фото, симптомы, кал грудничка при дисбактериозе, высыпания на коже, сыпь
Появляется дисбактериоз у грудничков довольно часто, при этом многие врачи вовсе не считают его диагнозом. Симптомы дисбактериоза у грудничка лишь сигнализируют об уменьшении полезной микрофлоры, что легко исправить, если вовремя заметить признаки расстройства кишечника.
Симптомы дисбактериоза у грудничков
Дисбактериоз у грудничка (фото 1) характеризуется определенным набором признаков, по которым врачи безошибочно определяют бактериальный дисбаланс. Дисбиоз — более правильное название расстройства желудка, но большинство предпочитает пользоваться привычным термином. Симптомы дисбактериоза у грудничка проявляются в следующем:
у ребенка чувствуется тяжесть в животе, от боли детки плачут и становятся беспокойными;
дети страдают метеоризмом, накопление газов провоцирует боль;
типичный признак нарушения микрофлоры — расстройство стула;
нетипичный кал с примесью непереваренной пищи;
частые срыгивания большими объемами;
кожные высыпания, атопический дерматит, появление опрелости;
ломкость ногтей, выпадение волосиков на голове и их повышенная ломкость;
грязно белый налет на поверхности языка, отличный от молочного после кормления;
появление неприятного запаха изо рта;
снижение аппетита, капризы перед кормлением.
Кал грудничка при дисбактериозе
Кал у грудничка при дисбактериозе (фото 2) имеет характерные признаки. В первую очередь, как и кал у взрослого, изменяется консистенция каловых масс. Если в норме кал ребенка имеет плотную структуру, то дисбактериоз у грудничков провоцирует изменение характера испражнений – они имеют жидкий вид, причем в самом кале заметны непереваренные крупинки пищи. Это может быть створожившееся молоко или частички прикорма, которые четко визуализируются на подгузнике.
Изменяется и цвет кала при дисбактериозе у грудничка – в зависимости от тяжести расстройства и принятой пищи цвет кала может быть грязно-зеленым или желтоватым. Цвет кала у взрослых примерно такой же, но темнее из-за присутствия пищи другого характера. При этом стул при дисбактериозе у грудничков имеет жидкую консистенцию и включает в себя светлые слизистые тяжи, а сам кал может пузырится. Это хорошо заметно, если ребенок недавно сходил на горшок или в памперс.
Внешне кал может быть похож на цвет кала при панкреатите, когда заболевание приобретает острый характер. Также стоит отметить, что стул новорожденного приобретает характерный резкий запах с кислинкой. Это подтверждает проблемы с перевариваемостью — запор или диарею, при которых желудочное содержимое выводится ненормально. Кал новорожденного при подозрении на дисбактериоз собирается и отправляется в лабораторию на исследование.
Высыпания на коже при дисбактериозе
Дисбактериоз у детей и взрослых имеет тесную связь с кожными высыпаниями. Высыпания у грудничка при обострении дисбактериоза будут давать четкую реакцию на коже. Поэтому сыпь у взрослых и детей можно лечить симптоматически, уделяя основное внимание проблемам кишечника.
Высыпания на коже при дисбактериозе (фото 3) появляются при интоксикации организма токсинами, которые образуются в процессе брожения и гниения содержимого кишечника. Токсические вещества из кишечника, богато снабженного кровеносными сосудами, попадают в кровь и разносятся по организму.
Дисбактериоз у ребенка и взрослого провоцирует защитную реакцию организма, активизируется работа сальных и потовых желез, которые пытаются вывести токсины из крови. При этом на коже появляется сыпь, при дисбактериозе у детей и взрослых она имеет типичные признаки раздражения и аллергической реакции.
Проявляется дисбактериоз на лице типично – кожный покров становится более тусклым, а сальные железы активно выделяют жировую смазку. Появляется мелкая сыпь у грудничка при дисбактериозе, у взрослых при закупорке желез жировым содержимым появляются гнойнички. Больше всего заметен дисбактериоз у новорожденного на лице, в складках кожи, на руках.
Если у новорожденных и детей не ухаживать за кожей правильно, то детский дерматит усугубляется, аллергический процесс захватывает все большие площади. Высыпания у ребенка при усилении аллергического компонента сопровождаются зудом и жжением, отечностью.
Дисбактериоз полости рта
Дисбактериоз полости рта (фото 4) проявляется при различных формах дисбактериоза. Дисбактериоз у грудных детей и взрослого характеризуется увеличением патогенной микрофлоры в ротовой полости по сравнению со здоровой. Дисбактериоз на языке и полости рта проходит несколько ступеней:
Дисбиотический сдвиг — слабо увеличенное количество патогенной микрофлоры, внешне общий состав форы не страдает, поэтому визуальные проявления на этой стадии практически не заметны. Выглядит дисбактериоз в начале патологического процесса как белесые заезды в уголках рта;
При субкомпенсированной форме дисбактериоз ротовой полости провоцирует белесый налет, а при сдаче анализа отмечают сдвиг по 2-3 показателям представителей флоры. Налет можно заметить на зубах, а во рту отмечается сухость, начинают кровоточить десна;
При монокультуральной форме лактобактерии вытесняются. Язык при дисбактериозе кишечника изменяет свой цвет и приобретает грязно желтый оттенок, появляется неприятный кислый запах изо рта. Возникает воспаление миндалин, страдают зубы и десна;
При четвертой, декомпенсированной стадии, в ротовой полости поселяются дрожжеподобные грибки, они поражают не только язык, но и обволакивают налетом стенки рта, небо.
Дисбактериоз кишечника не должен беспокоить — это состояние легко исправить, если добавить пациенту полезной микрофлоры, которая быстро подавит патогенные микроорганизмы и восстановит нормальный баланс в органах пищеварения.
Галерея фотографий дисбактериоза
симптомы и лечение, признаки и анализы кала
Когда в организме малыша нарушается соотношение микроорганизмов, находящихся в кишечнике, данное состояние называют дисбактериозом. Может ли оно развиваться у новорожденного, что его провоцирует, как выявить такую проблему и что важно предпринять для ее лечения?
Причины
Кишечник новорожденного младенца отличается незрелостью, поэтому риск появления дисбактериоза у маленьких детей повышен.
К развитию дисбаланса кишечной микрофлоры приводит:
Травма во время родов.
Врожденные заболевания органов пищеварительной системы.
Назначение новорожденному антибиотиков и других лекарственных препаратов на длительный период (дольше 7 дней).
Иммунодефицит.
Ферментопатии.
Замена грудного вскармливания искусственным в период новорожденности.
Симптомы
У новорожденного дисбактериоз может проявляться следующими симптомами:
Частые срыгивания.
Беспокойное поведение через 1-2 часа после еды.
Нарушенный сон.
Приступы рвоты.
Плохой набор массы.
Вздутие живота.
Понос, представленный жидким стулом в большом количестве, в котором могут быть примеси зеленого цвета, пены, белых комочков. Запах у такого стула кислый либо гнилостный.
Факторы риска
Нарушению составу микрофлоры в кишечнике новорожденного способствуют такие факторы:
Осложнения беременности и проблемы с родовым процессом.
Наличие бактериального вагиноза у женщины.
Плохие показатели шкалы Апгар и проведение реанимационных мероприятий.
Отсроченное первое прикладывание к груди.
Долгое пребывание в родильном доме.
Физиологически незрелый кишечник.
Гнойные инфекции.
Развитие болезни
Когда младенец пребывает в материнской утробе, в его кишечнике нет никаких микроорганизмов. Рождаясь, кроха сталкивается с первыми микробами, и в норме это будут лактобактерии, кишечные палочки и бифидобактерии. Они находятся в маминых родовых путях и в материнском молоке. Также грудное молочко (в первые дни это молозиво) включает особые факторы, стимулирующие рост полезной микрофлоры в младенческом кишечнике. Именно поэтому так важно приложить кроху к груди немедленно после родов и в первые дни в роддоме давать малютке молозиво из маминой груди.
Если первое прикладывание к маминой груди произошло поздно или вообще не произошло, это повышает риск попадания в кишечник младенца другой флоры. В норме микроорганизмы, способные вызывать нарушение работы кишечника, пребывают в ЖКТ детей в небольшом количестве. Их называют условно-патогенными бактериями. Пока их в детском кишечнике мало, пищеварение малыша не нарушено. Однако при действии провоцирующих дисбактериоз факторов полезной флоры становится меньше, что дает возможность условно-патогенным микробам увеличить свою численность и повлиять на состояние пищеварительной системы младенца.
Также следует отметить, что у большинства новорожденных в течение первых дней после рождения развивается проходящий (транзиторный) вид дисбактериоза, проявляющийся нарушениями стула.
Если при этом на кроху не будут действовать отягчающие факторы, а мама будет продолжать кормить малютку грудью, к концу первой недели жизни число бифидо- и лактобактерий в кишечнике будет преобладать.
Диагностика
Для выявления дисбактериоза сначала врач осматривает малыша, пальпирует его кишечник и направляет малютку на исследование кала. Сначала младенцу назначают сдать копрограмму кала, а затем и другие анализы кала при дисбактериозе, среди которых бывает и определение бактерий в испражнениях.
Лечение
Кормление грудью считают одним из главнейших моментов в лечении дисбиоза кишечной флоры у новорожденного. Детки с дисбактериозом нуждаются в материнском молоке особенно сильно.
При невозможности кормить грудью малышу следует давать адаптированную смесь, содержащую защитные факторы – бактерии, пребиотики.
Для коррекции микрофлоры малютке могут назначаться бактериофаги и пробиотики для детей. Также младенцу по показаниям назначают симптоматическую терапию.
Последствия болезни
Одним из самых опасных следствий дисбактериоза является гиповитаминоз у младенца, а также нарушение всасывания минеральных веществ и снижение иммунитета у малютки. Это может значительно повлиять на здоровье новорожденного.
Профилактику дисбактериоза нужно начинать еще при беременности, об этом читайте в другой нашей статье.
Симптомы и лечение дисбактериоза у детей, причины, анализ кала
Дисбактериозом называют нарушение баланса кишечной микрофлоры, которое выражается ухудшением пищеварения ребенка. Давайте разберемся, почему у ребенка может развиться дисбактериоз, как он проявляется, диагностируется и лечится.
Причины
Появление дисбактериоза возможно из-за:
Антибиотикотерапии;
Родовых травм;
Острых либо хронических заболеваний пищеварительной системы;
Длительного употребления лекарств;
Пребывания в экологически неблагополучных условиях;
Стрессов и частых простуд, а также пассивного курения;
Несбалансированного питания, включая раннее введение прикорма;
Гельминтозов;
Вирусных инфекций.
Большая частота развития дисбаланса микрофлоры у маленьких детей обусловлена незрелостью ЖКТ младенцев и большим количеством факторов риска, начиная от осложнений беременности и заканчивая инфекционным поражением кишечника малютки.
Симптомы
Дисбактериоз у детей проявляется:
Срыгиваниями;
Запахом изо рта;
Рвотой;
Нарушениями сна и беспокойным поведением в младенчестве;
Малым темпом набора массы в первый год жизни;
Обильным стулом кашицеобразной или жидкой формы, с пеной, зеленью, белесыми комочками, гнилостным или кисловатым запахом;
Приступами боли через несколько часов после еды;
Урчанием в животе и вздутием;
Полигиповитаминозом;
Упорными запорами у детей старшего возраста;
Появлением кишечных колик;
Отрыжкой;
Ощущением распирания в животе после еды;
Снижением аппетита;
Появлением молочницы, частых инфекционных болезней;
Высыпаниями на коже.
Факторы риска
У ребенка чаще всего может нарушиться состав микрофлоры вследствие:
Более позднего прикладывания к груди, в результате чего ребенок не получает защитные факторы из молозива, способствующие росту полезных бактерий.
Слишком раннего либо очень резкого перевода на вскармливание смесями, когда полезные микроорганизмы еще не успели заселить кишечник.
Несбалансированного питания подросшего ребенка, если он потребляет мало клетчатки, важной для жизнедеятельности бактерий в кишечнике.
Развитие болезни
У здоровых детей в кишечнике имеются бактерии, представленные преимущественно лакто- и бифидобактериями, а также кишечными палочками. Такие бактерии составляют до 97% всей микрофлоры в кишечнике. Они выполняют множество ценных для организма функций – выводят токсины, регулируют иммунитет, синтезируют витамины, участвуют в обменных процессах, стимулируют перистальтику, помогают усваивать кальций, синтезируют некоторые аминокислоты.
Также кишечная микрофлора частично состоит из условно-патогенных микробов, число которых повышается при неблагоприятном воздействии на организм. Кроме того, всегда существует риск попадания в кишечник патогенных микроорганизмов. При дисбактериозах число бифидо- и лактобактерий понижается, а количество условно-патогенных и болезнетворных бактерий увеличивается.
У детей распространенность дисбактериоза связана в первую очередь с тем, что при рождении их кишечник полностью стерилен. Он заселяется микрофлорой в процессе родов, при первых прикладываниях к груди и вскармливании в первые месяцы жизни. Именно поэтому более предпочтительно кормление материнским молоком, поскольку такое питание помогает заселить кишечник младенца именно теми бактериями, которые там должны жить в норме.
При воздействии любого фактора, вызывающего дисбактериоз, например, отсутствии грудного вскармливания или длительного лечения младенца антибиотиками, число бифидо- и лактобактерий в составе кишечной флоры уменьшается. Патогенных микроорганизмов становится больше, что и приводит к нарушениям работы пищеварительного тракта.
Формы дисбактериоза
Дисбактериоз можно классифицировать по микрофлоре, которая в данный момент преобладает в ЖКТ ребенка, например, кандидозный или стафилококковый дисбактериоз.
В зависимости от распространения патология может быть:
локализованной;
распространенной (ее также называют генерализованной).
Распространенная форма помимо нарушений работы ЖКТ может проявляться молочницей, воспалением легких, ангиной. Скрытая форма проявляется немного сниженным аппетитом, частыми инфекциями и малым весом по сравнению со сверстниками.
Течение болезни может быть представлено фазами декомпенсации (состояние ребенка ухудшено) и субкомпенсации (симптомы выражены умеренно), а также компенсации (клинических проявлений нет). Также существует разделение дисбактериоза по степени тяжести.
Стадии болезни
Первой стадией является латентный дисбактериоз, который также называют компенсированным, поскольку пищеварительная функция нарушена мало. У ребенка периодически скапливаются газы в кишечнике, ухудшается аппетит. Каловые массы могут иметь неравномерную окраску. Нередко появляются запоры, однако они могут чередоваться и с выделением разжиженного стула. Ребенок иногда ведет себя беспокойно и легко возбудим.
При второй стадии заболевание становится субкомпенсированным. Присоединяются другие симптомы, которые делают дисбактериоз похожим на другие болезни пищеварительного тракта (энтерит, энтероколит, колит). У ребенка возможна рвота, плохой аппетит, вздутие, частые срыгивания. Малыш начинает проявлять беспокойство примерно через 2 часа после еды. У него может нарушиться сон. Врач также может отметить, что прибавка в весе недостаточна.
Третья стадия считается тяжелой. Состояние ребенка ухудшается, он вялый, отказывается от пищи. Частыми проявлениями этой стадии являются поносы, схваткоподобные боли в животе, периодическое повышение температуры, запоры. Ребенок страдает от гиповитаминоза и анемии. Появляется риск обезвоживания и развития сепсиса.
Степени тяжести дисбактериоза
Различают четыре степени тяжести данной патологии в зависимости от результатов исследования и выявленного состава микрофлоры:
При первой степени нарушения в организме ребенка незначительные. Бифидобактерии определяются в количестве минимум 107-8. Преобладающим видом бактерий являются анаэробы. Условно-патогенная флора представлена до двух видов микроорганизмов, а их численность не превышает 102-4.
Вторая степень нарушений характеризуется повышением числа аэробных бактерий. Их количество сравнивается с анаэробной флорой. Число условно-патогенных бактерий повышается до 106-7. Вместо обычных кишечных палочек определяются лактозонегативные и гемолизирующие.
Признаками третьей степени является преобладание аэробных бактерий. В кишечнике выявляется большое число условно-патогенных представителей микрофлоры, а лакто- и бифидобактерии резко снижены.
О четвертой степени говорят, когда бифидобактерии в пищеварительном тракте ребенка отсутствуют, а кишечные палочки и лактобактерии значительно уменьшены. Условно-патогенные микроорганизмы при такой степени болезни нередко проявляют устойчивость к антибиотикотерапии.
Диагностика
Выявить дисбактериоз можно на основе клинических проявлений после назначения дополнительных исследований – копрограммы, биохимического, а также бактериологического анализа кала.
Лечение
Терапия при дисбактериозе, если врач после анализов и оценки клинических проявлений сделал выводы об ее необходимости, включает устранение патологической микрофлоры и интоксикации, восстановление пищеварения с помощью ферментов, а также лечение лактазной недостаточности в случае ее выявления.
Далее лечение будет направлено на заселение ЖКТ нормальной микрофлорой и стимулирование ее роста.
В первую очередь обращают внимание на диету ребенка с дисбактериозом, а также режим питания. Лечение антибиотиками возможно лишь после назначения врачом при наличии показаний. Ребенку могут назначить прием бактериофагов и кишечных антисептиков. Большое значение уделяют приему пробиотиков.
У грудничка
Для грудного младенца одним из важных факторов лечения дисбиоза в кишечнике является грудное вскармливание. Если оно по определенным причинам невозможно, ребенка следует кормить адаптированной смесью, обогащенной защитными факторами.
Профилактика дисбактериоза у детей была рассмотрена нами в другой статье.
Последствия болезни
Вследствие дисбактериоза у ребенка снижается иммунитет, поэтому малыш становится менее защищенным от разных вирусных и бактериальных инфекций. Дисбактериоз также способен влиять на всасывание полезных веществ в кишечнике, что приводит к недостаточному поступлению в организм ребенка минеральных соединений и витаминов.
симптомы, лечение, диета кормящей мамы
С таким кишечным заболеванием как дисбактериоз сталкивается около 92% детишек грудного возраста. Преимущественно недугу подвержены болеющие часто малыши, ослабленные, недоношенные. Но и здоровый малыш может иметь расстройство кишечника.
Что же собой представляет это заболевание? По каким причинам дисбактериоз у грудничка может возникнуть? Опасен ли он, каковы его симптомы. И главное, как правильно лечить. На все вопросы вы найдете ответы в статье.
Причины нарушения микрофлоры у детей до года
Прежде чем выяснить причины расстройства, разберемся, что же это такое. При заболевании происходит дисбаланс естественной микрофлоры в кишечнике. В странах Европы такое расстройство не относят к заболеванию и зачастую не лечат. Специалисты придерживаются мнения, что организму лучше справляться самому.
Но многие врачи придерживаются иной точки зрения, доказывая, что дисбактериоз требует лечения.
Почему же у грудного ребенка происходит нарушение микрофлоры? До момента своего рождения малютка находятся в стерильно-чистой среде. Продвигаясь по родильным путям в момент появления на свет, кроха начинает первое «знакомство» с естественной микрофлорой мамы, в которой находятся разнообразные бактерии, включительно с вредными.
Далее малыш начинает «знакомиться» с разными бактериями: при поцелуях, грудном вскармливании, объятии. Происходит постепенная колонизация кишечника естественной микрофлорой. Детки «искусственники» преимущественно имеют в микрофлоре кишечника 92-98% пробиотиков. Остальное приходится на нейтральные бактерии, которые становятся опасными при любом неблагоприятном факторе. Они и являются причинами возникновения дисбактериоза кишечника у грудных детей.
Нарушения микрофлоры кишечника: основные факторы
Иммунодефицит.
Продолжительное или неконтролируемое лечение антимикробными препаратами (относится и к малышу, и к матери).
Несоблюдение мамой правил личной гигиены.
Изменение переваривания некоторых веществ, связанное с отсутствием ферментов (непереносимость сахара, казеина, белка злаковых растений).
Переедание, нарушение режима питания.
Частые инфекционные заболевания.
Глистная инвазия.
Болезни женщины в предродовой период или родовая патология.
Аллергия.
Ранний перевод малышей на вскармливание обычными продуктами питания.
Обитание в экологически загрязненной местности.
Позднее прикладывание к груди.
Неправильное начало прикорма.
Постоянные стрессовые ситуации.
Аллергические дерматиты.
Проявления рахита.
Основные симптомы дисбактериоза
Внимание: нарушение баланса микрофлоры кишечника для организма маленького ребенка нередко приводит к неблагоприятным последствиям, осложнениям. Родителям важно распознать заболевание вовремя.
Симптомы могут проявляться по-разному, преимущественно это:
Пониженный, плохой аппетит или его отсутствие.
Неустойчивый стул (диарея) — более 2-3 дней.
Стоматит.
Повышенное слюноотделение.
Неприятный запах из ротовой полости.
Сухость кожного покрова.
Повышение метеоризма.
Болезненный живот, колики.
Проявление молочницы;
В стуле заметны кровянистые вкрапления, он пенистый или содержит зеленую слизь.
Рвота, тошнота.
Признаки аллергического дерматита.
Продолжительный запор.
Ребенок не набирает массу тела или вес набирается незначительно.
Важно знать: у малышей в возрасте до одного года кал имеет желтый цвет с запахом, напоминающим сметану. Если в нем имеется немного пены, слизи – это не свидетельствует о дисбалансе кишечника и не считается чем-то ненормальным. У детей, получающих прикорм, нормальным является содержание в кале небольших кусочков непереваренной пищи.
Степени дисбактериоза по классификации
Форма дисбактериоза отличается в зависимости от преобладающей условно-патогенной флоры и бывают: ассоциированной, стафилококковой, кандидозной. По клиническому состоянию заболевание имеет генерализованный, латентный или локальный вариант.
Степень нарушения дисбаланса в кишечнике у грудных детей определяется составом микрофлоры.
1 степень – компенсированная, самая легкая. В народе имеет название «колики». Зачастую не требует лечения. У малыша продолжает набираться вес, но немного меньше положенной нормы. Стул без изменений или слегка жидковатый, но без крови, гноя, слизи. Может быть незначительное вздутие. Кроха активный, аппетит в норме, спит спокойно. Лечение в основном ограничивается «Эспумизаном», «Боботиком».
2 степень – субкомпенсированная. Детишки становятся беспокойными, их трудно накормить, они отказываются от груди, часто плачут. Поносы сменяются запорами, нестабильностью стула, кал может иметь нехарактерный, резкий запах. Отмечается задержка в весе.
3 степень – декомпенсированная, симптомы усиливаются. Вес убавляется, диарея не прекращается. В стуле заметны комки. Малыш быстро устает, плохо спит, не хочет есть, плачет. Кожные покровы – сухие, бледные.
4 степень – осложнение третьей степени, требует срочного стационарного лечения. В основном сопровождается кишечными инфекциями. У грудничка появляются признаки авитаминоза. Он стремительно теряет вес, не хочет есть. Нередко бывает высокая температура из-за воспалительных процессов в кишечнике, вызванных патогенной средой.
Диагностика дисбактериоза
Для подтверждения диагноза ребенка надо показать детскому гастроэнтерологу или педиатру. Специалист назначит лабораторные анализы, в случае необходимости – дополнительные исследования. Определяется состояние слизистых оболочек, кожного покрова, проводится пальпация живота для выявления вздутия, болезненности. Лабораторная диагностика подразумевает биохимическое или бактериологическое исследование каловых масс на дисбактериоз кишечника. Микробиологическими критериями является увеличение или понижение нормального количества кишечной палочки, уменьшение лактобактерий, бифидобактерий, нахождение измененных штаммов, появление грамотрицательных палочек, клостридий, грибов. Также анализы включают исследование на правильное усвоение пищевых компонентов.
Информация для родителей! Кал для анализа необходимо собирать в стерильную банку в количестве не менее 15 грамм, и сдавать свежесобранным. Недопустимо хранение в холодильнике. Если малыши принимали перед сдачей анализа пробиотики, их прием отменяется на сутки до сбора.
При тяжелой степени заболевания или скрытых симптомах дополнительно назначается биохимическая проба печени, УЗИ органов, анализы кала на гельминты, лямблии, копрограмма.
Медикаментозное лечение
Нарушение естественной микрофлоры требует правильного, комплексного лечения. Главное – устранение патогенных организмов и беспокоящих симптомов. Медицинские препараты помогают избавиться от запора, поноса, рвоты, налаживают сон малыша и аппетит.
Мамам детишек с прикормом рекомендуется ставить упор на грудное вскармливание. Детишкам, не получающим грудного молока, понадобится специальная сбалансированная диета.
Для лечения несложной формы дисбактериоза назначают такие антисептики, как пребиотики, бактериофаги, пробиотики.
При третьей и четвертой степени назначается антибиотикотерапия в виде противомикробных лекарственных средств системного действия в комплексе с пробиотиками (Эубикор, Инулин, Эффидижест,, Колибактерин). Эффективны в лечении комбинированные препараты.
Бактериофаги эффективно использовать при четвертой степени дисбактериоза. При попадании в кишечник они начинают моментальное вытеснение патогенных возбудителей факультативной флоры.
Давать самостоятельно антибиотики грудничкам нельзя! Такой вид медикаментозного лечения выписывается специалистами – с учетом пользы и риска для грудного ребенка.
При поносах, запорах лечение направлено на налаживание моторики кишечника. Детский гастроэнтеролог в индивидуальном порядке выписывает гепатопротекторы, прокинетики, слабительные средства.
На заметку: лечение продолжительное, курс от 10-12 дней. Длительность определяет врач с учетом состояния маленького пациента и наличием сопутствующих патологий. Нередко расстройство кишечника симптом заболеваний поджелудочной железы, гастрита, сахарного диабета, вирусной инфекции, астмы, колита. Такие дети требуют постоянного наблюдения у педиатра.
Диета кормящей мамы
Организм новорожденных к моменту рождения незрелый, это касается и пищеварительной системы. Малыш нередко остро реагируют на новые вещества, проникающие в их организм вместе с молоком матери.
При бактериозе грудничка женщина должна питаться правильно, соблюдая диету. Принцип – рациональное, здоровое, сбалансированное питание. Особых ограничений не имеется, но стоит исключить из меню все, что может приводить к метеоризму и процессам брожения в кишечнике. Рацион должен преобладать из кисломолочных продуктов, белковой пищи, овощей, фруктов, злаков.
Само по себе грудное молоко имеет противомикробное действие и является «лекарством» от многочисленных заболеваний. Микрофлора кишечника грудных детей быстро восстанавливается при регулярном кормлении грудью.
Профилактика
Предупредить развитие дисбактериоза можно заранее, еще до появления крохи на свет.
Перед тем как планировать беременность, будущая мамочка должна пройти полное обследование для выявления нарушения флоры половых органов.
Если вы уже в ожидании крохи, то можно позаботиться о его здоровье сейчас. Существует немало лекарственных препаратов, показанных в лечении нарушенной микрофлоры во время беременности.
Важно правильно питаться, не принимать антибиотики, отказаться от курения, проводить много времени на свежем воздухе. Также не лишним будет проконсультироваться, когда после родов надо начинать прикладывать малыша к груди.
Детям, часто болеющим, в профилактических целях полезно давать пробиотики.
Резюме
Заболевания органов пищеварительного тракта встречаются у грудничков довольно часто. При любых изменениях стула у малыша, болях в животе, колитах, изменении стула, обратитесь к лечащему врачу. Своевременно начатое лечение приводит к быстрому выздоровлению без осложнений.
Полезная литература для родителей
Книга А.Л, Соколова и Ю.А, Копанева «Дисбактериоз у детей». Авторы не только подробно описали классическое представление о заболевании, но и привели схемы коррекции микрофлоры кишечника, данные о гельминтозе. Дали рекомендации о приеме необходимых лекарственных препаратов и правильном питании ребенка до 1 года.
Книга доктора Е.О. Комаровского «Здоровье ребенка и здравый смысл его родственников». Замечательное пособие для родителей. Написана книга в доступной, развлекательной, понятной форме. Адресуется и состоявшимся родителям, и тем, кто только планирует зачатие. Вы найдете ответы на множество вопросов, связанных с образом жизни крохи, и рекомендации о том, что делать в случае заболеваний.
«Справочник здравомыслящих родителей» — еще одна книга доктора Комаровского. Содержит сведения важные для всех, кто имеет малышей. В ней подробно описано о развитии ребенка, прививках, правильном питании, обследовании.
Отзывы родителей
Анастасия Наш малыш недавно переболел дисбактериозом. Педиатр порекомендовал мне, как кормящей маме, подкорректировать питание. Сынишке назначил натуральное средство «Ливео» с большим содержанием полезных бактерий для микрофлоры кишечника. Через 5 дней ребенок полностью избавился от симптомов. Перестал плакать, стул пришел в норму, аппетит прекрасный, нет белого налета на языке. Средство не принимайте без назначения врача. Хотя оно нам и помогло, но убедитесь в правильности диагноза.
— — —
Ольга Еще с роддома вздрагивала при слове «дисбактериоз». И нас это не минуло. В 3 месяца у сынишки начался понос, кал стал со слизью, зеленого оттенка. Педиатр сразу отправил нас на анализ, диагноз подтвердился. Мы принимали Бифиформ с Линексом. Лечились около 10 дней. Не откладывайте визит к специалисту.
— — —
Галина У дочки пищевая аллергия с 3 месяцев. Диагноз «дисбактериоз кишечника» поставили после того, как у нее помимо высыпаний на коже, появились запоры, чередующиеся с слизистыми поносами. Рекомендации врача: тщательное корректирование меню (малышка у меня на искусственном вскармливании). Дополнительно сдали пробы на аллергены, исключили провоцирующие продукты питания. Теперь все в норме, мы не болеем.
— — —
Лариса Дисбактериоз у моей малютки, как оказалось потом, спровоцировало мое жирное грудное молоко. Оно попросту не переваривалось полностью. Перешла на диету с большим количеством злаков, овощных салатов, ягод, фруктов. Проблемы с пищеварением у ребенка полностью исчезли.
симптомы, фото, необходимые анализы, лечение
Анна Новикова
29.10.2014
Педиатры с тревогой отмечают, что в последние годы диагноз «дисбактериоз кишечника» ставится каждому второму грудному младенцу в возрасте до года. Особенно часто этому недугу подвержены недоношенные, ослабленные и часто болеющие дети. Давайте рассмотрим подробнее, как проявляется дисбактериоз у грудничков, чем он опасен и как его лечить?
Содержание страницы:
Что такое дисбактериоз?
Дисбактериоз кишечника – это нарушение баланса между здоровой и патогенной микрофлорой, приводящее к сбоям в нормальной работе пищеварительной системы. В здоровом кишечнике полезная микрофлора преобладает, но под действием неблагоприятных факторов это соотношение может измениться в пользу болезнетворных микроорганизмов (стафилоккоки, стрептококки, синегнойная палочка, грибки).
Такое патологическое состояние может возникнуть в любом возрасте, но наиболее уязвимы в этом отношении груднички.
Как происходит формирование микрофлоры у грудных детей?
До самого рождения ребенок находится в стерильной среде, его кишечник в это время не содержит бактерий или микроорганизмов. Впервые младенец сталкивается с естественной микрофлорой матери в момент рождения. Именно во время прохождения по родовым путям происходит первое заселение кишечника микроорганизмами.
После рождения микрофлора пополняется во время первого контакта с окружающим миром и первого прикладывания к груди матери. В этот момент младенец получает глоток ценного молозива, которое содержит огромное количество полезных веществ, самым благоприятным образом влияющих на формирование нормальной микрофлоры кишечника.
Молозиво богато компонентами, которые стимулируют рост полезных бифидо- и лактобактерий и создают условия для их развития и размножения. Помимо этого, в молозиве находится большое количество иммуноглобулинов, без которых невозможно нормальное самочувствие и формирование стойкого иммунитета.
Поэтому младенцы, которых приложили к груди матери в первые часы жизни растут более здоровыми и крепкими чем те, кто по каким-либо причинам был отлучен от материнской груди.
В течение последующих 3-5 дней кишечник малыша продолжает колонизироваться различными бактериями, среди которых находятся и патогенные микроорганизмы. Поэтому в первую неделю жизни у ребенка может развиться транзитный дисбактериоз, характеризующийся коликами в животе, срыгиванием и появлением водянистого зеленоватого стула со слизью.
Но уже через несколько дней полезные бактерии, полученные в первые часы жизни размножаются в достаточном количестве и вытесняют патогенные микроорганизмы. Стул ребенка нормализуется, срыгивания уменьшаются. Окончательная стабилизация микрофлоры происходит к концу первого месяца жизни ребенка.
У ослабленных, недоношенных детей под влиянием неблагоприятных факторов может развиться первичный дисбактериоз, ведущий к нарушению нормального пищеварения и стула, ослаблению иммунитета. Какие причины могут вызвать развитие дизбактериоза?
Причины, вызывающие дисбактериоз кишечника у грудничков
Причины младенческого дисбактериоза могут быть разными. Развитие первичного дисбактериоза может вызвать:
Отказ от грудного вскармливания
Ранний переход на искусственные смеси (до 1 месяца после рождения)
Прием кормящей матерью гормональных средств или антибиотиков
Возникновение вторичного дисбактериоза кишечника у грудничков вызывают следующие причины:
Заболевания желудочно-кишечного тракта
Лечение грудничка антибиотиками
Недостаточная выработка пищеварительных ферментов
Физиологическая незрелость (нарушения всасывания и моторной функции кишечника)
Неправильный рацион питания, ранее введение прикорма
Заражение паразитами или болезнетворными бактериями, уничтожающими полезную микрофлору кишечника
Родовые травмы
Инфекции, мастит у кормящей матери
Очень часто причиной дисбактериоза у младенцев становится заражение золотистым стафилококком. Эта больничная инфекция очень распространена в отечественных роддомах и больницах. Избежать ее не просто и зачастую ею инфицируется и мать и ребенок. Стафилококк сильно разрушает полезную микрофлору и у ослабленных детей может спровоцировать развитие дисбактериоза.
Нормальную микрофлору может разрушить антибактериальная терапия. Даже для взрослых лечение антибиотиками не проходит бесследно, а для младенцев такая терапия просто опасна. Микрофлора, которая еще не сформировалась до конца, может быть полностью уничтожена, поэтому дисбактериоз у грудничка после антибиотиков диагностируется в большинстве случаев.
Необходимо, чтобы лечение малышей антибактериальными препаратами сочеталось с одновременным приемом средств, восстанавливающих нормальную микрофлору.
Симптомы заболевания
Первым симптомом дисбактериоза у грудничка становится расстройство стула. Он может быть частым и обильным, либо напротив, опорожнение кишечника становится затруднительным и болезненным. Меняется внешний вид стула, он становится жидким и пенистым, либо кашеобразным, с присутствием непереваренных комочков.
Испражнения становятся зеленоватого цвета с примесью слизи, и приобретают кислый или гнилостный запах. У ребенка после кормления возникает урчание в животе, вздутие, болезненные колики, он становится беспокойным, плохо спит и много плачет. В промежутках между кормлениями малыш часто срыгивает, у него может появиться неприятный запах изо рта.
Из-за нарушений кишечного всасывания пища переваривается не полностью, и возникают признаки интоксикации, в виде аллергических высыпаний на коже. У ослабленных детей к дисбактериозу могут присоединиться симптомы анемии, нехватки витаминов, в ротовой полости часто развивается молочница.
Педиатры выделяют три степени дисбактериоза у грудных детей:
Дисбактериоз 1степени (компенсированный) – характеризуется снижением аппетита, нестабильным набором веса, метеоризмом и бесцветной окраской каловых масс. Этот вид заболевания связывают с неправильным питанием, реакцией организма ребенка на ранний прикорм и пищевые аллергены. Самочувствие малыша при этом удовлетворительное и опасений не вызывает.
Дисбактериоз 2 степени у грудничка (субкомпенсированный) проявляется метеоризмом, схваткообразными болями в животе, отсутствием аппетита, сопровождающимся диареей или запором. Стул чаще всего зеленоватого цвета, с неприятным запахом и комочками непереваренной пищи. Анализ кала выявляет наличие патогенной микрофлоры: стафилококка, бактерий протей, дрожжеподобных грибов.
Дисбактериоз кишечника у грудничков 3 степени (декомпенсированный) сопровождается усилением неприятных симптомов и размножением болезнетворных бактерий. У ребенка может появиться хронический понос с зеленоватым оттенком и запахом тухлого яйца. В испражнениях все больше остатков непереваренной пищи. У ребенка снижается иммунитет, появляются признаки рахита. Малыша мучают болезненные колики, метеоризм, тошнота, появляется слабость, ухудшается общее состояние. Могут появиться признаки анемии, пропадает аппетит, ребенок не прибавляет в весе.
Дисбактериз 4 степени. Значительно активизируется размножение вредоносных бактерий (кишечной палочки, возбудителей дизентерии и сальмонеллеза), что значительно увеличивает риск острого инфекционного процесса. Микробы из кишечника разносятся по всему организму, вызывая воспалительные процессы в других органах. Выделяющиеся токсины отравляют организм. Интоксикация сопровождается слабостью, отказом от еды, головными болями и повышением температуры. Постоянный жидкий стул приобретает гнилостный запах, ребенок худеет, появляются симптомы малокровия, авитоминоза, отмечаются расстройства нервной системы.
Все проявления и симптомы дисбактериоза должны сразу же насторожить родителей, за врачебной помощью следует обращаться немедленно. Дальнейшее лечение будет зависеть от степени развития патологического процесса, и проходить под строгим контролем врача.
Диагностика заболевания
Одним из самых простых и доступных лабораторных методов диагностики является посев кала и копрограмма. Кал на дисбактериоз у грудничка необходимо собрать до того, как малышу будет назначен прием антибактериальных препаратов или не менее чем через 12 часов после их отмены. Если ребенку была назначена терапия пробиотиками, анализ отбирают через месяц после окончания их приема.
Бактериологическое исследование кала в лабораторных условиях позволит выявить до 25 видов различных микроорганизмов. Посев кала на условно-патогенную флору позволит выявить процент патогенных бактерий без учета количества здоровой микрофлоры.
А посев кала на дисбактериоз покажет соотношение полезной и патогенной микрофлоры и определит ее чувствительность к антибиотикам. Для получения окончательного результата нужна как минимум неделя, это время необходимо для того, чтобы бактерии выросли на определенных питательных средах.
Копрограмма определит степень переваривания частичек пищи и покажет, есть ли признаки воспалительного процесса в кишечнике.
Дыхательный экскреторный тест. Этот высокочувствительный метод является простым и позволяет получить результат в течение нескольких часов. С его помощью можно выявить и определить продукты жизнедеятельности бактерий и установить, какие микроорганизмы населяют кишечник.
К сожалению, лабораторные анализы не всегда могут определить реальное состояние кишечника, так как микрофлора каждого человека переменчива и индивидуальна. Поэтому педиатр может назначить дополнительные анализы крови и мочи, а также консультацию гастроэнтеролог.
Как лечить дисбактериоз у грудничков?
При подтверждении диагноза потребуется комплексное и достаточно продолжительное лечение. На первом этапе терапии врач назначит прием бактериофагов, действие которых направлено на уничтожение патогенной и условно-патогенной микрофлоры, полезные бактерии при этом не пострадают.
Параллельно назначают сорбенты, для вывода из организма накопившихся токсинов и ферменты, которые будут помогать нормальной работе пищеварительного тракта. На втором этапе лечения от дисбактериоза, кишечник грудничка заселяют полезными бактериями. Для этого назначают препараты и смеси, содержащие лакто – и бифидобактерии и продукты их жизнедеятельности, помогающие им заселить кишечник.
Такие препараты относятся к группе пробиотиков, при назначении их грудным детям достаточно быстро происходит восстановление полезной микрофлоры. Из пробиотиков грудничкам чаще всего назначают Энтерол, Бификол, Линекс, Лактобактерин.
Большую роль в лечении дисбактериоза играют пребиотики. Это вещества, позволяющие организму самому вырабатывать нужные бактерии и ускорять их рост и размножение. К таким элементам относятся:
Лактоза (молочный сахар). Содержится в грудном молоке, незаменим для активизации и ускорения роста бифидобактерий в ЖКТ грудных детей.
Лактулоза. Содержится в молоке и его производных, необходима как питательная среда для полезных бактерий.
Фруктосахариды. Эти необходимые элементы содержаться в овощах и фруктах.
Инсулин, который вырабатывает поджелудочная железа (помогают овощи). Необходим для разложения питательных веществ на простые сахара, с помощью которых бактерии растут и размножаются.
Пищевые волокна. Самый известный элемент – целлюлоза, содержащаяся в овощах, фруктах и зерновых. В организме служит пищей для бактерий, способствуя их росту и размножению.
Лечение дисбактериоза у грудничков с помощью антибиотиков нецелесообразно. Но в отдельных случаях гастроэнтеролог, основываясь на лабораторных и клинических данных, может назначить такие антибактериальные средства, как Дифлюкан, Макропен, наиболее щадящие полезную микрофлору. Совместно с приемом антибиотиков следует принимать биопрепараты (диалакт, лактобактерин).
К лекарственным средствам последнего поколения можно отнести иммунные препараты на основе человеческого белка. Для лечения дисбактериоза у детей грудного возраста наиболее подходящим считается комплексный препарат на основе иммуноглобулина. Значительное облегчение состояния отмечается после одного-двух курсов лечения.
Кроме медикаментозного лечения родителям малышей следует позаботиться о правильном питании и соблюдении режима дня. Ребенку необходимы длительные прогулки на свежем воздухе, так как кислород способствует обновлению клеток слизистой оболочки кишечника.
Маленьким пациентам может быть назначен курс физиотерпии, а именно посещение барокамеры, где они дышат чистым кислородом. Кроме того, для поддержания иммунитета малышам назначают лечебный массаж и лазерную физиотерапию. При болях в животике полезны ежедневные теплые ванночки.
Если отмечаются нарушения всасывания и усвоения питательных веществ может развиться состояние гиповитаминоза. В таких случаях специалисты рекомендуют препараты группы В, фолиевую, никотиновую и аскорбиновую кислоты.
В период лечения врачи рекомендуют не вводить прикорм, не давать малышу новые продукты, а как можно дольше сохранить грудное вскармливание. Даже если в материнском молоке обнаруживаются болезнетворные бактерии, прекращать вскармливание не стоит, так как с молоком ребенок продолжает получать антитела к патогенным микроорганизмам.
Если симптомы, сопутствующие дисбактериозу становятся слишком сильными и сопровождаются непрекращающимся поносом, рвотой, потерей веса и истощением организма, родителям не следует избегать больницы. Врачи предупреждают, что потеря жидкости и солей смертельно опасна для маленького ребенка! В таких случаях спасением будет лишь внутривенное введение жидкости в условиях стационара.
Лечение дисбактериоза всегда комплексное, оно основано не только на медикаментозной терапии этого заболевания, но и предполагает лечение сопутствующих заболеваний желудочно-кишечного тракта, анемии или авитоминоза. Вместе с этим необходимо наладить правильное питание, организовать режим дня, необходимые поддерживающие процедуры и строго выполнять все назначения лечащего врача.
Профилактика дисбактериоза у младенцев: диета для грудничков и кормящей мамы
Начинать профилактику дисбактериоза врачи советуют еще до рождения малыша. Будущая мама перед планированием беременности должна пролечить все заболевания женской половой сферы. Если при рождении малыша естественная среда половых путей не будет иметь грибковых и патогенных бактерий, то и ребенок будет здоровым.
Главная составляющая профилактики дисбактериоза – ранее прикладывание к груди. Таким образом, малыш вместе с молозивом получит все необходимые полезные бактерии. Педиатры советуют первый раз приложить ребенка к груди сразу после рождения.
Нормальную микрофлору поможет сформировать правильный режим дня, кормление грудничка по часам. Не стоит перекармливать ребенка, спешить с введением прикорм и переводом его на искусственные смеси.
Питание кормящей матери должно быть сбалансированным и содержать достаточное количество питательных веществ, белков и витаминов. От этого будет зависеть хорошее самочувствие и здоровье малютки. Маме необходимо тщательно поддерживать необходимую гигиену и в роддоме и дома, а ежедневные прогулки на свежем воздухе и вечерние теплые ванночки помогут укрепить иммунитет ребенка и будут залогом его хорошего самочувствия.
Правильно подобранное меню кормящей мамы способствует нормальному пищеварению у ее малыша. При грудном вскармливании рекомендуется ежедневно употреблять кисломолочные продукты:
кефир,
ряженку,
бифидок,
йогурт.
Мясо лучше выбирать диетическое (курятину, телятину, кролика), жирные сорта могут спровоцировать у ребенка пищевую аллергию.
Если у грудничка появляются высыпания на коже, следует исключить из меню сладкие молочные каши, их лучше варить на воде. Для улучшения пищеварения лучше всего подходят гречка и овсянка. Молодая мама должна ограничить употребление сахара и сладостей, они могут вызвать бродильные реакции в организме. Из кондитерских изделий разрешено несладкое сухое печенье или кондитерские изделия для диабетиков.
Овощи и фрукты можно употреблять не все, многие из них способны вызвать у малыша аллергическую реакцию. Без опасения можно есть зеленые яблоки, бананы, морковь, кабачки, болгарский перец, картофель, зеленый лук.
Сыры предпочтительны твердых сортов. Куриные яйца лучше не употреблять, можно делать омлеты из гипоаллергенных перепелиных яиц. Из напитков можно пить черный и зеленый чай, соки, разбавленные водой, компот из сухофруктов. Кормящей маме следует отказаться от кофе и газированных напитков.
Соблюдая эти несложные правила, молодым родителям не придется долгое время лечить дисбактериоз у грудничка. Ваш малыш будет здоров и ничто не помешает его хорошему самочувствию и правильному физическому развитию.
Отзывы о лечении дисбактериоза кишечника у грудничков
Отзыв №1
После рождения сыночка я заболела маститом и не смогла кормить малыша. Пришлось переводить ребенка на искусственное вскармливание. Это сразу же отразилось на его самочувствии, он стал беспокойным, мучили колики. После каждого кормления часто срыгивал, появился частый жидкий стул с неприятным запахом.
После лабораторного исследования кала был назначен прием Энтерола, Йогулакта, лечение бактериофагами. Через некоторое время заметила, что ребенок стал спокойнее, стул гуще и реже. Сейчас сыночек чувствует себя лучше и хорошо прибавляет в весе.
Мария, Москва
Отзыв №2
У дочки, которую кормила грудью начались проблемы с пищеварением после того, как попытались вводить прикорм. Появился жидкий стул, колики в животе, вздутие, постоянно отходили газики.
Врач посоветовал прием препарата Бифидумбактерин форте, он нормализует пищеварение, его назначают даже новорожденным. Препарат помог, отличное средство, результат от его приема был уже на следующий день. Сейчас у моей малышки все хорошо.
Татьяна, Санкт-Петербург
Ну и в заключение посмотрите видео с полезными советами от доктора Комаровского о том, как и чем лечить дисбактериоз у грудничков:
Симптомы дисбактериоза у грудничков
Дисбактериоз – нарушение качественного и количественного баланса бактерий, заселяющих стенки кишечника. Согласно МКБ он считается не заболеванием, а состоянием, возникающим в результате определенных патологических процессов в организме. Дисбаланс микрофлоры обязательно нужно устранять, ведь он негативно сказывается на самочувствии новорожденного. Разберемся, как проявляется дисбактериоз у грудничков, а также выясним его причины.
Факторы риска
Микрофлора кишечника формируется в первые месяцы жизни ребенка. В этот период возникает транзиторный дисбактериоз, который не нужно лечить. Но под воздействием негативных факторов баланс между полезными и патогенными организмами на слизистых оболочках ЖКТ существенно нарушается. Это состояние требует внимания со стороны родителей.
Причины дисбактериоза:
Полное отсутствие кормления грудью или ранний переход на адаптированное питание. Смеси, которые употребляют малыши на искусственном вскармливании, имеют сбалансированный состав, но в отличие от материнского молока они не помогают процессу формирования микрофлоры.
Употребление антимикробных средств. После курса антибиотиков широкого спектра погибают не только болезнетворные агенты, но и лакто- и бифидобактерии. После антибиотиков, которые принимала кормящая мама, также наблюдается ухудшение работы кишечника грудничка.
Преждевременный ввод прикорма. До полугода ЖКТ малыша не способен переваривать твердую пищу, знакомство со взрослыми продуктами раньше срока приводит к существенному нарушению процесса пищеварения. Такие же негативные последствия возникают после употребления цельного коровьего или козьего молока до года.
Кишечные инфекции. После них возникает воспаление слизистой оболочки кишечника, и создаются условия для роста патогенных бактерий.
Пищевая аллергия. ЖКТ ребенка очень чувствителен, аллергены легко повреждают клетки его эпителиальных оболочек, в результате их функционирование нарушается.
Частые заболевания, неполноценное питание, экологическая загрязненность и другие факторы, провоцирующие общее снижение иммунитета.
Клиническая картина
Симптомы дисбактериоза после антибиотиков или инфекций разнообразны. Чаще всего обнаруживаются такиепризнаки, как:
проблемы с дефекацией – жидкий кал, нерегулярный стул, нехарактерный вид испражнений
вздутие живота и связанные с ним боли
обильные срыгивания
снижение аппетита – уменьшение порций, отказ от груди
плохая прибавка в весе
капризность, нарушение сна
сыпь на теле
симптомы общей интоксикации – температура, слабость
Наиболее ярким проявлением дисбактериоза у новорожденного считается нарушенный стул. Рассмотрим все симптомы более подробно.
Понос
Частота и консистенция испражнений у грудных детей определяется тем, какое питание они получают. На грудном вскармливании стул может наблюдаться от 1 до 12 раз в сутки (после каждой трапезы). Кал выглядит как желтоватая кашица и обладает творожистым запахом.
На искусственном вскармливании малыши какают 1-2 раза в сутки. Стул плотный коричневый с характерным ароматом.
При дисбактериозе после приема антибиотиков или под влиянием других факторов у детей наблюдается понос. Его симптомы:
внезапное увеличение частоты дефекаций – кал чаще 8-12 раз в сутки
водянистая текстура
наличие слизи
резкий запах
Учащенный жидкий кал опасен тем, после него у ребенка может развиться обезвоживание.
Запор
Читатели Ogrudnichke.ru рекомендуют:- Обзор самых популярных витаминных добавок для детей от компании Garden of Life Читать статью >>> — Как продукция компании Earth Mama может помочь молодым родителям в уходе за грудничком? Читать статью —
Донг квай (Dong Quai) – удивительное растение, помогающее сохранять молодость женскому организму Читать подробнее… — Витаминные комплексы, пробиотики, омега-3 от компании Garden of Life, разработанные специально для беременных женщин Узнать подробности >>>
Уничтожение полезных бактерий в кишечнике после приема антибиотиков зачастую приводит к тому, что пищеварение замедляется, и каловые массы медленней продвигаются по ЖКТ, то есть возникает запор. Его признаки:
стул отсутствует дольше 3 дней у детей на грудном вскармливании, больше 1 суток у малышей, получающих адаптированное питание
перед дефекацией ребенок тужится, кряхтит, краснеет, плачет
кал выходит в виде шариков темного цвета с гнилостным запахом
Внешний вид испражнений
Дисбактериоз не всегда сопровождается изменением частоты дефекаций. В некоторых случаях имеет место нехарактерный внешний вид испражнений, а именно:
стул окрашен в зеленый или почти черный цвет
кал содержит частички непереваренной пищи, слизи, пены и прожилки крови (при повреждении слизистой оболочки)
у выделений резкий неприятный запах «тухлых яиц»
Частый жидкий кал может сменяться запорами.
В норме в испражнениях малыша могут присутствовать комки непереваренного молока и небольшое количество слизи. Беспокоиться стоит в том случае, если объем посторонних вкраплений велик.
Метеоризм
Ухудшение переваривания пищи при дисбактериозе приводит к тому, что ее частицы остаются в кишечнике, и начинается брожение, побочным эффектом которого является повышенное газообразование (метеоризм).
Животик малыша вздувается, становится напряженным, можно услышать урчание и бурление в нем. Лишний воздух растягивает стенки кишечника и причиняет малышу боль. Он плачет и подтягивает ножки к животику. После отхождения газов самочувствие крохи улучшается.
Ситуация усугубляется, если у малыша наблюдается редкий стул или, наоборот, понос. Другие причины усиления метеоризма:
неправильное питание матери – присутствие в меню продуктов, вызывающих газообразование
употребление ребенком большого количества «переднего» молока
слишком густая смесь или ее неправильный подбор
заглатывание воздуха во время кормления или плача
перекорм
Дерматит
Воспаление слизистой оболочки кишечника, брожение остатков пищи, нехватка полезных бактерий – все это причины недостаточного всасывания витаминов и минералов в ЖКТ. В результате у ребенка ухудшается состояние кожных покровов – появляется сыпь, сухие и шелушащиеся участки.
Чаще всего раздражение возникает на внешней стороне локтей, коленей и на щеках. Иногда трескаются уголки рта. В отличие от аллергического дерматита сыпь при дисбактериозе не зудит.
Сухая кожа может повреждаться при трении об одежду и воспаляться. Такую сыпь обязательно нужно лечить, но не антигистаминными препаратами, а увлажняющими и антисептическими средствами.
Другие проявления
Другие симптомы дисбактериоза:
неприятный запах изо рта – он возникает из-за нарушения микрофлоры носоглотки, зачастую ее колонизирует грибки Кандида, и у малыша развивается молочница
беспокойное поведение – оно связано с взывающими боль и дискомфорт нарушениями в работе ЖКТ, среди которых редкий или учащенный кал, а также метеоризм
плохой набор или потеря веса из-за снижения аппетита и поноса
Стадии дисбактериоза
В зависимости от клинической картины определяют четыре степени дисбактериоза у детей. При первой (компенсированной) степени у малыша:
ухудшается аппетит
замедляется набор веса
изменяется стул
наблюдается метеоризм
Кроме того, могут возникнуть сыпь, снижение иммунитета и ломкость ногтей.
Признаки второй (субкомпенсированной) степени:
запоры или поносы
боль в животе из-за газов
кал со слизью и непереваренной пищей
Третья степень характеризуется средней тяжестью состояния ребенка. Ее симптомы:
слабость
тошнота
поносы
остановка набора веса
анемия
незначительное повышение температуры тела
Проявления тяжелой степени дисбактериоза:
очень частый стул – больше 10-12 раз в сутки
потеря веса
гипертермия (выше 38 °С)
Симптомы дисбаланса микрофлоры нарастают постепенно. Самые тяжелые признаки возникают из-за распространения патогенных микроорганизмов и общей интоксикации.
Когда обращаться к доктору?
Даже при первых симптомах легкого дисбактериоза стоит посетить врача. Обращение за медицинской помощью является обязательным при появлении осложнений. Их признаки:
отказ ребенка от еды
недобор или потеря веса
частый водянистый стул
сильные боли в животе
повышение температуры
рвота
симптомы обезвоживания – отсутствие слез, редкое мочеиспускание, западание родничков
Многие педиатры считают, что дисбактериоз в младенческом возрасте – нормальное явление. Если у малыша, получающего естественное питание, наблюдается жидковатый и частый стул с незначительным количеством слизи, но он отлично себя чувствует, не стоит паниковать. Явные симптомы неблагополучия (понос, запор, температура, срыгивания, боли в животе) – повод для обращения к врачу. Доктор сможет определить, что происходит с малышом, и дать советы, касающиеся его лечения.
Читайте также:
Симптомы и лечение дисбактериоза у новорожденных
В этой связи важно, чтобы в момент рождения малыша окружало его как можно больше полезных бактерий. Если этого не происходит, возникает нарушение баланса количества и качества флоры, которое у новорожденных называется дисбактериозом.
Полное отсутствие одного из видов бактерий влечет за собой расстройство кишечника (диарею, запор), нарушение обмена веществ, снижение иммунитета, а также развитие пищевой аллергии.
Причины дисбактериоза у новорожденных
Часто порок развития микрофлоры кишечника у новорожденных вследствие таких факторов:
Кормить ребенка грудью было поздно. Материнское молоко способствует нормальному развитию кишечной флоры. В нем содержатся все необходимые бактерии, которые так необходимы крохе для иммунитета. При задержке получения грудного молока слизистая оболочка кишечника ребенка разрушает штаммы бактерий, не присущих кишечнику человека, и развитие болезни.
Лечение кормящих женщин или новорожденных антибиотиками. Существующие современные препараты, как правило, не обладают строгим избирательным действием, которое может атаковать как болезнетворные микроорганизмы, так и полезные бактерии. Этот побочный эффект достаточно выражен в отношении лактобацилл. Однако не имеет значения, каким образом ни одно лекарство не попало в организм. Также противомикробные средства кормящей матери могут вызвать развитие дисбактериоза у новорожденного ребенка.
Острое воспаление или хронический характер.Любое воспаление в организме связано с тем, что он содержит очаг условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Они очень стремительно развиваются в организме крохи. Стоит отметить, что воспалительные процессы в желудочно-кишечном тракте могут быть вызваны даже теми факторами, которые на первый взгляд совершенно не связаны с развитием заболевания кишечника. Речь идет о различных стрессах, длительном нахождении в задымленном месте, а также о возможных травмах при родах.
глисты, редкая причина болезней у младенцев, однако их появление вызывает диарею, вздутие живота, а также другие характеристики, характерные для дисбактериоза.
Дисбактериоз новорожденного. Симптомы его проявления
Нарушение кишечной флоры у младенцев, часто, а именно. Ведь они могут свидетельствовать о других заболеваниях у малыша. Классические клинические проявления позволяют точно диагностировать зоб у новорожденного, симптомы, правда, не всегда проявляются в целом, но очень часто встречаются лишь некоторые их признаки.
Общие симптомы дисбактериоза у этих новорожденных:
диарея или запор;
зловонный, неприятный запах стула;
зеленовато-желтых или зеленых фекалий;
пенистая консистенция кала новорожденного;
частая срыгивание;
вздутие и урчание с высоким газоотделением;
неприятный запах изо рта;
плохой аппетит или полное его отсутствие;
отставание в прибавке в весе от сверстников;
Боль в животе, которая может быть постоянной или приступообразной, связанной с приемом пищи или актом дефекации.
Внешний вид малыша угнетенный, говорит о сухости кожи и слизистых оболочек, иногда проявляется сыпь, которая носит аллергический характер.
Фекальный зоб новорожденного
Установить точный диагноз можно на основании лабораторного обследования ребенка. Врач прописывает сдать кал при дисбактериозе у новорожденных. Анализ представляет собой бактериологичесокое исследование фекалий, при котором наличие микроорганизмов определяется необычным кишечником.
Часто для диагностики заболеваемости используют:
копрограмма — лабораторные исследования кала, свидетельствующие о степени переваривания пищевых компонентов кишечником, а также о наличии (отсутствии) признаков воспаления;
Урожай
на условно-патогенную флору — дает представление об уровне «нейтральных» представителей бактерий без учета нормальной флоры;
Инокуляция бактерий разрастания — Анализ, дающий информацию о количестве нормальной и условно-патогенной флоры.Кроме того, его можно использовать для определения чувствительности организма к лекарствам.
Для проведения анализа на дисбактериоз забор материала имеет особое значение. Он должен быть свежесобранным и в необходимом количестве. Также необходимо отказаться от приема добавок, направленных на нормализацию микрофлоры кишечника.
Современное лечение дисбактериоза новорожденных
давайте, как можно дольше кормите ребенка грудью, ведь именно материнское молоко способно обеспечить наилучшие условия для развития здоровой микрофлоры.
Если по каким-либо причинам кормление грудью невозможно, необходимо подбирать максимально адаптированные смеси, обогащенные всеми необходимыми факторами. Такие смеси — особые молочные.
После консультации с врачом выпустить препараты, подавляющие развитие условно-патогенных бактерий. К ним относятся бактериофаги, которые поглощают и растворяют внутри клеток микробы. Кроме того, в зависимости от степени тяжести заболевания у новорожденных лечение дисбактериоза проводится антисептиками или антибиотиками.Дозировку подбирает только врач.
Расселение исключительно кишечной флоры здоровых новорожденных. Отличные помощники в действии пробиотики. Курс лечения этими средствами определяет педиатр.
Дисбактериоз | GreenMedInfo | Болезнь | Натуральная медицина
Сосредоточьтесь на своем исследовании
Щелкните любую тему ниже, чтобы отфильтровать + сфокусировать исследование
Экспериментальные исследования продолжают предлагать убедительные доказательства того, что желудочно-кишечный микробиом (ЖКТ) оказывает большое влияние на анатомическое и клеточное развитие и функции иммунной системы (1–3).Колонизация кишечника специфическими бактериями стабилизирует популяции иммунных регуляторных клеток, участвующих в поддержании здоровья. Например, было показано, что баланс Th2 / Th3 (4), Th27 (5), Treg (6) и iNKT слизистой оболочки (7) требует GIM для своего нормального развития и функционирования. Таким образом, нарушение естественного процесса колонизации кишечника, который происходит у ребенка с GIM, может иметь как немедленные, так и долгосрочные иммунные последствия. Агрессивные стандарты гигиены, использования антибиотиков и недоедания вызывают значительные краткосрочные и долгосрочные нарушения сборки и созревания ГИМ младенца (8, 9).Сейчас мы понимаем, что иммунные эффекты дисбиоза GIM не могут быть реализованы в краткосрочной перспективе. Появляются новые высококачественные исследования, которые связывают использование антибиотиков в раннем возрасте с повышенным риском развития аллергических и аутоиммунных заболеваний в более позднем возрасте (10–14). Однако соответствующее влияние дисбактериоза GIM на конкретные параметры функции Т-лимфоцитов ребенка не изучалось.
GIM младенцев особенно уязвима из-за присущей ей нестабильности и меньшего видового разнообразия по сравнению с детьми старшего возраста и взрослыми (15, 16).Антибиотики — это наиболее часто назначаемые лекарства беременным женщинам и детям и, следовательно, основная причина дисбактериоза кишечника. До 40% беременных женщин лечатся антибиотиками в перинатальный период (17, 18), и до 75% детей лечились хотя бы одним курсом антибиотиков в возрасте до 2 лет (19, 20). Наиболее распространенное лечение антибиотиками беременных женщин — это во время родов профилактика антибиотиками (IAP) во время родов для предотвращения перинатальной болезни, вызванной стрептококками группы B (GBS) у младенцев.Пенициллин, ампициллин, ванкомицин или клиндамицин — распространенные антибиотики, используемые для лечения матерей, колонизированных СГБ, во время родов (21). В нескольких исследованиях подробно описано долгосрочное влияние даже коротких курсов антибиотиков на плотность, сложность и стабильность GIM (22, 23). Влияние антибиотиков, назначаемых матери во время родов, на ГИМ младенца подробно описано в нескольких исследованиях с использованием методов, основанных на культуре и некультурировании (24–27). Насколько нам известно, ни в одном исследовании не оценивалось, как IAP-индуцированный дисбактериоз у новорожденных GIM может изменять функцию отдельных подгрупп адаптивного клеточного иммунитета после рождения.
Младенцы характеризуются отчетливым GIM. Следовательно, функциональное поведение и фенотип детских иммунных эффекторов не может регулироваться GIM таким же образом, как это было продемонстрировано у взрослых. Младенческие Т-клетки ограничены в своей способности регулировать гамма-интерферон (IFN-γ), важный медиатор в борьбе с вирусными и другими внутриклеточными патогенными инфекциями. Как было продемонстрировано на мышах и людях, детские Т-клетки способны продуцировать IFN-γ в ответ на инфекцию, но это может быть искажено по времени (слишком рано) и по величине (слишком слабо) по сравнению со взрослыми Т-клетками (28).Эти различия в развитии могут модулироваться внутренними или внешними механизмами и включать эпигенетическое гиперметилирование промотора IFN-γ (29), повышенный порог активации Т-клеточного рецептора (TCR), регулируемый miRNA (30), ингибирование Treg (31), перекос в сторону врожденный функциональный профиль (32), недостаточное содействие со стороны младенческих антигенпрезентирующих клеток (33) или метаболитов GIM (34, 35).
Мы продемонстрировали, что детеныши мышей с дисбиозом GIM, вызванным лечением матерью антибиотиками (MAT) в последние дни беременности, вызывают повышенную предрасположенность к смерти после системной вирусной инфекции (36).Мы наблюдаем, что эффекторные Т-клетки CD8 + от новорожденных мышей MAT последовательно демонстрируют неспособность поддерживать продукцию IFN-γ in vivo после инфицирования вирусом осповакцины и in vitro при стимуляции TCR. Цели этого исследования заключались в дальнейшей оценке внутренней функциональной способности MAT CD8 + T-клеток и оценке активации проксимальных и дистальных сигнальных молекул после вовлечения TCR. Мы также определили, достаточно ли переноса Т-клеток MAT CD8 + в недисбиотическую среду хозяина или стимуляции липополисахаридом (ЛПС) для восстановления сигнальной активации и ответа на IFN-γ Т-клеток MAT CD8 + .
Материалы и методы
Мыши
Все исследования на животных проводились в соответствии с протоколом на животных, утвержденным Комитетом по уходу и использованию животных Медицинского центра Колумбийского университета. От шести до восьми недель C57BL / 6J, OT-I CD45.1, Rag1KO (B6.129S7- Rag1 tm1Mom / J), MyD88KO [B6.129P2 (SLJ) — Myd88 tm1.1Def / J] и TLR4KO (B6.B10ScN- Tlr4 lps-del / JthJ) мышей содержали в течение по крайней мере 7 дней до разведения и содержали в условиях BSL-1 и BSL-2, свободных от конкретных патогенов. условия содержания животных в помещениях Медицинского центра Колумбийского университета.Пары были созданы в гареме по две самки и один самец в клетке. Беременных самок отделяли от самцов и помещали отдельно на 17 день после спаривания. Мышам, переведенным из одного помещения в другое, позволяли акклиматизироваться в течение ≥1 недели до начала экспериментов. Мыши OT-I CD45.1 были получены путем скрещивания мышей OT-I [C57BL / 6-Tg (TcrαTcrβ) 1100Mjb / J] и CD45.1 (B6.SJL- Ptprc a Pepc b / BoyJ). уже более 10 поколений. Фенотип мышей OT-I CD45.1 был подтвержден методом проточной цитометрии с использованием антител, специфичных к CD45.1 (клон A20), CD8α (клон 53-6.7), TCR Vα2 (клон B20.1) и TCR V5.1 (клон MR9-4), все от BioLegend (Сан-Диего, Калифорния, США). Все родительские штаммы были получены из лаборатории Джексона (Бар-Харбор, штат Мэн, США). Во всех экспериментах использовали однопометников женского и мужского пола до отъема.
Лечение матерей антибиотиками
Беременным матерям разрешалось пить воду, обработанную антибиотиками, содержащую смесь ампициллина (AuroMedics), стрептомицина (X-Gen Pharmaceuticals) и клиндамицина (Aurobindo Pharma) в стерильной воде (каждая в дозе 1 мг / мл) ad libitum 3–5 дней до рождения помета и на время экспериментов.Воду, обработанную антибиотиками, заменяли каждые 3 дня. Ранее мы определили, что требуется всего 3 дня, чтобы значительно изменить микробиом с помощью этого коктейля (данные не показаны) и что обновление раствора антибиотика каждые 3 дня поддерживает устойчивое истощение микробиоты у взрослых мышей.
Выделение Т-клеток и Анализ активации in vitro
Для экспериментов по стимулированию ЛПС in vitro, и переносу OT-I, общее количество Т-клеток CD8 + было очищено из объединенных селезенок соответствующего пола 15-дневного контроля (CTRL) и однопометника MAT C57BL / 6J, MyD88KO, TLR4KO и OT-I мышей, соответственно, с использованием набора для выделения CD8 мыши MojoSort (BioLegend) плюс биотин анти-CD71 (клон RI7217), биотин анти-CD45R / B220 (клон RA3-6B2) и биотин анти-TER119 (клон TER119) с последующим отрицательным отбором MACS (Miltenyi Biotec).CD8 + чистота Т-клеток обычно составляла 98%. Чтобы оценить влияние обработки LPS на продукцию цитокинов CD8 + Т-лимфоцитов, Т-клетки CD8 + стимулировали связанными с планшетом анти-CD3 (1 мкг / мл; клон 145-2C11) и растворимым анти-CD28 (2 мкг). / мл; клон 37,51) с Escherichia coli или без него 055: LPS, производный от B5 (1 мкг / мл; InvivoGen) в течение 72 часов. Для анализов передачи сигналов TCR общие Т-клетки были обогащены из индивидуально обработанных селезенок 15-дневных мышей CTRL и MAT C57BL / 6J из одного помета с использованием биотина против CD71 (клон RI7217), биотина против CD45R / B220 (клон RA3-6B2 ) и биотиновые антитела против TER119 (клон TER119) с последующей отрицательной селекцией MACS (Miltenyi Biotec).Для создания эффекторных Т-клеток для анализа передачи сигналов TCR, общие Т-клетки (2 × 10 5 клеток / 200 мкл) стимулировали связанными с планшетом анти-CD3 (1 мкг / мл; клон 145-2C11) и растворимыми анти-CD28 ( 2 мкг / мл; клон 37,51) в RPMI-10 (RPMI 1640 с добавлением 10% FBS, 20 мМ HEPES, 2 мМ l-глутамина, 0,1 мМ 2-меркаптоэтанола, 50 мкг / мл сульфата гентамицина, 50 Ед / мл пенициллина, и 50 мкг / мл стрептомицина) в 96-луночных планшетах с плоским дном и инкубировали при 37 ° C с 5% CO 2 в течение 24, 48 и 72 часов.В некоторых анализах передачи сигналов TCR использовали очищенные Т-клетки CD8 + , как указано. Все антитела были от BioLegend.
Эксперименты по переносу адоптивных клеток OT-I
Контроль и MAT OT-I CD8 + Т-клетки, объединенные от однопометников (1,5 × 10 5 /100 мкл PBS), были перенесены в совпадающие по возрасту и полу реципиенты CTRL Rag1KO путем внутрибрюшинной (внутрибрюшинной) инъекции. Через 24 часа после переноса адоптивных клеток OT-I мышей-реципиентов инфицировали i.p.с 1 × 10 4 БОЕ рекомбинантного овальбумина осповакцины (Vac-OVA) с помощью i.p. инъекция. Ежедневно наблюдали за мышами на предмет потери веса и появления болезни. Через восемь дней после заражения мышей умерщвляли ингаляцией CO 2 . Клетки перитонеального экссудата (PEC) аспирировали после промывания брюшины 1 мл стерильного PBS. Селезенки и брыжеечные лимфатические узлы (MLN) были механически разрушены для получения суспензий отдельных клеток, а затем обработаны буфером ACK для лизиса эритроцитов.Для обнаружения цитокинов клетки культивировали в течение 5 ч в RPMI-10 с пептидом SIINFEKL (5 мкМ; пептид Новой Англии) в присутствии брефельдина А и монензина (BioLegend).
In vivo Лечение LPS и инфекция Vac-OVA
Пятнадцатидневных мышей CTRL и MAT C57BL / 6J были инфицированы Vac-OVA (1 × 10 4 БОЕ, внутрибрюшинно) и перорально обработаны E. coli. 0111: LPS, полученный из B4 (50 мкг орогастрального; InvivoGen), начиная со дня заражения и продолжая через день в течение 10 дней.Ежедневно наблюдали за мышами на предмет потери веса и появления болезни. Через одиннадцать дней после заражения мышей умерщвляли путем ингаляции CO 2 . Селезенки механически разрушали для получения суспензий отдельных клеток, а затем обрабатывали буфером ACK для лизиса эритроцитов. Для обнаружения цитокинов спленоциты культивировали в течение 5 ч в RPMI-10 с пептидом SIINFEKL (5 мкМ; пептид Новой Англии), форбол 12-миристат 13-ацетат (PMA) (10 нг / мл) и иономицином (1 мкг / мл) в присутствии брефельдина А и монензина (BioLegend).
Проточная цитометрия
Одноклеточные суспензии лимфоцитов, выделенных из селезенки, MLN или PEC неинфицированных и инфицированных новорожденных мышей, окрашивали оптимальными концентрациями следующих антител и реагентов: CD3ε (клон 145-2C11), CD8α (клон 53-6.7), CD25. (клон PC61), CD44 (клон IM7), CD62L (клон MEL-14), CD69 (клон h2.2F3), TNF-α (клон MP6-XT22), IFN-γ (клон XMG1.2), pTyr (клон pY20), ZAP-70 (клон 1E7.2), фосфорилированный ZAP-70 (pZAP-70) Tyr319 (клон n3kobu5; eBioscience), Erk2 (клон REA186; Miltenyi Biotec), фосфо-Erk-1/2 (pErk1 / 2 ) Thr202 / Tyr 204 (клон 4B11B69), c-Rel (клон REA397; Miltenyi Biotec), Ki-67 (клон B56; BD Biosciences), аннексин V и 7-аминоактиномицин D (7-AAD).Все антитела и реагенты были от BioLegend, если не указано иное. Мертвые клетки были исключены из анализа путем окрашивания Zombie Aqua (BioLegend). Клетки анализировали на проточном цитометре Fortessa (Becton Dickinson) с использованием программного обеспечения CellQuest ™. Данные анализировали с помощью программного обеспечения для анализа FlowJo v10 (TreeStar).
Анализ сигналов TCR с помощью проточной цитометрии
CTRL и MAT Т-клеток младенцев (5 × 10 5 клеток / 50 мкл), которые были свежевыделены (нестимулированы) или стимулированы анти-CD3 / анти-CD28 в течение 24, 48 и 72 ч, инкубировали с растворимыми или без них. анти-CD3 (10 мкг / мл; клон 145-2C11; BioLegend) и растворимый анти-CD28 (10 мкг / мл; клон 37.51, BioLegend) в холодном RPMI 1640 с добавлением 0,5% FBS в 96-луночных круглодонных планшетах при 4 ° C в течение 15 мин, промытых холодной средой, инкубированных с растворимым козьим антихомячьим IgG или без него (20 мкг / мл; Jackson ImmunoResearch Лаборатории) при 4 ° C в течение 15 мин, промывали холодной средой, затем ресуспендировали в 50 мкл среды и инкубировали на водяной бане при 37 ° C в течение 2 мин. После сшивания CD3 / CD28 клетки немедленно фиксировали 50 мкл предварительно нагретого буфера Cytofix (BD Biosciences) для окрашивания Erk2 и pErk1 / 2 или буфера IC Fixation (eBioscience) для ZAP-70, pZAP-70, pTyr и c. -Rel окрашивание, инкубировали при 37 ° C в течение 10 мин и промывали буфером FACS (HBSS, содержащий 1% FBS и 0.1% азид натрия) перед окрашиванием антителами к CD8α, CD44 и CD62L при 4 ° C в течение 30 мин. Для внутриклеточного окрашивания Erk2 и pErk1 / 2 клетки пермеабилизировали с помощью предварительно охлажденного буфера Phosflow Perm III (BD Biosciences). Для внутриклеточного окрашивания ZAP-70, pZAP-70, pTyr и c-Rel клетки пермеабилизировали с помощью буфера Perm Wash (BioLegend). Клетки инкубировали с внутриклеточными антителами при 4 ° C в течение ночи, промывали буфером Perm Wash и затем буфером FACS перед анализом. Анализ выполняли с привязкой к наивным (CD44 — ) или эффекторным (CD44 + ) CD8 + Т-клеткам, как указано.
Статистический анализ
Статистический анализ проводился с использованием GraphPad Prism 7.0. Данные анализировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Холма-Сидака или непарного двустороннего критерия Стьюдента t , как указано. Во всех анализах значения с p <0,05 считались статистически значимыми.
Результаты
MAT Effector CD8 + Т-клетки демонстрируют меньше полифункциональных цитокиновых ответов, чем клетки CTRL
Недавно мы сообщили, что у маленьких мышей, матери которых лечили антибиотиками (MAT) в последние дни беременности и во время кормления грудью, значительно изменился состав GIM, повысилась восприимчивость к системной вирусной инфекции, изменились популяции клеток врожденного иммунитета и снизился эффекторный CD8. + Т-клеточные ответы по сравнению с младенцами CTRL (36).В частности, эффекторные Т-клетки MAT CD8 + неспособны поддерживать продукцию IFN-γ in vivo после инфицирования вирусом осповакцины и in vitro при стимуляции TCR и CD28 (36). Эти данные привели нас к гипотезе о том, что дисфункция, наблюдаемая в MAT CD8 + Т-клетках, была вызвана внутренними клеточными дефектами.
Чтобы решить судьбу MAT и CTRL-антиген-специфичных Т-клеток CD8 + , мы адоптивно перенесли овальбумин-специфические антиген-специфические CD8 + Т-клетки в хозяина с нормальным GIM до заражения системной вирусной инфекцией.Мыши Rag1KO не поддерживают эндогенные В- или Т-клетки, хотя подмножества врожденных иммунных клеток сохраняются (37), что позволяет оценить распространение и функцию перенесенных овальбумин-специфических Т-клеток OT-I в ответ на инфекцию. В этих экспериментах 1,5 × 10 5 селезеночных OT-I CD8 + Т-клеток, выделенных из дня жизни (dol) 15 конгенных (CD45.1) мышей MAT и CTRL, были адоптивно перенесены в детей, соответствующих возрасту и полу. CTRL Rag1KO мышей. В течение 24 часов, прежде чем может произойти значительная гомеостатическая пролиферация перенесенных клеток (38), мышей инфицировали Vac-OVA (1 × 10 4 БОЕ i.п.). В день инфицирования (doi) 8, который соответствует пику системного адаптивного иммунного ответа против осповакцины, мы выделили лимфоциты из очага инфекции в брюшине и из лимфоидных тканей, дренирующих систему (39). Мы обнаружили эквивалентные проценты MAT и CTRL OT-I CD8 + Т-клеток (CD45.1 + TCRVβ5 + ) в PEC, MLN и селезенке мышей-реципиентов (рисунок 1A). Эквивалентные проценты эффекторных Т-клеток MAT и CTRL OT-I (CD44 + CD62L —) были обнаружены в месте инфекции (PEC) и в селезенке.Однако значительно сниженный процент эффекторов MAT OT-I был обнаружен в MLN мышей-реципиентов (рис. 1B). Затем мы проанализировали экспрессию маркера активации CD69 в эффекторных Т-клетках MAT и CTRL OT-I, распределенных в селезенке, MLN и PEC мышей-реципиентов. Мы обнаружили аналогичные проценты эффекторных Т-клеток CD69 + MAT и CTRL OT-I на каждом сайте (рис. 1C). Тем не менее, исходя из уровней экспрессии CD69, эффекторы MAT OT-I были менее активированы, чем эффекторы CTRL, но только в MLN (рис. 1D).Наконец, мы оценили способность MAT и CTRL OT-I T-клеток, выделенных из селезенки, MLN и PEC мышей-реципиентов CTRL Rag1KO, инфицированных Vac-OVA, производить эффекторные цитокины IFN-γ и TNF-α в ответ на Ограниченный MHC классом I OVA-пептид SIINFEKL. Полифункциональные эффекторы Т-клеток CD8 + образуются после инфицирования вирусом осповакцины (40) и также связаны с лучшим CTRL вирусных инфекций (41, 42). Как MAT, так и CTRL OT-I эффекторные Т-клетки имели одинаковый процент клеток, продуцирующих IFN-γ и TNF-α, в месте инфекции (PEC) (рис. 1E).В то время как эффекторы MAT OT-I проявляли устойчивые ответы IFN-γ в периферических лимфоидных органах, эффекторные T-клетки CTRL OT-I, выделенные в периферических лимфоидных тканях (селезенке и MLN), характеризовались высокой частотой IFN-γ и TNF-α, двойными. продуцирующие клетки (селезенка 58% и MLN 61%). Эффекторные Т-клетки MAT OT-I имели низкую частоту этой двойной продуцирующей подгруппы (селезенка 39% и MLN 30%) и заметно более высокую частоту клеток, не продуцирующих цитокины (селезенка 19% и MLN 20%; Рисунок 1E). Эти результаты показывают, что Ag-специфические CD8 + Т-клетки, полученные от мышей MAT, несмотря на первоначальное праймирование в среде нормальной микробиоты при оптимальных условиях активации, в целом поддерживают дифференциальный фенотип от CTRL Ag-специфических CD8 + Т-клеток, демонстрируя пониженную полифункциональность. противовирусные цитокиновые ответы.Такое поведение согласуется с гипотезой о существовании внутренних различий в Т-клетках MAT CD8 + младенцев (36), возможно, запечатленных в результате их развития в среде, обедненной GIM.
Фигура 1. Эффекторные Т-клетки CD8 + для лечения материнскими антибиотиками (MAT) проявляют меньше полифункциональных цитокиновых ответов, чем контрольные (CTRL) эффекторные клетки . Конгенные (CD454.1) OT-I CD8 + Т-клетки, выделенные из селезенки в день жизни 15 мышей CTRL и MAT были адоптивно перенесены в мышей-реципиентов CTRL Rag1KO, соответствующих возрасту и полу, за 24 часа до инфицирования вирусом осповакцины-OVA (1 × 10 4 БОЕ внутрибрюшинно).Лимфоциты, выделенные из селезенки, брыжеечных лимфатических узлов (MLN) и клеток перитонеального экссудата (PEC) мышей-реципиентов CTRL Rag1KO, анализировали на (A) процентов CD45.1 и Т-клеточного рецептора (TCR) Vβ5 + клеток от общего числа лимфоцитов, (B) процентов CD44 + и CD62L — клеток (эффекторные Т-клетки, Teff) OT-I CD8 + Т-клеток, (C) процентов CD69 + клетки OT-I Teff клеток, (D) медианная интенсивность флуоресценции (MFI) CD69 клеток OT-I Teff и (E) процент интерферона гамма (IFN-γ) — и TNF-α-экспрессирующих Клетки OT-I Teff после стимуляции in vitro пептидом SIINFEKL (5 мкМ).DN, дважды отрицательный по экспрессии IFN-γ и TNF-α. Показаны объединенные данные из двух независимых экспериментов (CTRL, n = 7; MAT, n = 10). Данные на панелях (A – C) представлены как среднее + SEM. * p <0,05, непарный двусторонний тест Стьюдента t -тест.
Наивные MAT CD8 + Т-клетки демонстрируют измененную передачу сигналов TCR
Ранее мы наблюдали, что MAT и CTRL эффекторные CD8 + Т-клетки генерировали in vitro после стимуляции TCR и CD28 имели аналогичную частоту IFN-γ-продуцирующих клеток через 24 часа после стимуляции, но эффекторные клетки MAT не могли поддерживать IFN. -γ через 72 ч после стимуляции (36).Включение TCR и CD28 инициирует внутриклеточные сигнальные пути, которые приводят к активации факторов транскрипции, которые способствуют активации, пролиферации, дифференцировке, продукции цитокинов и выживанию Т-клеток (43). Сигнальные пути митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) и ядерного фактора-κB (NF-κB) имеют решающее значение для продукции IFN-γ Т-клетками (44–49). Мы предположили, что нарушение продукции IFN-γ в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + является результатом измененной передачи сигналов, опосредованной TCR.Соответственно, мы проанализировали экспрессию и активацию проксимальных и дистальных белков, участвующих в передаче сигналов TCR, включая альфа-цепь CD8 (CD8α), бета-цепь TCR (TCRβ), проксимальную протеинтирозинкиназу ZAP-70, MAPKs Erk1 / 2, и член семейства факторов транскрипции NF-κB, c-Rel. Мы предположили, что внутренние дефекты в MAT CD8 + Т-клетки могут возникать в наивных клетках или позже, во время их эффекторной стадии. Было описано, что опосредованные TCR сигнальные ответы различаются между наивными, эффекторными и подгруппами Т-клеток памяти CD8 + (50, 51).Таким образом, мы обогатили общие Т-клетки из селезенки неинфицированных мышей dol 15 MAT и CTRL для анализа передачи сигналов, опосредованной TCR, у наивных и in vitro, генерирующих эффекторных Т-клеток CD8, + , с помощью проточной цитометрии.
Сначала мы проанализировали экспрессию CD8α и TCRβ в MAT и CTRL-наивных CD8 + Т-клетках. Мы отметили эквивалентную экспрессию этих белков клеточной поверхности в обеих группах (Рисунки 2A, B). Затем мы проанализировали экспрессию проксимальной сигнальной молекулы TCR ZAP-70.Несмотря на снижение уровней экспрессии белка в MAT-наивных CD8 + Т-клетках (фиг. 2C), как MAT, так и CTRL-клетки проявляли эквивалентные уровни экспрессии pZAP-70 после перекрестного связывания TCR и CD28 (фигура 2D). Более того, стимуляция H 2 O 2 , которая обходит стимуляцию TCR и индуцирует фосфорилирование тирозина ZAP-70 (52), приводила к эквивалентной активации ZAP-70 в MAT и CTRL-наивных CD8 + Т-клетках (Рисунок 2D) . Однако нестимулированные MAT наивные CD8 + Т-клетки демонстрировали повышенное соотношение pZAP-70 / ZAP-70 по сравнению с CTRL (рис. 2E).В совокупности эти результаты показали, что проксимальная TCR-опосредованная сигнальная способность не нарушена в наивных MAT CD8 + Т-клетках и что ZAP-70 может быть гиперфосфорилирован в этих клетках.
Рисунок 2. Лечение материнскими антибиотиками (MAT) и контрольные (CTRL) наивные CD8 + Т-клетки демонстрируют эквивалентную передачу сигналов, опосредованную проксимальным Т-клеточным рецептором (TCR) . Общее количество Т-клеток, обогащенных селезенками дня жизни 15 CTRL и новорожденных мышей MAT анализировали на экспрессию (A) CD8α (CTRL, n = 7; MAT, n = 5), (B) TCRβ (CTRL, n = 13; MAT, n = 13), (C) ZAP-70 (CTRL, n = 11, MAT, n = 8) и (D ) фосфо-ЗАП-70 (pZAP-70) (CTRL, n = 6; MAT, n = 3) гейтирование наивных (CD44 —) CD8 + Т-клеток с помощью проточной цитометрии.Чтобы проанализировать экспрессию pZAP-70 (D) , Т-клетки не стимулировали (-) или стимулировали (+) анти-CD3 / анти-CD28 или H 2 O 2 в течение 2 минут при 37 ° C. . (E) Соотношение pZAP-70 / ZAP-70 в нестимулированных наивных CD8 + Т-клетках (CTRL, n = 6; MAT, n = 3). Показаны характерные графики (CTRL, белый; MAT, черный; пунктирная линия, отрицательный контроль окрашивания) и анализ средней интенсивности флуоресценции (MFI). Данные представляют два независимых эксперимента и представлены как среднее значение + SEM.** p <0,01, непарный двусторонний тест Стьюдента t -тест.
Затем мы оценили дистальные сигнальные компоненты пути передачи сигналов TCR, в частности, сосредоточив внимание на пути MAPK, регулируемом с помощью Erk1 / 2, поскольку его активация является критической для активации и дифференцировки Т-клеток (53). MAT и CTRL-наивные Т-клетки CD8 + показали аналогичные уровни экспрессии Erk2 (фиг. 3A) и после перекрестного связывания TCR / CD28, равные проценты (фиг. 3B) и уровни экспрессии pErk1 / 2 (фиг. 3C).Чтобы определить, была ли передача сигналов протеинкиназы C (PKC) выше пути Erk1 / 2 MAPK эквивалентна в MAT и CTRL-наивных Т-клетках CD8 + , мы обошли передачу сигналов TCR путем активации Т-клеток комбинацией сложного эфира форбола PMA. и ионофор кальция иономицин. PMA индуцирует аутофосфорилирование PKC, имитируя естественный лиганд диацилглицерин, и иономицин действует синергетически с PMA (54). Мы определили, что у наивных MAT CD8 + Т-клетки имели пониженную частоту и уровни экспрессии pErk1 / 2 при стимуляции PMA и иономицином, предполагая, что активация PKC и мобилизация Ca 2+ может быть несколько нарушена в этих клетках (Фигуры 3B , В).Наконец, мы проанализировали экспрессию c-Rel, компонента пути передачи сигнала NF-κB, в MAT и CTRL-наивных Т-клетках CD8 + . Уровни его экспрессии были значительно снижены в клетках MAT по сравнению с CTRL (рис. 3D). В совокупности наши результаты демонстрируют, что хотя MAT и CTRL-наивные CD8 + Т-клетки демонстрируют эквивалентную проксимальную TCR-опосредованную передачу сигналов, дистальные и зависимые от кальция события передачи сигналов могут быть нарушены.
Рисунок 3.Передача сигналов, опосредованная дистальными Т-клеточными рецепторами, нарушена при лечении материнскими антибиотиками (MAT) наивных CD8 + T-клеток . Общее количество Т-клеток, обогащенных селезенками из контрольной группы 15-го дня жизни (CTRL) и мышей MAT, анализировали на предмет экспрессии (A) Erk2 (CTRL, n = 5; MAT, n = 4), (B) процентов фосфо-Erk-1/2 (pErk1 / 2) положительных клеток (CTRL, n = 5; MAT, n = 4), (C) экспрессия pErk1 / 2 (CTRL , n = 5; MAT, n = 4), и (D) выражение c-Rel (CTRL, n = 6; MAT, n = 3) гейтирование наивно (CD44 — ) CD8 + Т-клетки методом проточной цитометрии.Для анализа экспрессии pErk1 / 2 (B, C) Т-клетки оставляли нестимулированными (-) или стимулированными (+) анти-CD3 / анти-CD28 или форболом 12-миристат 13-ацетатом (PMA) / иономицином в течение 2 дней. мин при 37 ° C. Показаны характерные графики (CTRL, белый; MAT, черный; пунктирная линия, отрицательный контроль окрашивания) и анализ средней интенсивности флуоресценции (MFI) или процента. Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов, представлены как среднее значение + стандартная ошибка среднего и были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа с использованием посттеста Холма – Сидака (B, C) или непарного двустороннего теста Стьюдента t -теста (D) .* p <0,05, ** p <0,01.
Эффектор MAT CD8 + Т-клетки не поддерживают фосфорилирование Erk1 / 2
Для создания эффекторных Т-лимфоцитов CD8 + мы очистили Т-клетки CD8 + из объединенных селезенок мышей dol 15 CTRL и MAT и стимулировали Т-клетки CD8 + анти-CD3 и -CD28 до 72 часов. В этот момент Т-клетки CD8 + приобрели эффекторный статус, основанный на экспрессии маркеров активации и дифференцировки клеточной поверхности, пролиферации и продукции цитокинов (рис. 4).И MAT, и CTRL CD8 + Т-клетки проявляли эквивалентную пролиферацию и дифференцировку на основе экспрессии Ki-67 и CD44 (фиг. 4A). Однако, несмотря на идентичные частоты эффекторных клеток CD25 + (рис. 4B), значительно сниженный процент эффекторных клеток MAT продуцировал IFN-γ по сравнению с эффекторами CTRL (рис. 4C), что согласуется с нашими предыдущими выводами. Это не было связано с различиями в выживаемости клеток, так как как MAT, так и CTRL эффекторные Т-клетки CD8 + показали идентичное процентное соотношение аннексин V и 7-AAD-положительных клеток (фиг. 4D).
Рисунок 4. Лечение материнскими антибиотиками (MAT) и контроль (CTRL) эффекторных CD8 + Т-клетки пролиферируют и активируют одинаково, но эффекторы MAT производят меньше гамма-интерферона (IFN-γ) . CD8 + Т-клетки, очищенные из объединенных селезенок дня жизни 15 Мышей CTRL и MAT стимулировали анти-CD3 / анти-CD28 в течение 72 часов и анализировали на (A) процентное содержание Ki-67 и CD44 + клеток, (B) процентов CD25 + клеток эффекторных Т-клеток (CD44 + CD62L — , Teff) (CTRL, n = 6; MAT, n = 10), (C) процентов IFN-γ + клеток Teff (CTRL, n = 11; MAT, n = 13) и (D) процентов клеток Teff, положительных по 7-аминоактиномицину D и аннексину V. методом проточной цитометрии.Данные являются репрезентативными для трех независимых экспериментов, представлены как среднее + стандартная ошибка среднего и были проанализированы с помощью непарного двустороннего теста Стьюдента t -тест (B, C) . ** p <0,01.
Таким образом, чтобы определить, в какой момент времени во время дифференцировки эффекторных Т-клеток, у MAT CD8 + Т-клетки нарушена их способность эффективно передавать сигналы через TCR для поддержания продукции IFN-γ, мы проанализировали общее фосфорилирование тирозина белка ( pTyr), экспрессию ZAP-70 и экспрессию / активацию Erk-1/2 через 24, 48 и 72 часа после стимуляции.В этих анализах мы обогащали общее количество Т-клеток из селезенки мышей dol 15 CTRL и MAT и стимулировали Т-клетки анти-CD3 и анти-CD28 в указанные моменты времени. Затем был проведен анализ по эффекторным (CD44 + ) CD8 + Т-клеткам. Анализ фосфорилирования общего белка тирозина, индуцированного TCR, показал, что MAT и CTRL эффекторные Т-клетки CD8 + экспрессируют аналогичные уровни фосфорилированных тирозином белков через 24 часа после стимуляции. Однако в течение следующих 48 часов эти уровни были заметно снижены в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + по сравнению с эффекторами CTRL, что указывает на то, что опосредованные TCR сигнальные события в Т-клетках MAT CD8 + не поддерживаются во время более поздние эффекторные стадии (рис. 5А).
Рисунок 5. Эффекторная терапия антибиотиками (MAT) для матери CD8 + Т-клетки не поддерживают фосфорилирование тирозина общего белка . Общие Т-клетки, обогащенные из селезенок контрольной группы 15-го дня жизни (CTRL) и мышей MAT, стимулировали анти-CD3 / анти-CD28 в течение 24, 48 и 72 часов и анализировали на предмет экспрессии общего белка (A) фосфорилирование тирозина (pTyr) (CTRL, n = 6; MAT, n = 5), (B) Экспрессия ZAP-70 (CTRL, n = 7; MAT, n = 6) и (C) процентов ZAP-70 и интерферон-гамма (IFN-γ) положительных клеток, блокирующих эффекторные (CD44 + ) CD8 + Т-клетки с помощью проточной цитометрии.Показаны характерные графики (CTRL, белый; MAT, черный) и анализ средней интенсивности флуоресценции (MFI). Данные представляют два независимых эксперимента и представлены как среднее значение + SEM. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, односторонний дисперсионный анализ с посттестом Холма – Сидака.
Экспрессия ZAP-70 в Т-клетках увеличивается после продолжительной антигенной стимуляции, а повышенные уровни белка ZAP-70 в активированных Т-клетках CD4 + были связаны с приобретением эффекторных функций (т.е.е., продукция IFN-γ) (55). Поэтому мы проанализировали экспрессию ZAP-70 в эффекторных клетках MAT и CTRL CD8 + через 48 и 72 часа после стимуляции. Хотя экспрессия ZAP-70 была снижена в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + через 48 часов после стимуляции, его экспрессия была эквивалентно повышена как в MAT, так и в CTRL эффекторных Т-клетках CD8 + к 72 часам (фиг. 5B). Следовательно, снижение продукции IFN-γ в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + через 72 часа после стимуляции не было связано с нарушением экспрессии ZAP-70 (фиг. 5C).
Учитывая сходство экспрессии ZAP-70, мы исследовали дистальные сигнальные молекулы, необходимые для транскрипции генов цитокинов в эффекторных Т-клетках. Мы сосредоточили наш анализ на сигнальном пути Erk-1/2 и Erk2, учитывая его роль в активации Т-клеток и транскрипции IFN-γ (46, 47). Через 24 часа после стимуляции мы обнаружили сходную частоту и уровни экспрессии Erk2 в MAT и CTRL эффекторных Т-клетках CD8 + (Фигуры 6A, B). Кроме того, мы определили, что MAT и CTRL эффекторные Т-клетки CD8 + демонстрируют эквивалентные проценты и уровни экспрессии pErk1 / 2 после перекрестного связывания TCR и CD28 (Фигуры 6C, D).Однако уже через 48 и 2 часа после стимуляции эффекторные Т-клетки MAT CD8 + демонстрировали значительно пониженную частоту и уровни экспрессии pErk1 / 2 по сравнению с эффекторными клетками CTRL (Фигуры 6C, D). Хотя процент Erk2-экспрессирующих MAT и CTRL CD8 + Т-клеток оставался эквивалентным через 48 и 72 часа после стимуляции (фиг. 6A), эффекторные клетки MAT экспрессировали значительно меньшие количества Erk2 в эти моменты времени (фиг. 6B). Более тщательный анализ показал, что это происходит из-за бимодальной экспрессии Erk2 в эффекторных клетках MAT.Как показано на фиг. 6E, большинство эффекторных Т-клеток MAT CD8 + экспрессировали от промежуточных до низких уровней Erk2, тогда как большинство эффекторов CTRL экспрессировали высокие уровни этого белка через 48 часов после стимуляции. Более того, в то время как и Erk2 lo — и Erk2 hi -экспрессирующие CTRL эффекторные CD8 + Т-клетки имели фосфорилированные Erk-1/2, только Erk2 hi -экспрессирующие MAT эффекторные CD8 + Т-клетки имели фосфорилированные Erk -1/2 через 48 ч после стимуляции (рис. 6Е).Кроме того, через 72 часа после стимуляции как Erk2 lo -, так и Erk hi — экспрессирующие MAT эффекторные Т-клетки CD8 + не имели фосфорилированных Erk-1/2, в то время как эффекторные CTRL CD8 + Т-клетки сохраняли экспрессию Erk2 и устойчивое фосфорилирование Erk-1/2 (рисунок S1 в дополнительном материале). Более того, мы наблюдали точный паттерн экспрессии Erk2 и pErk1 / 2 в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + , генерированных при стимуляции очищенных Т-клеток CD8 + анти-CD3 и анти-CD28 в течение 72 часов (рисунок S2 в дополнительном материале. ).Этот результат предполагает дифференциально регулируемый контроль ответной реакции на передачу сигналов (56) в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + , что может способствовать отсутствию длительной активации Erk-1/2 (57).
Рисунок 6. Эффекторная терапия материнскими антибиотиками (MAT) CD8 + Т-клетки не поддерживают фосфорилирование Erk-1/2 . Общее количество Т-клеток, обогащенных селезенками контрольной группы 15-го дня жизни (CTRL) и мышей MAT, стимулировали анти-CD3 / анти-CD28 в течение 24, 48 и 72 часов и анализировали на (A) процентов Erk2 + клеток (CTRL, n = 7; MAT, n = 6), (B) экспрессия Erk2 (CTRL, n = 7; MAT, n = 6), (C ) % фосфо-Erk-1/2 (pErk1 / 2) -положительных клеток (CTRL, n = 7; MAT, n = 6) и (D) экспрессия pErk1 / 2 гейтирования на эффектор (CD44 + ) CD8 + Т-клетки (Teff). (E) Процент клеток Teff CD8 + , экспрессирующих низкие или высокие уровни Erk2 (Erk2 lo и Erk2 hi , соответственно) и стробирующий анализ их соответствующих популяций, экспрессирующих pErk1 / 2, через 48 часов после стимуляция. Данные представляют два независимых эксперимента и представлены как среднее значение + SEM. * p <0,05, **** p <0,0001, односторонний дисперсионный анализ с посттестом Холма – Сидака.
Обработка ЛПС усиливает продукцию IFN-γ в эффекторных клетках MAT CD8 + In vivo и In Vitro
Было показано, что лечение ЛПС может восстанавливать нарушенную продукцию Т-клеточного IFN-γ на модели взрослых мышей с антибиотико-опосредованным дисбиозом вируса гриппа A (58).Таким образом, мы решили оценить, может ли обработка ЛПС in vivo , в качестве заместителя для колонизации грамотрицательными бактериями, отсутствующими у мышей MAT (36), усиливать опосредованную Т-клетками продукцию цитокинов и спасать новорожденных мышей MAT от смерти после системная вирусная инфекция. Мышей-младенцев Dol 15 MAT и CTRL инфицировали Vac-OVA (1 × 10 4 БОЕ, внутрибрюшинно) и лечили ЛПС из E. coli (50 мкг og), начиная с дня заражения и продолжая каждый второй. день в течение 10 дней.В doi 11 мы проанализировали цитокиновый ответ селезенки MAT и CTRL эффекторных Т-клеток CD8 + и обнаружили, что обработка LPS увеличивала продукцию IFN-γ и TNF-α в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + до уровней CTRL, тогда как у него умеренный эффект в ячейках CTRL (рис. 7A). Более того, лечение LPS значительно увеличивало выживаемость младенцев MAT, в то время как необработанные животные погибали на пике вирусной инфекции, 60% мышей MAT, получавших LPS, выживали при системной инфекции вирусом осповакцины (фигура 7B).Мы также оценили влияние обработки LPS на продукцию IFN-γ и TNF-α из MAT селезенки эффекторными CD8 + Т-клетками, генерировавшими in vitro . Обогащенные MACS CD8 + Т-клетки селезенки стимулировали анти-CD3 / CD28 в отсутствие или в присутствии ЛПС E. coli 055: B5 (1 мкг / мл) в течение 72 часов. Чистота Т-клеток CD8 + в этих культурах составляла до 97% (рисунок S3 в дополнительном материале). По сравнению с эффекторными Т-клетками CD8 + CTRL, эффекторы MAT, культивируемые в отсутствие LPS, снова продемонстрировали пониженный процент клеток, продуцирующих IFN-γ и TNF-α.Включение LPS во время стимуляции эффекторов MAT, происходящих из селезенки, привело к усилению продукции IFN-γ и неизменной продукции TNF-α (фигура 7C). Эффект LPS, по-видимому, был специфическим, поскольку мы также выполнили те же анализы с использованием Т-клеток CD8 + , очищенных из объединенных селезенок dol 15 MAT и CTRL TLR4KO и MyD88KO мышей. Мы наблюдали, что эффекторы MAT TLR4KO и MyD88KO, стимулированные в отсутствие LPS, демонстрируют меньшее количество клеток, продуцирующих IFN-γ и TNF-α, чем CTRL, а добавление LPS во время стимуляции TCR не усиливает профили продукции цитокинов ни в CTRL, ни в CTRL. Полученные из MAT CD8 + Т-клетки (фиг. 8).Эти результаты предполагают, что при определенных обстоятельствах дисбиоза GIM лечение LPS может представлять собой эффективное вмешательство для восстановления функции Т-клеток CD8 + и повышения устойчивости к вирусным инфекциям.
Фигура 7. Обработка липополисахаридом (LPS) усиливает продукцию гамма-интерферона (IFN-γ) в эффекторных CD8 + клетках in vivo in vivo и in vitro материнского антибиотика (MAT). Контрольных (CTRL) и MAT младенческих мышей инфицировали в день жизни (dol) 15 овальбумином осповакцины (Vac-OVA, 1 × 10 4 БОЕ внутрибрюшинно) и обрабатывали ЛПС, полученным из Escherichia coli (50 мкг о.ж.) через день в течение 10 дней (Vac-OVA + LPS). (A) На 11 день инфицирования лимфоциты выделяли из селезенки мышей CTRL и MAT и стимулировали in vitro пептидом SIINFEKL, форбол 12-миристат 13-ацетатом и иономицином в течение 5 часов для анализа процентное содержание IFN-γ- и TNF-α-продуцирующих CD8 + эффекторных Т-клеток (CD44 + CD62L —, Teff) по данным проточной цитометрии (CTRL Vac-OVA, n = 3; CTRL Vac-OVA + LPS, n = 7; MAT Vac-OVA, n = 2; MAT Vac-OVA + LPS, n = 3). (B) Кривая выживаемости новорожденных мышей CTRL и MAT после инфекции Vac-OVA и лечения LPS (CTRL Vac-OVA, n = 5; CTRL Vac-OVA + LPS, n = 5; MAT Vac-OVA , n = 2; MAT Vac-OVA + LPS, n = 11). Сравнение кривых выживаемости проводили с помощью логрангового теста (Мантела – Кокса). Данные представляют два эксперимента по заражению. (C) Объединенные CD8 + Т-клетки, выделенные из селезенки неинфицированных мышей dol 15 CTRL ( n = 3) и MAT ( n = 6) новорожденных мышей стимулировали анти-CD3 / анти-CD28 с или без ЛПС, полученного из Escherichia coli (1 мкг / мл), в течение 72 часов и проанализировали на процентное содержание клеток Teff, продуцирующих IFN-γ и TNF-α, методом проточной цитометрии.Данные представляют из трех независимых экспериментов.
Фигура 8. Производство контрольных цитокинов (CTRL) и лечение материнскими антибиотиками (MAT) TLR4KO и MyD88KO эффекторные CD8 + Т-клетки в ответ на липополисахарид (LPS) . Объединенные CD8 + Т-клетки, выделенные из селезенки неинфицированного дня жизни 15 CTRL TLR4KO ( n = 2), MAT TLR4KO ( n = 5), CTRL MyD88KO ( n = 5) и MAT MyD88KO ( n = 4) детенышей мышей стимулировали анти-CD3 и анти-CD28 с или без ЛПС, полученного из Escherichia coli (1 мкг / мл), в течение 72 часов.Анализ процентного содержания интерферона гамма (IFN-γ) и TNF-α-продуцирующих эффекторных Т-клеток CD8 + (CD44 + CD62L —) проводили с помощью проточной цитометрии. DN, дважды отрицательный по экспрессии IFN-γ и TNF-α. Данные представляют два независимых эксперимента.
Обсуждение
Цель нашего исследования — понять, как микробиом желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) влияет на адаптивный противовирусный иммунитет в младенчестве. Мы обнаружили, что CD8 + Т-клетки от младенцев, рожденных от матерей, леченных антибиотиками (MAT), демонстрируют заметно сниженные ответы IFN-γ в отличие от мышей CTRL того же возраста, которые развиваются с нормальным GIM.MAT CD8 + Т-клеточные ответы подавлялись как in vivo, после сублетальной вирусной инфекции, так и in vitro, после стимуляции TCR / CD28. Эксперименты in vitro показали, что детские CD8 + Т-клетки MAT сохраняют внутреннюю клеточную дисфункцию при удалении из среды их хозяина. Эта внутренняя дисфункция не была полностью восстановлена после переноса 15-дневных Т-клеток MAT в соответствующую по возрасту недисбиотическую среду хозяина или после обработки E.coli — производный LPS. В совокупности наши результаты демонстрируют, что системные Т-клетки, которые развиваются у детенышей мышей с дисбиозом GIM, демонстрируют дисфункцию Т-клеток из-за измененной экспрессии и активации ключевых сигнальных белков TCR, что ставит под угрозу устойчивую продукцию цитокинов Т-клетками.
Наши результаты предполагают, что дисбиотическая среда, присутствующая в младенческих мышах MAT, импринтирует их периферические Т-клетки CD8 + и подавляет внутреннюю реактивность, хотя точный механизм, опосредующий этот эффект, еще не ясен.В то время как детские Т-клетки могут генерировать ответы, подобные взрослым, при определенных обстоятельствах (59), новые исследования неонатальных Т-клеток из нормальной среды микробиоты хозяина подтверждают, что внутренние свойства отличают их чувствительность к ТКО от ювенильных и взрослых Т-клеток (60, 61). Т-клетки CD4 + , происходящие из пуповинной крови человека, были обнаружены с дефицитом TCR-ассоциированных сигнальных молекул, включая низкую экспрессию Lck, неэффективное фосфорилирование Lck и нижестоящее снижение экспрессии TCR-ассоциированного белка (62, 63).Кроме того, неонатальные CD8 + Т-клетки человека, полученные из пуповинной крови, по-видимому, нуждаются в IL-12 для обеспечения «третьего сигнала» после стимуляции CD3 и CD28 для достижения максимального расширения, пролиферации, продукции IL-2 и дифференцировки в IFN. -γ-продуцирующие эффекторные клетки (64). Для достижения максимального фосфорилирования проксимальных сигнальных молекул и сигнальных молекул TCR на более поздних стадиях необходима устойчивая передача сигналов IL-12 в течение по крайней мере 72 часов. Таким образом, проксимальные и дистальные сигнальные события могут не действовать согласованно в детских Т-клетках, модифицируя их реакцию на TCR-зависимую передачу сигналов для активации и дифференцировки.Мы аналогичным образом отметили различия в проксимальной экспрессии и последующем устойчивом фосфорилировании в MAT CD8 + Т-клетках. Обнаружение дифференциальной экспрессии Erk1 / 2 в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + было неожиданным, однако более низкая экспрессия Erk1 / 2 коррелировала со сниженной и плохо устойчивой активацией в этих клетках. Мы предполагаем, что эта дифференциальная экспрессия может быть связана с альтернативными вариантами сплайсинга или другими внутренними факторами, регулирующими посттрансляционную стабильность белка Erk1 / 2 (65) в эффекторных Т-клетках MAT CD8 + .Будущие эксперименты будут направлены на оценку этих возможностей. В целом, наши результаты указывают на потребность в численно плотном и разнообразном GIM для обеспечения полной эффекторной функции детских CD8 + Т-клеток.
Помимо различий в передаче сигналов Т-клетками, младенцы также характеризуются отличным GIM (66). Следовательно, функциональное поведение и фенотип адаптивных Т-клеточных ответов младенцев, регулируемых GIM, могут не быть эквивалентными взрослым. У взрослых мышей истощение микробиоты антибиотиками подавляло активацию инфламмасом и экспрессию генов противовирусной защиты в клетках врожденного иммунитета, что приводило к слабым гриппоспецифическим или LCMV-специфическим ответам Т-клеток (67, 68).Однако наши результаты показывают, что дисбактериоз детского GIM напрямую влияет на младенческие CD8 + Т-клетки, что еще больше ставит под угрозу уже сниженную способность младенческих Т-клеток генерировать достаточные ответы, управляемые IFN-γ (28).
Мы наблюдали повышенное соотношение pZAP-70 / ZAP-70 в нестимулированных MAT, наивных CD8 + Т-клетках по сравнению с CTRL-клетками. Есть преимущество, что измененный GIM может влиять на базовую активацию системных Т-клеток. Хуанг и др. установили модель мыши с ограниченной флорой, в которой мышей содержат ограниченную микробиоту, определяемую шестью непатогенными видами Clostridium .Они наблюдали, что взрослые селезеночные наивные CD4 + Т-клетки проявляли гиперреактивность TCR, которая была связана с повышенным фосфорилированием сигнальных молекул ZAP-70, Lck и LAT, а также повышенной активацией, вызванной гибелью клеток (69). Возможно, что изменения в TCR-опосредованной передаче сигналов в MAT T-клетках включают гиперфосфорилированные базальные уровни критических проксимальных и промежуточных сигнальных белков для компенсации нижестоящих дефицитов. Так же, как Хуанг и др., Мы аналогичным образом предполагаем, что пониженная микробная среда у мышей MAT либо подавляет базовое состояние, необходимое для функционального гомеостаза Т-клеток, либо циркулирующие метаболиты микробиома регулируют дифференциальную реакцию Т-клеток CD8 + .Снижение плотности или разнообразия видов, продуцирующих иммунорегулирующие метаболиты, может, таким образом, влиять на нормальные паттерны транскрипции и регуляции сигналов в периферических детских Т-клетках, зависящих от этих продуктов.
Множество механизмов / и механизмов, с помощью которых продукты, полученные из микробиоты, опосредуют иммунные эффекты, еще предстоит полностью охарактеризовать (70, 71). Согласно недавнему исследованию, способность вырабатывать воспалительные цитокины в лимфоцитах периферической крови человека была связана с GIM и конкретными микробными метаболическими путями (72).Кроме того, показано, что два хорошо описанных примера факторов микробного происхождения регулируют Т-клетки in vivo . ПСА, продуцируемый Bacteroides fragilis , задействует TLR2, экспрессируемый на Т-клетках, чтобы способствовать дифференцировке Treg в периферических лимфоидных тканях (73). Бутират короткоцепочечных жирных кислот служит источником энергии для эпителиальных клеток толстой кишки, но также опосредует гомеостаз и функцию иммунной системы за счет связывания с GPR43, экспрессируемым на множестве врожденных и адаптивных иммунных клеток, в частности, Treg (74).Бутират также может управлять эпигенетической модификацией генов, воздействуя на HDAC (35). Принимая во внимание важность эпигенетических механизмов, участвующих в регуляции развития и функции детских Т-клеток (32, 75), интересно предположить, насколько они проницаемы для циркулирующих бактериальных метаболитов, происходящих из детского GIM. Прямое действие ЛПС на обогащенные или очищенные Т-клетки человека и мыши in vitro было описано ранее (76). Однако мы не можем полностью исключить, что эффекты in vitro Т-клеток LPS CD8 + в нашем анализе были опосредованы через , загрязняющие врожденные эффекторы, поскольку мы не использовали сортированные очищенные клетки.Тем не менее, LPS успешно использовался в качестве адъюванта для усиления вирусных и вакциноспецифических ответов in vivo (58, 77), и мы действительно наблюдали положительный эффект LPS бактериального происхождения на усиление функции MAT Т-лимфоцитов и MAT у младенцев. выживаемость мышей после вирусной инфекции. Частичный ответ, наблюдаемый у мышей, может указывать на то, что лечение было проведено слишком поздно, чтобы полностью восстановить функциональные ответы MAT, и что существуют определенные возрастные окна, когда должен присутствовать нормальный GIM, чтобы поддерживать развитие и функцию нормального иммунитета.
Младенчество и детство — это период, отмеченный повышенной исходной восприимчивостью к вирусным инфекциям, а также период жизни, когда вводится большинство вакцин. Таким образом, оценка того, как дисбиоз GIM в этот период жизни может изменить Т-клеточный иммунитет, имеет решающее значение для нашего понимания иммунитета младенцев в целом и для разработки стратегий, которые могут защитить или усилить Т-клеточный иммунитет CD8 + . Наши результаты предполагают, что GIM младенца импринтирует функцию Т-лимфоцитов CD8 + в течение этого периода жизни и может иметь долгосрочные последствия.Наш текущий и будущий анализ этой модели включает: (1) определение длительного воздействия дисбиоза GIM на функцию Т-лимфоцитов, особенно в генерации долговременной памяти, (2) стратегии тестирования, которые можно использовать для коррекции дисфункции, (3) и оценка роли микробных метаболитов GIM младенческого происхождения в регуляции противовирусного иммунитета CD8 + Т-клеток.
Авторские взносы
GG-P и EL-S разработали и провели эксперименты, проанализировали и интерпретировали данные, подготовили рисунки и написали рукопись.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Исследование, описанное в этой публикации, было проведено в CCTI Flow Cytometry Core.
Финансирование
Эта работа была поддержана Премией Гарольда Амоса за развитие факультетов от Фонда Роберта Вуда Джонсона (грант № 71107) и Премией за разнообразие факультетов Колумбийского Провоста.Спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и интерпретации данных или в решении представить работу для публикации
Frontiers | Кишечный микробиом в раннем возрасте: здоровье и болезни
Введение
Кишечник младенца проходит важные стадии развития, которые полностью зависят от колонизации микроорганизмами, начиная с рождения. Эксперименты на стерильных животных моделях показали, что микробная колонизация индуцирует анатомическое развитие кишечного эпителия в типичный образец микроворсинок, увеличивает скорость обновления эпителиальных клеток и запускает созревание кишечной лимфоидной (иммунной) ткани (GALT) (1, 2).Функционально у стерильных мышей не развивается устная толерантность (3), а мыши, получавшие антибиотики, гораздо более восприимчивы к кишечным патогенам (4–6). Кроме того, после лечения антибиотиками несколько моделей на животных демонстрируют либо обострение, либо улучшение фенотипа иммуноопосредованных заболеваний, включая астму (7) и диабет 1 типа (8), что подчеркивает роль микробиоты в развитии иммуноопосредованных заболеваний.
Поведение детей в первые 3 года жизни явно способствует значительному воздействию микробов: питание непосредственно с материнской кожи, постоянное попадание рук, ног и других предметов в рот и контакт рук с поверхностью пола, особенно во время ползания и ранние этапы ходьбы.Дети также чаще страдают инфекционными заболеваниями, чем взрослые. Неудивительно, что микробиота у детей в возрасте до 3 лет существенно колеблется и более восприимчива к факторам окружающей среды, чем микробиота взрослых (9). Современные изменения в образе жизни, в том числе улучшение санитарной обработки, кесарево сечение, использование антибиотиков и иммунизация, являются одними из факторов, которые могут изменить микробиоту, и изучаются как потенциальные движущие силы внезапного роста иммуноопосредованных заболеваний в развитых странах.Была выдвинута гипотеза, что в раннем возрасте существует «критическое окно», в течение которого микробиота может быть нарушена таким образом, что может способствовать развитию болезни в более позднем возрасте (10). Это было показано на модели астмы на животных, в которой лечение антибиотиками исключительно в перинатальном периоде приводит к более тяжелому фенотипу заболевания (7).
Целью этого обзора является обобщение последних результатов исследований детской микробиоты, сосредоточенных на первых трех годах жизни.Кроме того, мы собираем некоторые из наиболее важных пренатальных, перинатальных и послеродовых событий, которые, как известно, изменяют микробиом кишечника в раннем возрасте. Мы также обсуждаем растущее количество данных, указывающих на роль изменений микробиоты в раннем возрасте, влияющих на развитие кишечных и экстракишечных заболеваний. Поскольку изучение микробиоты резко изменилось с появлением методов, не зависящих от культуры, мы начинаем этот обзор с описания высокопроизводительных методов секвенирования, используемых в настоящее время для анализа микробных сообществ.
Методы исследования микробиоты
Наша концепция микробиоты значительно расширилась с появлением молекулярных методов изучения микробных сообществ. Эти методы затмили небольшую долю бактериальных групп, способных расти в культурах. Хотя в других естественных средах показатели культивирования немного выше (11, 12), культивируемость сообществ, связанных с человеком, остается очень низкой (13, 14). Эти методы также привели к открытию новых таксонов, таких как тип TM7 в кишечном тракте человека и других участках тела (15–18).Обсуждение всех методов изучения микробиоты выходит за рамки настоящего обзора, поскольку уже есть обзоры, посвященные этой теме (19–21). Вместо этого мы обсуждаем наиболее актуальные методы, используемые в исследованиях микробиоты, включая целевые подходы, такие как секвенирование следующего поколения гена 16S рРНК (NGS), а также крупномасштабный метагеномический подход, также известный как секвенирование дробовиком.
Ген 16S рРНК NGS — Исследования сообщества микробиоты
В настоящее время золотым стандартом для анализа микробного сообщества является амплификация гена 16S рРНК, хотя другие специфичные для бактерий мишени, такие как рибосомная 23s-субъединица и внутренне транскрибируемый спейсер (ITS), спейсерная область 16S-23S (22, 23) были используемый.Ген 16s рРНК имеет преимущества кодирования нескольких консервативных областей, которые являются исключительными для всех бактерий, и гипервариабельных областей, которые придают специфичность большому количеству видов бактерий. Текущие справочные базы данных по таксономии, такие как SILVA (24), содержат более 3 миллионов выровненных последовательностей 16S. Типичный анализ сообщества 16S включает выделение ДНК или РНК, амплификацию, стандартизацию, построение библиотеки, секвенирование и последующий биоинформатический анализ. Выбор праймеров для амплификации желаемой области гена 16S, а также используемый протокол экстракции могут внести систематическую ошибку в результаты микробного состава.Например, праймеры, нацеленные на области V1 – V2, не способны амплифицировать важные бактериальные группы, такие как Bifidobacterium . Использование этих праймеров привело к ошибочному заключению, что Bifidobacteria были незначительной бактериальной группой в кишечнике младенца (25). Хотя до сих пор нет единого мнения по этому поводу, сравнительный анализ с полноразмерным секвенированием по Сэнгеру гена 16S рРНК поддерживает использование праймеров, которые амплифицируют область V4 (26), поскольку они дают наиболее таксономически информативные последовательности (27).
В настоящее время большинство исследовательских групп используют две основные платформы секвенирования: пиросеквенсор Roche 454 (GS, FLX и FLX Titanium) и секвенатор Illumina (MiSeq и HiSeq2000; Illumina Inc., Сан-Диего, Калифорния, США). Вкратце, пиросеквенирование 454 позволяет считывать фрагменты ДНК длиной до 500 п.н., что позволяет охватить несколько гипервариабельных V-областей, что улучшает таксономическое разрешение набора данных. Платформа Illumina обеспечивает секвенирование фрагментов ДНК длиной до 150 п.н., но при этом секвенирует на 10–100 больше образцов при гораздо большей глубине секвенирования и меньшей стоимости, чем пиросеквенатор 454.Выбирая подходящие праймеры, можно добиться перекрытия последовательностей, уменьшить ошибку секвенирования и увеличить таксономическую информацию, которую можно получить при считывании. Анализ главных компонентов из большого когортного исследования, в котором использовались платформы 454 и Illumina, показал, что чтения из Illumina сгруппированы очень близко к чтениям, полученным при полноразмерном секвенировании по Сэнгеру, тогда как чтения из 454 пиросеквенирования сгруппированы отдельно (28).
Пока не существует методики секвенирования, которая считается золотым стандартом, но очень важно выбрать протоколы подготовки проб и платформы секвенирования, которые принесут наибольшую пользу каждому исследованию, с учетом среды, в которой отбираются пробы, количества проб, стоимости и желательна глубина секвенирования, среди прочего.
Метагеномика
Хотя анализ гена 16S рРНК в микробных сообществах дает обзор бактерий, присутствующих в конкретной среде, он не дает никакой функциональной информации. Для клинических исследований на людях это означает, что невозможно вывести возможный механизм, объясняющий связь между различиями в микробных сообществах и конкретными болезненными состояниями. Одним из подходов к получению функциональной биохимической информации является метагеномика. Эти крупномасштабные исследования направлены на проведение инвентаризации микробного сообщества на основе генов.Он включает в себя секвенирование разрезанной геномной ДНК без какой-либо предварительной амплификации, также известное как секвенирование дробовиком. Чтобы не упустить генетическую информацию об очень малочисленных видах, метагеномное секвенирование должно выполняться на очень большой глубине. Об этом свидетельствует недавнее исследование Human Microbiome Project, в котором каждый образец дал ~ 10 7 прочтений (29). Те же платформы NGS, которые обсуждались для целевых исследований ампликонов, используются при метагеномном секвенировании. Полученные короткие последовательности собираются в более длинные непрерывные чтения (контиги) и сравниваются с базами данных известных генов, такими как Genbank NIH.Существуют также базы данных, такие как Киотская энциклопедия генов и геномов (KEGG) (30), которые организуют гены в биохимические пути.
Превосходство методов на основе нуклеиновых кислот для изучения микробиоты над методами, основанными на культуре, хорошо известно. Хотя такие методы, как метагеномика, остаются технически сложными и дорогими для многих лабораторий, NGS гена 16S рРНК является доступным и очень информативным выбором.
Состав кишечных микроорганизмов в молодом возрасте
Возраст является основным фактором различий в микробиоте кишечника в нескольких исследованиях на людях (31).Используя последовательный отбор образцов кала у одного младенца в течение первых двух с половиной лет жизни и два больших когортных исследования микробиома человека в Северной Америке, Африке, Южной Америке и Европе, становится очевидным, что микробиом кишечника очень нестабилен в течение первых трех лет. лет жизни (9, 32, 33). Дети младше 3 лет имеют значительно более низкий индекс разнообразия по сравнению со взрослыми: ~ 1000 операционных таксономических единиц (OTU), обнаруженных в первый год жизни, по сравнению с почти 2000 OTU после этого.Однако, хотя в кишечной микробиоте младенцев преобладает меньшее количество видов бактерий, индивидуальная вариабельность в этой возрастной группе значительно выше, чем у взрослых (33).
Кишечник новорожденного при рождении представляет собой аэробную среду, в которой могут расти только факультативные анаэробы, такие как представители семейства Enterobacteriaceae. Однако в течение нескольких дней просвет кишечника становится анаэробным, что позволяет колонизировать строгие анаэробы, такие как Bifidobacterium, Clostridium и Bacteroides (34).В течение первых нескольких недель микробиота кишечника новорожденного напоминает микробиом материнской кожи и влагалища, причем преобладающими таксонами бактерий являются Enterococcaceae, Streptococcaceae, Lactobacillaceae, Clostridiaceae и Bifidobacteriaceae. В течение первых нескольких месяцев диета младенца почти полностью состоит из молока, с предпочтением ферментеров олигосахаридов молока, таких как Bifidobacterium . Многие виды бифидобактерий были выделены из кишечника младенца (35–37), и это считается наиболее распространенной группой бактерий на этой стадии (31).Отлучение от груди и / или введение твердой пищи знаменует еще один быстрый и важный сдвиг в микробиоте кишечника. Введение разнообразных питательных веществ, многие из которых являются полисахаридами, не перевариваемыми ферментами хозяина, вызывает увеличение численности Bacteroides, Clostridium, Ruminococcus и уменьшение Bifidobacterium и Enterobacteriaceae (9, 38). В последующие 12–30 месяцев микробиота кишечника младенцев превращается в микробиоту кишечника взрослых, в изобилии присутствующих в Ruminococcaceae, Lachnospiraceae, Bacteroidaceae и Prevotellaceae (31) (Рисунок 1).
Рисунок 1. Этапы микробной колонизации кишечника младенца и ребенка . Наиболее многочисленные семейства бактерий изображены в кругах, где размер круга пропорционален относительной численности таксонов бактерий на каждой стадии роста. Кишечная микробиота новорожденного изначально заселяется энтеробактериями . В последующие дни в микробном сообществе доминируют строгие анаэробные бактерии. В течение первого месяца в кишечнике преобладают виды бифидобактерий, но введение твердой пищи примерно через 4–6 месяцев сопровождается расширением клостридиальных видов (Lachnospiracea, Clostridiaceae и Ruminococcaceae).Численность представителей семейства Ruminococcaceae в последующие месяцы продолжает увеличиваться. К 2–3 годам состав микробиоты состоит в основном из Bacteroidaceae, Lachnospiraceae и Ruminococcaceae, который затем остается стабильным в зрелом возрасте.
Многие факторы определяют формирование и состав микробных сообществ во всей слизистой оболочке, включая кишечник. Наиболее важный микробный посев происходит при рождении и вскоре после него. Однако тип диеты, которую едят младенцы и дети ясельного возраста, их географическое положение и использование антибиотиков в этот период жизни, могут в течение всей жизни влиять на состав и функцию их желудочно-кишечной микробиоты.Раньше считалось, что рождение является первым микробным контактом с младенцем, но теперь имеется достаточно доказательств, подтверждающих, что внутриутробное воздействие микробов имеет место. Следующий раздел начинается с изучения in utero встреч с микроорганизмами.
Факторы, влияющие на развитие кишечной микробиоты у детей
Пренатальное воздействие
Развитие микробиоты начинается задолго до рождения ребенка. Вопреки тому, что считалось ранее, амниотическая жидкость не стерильна (39, 40).В некоторых случаях присутствие бактерий в околоплодных водах связано с болезненным состоянием. Mycoplasma и Ureaplasma в околоплодных водах — частые изоляты, вызывающие вред здоровью, такие как хориоамнионит, преждевременные роды и некротический энтероколит (NEC) (41–43). Кроме того, женщины с вагинальными инфекциями гораздо чаще рожают недоношенных (РТ) детей (44). Помимо этого, бактерии также часто обнаруживаются в околоплодных водах и плаценте доношенных здоровых младенцев (45–47).Другие типы, обнаруженные в околоплодных водах и плаценте, частично совпадают с типами, обычно встречающимися в микробиоте полости рта: Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria, Proteobacteria и Fusobacteria (40, 48). Меконий также не стерилен (49–51), что подтверждает мнение о том, что микробы в околоплодных водах имеют доступ к будущему плоду. В недавнем исследовании микробиота мекония недоношенных детей сравнивалась с отдельными наборами данных об амниотических, вагинальных и ротовых микробиотах, и было обнаружено, что наибольшее совпадение между меконием было из наборов данных об амниотических веществах (52).Таксоны бактерий, обнаруженные в меконии с использованием как культурально-зависимых, так и независимых подходов, частично совпадают с кишечной микробиотой взрослых. Enterobacteriaceae (включая Escherichia coli и Shigella spp.), Энтерококки, стрептококки, стафилококки (включая Staphylococcus epidermidis ) и Bifidobacteria (50, 53) у здоровых, доношенных детей. Кроме того, введение Enterococcus faecium беременным крысам позволило изолировать те же бактерии из мекония доношенных детенышей сразу после рождения путем кесарева сечения (53).Таким образом, хотя воздействие патогенных вагинальных микробов можно рассматривать как инфекционное событие, пренатальное воздействие фекальных микробов, вероятно, является естественной частью развития in utero . Как эти микробы получают доступ к матке, остается неизвестным, хотя бактериальная транслокация из кишечника в кровоток, а затем в матку — это одна теория, которая была предложена, но еще не проверена экспериментально (54).
Способ доставки
Приблизительно 26% младенцев, рожденных в Канаде, рождаются посредством кесарева сечения (55), и этот процент равен или выше во многих других развитых странах.Паттерны ранней колонизации младенцев, рожденных после кесарева сечения, сильно отличаются от детей, рожденных естественным путем (34, 56). Knight et al. показали, что первые микробиоты младенцев человека структурированы в основном по способу их доставки, а различия в бактериальных популяциях в кишечнике младенца аналогичны типу микробиоты, с которой ребенок сталкивается при рождении (31, 56). Фактически, данные послеродового секвенирования 16S рРНК, проведенные Knight et al. продемонстрировать, насколько микробиота кишечника младенца похожа на микробиоту влагалища или кожи матери, в зависимости от способа их рождения (56).Кроме того, анализ образцов кала у детей через 3 дня после рождения по временной температуре и денатурирующий градиентный гель-электрофорез (TTGE и DGGE) показал значительные различия в бактериальных популяциях в кишечнике новорожденных после кесарева сечения и естественных родов (57). Младенцы, рожденные после кесарева сечения, имели меньше видов Bifidobacterium и Bacteroides по сравнению с детьми, рожденными естественным путем (57–59). Кроме того, микробиота кишечника новорожденных, родившихся после кесарева сечения в возрасте 24 месяцев, менее разнообразна, чем у детей, рожденных естественным путем (60).Авторы предполагают, что это снижение разнообразия может быть связано с отсроченной колонизацией кишечника Bacteroidetes, поскольку у некоторых новорожденных, рожденных с помощью кесарева сечения, не было признаков колонизации Bacteroidetes до возраста 1 года (60). Однако у недоношенных детей эти различия не проявляются. Хотя более короткий срок беременности связан с более высокой распространенностью видов Clostridium difficile и Staphylococcus (59), способ доставки мало влияет на развитие микробиоты кишечника недоношенных детей (61).Также может быть, что модели колонизации у младенцев, рожденных недоношенными, различаются из-за увеличения количества антибиотиков и различных видов лечения, проводимых в отделении интенсивной терапии новорожденных (NICU) (62, 63).
С установлением различных микробиот кишечника среди младенцев, рожденных вагинально или путем кесарева сечения, последующее развитие различных иммунологических нарушений, связанных с способом родов. Bager et al. показывают, что кесарево сечение связано с более высоким риском развития воспалительного заболевания кишечника (ВЗК) в возрасте от 0 до 14 лет, независимо от родительской истории ВЗК (64).Blustein et al. провели исследование с участием 10 219 детей (926 родившихся в результате кесарева сечения) и обнаружили, что кесарево сечение неизменно ассоциировалось с ожирением в возрасте 6 недель, и эта связь была даже сильнее, если дети были рождены от матерей с ожирением (65). Кроме того, к 11 годам у этих детей в 1,83 раза больше шансов иметь избыточный вес или ожирение (65). Кроме того, Decker et al. обнаружили, что дети, рожденные с помощью кесарева сечения, также имеют повышенный риск развития целиакии (66).Микробный дисбиоз кишечника был наиболее приемлемым объяснением связи способа родоразрешения с исходом заболевания, но необходимы дополнительные исследования, чтобы адекватно поддержать эти гипотезы, поскольку они остаются исследованиями ассоциации.
Грудное вскармливание и кормление смесями
Грудное молоко удовлетворяет потребности грудного ребенка в питании и обеспечивает защиту от патогенов за счет передачи материнских антител (IgA) и других антимикробных факторов (67–72). Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рекомендует исключительно грудное вскармливание детей в возрасте до 6 месяцев, чтобы гарантировать, что растущий младенец получает все питательные свойства грудного молока (73).В ряде исследований сравнивалось влияние грудного вскармливания и кормления смесью (74–76). Человеческое грудное молоко содержит свой собственный микробный консорциум, который передается младенцу вместе со сложными неперевариваемыми олигосахаридами грудного молока (HMOs), которые способствуют размножению определенных кишечных микробов (77). Считается, что младенец, который потребляет примерно 800 мл грудного молока в день, проглатывает от 1 × 10 5 до 1 × 10 7 комменсальных бактерий (78), однако происхождение этих комменсалов остается неясным.Перенос бактерий с кожи матери во время кормления грудью по существу неизбежен, но ряд исследований также поддерживает гипотезу о пути развития молочной железы, согласно которой бактерии из кишечника матери могут достигать молочных желез через дендритные клетки и макрофаги матери (79). Пиросеквенирование грудного молока от семи матерей выявило присутствие ДНК ряда основных кишечно-ассоциированных бактерий (например, Bacteroides, и Clostridia) (80), а также выявило ряд родов кишечных бактерий, общих для материнских фекалии, грудное молоко и неонатальный кал (79).Кроме того, Martin et al. подтвердили, что грудное молоко и младенческие фекалии пар мать-младенец имеют одни и те же штаммы бактерий (81). Независимо от происхождения этих ассоциированных с кишечником комменсалов, в ряде исследований предпринимались попытки определить механизмы, с помощью которых грудное вскармливание способствует общему иммунному здоровью через энтеро-молочный путь (67, 81–84). Сравнение младенцев, находящихся на грудном вскармливании и на искусственном вскармливании, показывает, что младенцы, находящиеся на грудном вскармливании, обычно содержат более однородную популяцию кишечных микробов (84).Например, Bifidobacteria и Lactobacillus имеют тенденцию преобладать в кишечнике младенцев, вскармливаемых грудью, тогда как младенцы, находящиеся на искусственном вскармливании, демонстрируют более высокие доли Bacteroides, Clostridium, Streptococcus, Enterobacteria и Veillonella spp. (82–85).
Еще одна область исследований, касающихся обогащения смесей, — это ОПЗ и их влияние на микробиоту кишечника младенца. ОПЗ считаются типом пребиотиков, поскольку они способствуют росту и распространению полезных комменсалов и, следовательно, предотвращают колонизацию патогенами кишечника младенца и оказывают положительное влияние на здоровье (86).Определенные популяции кишечных бактерий, такие как Bifidobacterium spp. обладают кластерами генов, отвечающих за метаболизм этих субстратов (87, 88). В исследовании in vitro оценивалось потребление ОПЗ Bifidobacterium spp., E. coli и Clostridium perfringens и было обнаружено, что только Bifidobacterium spp. смогли эффективно метаболизировать HMO (89). Кроме того, метаболизм этих субстратов приводит к выработке лактата и короткоцепочечных жирных кислот (SCFA), что, в свою очередь, увеличивает кислотность окружающей среды, что является важным фактором предотвращения вторжения патогенов (89).Хотя Bifidobacteria имеют тенденцию доминировать в кишечнике грудных детей, HMO потребляются другими бактериальными таксонами и, следовательно, играют большую роль в колонизации кишечника младенца различными видами микробов. В отличие от Bifidobacterium spp., Bacteroides spp. (например, Bacteroides fragilis и Bacteroides vulgatus ) потребляют широкий спектр гликанов HMO (90). В исследовании на модели поросят изучалась роль добавки смеси с пребиотической смесью HMO на микробиоту кишечника и общее состояние здоровья после ротавирусной инфекции (91).Группа обнаружила, что поросята, получавшие смесь с добавками, по сравнению с поросятами, получавшими только смесь, имели повышенное количество бактерий, продуцирующих бутират, в семействе Lachnospiraceae в дополнение к меньшей продолжительности диареи, вызванной ротавирусом (91). Продолжение исследований роли методов кормления грудных детей в развитии микробиоты кишечника, вероятно, прольет свет на иммунные и метаболические механизмы, которые способствуют общему здоровью ребенка.
Введение в твердую пищу
Введение твердой пищи в желудочно-кишечный тракт младенцев (ЖКТ) играет важную роль в развитии кишечной микробиоты в раннем возрасте.Микробиота кишечника проводит гораздо более широкий спектр метаболических процессов, чем клетки ЖКТ млекопитающих, поскольку она продуцирует ряд деградирующих ферментов, которые не кодируются геномами млекопитающих (92). Следовательно, неперевариваемые углеводы, такие как полисахариды клеточных стенок растений, целлюлоза и ксиланы, могут расщепляться и ферментироваться микробиотой кишечника (93). SCFAs (наиболее распространенными из которых являются бутират, ацетат и пропионат) являются конечными продуктами микробной ферментации и являются важными источниками энергии для клеток кишечника млекопитающих, а также являются предшественниками глюконеогенеза, липонеогенеза и синтеза белка и холестерина (94).Типы и количества продуцируемых SCFAs, а также распространенность видов кишечных микробов, которые их продуцируют, определяются типами потребляемых углеводов (93–95). Кроме того, изменения в диете могут изменить типы и распространенность видов микробов в кишечнике, поскольку некоторые виды микробов могут быть лучше приспособлены для использования определенных субстратов (например, инулин и фруктоолигосахариды способствуют росту Bifidobacterium ) (93). И наоборот, некоторые типы бактерий (например, Bacteroidetes) продуцируют многочисленные углеводно-активные ферменты, которые покрывают широкий спектр субстратов, позволяя им переключаться между источниками энергии в зависимости от того, что им доступно (96).
Первое приобщение младенцев к твердой пище происходит во время отлучения от груди (дополнительное кормление), когда младенцы подвергаются воздействию гораздо большего количества неперевариваемых углеводов, чем те, которые содержатся в грудном молоке или смесях (38). Как обсуждалось выше, изменения в рационе питания могут значительно изменить микробиоту кишечника из-за присутствия новых субстратов, которые способствуют выживанию и размножению различных типов микробов (38, 93). Кроме того, функция поджелудочной железы, абсорбция в тонком кишечнике и ферментация в толстой кишке у отъемного ребенка созревают с введением неперевариваемых углеводов, что меняет общее состояние пищеварительного тракта и материалов, которые в конечном итоге достигают развивающейся толстой кишки (97).Fallani et al. использовали флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH) для характеристики микробиоты кишечника 531 ребенка в Европе до и после отлучения от груди (38). Они обнаружили, что отлучение от груди было связано со значительным уменьшением доли видов Bifidobacteria и Enterobacteria , а также видов C. difficile и C. perfringens (38). Наоборот, наблюдалось значительное увеличение доли Clostridium coccoides и Clostridium leptum (38).В недавнем исследовании 45 5-месячных младенцев, находящихся на исключительно грудном вскармливании, были случайным образом распределены в 1 из 3 групп кормления для оценки влияния добавок железа на кишечную микробиоту (98). Детей кормили либо мясным пюре, злаками, обогащенными железом и цинком, либо злаками, обогащенными только железом, в качестве основного прикорма, пока им не исполнилось 9-10 месяцев, а образцы фекалий в возрасте от 5 до 9 месяцев сравнивали среди детей в трех группах. группы (98). Таксоны актинобактерий (такие как Bifidobacteria и Rothia ), а также лактобациллы со временем уменьшились, при этом Bacteroides оставались наиболее распространенными среди детей, получавших обогащенные только железом злаки (98). Clostridium группа XIVa (большая группа бактерий, продуцирующих бутират) была гораздо более многочисленна в микробиотах детей, которых кормили мясом (98). Koenig et al. обнаружили, что введение смеси и гороха в рацион младенца было связано с увеличением типа Bacteroidetes и, после метагеномного анализа, увеличением функциональных генов взрослого микробиома, связанных с использованием углеводов и биосинтезом витаминов (9). Введение твердой пищи в рацион младенцев, по-видимому, инициирует созревание кишечной микробиоты младенца до уровня взрослого.Однако необходимы дополнительные исследования, чтобы выяснить, какие конкретные компоненты твердой пищи играют наибольшую роль в развитии микробиоты кишечника младенца и как эти режимы кормления влияют на общее состояние здоровья младенца.
География
Микробиота кишечника различается по географическому положению по ряду причин. Воздействие микробов и окружающей среды может изменить как репертуар видов бактерий, населяющих этот регион, так и их численность. Различные этногеографические группы населения имеют разные генетические корни, региональные диеты и культурные обычаи.Конечно, богатые ресурсами регионы также имеют доступ к лучшей санитарии и здравоохранению, чем развивающиеся страны. Таким образом, когда исследования предназначены для оценки географических различий в кишечных сообществах, любые тенденции можно отнести на счет большого количества различий, помимо географического разделения. Тем не менее, сравнения между несколькими развитыми и развивающимися регионами дали некоторое представление о том, какие географические переменные являются наиболее сильными движущими силами микробного разнообразия.
Сравнение между континентально разными популяциями привело к появлению различных типов структур сообществ, обусловленных составом типа Bacteroidetes (28).Взрослые особи датчан, испанцев, итальянцев, французов, японцев и американцев различались по доминирующим родам в филюме: либо Prevotella , либо Bacteroides , либо с менее выраженной сигнатурой Ruminococcus . Интересно, что у детей не развивается подпись микробного сообщества ни с Bacteroides , ни с Prevotella до отнятия от груди (32). Продольное исследование датских младенцев показало, что сигнатура структуры сообщества была обнаружена только после 36 месяцев жизни, когда тип Bacteroidetes, не обнаруживаемый в 9 или 18 месяцев, расширился в изобилии (99).
Последовательное исследование сравнивало африканских детей, ведущих сельский образ жизни в Буркина-Фасо (BF), с европейскими городскими жителями во Флоренции, Италия (ЕС). Эти сопоставленные популяции были выбраны потому, что BF представляет общество, очень напоминающее образ жизни предков неолита, сопровождаемый диетой с высоким содержанием клетчатки из овощей, зерновых и бобовых и отсутствием обработанных пищевых продуктов. Дети из ЕС придерживаются типичной западной диеты, насыщенной сахарами и животными жирами, с повышенным потреблением калорий (32).По сравнению с детьми ЕС, у детей BF преобладают Bacteroidetes с уменьшенной популяцией Firmicutes, наряду с уменьшенным количеством Proteobacteria и уменьшенным Actinobacteria. Недавно была выдвинута гипотеза, что баланс Bacteroidetes-Firmicutes отражает климат, поскольку доминирование Firmicutes связано с более холодным климатом, что требует увеличения процента жира в организме (100). В этом исследовании также была обнаружена сигнатура структуры сообщества: доминирующих микробиот Prevotella являются эксклюзивными для BF и Bacteroides исключительно для ЕС.Помимо различий в микробных видах, у BF также были повышенные уровни SCFAs в стуле.
Дальнейшие исследования расширили сравнение развивающихся и развитых стран, включив большую когорту педиатрических и взрослых выборок из городских Соединенных Штатов и сельских деревень в Венесуэле и Малави. Преобладающая сигнатура сообщества Prevotella была обнаружена в малавийских и венесуэльских микробиотах, тогда как Bacteroides преобладали в североамериканских образцах (33).Кроме того, было гораздо меньше различий между венесуэльскими и малавийскими микробиотами по сравнению с образцами из США. Таксоны, различающие две сельские общины, принадлежат преимущественно к типу Firmicutes, при этом энтерококки чаще встречаются у венесуэльских младенцев, а разные распределения класса Clostridia разделяют взрослых. Более того, метагеномика выявила обогащение путей метаболизма гликанов и уреаз у венесуэльских и малавийских младенцев, что указывает на повышенную способность получать азот и гликаны в качестве источника энергии из грудного молока.Повышенная метаболическая эффективность венесуэльских и малавийских микробиот младенцев может быть адаптацией к уменьшенному объему питания, доступному этим младенцам по сравнению с североамериканцами. Разделение Prevotella – Bacteroides также наблюдается при сравнении детей, живущих в трущобах Бангладеш, с американскими детьми, живущими в зажиточных районах (101).
В целом считается, что географическое положение влияет на микробиоту в первую очередь в зависимости от образа жизни в регионе. Микробиоты по всей территории США не могут образовывать дискретные кластеры, несмотря на многокультурный и многоцентровый отбор проб (33, 102, 103).То же самое можно сказать и о европейских популяциях, которые похожи на американские (28, 104). Между тем, микробиоты в развивающихся странах различаются, но схожи между географически разными регионами со схожими диетическими привычками (32, 33). Важно отметить, что сигнатура Prevotella обнаруживается как в датской (99), так и в американской (33) когортах, хотя и с гораздо большей редкостью. Таким образом, микробиом младенца человека, независимо от генетического фона, может развиваться по противоположным траекториям, которые продиктованы региональным образом жизни и диетой.
Антибиотики
В западном мире младенцам часто назначают антибиотики широкого спектра действия, чтобы защитить развивающегося ребенка от болезней (105). Помимо придания устойчивости к антибиотикам в младенчестве (106), чрезмерное использование антибиотиков может существенно нарушить общую экологию кишечной микробиоты, изменить численность резидентных кишечных бактерий и потенциально склонить ребенка к определенным заболеваниям (107–109).
Хотя микробиота кишечника довольно устойчива к разрушающим факторам, таким как антибиотики (110), экология этой плотной микробной популяции может сильно измениться, если подвергнуться воздействию антибиотиков на слишком ранней стадии ее развития и / или в течение длительных периодов времени (111).Это экологическое нарушение в сочетании с уменьшением микробного разнообразия кишечника младенца может предоставить возможности для кишечных патогенов (112–114). C. difficile — распространенная инфекция, связанная с нарушением антибиотиков микробиоты кишечника (109). Исследование, в котором участвовали 53 ребенка в возрасте от 0 до 13 месяцев, связывало начало инфекций C. difficile в младенчестве с изменениями микробиоты кишечника младенца (114).
Использование антибиотиков в молодом возрасте также может существенно повлиять на рост других доминирующих бактериальных типов в кишечнике человека (111).Исследование Fouhy et al. показали, что младенцы, подвергшиеся воздействию ампициллина и гентамицина вскоре после рождения, имеют тенденцию содержать более высокие пропорции Proteobacteria, Actinobacteria и Lactobacillus , чем дети, не подвергавшиеся воздействию, в течение 4 недель после завершения лечения (111). Подобные эффекты еще более заметны на уровне родов, как показывают исследования, проведенные Tanaka et al. (105). Анализ полиморфизма длины конечных рестрикционных фрагментов (TRFLP) 26 младенцев (5 из них получали пероральные антибиотики широкого спектра действия) показал, что у субъектов, получавших пероральные или внутривенные антибиотики в течение первых 4 дней жизни, наблюдается меньшее микробное разнообразие кишечника, а также ослабление колонизации Bifidobacterium и увеличение колонизации Enterococcus (105).
Как указывалось выше, воздействие антибиотиков в раннем возрасте может сделать ребенка восприимчивым к многочисленным заболеваниям в более позднем возрасте (7, 59, 83, 107, 115). Russell et al. показали, что обработка ванкомицином мышей, зараженных овальбумином (OVA) в раннем возрасте, изменила относительную распространенность микробных популяций в кишечной микробиоте и, как следствие, увеличила восприимчивость этих мышей к астме (7). Исследование на людях связывало лечение ванкомицином с повышенным метаболизмом желчных кислот и глюкозы, связанным с развитием ожирения (115).Кроме того, антибактериальная терапия, проводимая на мышиной модели ожирения в раннем возрасте, изменяет относительную численность бактериальных популяций в кишечнике (107). Кроме того, они показали, что эта антибактериальная терапия в раннем возрасте увеличивает уровни короткоцепочечных жирных кислот толстой кишки и увеличивает ожирение у этих мышей за счет изменения регуляции метаболизма липидов и холестерина (107). Имеются также данные о том, что антибиотики играют роль в развитии ВЗК у детей (116–118). Shaw et al. обнаружили, что использование антибиотиков в течение первого года жизни чаще встречается у тех, у кого в более позднем возрасте диагностирована ВЗК (116).Эти результаты убедительно указывают на связь между применением антибиотиков и началом заболевания, но необходимы исследования, чтобы полностью понять механизм, с помощью которого вызванный антибиотиками микробный дисбиоз влияет на развитие иммунной системы в раннем возрасте.
Роль микробного дисбактериоза кишечника в детских заболеваниях
В этом разделе рассматриваются наиболее важные научные данные, связывающие изменения кишечной микробиоты и педиатрические заболевания. Краткое содержание этого раздела включено в Таблицу 1.
Таблица 1 . Микробный дисбактериоз кишечника при детских заболеваниях .
Некротический энтероколит
Одной из самых смертоносных угроз для ребенка с PT является NEC (138, 139). Приблизительно 7% младенцев с низкой массой тела при рождении (LBW) имеют диагноз НЭК в Канаде и США (140, 141) и до 30% этих младенцев умирают от этого заболевания (142), существует огромная потребность в понять его этиологию, чтобы разработать новые терапевтические вмешательства.НЭК может иметь разные проявления в зависимости от возраста новорожденного и срока гестации. НЭК у доношенных детей часто возникает из-за структурных аномалий кишечника и ишемического повреждения и часто проявляется в течение первой недели жизни (143–145). НЭК у недоношенных детей, возникающая в первый день жизни, часто возникает из-за перфорации кишечника, связана только с незначительным некрозом тканей и не имеет повышенной сигнатуры цитокинов сыворотки, наблюдаемой при классической НЭК (146). Классическая НЭК, которая проявляется у недоношенных детей через 1 неделю после рождения или позже, связана с обширным некрозом кишечной ткани (146), повышением провоспалительных цитокинов в сыворотке крови (147–149), а также бактериемией и эндотоксемией (148, 150).Этиология классического НЭК, вероятно, связана с кишечной микробиотой. Кишечный барьер у недоношенных новорожденных более негерметичен, чем у доношенных детей (151, 152), и эта тенденция также сохраняется в моделях классической НЭК на животных (153–155). Повышенная кишечная проницаемость способствует транслокации бактерий и может быть причиной эндотоксемии и бактериемии, связанных с НЭК. К другим факторам риска НЭК относятся использование антибиотиков (156, 157) и кормление смесями (158, 159), оба из которых связаны с различными микробными сообществами.Грудное вскармливание способствует росту бактерий, полезных для хозяина, в то время как кормление смесью может привести к появлению микробов, обычно не присутствующих в микробиоте. Род Chronobacter является одним из примеров появляющегося условно-патогенного микроорганизма, который может инфицировать детскую смесь, и с большей частотой выделяется у пациентов с НЭК (160). Таким образом, наличие неблагоприятных бактерий в кишечнике недоношенных детей с повышенной проницаемостью оценивается как еще один фактор риска НЭК.
В целом, обследования кишечника новорожденных после родов показывают, что в микробиоте преобладают филы Firmicutes и Proteobacteria (119–123, 161).Используя методы, основанные на культуре, патогенные бактерии чаще выделяли у младенцев с диагнозом НЭК (162) по сравнению с контрольной группой, с коагулазонегативными стафилококками в качестве распространенного патогена. Кроме того, при независимом от культуры сравнении случай-контроль образцы микробиоты были взяты в течение недели после постановки диагноза и выявлено увеличение протеобактерий в NEC по сравнению с контролем (119, 120).
В нескольких проспективных лонгитюдных исследованиях оценивали, следовали ли младенцы ПТ, у которых впоследствии разовьется НЭК, определенной траектории в отношении микробной сукцессии.В одном из таких исследований сравнивали младенцев PT, у которых была или не развилась НЭК, и здоровых доношенных детей. Они обнаружили, что здоровые младенцы PT начали сходиться к подобному сроку профилю примерно в 6-недельном возрасте, в то время как младенцы NEC имели дальнейший рост Proteobacteria за счет Firmicutes, в дополнение к уменьшению количества ферментеров лактозы из семейства Veillonellaceae (122). Тенденция к преобладанию в микробиоте Proteobacteria наблюдалась в дальнейших исследованиях микробиоты в NEC (119–124). Стюарт и др.имели уникальную возможность проанализировать микробиоту близнецов, дискордантных по НЭК, в возрасте от 5 дней до более месяца (162). Внезапный рост E. coli за неделю до постановки диагноза был обнаружен только у близнеца NEC, с последующим разрастанием Klebsiella pneumoniae вскоре после постановки диагноза, но после начала антибиотикотерапии. В более всестороннем исследовании проспективно оценивали 18 новорожденных с НЭК и 35 детей контрольной группы от рождения до выписки из больницы и обнаружили цветение протеобактерий за 2 недели до постановки диагноза, включая K.pneumoniae, C. perfringens и S. epidermidis (124). Поэтому грамотрицательный кишечник с преобладанием Proteobacteria следует рассматривать как значительный фактор риска развития НЭК. Механически врожденный сенсор толл-подобного рецептора (TLR) -4 бактериального липополисахарида (LPS) экспрессируется больше в кишечнике недоношенных, чем у доношенных детей, как у людей (163, 164), так и у грызунов в моделях недоношенных NEC ( 165). Более того, в таких моделях на животных детеныши, лишенные TLR-4, защищены от NEC (163, 165).Эти результаты показывают, что, хотя недоношенность может быть исходной причиной дисбиоза, микробиота всех недоношенных детей не следует той же траектории, и для тех, у кого Proteobacteria побеждают другие комменсалы, NEC становится гораздо большей угрозой.
Введение полезных комменсалов или пробиотиков показало некоторые перспективы в снижении заболеваемости НЭК. Следует отметить, что кормление крысят Bifidobacterium улучшает целостность кишечного барьера и снижает частоту НЭК (155).Этот комменсал процветает в грудном молоке и обнаруживается в кишечнике доношенных животных через несколько дней после рождения, хотя его меньше в кишечнике недоношенных (166). Это вместе с другими штаммами пробиотических бактерий может предоставить средства для модуляции дисбиоза NEC и ускорения созревания пренатального кишечника (167).
Воспалительное заболевание кишечника
Воспалительные заболевания кишечника включают болезнь Крона (БК) и язвенный колит (ЯК), два заболевания ЖКТ, глобальная распространенность которых продолжает расти.В Европе и Северной Америке самые высокие уровни заболеваемости как БК, так и ЯК: более 300 случаев на 100 000 случаев БК и 90–505 случаев на 100 000 случаев ЯК (168), а 20–30% диагнозов ставятся в педиатрической популяции (169 ). Генотип хозяина играет роль в ВЗК, и несколько полногеномных ассоциативных исследований (GWAS) выявили сотни аллелей риска, связанных как с ЯК, так и с БК. Большинство из них — это гены, связанные с иммунным гомеостазом в кишечнике, такие как MUC19, участвующий в барьерной функции кишечника, CARD9 (защита слизистой оболочки), CCL8 и IL8R (привлечение врожденных клеток), IL23R (ответы Т-клеток слизистой оболочки) и NOD2, ассоциированный ген, участвующий в обнаружении бактерий (170).Однако маловероятно, что ВЗК является исключительно заболеванием, опосредованным хозяином, поскольку эти аллели риска по-прежнему учитываются только для небольшой части, связанной с заболеванием.
Генные продукты многих полиморфизмов, связанных с заболеванием, также участвуют в диалогах хозяина с кишечными микробами. Более того, рост заболеваемости намного превышает генетический дрейф в человеческой популяции, что предполагает, что окружающая среда играет важную роль в патогенезе ВЗК. Некоторые аспекты окружающей среды были связаны с ВЗК у детей, включая стресс, диету, использование антибиотиков и пренатальное воздействие инфекций и курения (171), и все эти воздействия окружающей среды также были связаны с аберрантными кишечными микробиотами.Исследования на моделях животных показали, что кишечная микробиота играет решающую роль в развитии заболевания, поскольку ВЗК не возникает в условиях, свободных от микробов (172, 173). Анализ фекальной микробиоты неизменно показывает меньшее бактериальное разнообразие у пациентов с ЯК и БК по сравнению с контрольной группой, с повышенной плотностью прикрепленных бактерий в образцах биопсии. Утрата разнообразия CD приписывается меньшему количеству членов филума Firmicutes (174). Внутри этого типа истощаются Faecalibacterium и Roseburia , в то время как численность семейства Proteobacteria Enterobacteriaceae увеличивается (175–177).Некоторые из этих открытий использовали подходы, генерирующие гипотезы, чтобы поместить эти ассоциации в причинно-следственные связи. Например, снижение содержания Faecalibacterium prausnitzii в микробиоте ВЗК широко описано в литературе (178). Затем было показано, что F. prausnitzii индуцирует дифференцировку Т-регуляторных клеток человека in vitro (179), а также улучшает целостность кишечного барьера на модели колита у мышей (180). Подобные исследования, среди нескольких других, предоставили представление о дисбактериозе ВЗК у взрослых, а дальнейшие результаты обобщены в других источниках (181, 182).Небольшая коллекция исследований сосредоточена на педиатрической популяции, и их результаты представлены ниже.
В небольшой когорте, набранной в Шотландии, микробиоту образцов, полученных при колоноскопии, сравнивали между 25 детьми с ЯК или БК и 10 здоровыми людьми из контрольной группы. В соответствии с литературой для взрослых, разнообразие было уменьшено между CD и контролем, но это не было верно для UC. Также в резком контрасте с исследованиями на взрослых, уровни F. prausnitzii были увеличены при CD по сравнению с контролем (125).В более раннем исследовании детей с тяжелым ЯК было обнаружено снижение разнообразия среди пациентов по сравнению со здоровым контролем, а также снижение численности Firmicutes и Verrucomicrobia с увеличением Proteobacteria, включая E. coli (183). Однако, хотя дети с ЯК не получали антибиотики в течение как минимум 1 месяца до отбора проб, они получали терапию кортикостероидами, что могло способствовать этим тенденциям.
Более полное исследование, основанное на последовательностях, проведенное Papa et al. изучили возможность использования микробных сигнатур стула в качестве неинвазивного диагностического инструмента для педиатрической ВЗК.В когорте из 23 пациентов с БК, 43 пациентов с ЯК и 24 контрольных пациентов они смогли отличить не только ВЗК от контроля, но также ЯК и БК, позже применив свой алгоритм к набору данных образцов биопсии ВЗК у взрослых с некоторой точностью (126). Бактериальное разнообразие было снижено у пациентов с ВЗК, и это стало более очевидным во время активного заболевания и в меньшей степени в период ремиссии с увеличением протеобактерий (включая Escherichia и Shigella ). Во время ремиссии наблюдалось увеличение численности Bifidobacterium .Уникальным для UC было полное отсутствие Verrucomicrobia, которые присутствовали как в CD, так и в контроле. Интересно, что пациенты с ЯК и БК были более различимы в стадии ремиссии и более похожи во время активной болезни.
Все эти исследования, хотя и демонстрируют небольшие тенденции, страдают от небольшого размера выборки, смешанных эффектов лечения и, в некоторых случаях, полагаются только на стул вместо образцов биопсии. Недавнее исследование, проведенное Gevers et al. обратились к этим ловушкам, используя когорту из 447 детей с диагнозом БК и 221 ребенка из контрольной группы.Они получили стул вместе с образцами как подвздошной, так и ректальной биопсии для анализа 16S наряду с секвенированием с помощью дробовика на подмножестве образцов (127). Пациенты были отобраны при постановке диагноза, что исключило использование фармацевтического лечения как мешающего фактора. Их выводы предоставили несколько новых идей. Некоторые таксоны были отрицательно связаны с CD, включая Bacteroides, Bifidobacterium, Blautia и F. prausnitzii . Положительно ассоциированные с таксонами CD включали Haemophilus sp., Neiseriaceae, Fusobacterium, Haemophilus influenzae и E. coli . По данным эндоскопии, Veillonellaceae и Pasteurellaceae были связаны с глубокими изъязвлениями. Большинство этих тенденций были намного сильнее в образцах подвздошной кишки и не могли быть обнаружены в стуле, где присутствовали все те же микробы, но в гораздо меньшем количестве. Содержание генов, предсказанное алгоритмом PICRUSt для микробиоты подвздошной кишки или определенное с помощью дробовика для образцов кала, выявило обогащение путей, способствующих развитию патобионтов, при ВЗК.К ним относятся метаболизм обогащенного бензоата в подвздошной кишке, побочные продукты которого были связаны с дисбактериозом и вирулентностью Enterobacteriaceae (184, 185). Образцы стула были обогащены глицерофосфолипидами и метаболизмом ЛПС, продукты которых были обнаружены в повышенных уровнях в тканях биопсии CD и UC (184). Между тем, гены микробиома стула, участвующие в сложном углеводном обмене, были уменьшены, что может привести к снижению использования этих субстратов в кишечнике (186).
В совокупности, в настоящее время имеется достаточно доказательств того, что детская ВЗК связана с аберрантными микробными сообществами еще до начала лечения.Однако до сих пор неясно, является ли дисбактериоз, наблюдаемый на момент постановки диагноза, причиной заболевания или его ранним проявлением. Тем не менее, как дисбиотическое заболевание, его лечили пробиотиками в нескольких клинических испытаниях. Доказательств того, что пробиотики эффективны при лечении или предотвращении ремиссии БК у детей, очень мало. Однако при ЯК пробиотический препарат, известный как VSL-3, зарекомендовал себя как эффективная терапия продолжающегося заболевания и предотвращения ремиссии (187).
Болезнь обмена веществ: ожирение и недоедание
Сочетание ожирения и недоедания оказало существенное влияние на здоровье человека во всем мире. Показатели ожирения и диабета почти удвоились с 1980 года во всем мире, более 40 миллионов детей в возрасте до 5 лет имели избыточный вес в 2011 году (188), а 170 миллионов детей недоедали (189). Диета и питание в раннем возрасте играют важную роль в этих нарушениях обмена веществ. Однако распространенность и серьезность ожирения и недоедания нельзя объяснить только перееданием или отсутствием продовольственной безопасности (190).Прием пищи в раннем возрасте является сильным фактором, влияющим на состав кишечных микробов (191). В свою очередь, изменение кишечной микробиоты, вызванное диетой, может влиять на метаболизм и иммунитет хозяина с различными последствиями в зависимости от состава и метаболического потенциала колонизирующих микробов (192). В раннем возрасте прибавка в весе и рост являются важными показателями здоровья человека и являются суррогатными маркерами состояния питания. Как при недоедании, так и при ожирении взаимосвязь между микробиотой, метаболизмом и иммунитетом играет важную роль в определении исходов тяжести заболеваний, наблюдаемых у истощенных и страдающих ожирением людей, таких как экологическая энтеропатия (ЭЭ) у истощенных детей и раннее начало типа 2. диабет у детей с ожирением (193).
Ожирение
В отношении ожирения плодотворные ранние исследования показали, что состав кишечной микробиоты является медиаторами набора веса, поскольку соотношение между Bacteroidetes и Firmicutes в кишечнике коррелирует со способностью хозяина извлекать энергию из своего рациона (128). Более того, у близнецов, не согласных с ожирением, передачи их микробиоты стерильным мышам было достаточно, чтобы объяснить их вариации в весе, независимо от генетики (194). Механизмы, которые микробиота использует для сигнализации о сдвиге метаболизма хозяина, включают передачу сигналов через TLR5 (195), глюкагоноподобный пептид (GLP) -1/2 (196) и опосредование системных уровней LPS (197).Таким образом, не только функция микробиоты, но и измененная иммунная функция связана с патофизиологией ожирения. Ожирение имеет воспалительный компонент, который может объяснить развитие метаболического заболевания, что отражается в повышении уровня циркулирующих воспалительных белков, повышенной секреции адипокина тканями и дисрегуляции активации лейкоцитов в различных участках тканей, включая печень и мозг (198).
Теперь ясно, что изменения в составе микробиоты в раннем возрасте могут изменить предрасположенность к развитию ожирения в более позднем возрасте.Как обсуждалось ранее, способ родоразрешения при рождении может изменить микробное сообщество в раннем возрасте, где микробиота кишечника детей, рожденных с помощью кесарева сечения, больше похожа на микробиоту кожи, чем микробиоту влагалища. В исследовании бразильских детей, страдающих ожирением, субъекты, рожденные с помощью кесарева сечения, имели значительно более высокий риск ожирения в молодом возрасте по сравнению с детьми, рожденными естественным путем (199). Точно так же дети, которых кормили детской смесью, а не грудным молоком в течение первых 6 месяцев жизни, более чем в два раза чаще страдали ожирением в более позднем возрасте (200).Помимо приема пищи в раннем возрасте, многие дети подвергаются воздействию антибиотиков в детстве. Субтерапевтические дозы нескольких классов антибиотиков широко использовались в качестве стимуляторов роста в раннем возрасте в сельском хозяйстве на протяжении десятилетий. Механизмы этого эффекта были неясны до недавнего времени, когда в исследовании Cho et al. показали, что этих субтерапевтических доз достаточно для изменения кишечной микробиоты, что привело к обогащению ключевых микробных генов, участвующих в метаболизме углеводов, для образования SCFAs, а также к системным изменениям метаболизма липидов и холестерина в печени, что привело к увеличению ожирения у молодых мышей ( 107).Таким образом, низкие уровни или воздействие антибиотиков могут вызвать незначительные изменения в микробной экосистеме, выбирая среду, более благоприятную для набора веса и сбора энергии. Эпидемиологические исследования показывают, что использование антибиотиков в раннем возрасте и ожирение взаимосвязаны, поскольку в штатах США с самым высоким уровнем ожирения также наблюдается самый высокий уровень использования антибиотиков (188). Многие исследования показали, что присутствие / отсутствие определенных микробов может модулировать и программировать пожизненные изменения иммунитета (201), однако будущие исследования должны более подробно оценить, как эти изменения могут повлиять на прогрессирование метаболических заболеваний.Понимая различный сбор энергии и метаболические возможности кишечной микробиоты каждого ребенка, мы сможем разработать вмешательства на основе микробиоты, чтобы обратить вспять предрасположенность к ожирению в раннем возрасте. Недавнее исследование показало, что лечение мышей с ожирением с помощью Akkermansia muciniphila снижает метаболические нарушения, вызванные диетой с высоким содержанием жиров, включая увеличение жировой массы, метаболическую эндотоксемию, воспаление жировой ткани и резистентность к инсулину (202). Колонизация с помощью Akkermansia mucinophila увеличивала уровни эндоканнабиноидов в кишечнике, контролируя воспаление, а также увеличивала толщину внутреннего слоя слизи.Для этой обработки требовалось жизнеспособных A. mucinophila , что подчеркивает важность активного метаболизма бактерии. Это исследование и будущие усилия дают надежду на то, что предрасположенность к ожирению можно будет контролировать в раннем возрасте с помощью микробиоты, а последствия ожирения можно улучшить с помощью пробиотиков.
Недоедание
Функция и состав кишечной микробиоты также играют ключевую роль в развитии и серьезности недоедания.Перенося фекалии малавийских близнецов, несогласных с тяжелым белковым голоданием, беспроблемным мышам, Smith et al. смогли показать прямую роль микробиоты в опосредовании симптомов недоедания (203). Кроме того, мыши без микробов, которых кормили малавийской диетой и малавийскими микробами, быстро теряли вес, и этот эффект нельзя было полностью обратить вспять после кормления диетой с лечебной пищей, что означает, что изменения в микробиоте могут постоянно влиять на иммунитет и метаболизм хозяина. Поскольку микробиота может опосредовать последствия недоедания, воздействие фекально-оральных микробов в раннем возрасте во время критического периода роста и развития у детей может иметь длительное влияние на способность организма-хозяина получать питательные вещества из рациона, что приводит к ЭЭ (204).В то время как воздействие фекально-оральных патогенов может значительно изменить микробиоту кишечника на ранних этапах жизни и привести к диарее и задержке роста (205), ЭЭ представляет собой субклиническое заболевание, характеризующееся притуплением ворсинок, гиперплазией крипт, повышенной проницаемостью, хроническим воспалением и мальабсорбцией. тонкий кишечник (204, 206). Предполагается, что в регионах с плохой санитарией дети подвергаются воздействию повышенных уровней фекальных бактерий, которые могут колонизировать тонкий кишечник и приводить к ЭЭ.Вмешательства по питанию недостаточно, чтобы обратить вспять симптомы недоедания у двух третей детей, что позволяет предположить, что состав микробиоты в тонком кишечнике может исказить взаимодействия между иммунитетом и метаболизмом в сторону сценария, при котором усвоение питательных веществ и взаимное влияние микробов и хозяев не приветствуются (193). ). Таким образом, считается, что ЭЭ оказывает серьезное влияние на исходы недоедания в раннем возрасте, что может привести к стойкой утрате функции кишечника, иммунной функции и когнитивных способностей (207).
Механизмы, объясняющие, как микробиота может влиять на ЭЭ и недоедание, еще предстоит выяснить, хотя существует множество исследований, указывающих на связь между диетой в раннем возрасте и воздействием окружающей среды, изменяющим иммунитет и микробиоту, что может приводить к патофизиологии и заболеваниям, связанным с недоеданием в парадоксально подобный способ воздействия микробиоты на ожирение в раннем возрасте. Поскольку эффективность восстановления питания после недоедания в раннем возрасте остается низкой, плодотворное исследование Trehan et al.отметили значительное улучшение восстановления питания и показателей смертности после лечения антибиотиками у детей с тяжелой и острой недостаточностью питания (208). Авторы не секвенировали микробиоту этих детей, чтобы коррелировать различия в скорости восстановления после тяжелого истощения, хотя можно предположить, что лечение антибиотиками (амоксициллин) изменило состав микробиоты на более благоприятный для поглощения питательных веществ.
Критическое раннее окно существует в жизни ребенка, когда воздействие окружающей среды (включая диету и микробы) может сместить взаимодействия иммунитета, метаболизма и микробиоты в патофизиологические состояния, что приводит к изменениям скорости роста, метаболизма и иммунитета хозяина, что в конечном итоге приводит к заболевания, связанные с ожирением и недоеданием (например, диабет 2 типа и ЭЭ, соответственно).Недавнее исследование предполагает, что влияние стресса, связанного с питанием и изменением окружающей среды, на хозяина может передаваться от матери к детям через эпигенетическую модуляцию ДНК путем метилирования (209). Таким образом, материнское питание и воздействие микробов также имеют решающее значение для развития микробиоты в раннем возрасте, поскольку дети могут унаследовать гены с различным потенциалом предрасположенности к недоеданию или ожирению в зависимости от диеты их матери. В будущих исследованиях необходимо сосредоточить внимание не только на терапевтических вмешательствах в раннем возрасте для улучшения здоровья кишечника с целью борьбы с ожирением и недоеданием, но и на охране здоровья матери, чтобы достичь целостного подхода к преодолению воздействия недоедания и ожирения на общество сегодня.
Астма и атопия
Атопические заболевания (атопический дерматит, аллергический ринит, аллергический конъюнктивит, анафилаксия и астма) характеризуются IgE-опосредованной гиперчувствительностью к внешнему антигену (210). Гипотеза Страчана, выдвинутая в 1989 г., предполагала, что воздействие инфекционных агентов на детей в младенчестве снижает их восприимчивость к гипервоспалительным заболеваниям в более позднем возрасте (211). Недавний пример проверки этой теории был проведен Ege et al.в Центральной Европе; они обнаружили, что дети, выросшие на фермах, подвергались воздействию широкого спектра микробов и, как правило, были защищены от детской астмы и других атопических заболеваний (212).
Существенные изменения в микробиоте кишечника наряду с заметными изменениями в развитии иммунной системы и заболеваниях происходили параллельно с промышленной революцией, предполагая, что вызванные окружающей средой изменения в микробиоте кишечника связаны с развитием заболеваний гиперчувствительности. Распространенность астмы и аллергии продолжает расти в промышленно развитых странах и в развивающихся странах, где условия жизни и стандарты гигиены становятся все более похожими на западные (213).Следовательно, более высокие стандарты санитарии и более доступные антибиотики, вероятно, уменьшают наше воздействие микробных антигенов раннего детства за счет нашего иммунного развития (7, 213).
Гипотеза микрофлоры является продолжением гигиенической гипотезы Страчана, поскольку в ней утверждается, что между нашей кишечной микробиотой и нашей иммунной системой в раннем возрасте должны происходить критические взаимодействия, чтобы предотвратить развитие гиперчувствительности (214). Исследования на стерильных мышах показывают поляризацию послеродовой иммунной системы в сторону иммунного ответа, управляемого Т-хелперами 2 (T H 2) (215).С восстановлением микробиоты кишечника происходит сдвиг в сторону иммунного фенотипа с доминированием T H 1 и T H 17, что позволяет предположить, что микробиота кишечника играет важную роль в установлении баланса между T H 1 / T . H 2 подтипа в молодом возрасте (баланс часто нарушается у субъектов с атопией) (215–217).
Ряд модельных исследований на мышах направлен на определение того, что таксоны бактерий играют важную роль в предотвращении или стимулировании развития атопии.Было показано, что перинатальное лечение антибиотиками мышей, зараженных OVA (индуцированных астмой), потенциально обостряет заболевание за счет увеличения сывороточного и поверхностно связанного IgE, а также снижения накопления Т-регуляторных клеток в толстой кишке (218). Арнольд и др. показывают, что инфицирование индуцированных астмой новорожденных мышей по сравнению с взрослыми мышами с помощью Helicobacter pylori защищает этих мышей от гиперчувствительности дыхательных путей, воспаления тканей и метаплазии бокаловидных клеток (общие характеристики астмы) (135).Кроме того, Cahenzli et al. предоставили доказательства у мышей, что менее разнообразная микробиота кишечника в раннем возрасте связана с повышенным уровнем IgE, связанным с поверхностью тучных клеток, и усилением системной анафилаксии (219). Хотя эти исследования дают представление о взаимосвязи между микробиотой кишечника и иммунной системой, исследователи задаются вопросом, действительно ли конкретные микробы необходимы для предотвращения развития атопии или должны ли быть в центре внимания метагеномные и метаболомные профили микробиоты кишечника в целом.
Например, микробиота кишечника способствует развитию иммунной толерантности за счет регулярной стимуляции рецепторов распознавания образов (PRR) и за счет продукции метаболитов (например, SCFA) (94, 220). Установление этой иммунной толерантности к внешним антигенам и микробам-хозяевам необходимо для предотвращения развития реакций гиперчувствительности, поскольку Т-регуляторные клетки (+ FoxP3) имеют решающее значение для поддержания баланса T H 1 / T H 2 (94). Было показано, что SCFAs играют роль в регуляции пролиферации Т-регуляторных клеток толстой кишки (94).Эти микробные метаболиты могут быть ключом к перекрестным помехам между микробами и хозяевами, которые влияют на системное воспаление. Низкие уровни i-масляной, i-валериановой и валериановой кислот в образцах стула у детей в возрасте 1 года были связаны с развитием пищевой аллергии в возрасте 4 лет; однако анализ состава кишечной микробиоты не проводился (221). Недавнее исследование показало, что микробиота кишечника метаболизирует диету с высоким содержанием клетчатки, которую кормили взрослые мыши, и это, в свою очередь, увеличивало количество циркулирующих SCFA и, как следствие, уменьшало аллергическое воспаление в легких этих мышей (95).Дополнительные исследования, посвященные микробиоте в раннем возрасте, необходимы, чтобы определить, могут ли эти метаболиты влиять на развитие нашей иммунной системы и, таким образом, потенциально склонять нас к определенным воспалительным заболеваниям или от них.
Большинство исследований на людях, касающихся микробиоты кишечника в раннем возрасте и развития атопических заболеваний, сосредоточено на роли переменных, таких как способ родоразрешения (вагинальные роды или кесарево сечение), методы кормления (грудное молоко или смесь / твердая пища). диета), а также воздействие антибиотиков в раннем возрасте.Хотя микробиота кишечника младенца в значительной степени зависит от способа рождения ребенка (56), существуют противоречивые результаты относительно связи способа рождения с развитием атопических заболеваний. Например, согласно Kolokotroni et al. дети, рожденные с помощью кесарева сечения, подвергаются повышенному риску развития астмы в более позднем возрасте, однако van Nimwegen et al. утверждают, что способ рождения менее значим, чем место рождения (больница или дом) в развитии кишечной микробиоты и астмы (222, 223).
Грудное вскармливание вносит значительный вклад в развитие микробиоты кишечника младенца (224). Как обсуждалось ранее в этом обзоре, младенцы, находящиеся на грудном вскармливании, обычно имеют большее количество Bifidobacteria и меньшее количество Bacteroides и Atopobium по сравнению с младенцами, которых вскармливают исключительно смесями (83, 84), независимо от того, есть ли данные такие как это может быть связано с защитой или пропагандой атопического заболевания, все еще обсуждается (225–227).Однако более высокая доля некоторых неперевариваемых ОПЗ была связана со снижением риска респираторных заболеваний у младенцев (228).
Лечение антибиотиками в течение первых нескольких лет жизни оказывает не менее значительное влияние на бактериальную экологию кишечника младенца (107, 109, 111). Эпидемиологические исследования на людях показывают, что воздействие антибиотиков широкого спектра действия может играть роль в развитии астмы и атопии. Muc et al. провели анкетное исследование и обнаружили, что воздействие антибиотиков на первом году жизни играет значительную роль в развитии астмы и аллергического ринита у детей (229).Кроме того, Hoskin-Parr et al. оценили данные 4952 детей, включенных в Продольное исследование родителей и детей Avon, и обнаружили дозозависимую связь между использованием антибиотиков в течение первых 2 лет жизни и развитием астмы в возрасте 7,5 лет (230).
Развитие атопического заболевания у детей характеризуется чрезвычайно сложной сетью экологических и генетических факторов, но, как показывают текущие исследования, нельзя игнорировать роль микробиоты кишечника.
Ось кишечник-мозг — это биохимическая передача сигналов, которая происходит между ЖКТ и нервной системой. Это взаимодействие включает состав и функцию кишечной микробиоты, поскольку было показано, что она изменяет гормоны, связанные с нейрохимическими изменениями в головном мозге, которые могут модулировать поведение хозяина, включая беспокойство, когнитивные способности, стресс, настроение и уровень энергии ( 231). Есть много недавних обзоров, широко освещающих это явление (232, 233), поэтому для целей этого обзора мы сосредоточимся на том, как изменения микробиоты в раннем возрасте могут повлиять на восприимчивость к неврологическим заболеваниям, в частности, расстройствам аутистического спектра (РАС).РАС — это совокупность изменений нервного развития у детей, при которых они демонстрируют сложные поведенческие изменения в своих способностях к социальному взаимодействию и общению, а также наличие поведения, аналогичного обсессивно-компульсивному расстройству, включая повторяющиеся и узкие интересы. Хотя болезнь поражает мозг, желудочно-кишечные симптомы обычно описываются у детей с РАС (234, 235), а исследования выявили наличие воспалительного инфильтрата и гистопатологию в биоптатах детей с РАС, включая повышенное количество цитотоксических Т-клеток, CD19 + B-клеток и повышенный уровень кишечного IgG1 / 4 (236, 237).Возможно, связанные с этими иммунными изменениями и дисфункцией ЖКТ, некоторые исследования продемонстрировали изменение состава кишечной микробиоты у маленьких детей с РАС по сравнению со здоровыми детьми контрольной группы с типичной неврологической функцией (238–242). Однако эти данные следует интерпретировать с осторожностью, поскольку все эти исследования относительно небольшие и дети с РАС, как правило, имеют альтернативную диету и воздействие антибиотиков по сравнению со здоровыми, обычными детьми. Состав микробиоты может иметь клиническое значение, поскольку в ходе клинического исследования детей с РАС принимали ванкомицин и была обнаружена высокая эффективность восстановления после симптомов (243).Однако это было небольшое исследование, и достоверность лечения антибиотиками при РАС требует дополнительных данных.
При определении роли микробиоты в РАС, вместо того, чтобы делать прогнозы, основанные на данных таксономической последовательности, недавние исследования изучали секрецию метаболитов кишечных микробов и влияние этих микробиот на метаболиты сыворотки хозяина. Потенциальным механизмом, стоящим за симптомами РАС, могут быть нейроактивные метаболиты, опосредованные или продуцируемые микробиотой, которые могут распространяться системно и проникать через гематоэнцефалический барьер.Недавнее исследование Hsiao et al. стремились понять, какие метаболиты, продуцируемые бактериями, модулируют развитие РАС, используя в своих интересах модель мышей с активацией материнского иммунитета (МИА), в которой мыши, как известно, демонстрируют признаки РАС. Они продемонстрировали, что мыши MIA демонстрируют повышенную кишечную проницаемость и изменения микробиоты и профиля метаболитов сыворотки по сравнению с контрольными мышами (137). Примечательно, что авторы обнаружили, что пероральное введение B. fragilis обращало проницаемость кишечника и уменьшало неврологические дефекты у мышей с МИА, подобные РАС, включая тревожное и коммуникативное поведение, а также модулировало метаболом сыворотки.Кроме того, лечение одним метаболитом, который активируется у мышей MIA и восстанавливается до нормального уровня с помощью B. fragilis , вызывал поведенческие аномалии, подчеркивая важность профиля метаболома в сыворотке при РАС (137). Это исследование открывает захватывающие возможности для будущих исследований РАС и микробиома на ранних этапах жизни и намекает на способность полезных микробов модулировать симптомы РАС. Многие исследования показали, что воздействие Bifidobacterium или Lactobacillus в раннем возрасте влияет на поведение мышей (244, 245), и еще предстоит выяснить, могут ли эти более классические штаммы пробиотиков влиять на развитие РАС у детей.Другие исследования изменили гипотезу, утверждая, что именно микробные метаболиты влияют на симптомы РАС. В подтверждение этого сообщалось о повышенных концентрациях SCFA в стуле у детей с РАС (246). Микробиота в раннем возрасте производит более низкие уровни SCFA по сравнению со взрослыми, поскольку у них отсутствует преобладание микробов с ферментами для их производства, и они обычно придерживаются диеты с низким содержанием сложных пищевых углеводов, необходимых для производства SCFA. Прямое воздействие пропионата SCFA на ткани мозга животных приводит к развитию аутистического поведения (247, 248).Таким образом, увеличение этих метаболитов может привести к нарушениям функции мозга.
Роль кишечных микробов и метаболических изменений в нервно-психических расстройствах у детей, таких как РАС, когда-то рассматривалась в сфере «псевдонауки». Сложность и неоднородность РАС затрудняет понимание и терапевтическое лечение этого заболевания. Используя новое исследование роли микробиоты в доступе кишечника к мозгу и знание важности изменений в раннем периоде жизни, новое поколение методов лечения может сосредоточиться на методах лечения, повышающих бактериальный гомеостаз и барьерную функцию.
Заключение
Обследования микробиоты во всем мире дали важные уроки относительно того, что влияет на микробный состав кишечника взрослого человека и как это связано с различными заболеваниями. Сдвиг в соотношении Firmicutes / Bacteroidetes — постоянная находка среди нескольких исследований, посвященных болезням. Кроме того, распространенность Prevotella выше в регионах коренных народов мира, где частота иммуноопосредованных заболеваний гораздо ниже.Однако эти результаты являются результатом исследований, проведенных на взрослых, и микробиота кишечника в течение первых 3 лет жизни значительно отличается от взрослой жизни. «Сигнатуры» микробного сообщества, связанные с рассматриваемыми здесь заболеваниями, появляются только через 2–3 года, однако известно, что изменения в микробиоте в раннем возрасте тесно связаны с развитием этих заболеваний. Недавнее исследование с участием детей, которым впервые был поставлен диагноз ВЗК, показало, что микробные изменения, сопровождающие заболевание, отличаются от изменений, наблюдаемых в исследованиях, проведенных после постановки диагноза и во время фармакологического лечения (127).Это важное исследование предполагает, что микробные изменения, наблюдаемые после клинического проявления заболевания, могут не участвовать непосредственно в патогенезе заболевания и фактически могут быть, по крайней мере частично, продуктом его проявления. Очень важно проводить дополнительные исследования микробиоты в течение первого года жизни, периода, в течение которого состав микробиоты может дать более точное представление о микробных условиях, которые участвуют в патогенезе.
На сегодняшний день подавляющее большинство исследований микробиоты сосредоточено на таксономических профилях микробных сообществ.Однако метагеномные исследования показали, что разные микробы в кишечнике не обязательно отражают разный метаболический профиль, что подчеркивает высокую степень избыточности биохимической активности среди разных бактериальных таксонов (249). Таким образом, изучение метагеномных и метаболомных профилей, возникающих в результате микробных изменений в раннем возрасте, связанных с заболеванием, может обеспечить лучшее понимание роли микробиоты (и их молекул) в процессе болезни, а также может выявить биомаркеры болезни до того, как она проявится. клинически.
Учитывая, что у детей в течение нескольких месяцев происходит резкая череда микробных изменений, очень важно понимать, как и когда эти изменения происходят. Существует реальная потребность в крупных когортных исследованиях, которые изучают микробиом и метаболом младенца с момента рождения и в течение, по крайней мере, первого года жизни, периода времени, который чаще всего свободен от болезней, обсуждаемых здесь, но полон микробных и метаболических изменений, которые могут объяснить процесс более позднего возникновения болезни. Полное понимание изменений, связанных с этим заболеванием, может позволить нам разработать меры, которые рационально изменят микробиоту у младенцев, чтобы создать здоровую кишечную среду с раннего возраста.«Критическое окно» существует в раннем возрасте, когда вмешательства могут иметь более глубокое и долгосрочное воздействие на здоровье. Таким образом, понимание изменений микробиоты в течение этого критического периода времени будет иметь большое значение для профилактики заболеваний.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Лаборатория Бретта Финлея финансируется за счет грантов Канадских институтов исследований в области здравоохранения (CIHR), Genome British Columbia и Institut Merieux.
Список литературы
1. Абрамс Г.Д., Бауэр Х., Спринц Х. Влияние нормальной флоры на морфологию слизистой оболочки и обновление клеток в подвздошной кишке. Сравнение мышей без микробов и обычных мышей. Lab Invest (1963) 12 : 355–64.
2. Бускра Д., Брезильон С., Берард М., Вертс С., Варона Р., Бонека И.Г. и др. Генез лимфоидной ткани, индуцированный комменсалами через nod1, регулирует гомеостаз кишечника. Nature (2008) 456 : 507–10. DOI: 10.1038 / nature07450
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
3. Раск С., Эвертссон С., Телемо Э., Уолд А. Полная флора, но не моноколонизация с помощью Escherichia coli или Lactobacilli , поддерживает толерогенный процессинг подаваемого антигена. Scand J Immunol (2005) 61 : 529–35. DOI: 10.1111 / j.1365-3083.2005.01598.х
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
4. Секиров И., Там Н.М., Йогова М., Робертсон М.Л., Ли Ю., Лупп С. и др. Вызванные антибиотиками нарушения микробиоты кишечника изменяют восприимчивость хозяина к кишечной инфекции. Infect Immun (2008) 76 : 4726–36. DOI: 10.1128 / IAI.00319-08
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
5.Феррейра Р.Б., Гилл Н., Уиллинг Б.П., Antunes LC, Рассел С.Л., Кроксен М.А. и др. Микробиота кишечника играет роль в колите, вызванном сальмонеллой, независимо от колонизации патогенами. PLoS One (2011) 6 : e20338. DOI: 10.1371 / journal.pone.0020338
CANDIDA и АНТИБИОТИЧЕСКИЙ СИНДРОМ
CANDIDA и АНТИБИОТИЧЕСКИЙ СИНДРОМ
Недостаток нарушения энергии и пищеварения, артрит
боли в суставах, кожные заболевания, нарушения менструального цикла, эмоциональная нестабильность и
депрессия.Все симптомы того, что я называю «синдромом антибиотиков» частота которых значительно возросла в последние годы.
При дальнейшем осмотре могут быть обнаружены другие симптомы.
Большая часть желудочно-кишечного тракта болезненна при надавливании, особенно маленькие
кишечник, печень и желчный пузырь. Возможно, даже был желчный пузырь
операция, которая не улучшила состояние, а иногда даже ухудшила
симптомы.
В анамнезе может быть молочница или оральный, анальный или вагинальный
зуд.Когда они присутствуют, диагноз Candida очевиден, но может
также присутствовать при отсутствии этих проявлений, и это может быть несколько
сбивает с толку. Дрожжи или грибки Candida albicans , конечно,
процветает во время лечения антибиотиками. Считаю это безрассудным пренебрежением к
назначать антибиотики без одновременного приема фунгицидов и заместительной терапии
с лактобациллами впоследствии. Я считаю, что эта практика значительно улучшила
наш огромный пул хронически больных людей.
Однако «антибиотический синдром» возникает не только из-за
Candida. Я рассматриваю это в более общем плане как «дисбактериоз», когда неправильный вид
микробы обитают в кишечном тракте, не только Candida и другие грибы, но
многие типы патогенных бактерий, включая бактерии coli , которые являются
нормальные в толстой кишке, но становятся болезнетворными, когда поднимаются в малую
кишечник.
Если проблема существует много лет, обычно
недостаток желудочного сока, что позволяет ему заселять желудок микробами,
вызывая воспаление с болью, а затем и язвы.Токсины, выделяемые
перенаселенность микробов вызывает, кроме того, хроническое воспаление печени,
желчный пузырь, поджелудочная железа и кишечник. Я считаю весьма вероятным, что
хроническое воспаление поджелудочной железы является основным фактором, способствующим
развитие инсулинозависимого диабета.
Бактериальная атака
Определенные типы патогенных бактерий, по-видимому, вызывают или
способствуют возникновению определенных аутоиммунных заболеваний. Одна разновидность бактерий кишечной палочки для
например, производит молекулу, очень похожую на инсулин.Когда иммунитет
система активируется против этой молекулы, она может затем атаковать связанные
особенности бета-клеток поджелудочной железы
Другой вид бактерий, Yersinia enterocolitica, вызывает иммунный ответ, который атакует щитовидную железу и приводит к
Болезнь Грейвса с серьезной гиперпродукцией гормонов щитовидной железы.
Язвенный колит связан с чрезмерным ростом патогенных
микробы, такие же, как болезнь Крона, остеопороз и анкилозирующий спондилит.При анкилозирующем спондилите позвонки соединяются вместе, вызывая
скованность и боль. Со временем могут поражаться и другие суставы.
Klebsiella, другой вид патогенных бактерий,
производит молекулу, похожую на тип ткани, обнаруживаемый у людей с этим
болезнь. Когда количество клебсиелл в кишечнике уменьшается, родственные антитела
в крови уменьшаются и состояние улучшается.
Ревматоидный артрит связан с другими бактериями, называемыми протей.Proteus также является частой причиной инфекций мочевыводящих путей.
Женщины в два раза чаще страдают инфекциями мочевыводящих путей и ревматоидным артритом.
часто как мужчины, в то время как у мужчин обычно более высокие уровни клебсиелла и в три раза чаще, чем у женщин, больных анкилозирующим спондилитом.
Кроме того, чрезмерный микробный рост повреждает кишечник.
стенка, чтобы в кровоток попадали только частично переваренные частицы пищи,
вызывая аллергию. Таким образом, все аутоиммунные заболевания могут быть связаны с пищей.
аллергия.
В то время как ревматоидный артрит является частым признаком
антибиотический синдром, и я считаю, что его относительно легко вылечить, не многие
Больные этой болезнью, кажется, заинтересованы в этом естественном подходе. В
на днях молодой человек с тяжелым ревматоидным артритом постучал в мою дверь, чтобы
собирать деньги на проходящий под эгидой врачей ходокатон. Когда я сказал ему, что я не
дать деньги на медикаментозное лечение, поскольку это можно преодолеть с помощью естественных методов лечения, он
крикнул: «Ты злишься!» и уехал явно расстроенный.
Другие аутоиммунные заболевания, которые до сих пор были связаны с
К дисбактериозам относятся псориаз, красная волчанка и панкреатит. Когда лекарства
учитывая, что они связывают бактериальные эндотоксины, эти условия обычно улучшаются. А
дальнейшее последствие дисбактериоза — предрасположенность к пищевым отравлениям, как и при сальмонеллы бактерий, в то время как здоровая кишечная флора предотвращает их распространение
размножаются и вызывают проблемы.
Золотистый стафилококк или золотой стафилококк вызывают серьезные
инфекции у больничных пациентов.Было установлено, что не только золотой стафилококк
но также и другие инфекции, которые возникают при Candida
разрастание. Поскольку чрезмерный рост Candida является естественным результатом стандартной больницы
лечения, легко понять, почему золотой стафилококк так смертоносен в
больницы.
Похожая картина наблюдается со СПИДом. Люди не умирают от
вирус СПИДа, но от бактериальных инфекций, потенцированных Candida. Я также вижу
вызванный антибиотиками дисбактериоз у младенцев и младенцев как основная причина их
частые инфекции, клей ушей и очень способствующие детской смерти.
Раньше дети редко имели больше
одно-два заражения в год, сейчас более шести — это норма.
В 1940-х годах Candida обнаруживали только в трех процентах
вскрытия, сейчас цифра приближается к тридцати процентам. Есть, конечно, и другие
факторы, которые могут вызвать дисбактериоз — противозачаточные таблетки, стероиды и др.
лекарства, лучевая терапия и химиотерапия — но главный виновник
сомневаюсь, антибиотики.
Близко к Candida микоплазмы или плеоморфные
организмы.Было показано, что они являются основным фактором, вызывающим
рак. Следовательно, противогрибковая терапия также имеет большое значение.
преимущества в лечении рака.
Dr Orian Truss
В 1953 году доктор Ориан Трасс обнаружил разрушительные эффекты
антибиотики в больнице Алабамы (США). Во время обхода больницы Ферма была
заинтригован изможденным, очевидно пожилым человеком, который явно умирает. Однако,
ему было всего за сорок, и он лежал в больнице четыре месяца. Ни у одного специалиста не было
смог поставить диагноз.Из любопытства Трасс спросил пациента, когда он
в последний раз был полностью здоров.
Мужчина ответил, что он здоров до шести месяцев назад.
когда он порезал себе палец, он получил для этого антибиотики. В ближайшее время
впоследствии у него началась диарея, и его здоровье ухудшилось. Трасс видел
до того, как антибиотики вызывают диарею. Было известно, что Candida была
оппортунистический и процветающий у ослабленных пациентов, но теперь Трасс задавался вопросом, не
может и не быть наоборот, Candida действительно вызвала ослабленный
состояние.
Он читал, что раствор йодида калия можно использовать для
лечить заражение Candida в крови. Поэтому он поставил пациента от шести до восьми
капли раствор Люголя четыре раза в день, и вскоре пациент снова
полностью хорошо.
Вскоре после этого у него была пациентка с заложенным носом,
пульсирующая головная боль, вагинит и тяжелая депрессия. К его изумлению вся она
проблемы немедленно исчезли с лечением Candida. Некоторое время спустя он увидел
пациентка, которая шесть лет болела шизофренией с сотнями
лечение электрошоком и большие дозы лекарств.Он начал лечить женщину
от аллергии носовых пазух с вакциной против Candida. Вскоре она выздоровела морально и
физически и оставался здоровым.
С тех пор он лечил своих пациентов от Candida в
малейшее указание на его наличие. Многие из его пациентов сделали замечательные
выздоравливает от самых необычных состояний, включая менструальные проблемы,
гиперактивность, нарушения обучаемости, аутизм, рассеянный склероз и аутоиммун
такие заболевания, как болезнь Крона и красная волчанка.
Каждый опытный натуропат может увидеть подобный успех
рассказы. Как ни странно, в антибиотиках вообще нет необходимости.
В нескольких процентах случаев, когда они необходимы, их серьезные последствия
эффектов можно легко избежать с помощью фунгицидов и лактобацилл.
Многие сомневаются в эффективности естественных методов лечения.
против явно серьезных инфекций, но мой опыт заставляет меня поверить
что часто естественные методы лечения более эффективны, не вызывая
повторные и хронические инфекции, наблюдаемые после приема антибиотиков.Я видел пациентов, которые
безуспешно принимали длительное лечение антибиотиками, выздоравливали в течение нескольких дней или
недель с естественной терапией.
Лечение «антибиотического синдрома»
Основным средством лечения «антибиотического синдрома» является
санация желудочно-кишечного тракта в сочетании с малоаллергенной диетой. В
таким образом, самые острые проблемы могут быть преодолены в течение нескольких недель, пока выродились
суставы или органы могут начать более медленный путь к выздоровлению.
Один неприятный побочный эффект большинства методов, используемых для уменьшения
патогенный микробный рост кишечника — реакция Герксгеймера
— внезапное ухудшение симптомов из-за токсинов, выделяемых мертвыми или умирающими
микробы.Иногда это используется в качестве диагностического инструмента, особенно для
Candida.
Я рекомендую промывки в сочетании с антимикробными средствами для
избежать или минимизировать неприятные побочные эффекты. Изотоническая промывка состоит из девяти
граммов или одна чайная ложка с горкой соли на один литр воды и подходит для
чувствительные люди и обычно с низким или нормальным кровяным давлением. А
раствор считается изотоническим, если он содержит такое же количество соли, как и
кровь. Промывка английской солью может содержать одну столовую ложку английской соли, больше или
меньше по необходимости, в большом стакане воды и полезен в случаях
запоры и при повышенном артериальном давлении.
измельченный зубчик чеснока можно добавить в промывку, чтобы
уменьшить микробный рост. Если чеснок использовать нельзя, то до двух
вместо него можно добавить чайные ложки трехпроцентной перекиси водорода (пищевой).
Вы можете выпить еще стакан воды после соли Эпсома, чтобы запить горечь.
послевкусие, но не после изотонической промывки, так как его больше не будет
изотонический.
Промывка унесет большинство мертвых микробов и их
выводят токсины из организма и сводят к минимуму любые неприятные реакции.Однако если
промывания не должно быть достаточно, чтобы вызвать сильную дефекацию в течение двух-двух
три часа, затем следует немедленно промыть еще раз, желательно английской солью.
последовать или могут возникнуть неприятные реакции.
В качестве меры предосторожности после антибактериальной терапии, как и для всего организма
очистить или, если есть только легкие симптомы чрезмерного роста микробов, это будет
достаточно, чтобы продолжать это около трех дней. В тяжелом и длительном состоянии
случаях промывка может использоваться в течение нескольких недель.Если разрастание Candida
подозревается, что у любого сексуального партнера должен быть хотя бы короткий период прилива крови. Если оно
неудобно продолжать промывку, например, с рабочими обязательствами,
тогда может быть приемлемо промыть один или два раза, а затем продолжить
длительное время с высоким потреблением ацидофилуса и бифидо
культур.
Ацидофилус и бифидо
Это приводит нас к следующему шагу: замене прореженного
патогенные микробы с желательными лактобациллами.Это должно быть сделано в массовом
доза 30-60 минут после каждого промывания, иначе могут размножаться нежелательные микробы
вернуться в полную силу после следующего приема пищи. Посев на Acidophilus используется для
заселить освободившиеся пространства на стенках тонкой кишки, в то время как
бифидобактерии являются защитными обитателями толстой кишки или большого
кишечник.
Есть несколько возможностей. Эти бактериальные культуры
доступны в магазинах здорового питания в виде порошков в бутылках из коричневого стекла, которые
следует хранить в холодильнике до и после продажи.Вы можете купить смешанную культуру
и возьмите две чайные ложки в воде или овощном соке или по одной чайной ложке каждого
отдельные культуры. Если вы подозреваете аллергию на коровье молоко, которая встречается довольно часто
в таком состоянии используйте безмолочные культуры.
5 капсул с высокой активностью.
Однако на начальном этапе их даже лучше объединить.
сильнодействующие капсулы или порошки со свежим йогуртом собственного приготовления. Вы можете использовать эти
культур в качестве закуски для приготовления собственного йогурта.Из-за возникших проблем
из коровьего молока можно использовать козье, соевое или даже рисовое молоко. В
Австралия Я обнаружил, что соевое молоко Sungold делает лучший йогурт.
Козье и рисовое молоко могут не становиться кремообразными из-за низкого содержания в них белка.
содержание, но это не имеет значения, так как полезные бактерии находятся в жидкости
сыворотка.
Потому что вам нужно будет держать молоко теплым в течение нескольких
часов, пока не застынет. Самый простой способ приготовить йогурт — это йогурт.
производитель.Температура должна оставаться между 30 и 45 0 C, лучше всего
ниже 41 0 C. В качестве закваски добавьте несколько чайных ложек порошка
культур или используйте чашку коммерческого йогурта, приготовленного с ацидофилином и бифидо
бактерии. Позже вам нужно будет выпить только около стакана предыдущей партии
йогурт в качестве закуски для следующего. Если йогурт стал слишком кислым или
в противном случае испортитесь позже, начните снова со свежей культурой в качестве закваски.
После застывания заморозьте йогурт.
Возьмите чашку этого йогурта лучше всего вместе с ацидофилусом.
порошок или капсулы после каждого промывания, использовать больше до или во время еды. Это
может не застывать так же твердо, как коммерческий йогурт, и немного более кислый, аналогичный
к ацидофильному молоку.
Продолжайте принимать культуры или йогурт в течение нескольких
через несколько месяцев после того, как вы прекратили промывание. Женщинам также следует в течение нескольких дней
или недель прикладывайте к влагалищу йогурт или ацидофильный порошок. Желательно
сначала в течение нескольких дней спринцеваться разбавленным раствором перекиси водорода при
крепость одной чайной ложки трехпроцентной перекиси на стакан воды или более
или меньше в зависимости от чувствительности.
Для тех, кто не употребляет ацидофильные / бифидо продукты
регулярно было бы хорошо проходить курс один раз в год просто в качестве меры предосторожности,
но особенно с или после приема каких-либо лекарств, медицинских или рекреационных, или когда
ведение стрессовой жизни.
Диета во время терапии должна быть без подсластителей, сладкого
продукты, дрожжи, алкоголь и, в первую очередь, фрукты. Различные добавки, такие как
каприловая кислота, может быть полезна, но не обязательна при этой промывке
метод.
Полынь
Если проблема Candida серьезная или уже существует для
долгое время есть вероятность, что грибок уже вторгся в кровоток и
внутренние органы.Помимо санации кишечника, я
рекомендуют избавиться от Candida и других паразитов с помощью полыни. Паразит
заражения в сочетании с грибами, такими как Candida, сильно подрывают наши
долгосрочное здоровье. Примеры распространенных паразитов — кишечные черви и
простейшие. Maleria и Giardia — простейшие. Их можно устранить с помощью
полынь (Arthemesia absinthium), лучше всего сочетается с другими травами Hulda Clark
молотая гвоздика и настойка зеленой скорлупы скорлупы черного грецкого ореха.
Можно положить молотую полынь в пустые желатиновые капсулы.
размер 00.Начните с 1 капсулы перед ужином и увеличьте на 1 капсулу в день до
7 капсул на 7-й день и еще 2 дня, затем продолжайте еще несколько
недель принимать по 3 капсулы два раза в день. В качестве альтернативы вы можете взять его просто с
ложку и запить, 1 чайная ложка с горкой эквивалентна примерно 7 капсулам,
пол чайной ложки на 3 капсулы. Однако, если трава измельчена вместо
мелко покрошить, то использовать только половину заявленных мер. Рекомендуемый
максимальная доза 7 капсул или 1 чайная ложка составляет около 2 г веса.
Можно принять 4 капли настойки черных грецких орехов 4 раза в жидкости.
в первый день. Если все в порядке, примите 4 x 8 капель на следующий день, затем 4
х 12 капель, 4 х 16 капель и на 5 день 4 х 20 капель. Тогда продолжайте принимать
20 капель 1 раз в сутки в течение нескольких недель.
Гвоздики должны быть свежемолотыми и охлажденными.
Принимать по 1 капсуле 3 раза до еды в 1-й день, 3 х 2 капсулы во 2-й день.
и после этого 3 x 3 капсулы до 10 дня. Наконец, принимайте 3 капсулы только один раз в
день в течение нескольких недель.
Если вы хотите взять измельченную гвоздику прямо на чайную ложку, используйте
пол чайной ложки без горки вместо 3 капсул и немедленно запить
много жидкости. Если у вас чувствительный желудок, вы можете продолжить
медленно увеличивая любое из этих средств.
Во время лечения любых паразитов или Candida потребляйте большое количество воды.
или разбавленные жидкости для удаления токсичных остатков. Эти травы-паразиты Hulda Clark
теперь доступны в большинстве магазинов здорового питания. Если вы не можете получить другой
травы тогда используют просто полынь.Для устранения Candida полыни нужно принимать
дольше, чем у других паразитов. Лекарство от полыни или паразитов следует
повторить при повторном появлении симптомов Candida или через 6 месяцев и позже один раз или
дважды в год.
Раствор Люголя
Если у вас есть основания полагать, что полынь не
удалили все Candida в крови или внутренних тканях, или вы не можете
принимать по другим причинам, тогда можно пройти курс раствора Люголя. Что
так доктор Ориан Трасс лечил своих пациентов.
Раствор Люголя — раствор йода для внутреннего применения, предназначенный для
исключить Candida и, возможно, вирусы и другие микробы из кровотока.
Получите 100 мл раствора Люголя, также помеченного как пероральный раствор водного йода.
Б.П., от химика. Возьмите тестовую каплю в жидкости, а не в воде, чтобы
вкус менее крепкий. Если это не вызывает аллергической реакции, продолжайте
принимать 4 х 6 капель в день в жидкости или в смеси с едой, но не вместе с
витамины A, C, E, экстракт виноградных косточек или цистеин.Йод — это окислитель, и он
лучше всего уменьшить потребление антиоксидантов во время его использования.
Если кровь была заражена, вы можете сначала
испытывают реакцию отмирания Candida, вызывая слабость и, возможно,
головная боль или тошнота. Если это произойдет, временно сократите количество
Раствор Люголя и запивать большим количеством воды и разбавленных чаев или соков. Продолжать
в течение 3 недель, но прервите, если у вас разовьется серьезная реакция. Не бери
йод в течение более 3 недель, так как он влияет на деятельность щитовидной железы.Если
необходимо повторить курс через несколько месяцев.
Прочие средства правовой защиты
Некоторые противогрибковые средства: прополис, золотая печать, pau d’arco,
и масла чайного дерева, дерева нима, корицы, эвкалипта, горчицы и тимьяна.
Также хорошо пожевать свежие или сушеные листья нима в течение нескольких недель. Избегайте
сладкие продукты, дрожжи, плесень и, вначале, фрукты. Для получения дополнительной информации см.
также Кишечная санитария в части 6 документа Healing
Продовольствие 9 1960.
Наконец, кроме раствора Полыни или Люголя и
возможно, в качестве альтернативы вы можете использовать очиститель крови типа Бека или заппер для
удалить Candida и другие грибки и инфекционные агенты из крови, для
подробнее см. статью Электронный заппер и магнитный импульсный генератор.Кроме того, магнитный импульсный датчик может помочь дезинфицировать карманы Candida.
инвазии во рту, влагалище или под пораженной кожей
области.
Не позволяйте синдрому антибиотика подкрасться к вам. Всегда
попробуйте природные альтернативы, а не антибиотики, но когда они
абсолютно необходимо, дополните свое лечение указанными шагами
над.
Симптомы и лечение новорожденного
Микрофлора слизистых оболочек младенцев чувствительна к любым изменениям.Это частая причина стоматита у младенцев. Это заболевание требует детальной диагностики и своевременного лечения, чтобы избежать осложнений. Каждому родителю необходимо знать, из-за чего появляется молочница у младенцев, каковы симптомы и признаки этого заболевания и какое лечение следует применять.
Виды болезни
Заболевание слизистой оболочки полости рта у младенцев бывает нескольких типов:
стоматит острый герпетический;
хронический герпес;
язвенная болезнь, которая часто носит хронический характер;
кандидозных поражений у младенцев.
У каждой формы стоматита у младенцев разные симптомы. При появлении первых признаков и симптомов молочницы у грудничков рекомендуется перед началом самолечения проконсультироваться со специалистом.
Лучше, чем лечить стоматит у новорожденного, определяется причина заболевания. Это может быть заболевание из-за аллергических реакций и бактериальной или инфекционной природы. При лечении стоматита у младенцев очень важно правильно диагностировать степень и тип заболевания и найти эффективное лечение, направленное на причину заболевания.При этом необходимо знать, насколько видны разные формы стоматита у грудничков.
Герпес формы
Острый герпетический стоматит у младенцев, вызванный вирусом герпеса. Это может произойти из-за того, что родитель целует или трогает других родственников. Эта форма характерна для грудничков в возрасте полугода. Симптомы:
головная боль;
недомогание и слабость;
значительное повышение температуры;
болезненность лимфоузлов на шее;
слизистая рта опухшая и покрыта мелкими пузырьками.
Через несколько дней пузырьки лопаются, в результате чего образуются небольшие красные эрозии. При этом заболевании часто наблюдается покраснение десен.
Заболевание может рецидивировать, особенно при частых простудных заболеваниях, инфекциях или сильном переохлаждении.
Лечение форм герпеса
При подозрении на молочницу у младенцев лучше проконсультироваться с педиатром, который подскажет, как лучше всего лечить эту проблему. Обычно лечение предполагает использование противовирусных препаратов, направленных против вируса герпеса.Это может быть мазь, гель или свечи ректальные. Мазью обрабатывают слизистую оболочку рта, уделяя особое внимание местам скопления пузырьков. Лучше, чем лечить стоматит у грудничка, зависит от степени поражения слизистой оболочки.
Ополаскиватель для младенцев применяется для обработки полости рта. Для этого используются специализированные растворы, которые предназначены для борьбы с вирусом — возбудителем стоматита у грудных детей.
При температуре тела следует применять детские жаропонижающие средства.При лечении этой формы заболевания важным этапом выздоровления является прием иммуностимулирующих препаратов.
Хроническая форма герпетического поражения слизистых оболочек у детей раннего возраста или новорожденных с опасностью частых рецидивов. Здесь важную роль играет иммунная система, поэтому следует проконсультироваться с врачом по поводу назначения эффективного иммуностимулятора грудничку.
Афтозная форма болезни
Причинами развития язвочек у младенцев являются:
наличие аллергических реакций;
заражение стафилококками;
проблемы в работе желудочно-кишечного тракта и печени;
низкий иммунитет.
Для болезни характерно появление одиночной кормы — язвочки небольшого размера с беловатым налетом и красной каймой. Афты появляются на слизистой оболочке рта, включая внутреннюю часть губ.
При афтозном стоматите у младенцев отмечается беспокойство и недомогание, иногда повышение температуры и болезненность лимфоузлов на шее. При прикосновении к Аттаму и во время еды ребенок испытывает сильную боль. Малыш беспокойный и плачет во время кормления.
Если у младенца обнаружен стоматит, пора начинать лечение. Перед началом лечения важно отличить афтозный стоматит, заболевание, вызванное вирусом герпеса.
При герпетическом стоматите пузыри покрывают целые участки слизистой оболочки, а язвы — единичные.
Пузырьки очень маленькие, а размер кормовой части может достигать 5 мм в диаметре.
Язвы, вызванные вирусом герпеса, проявляются покраснением десен.При афтозной форме такого эффекта не наблюдается.
Герпетическая форма заболевания сопровождается сыпью на губах и вокруг губ, при этом язвенная болезнь поражает только внутреннюю слизистую ротовой полости ребенка.
Стоматит у грудничков требует своевременного лечения, поэтому не откладывайте визит к врачу.
Лечебная афтозная форма
Перед лечением следует исключить возможность аллергической реакции. Если в рационе ребенка присутствует аллерген или медикаменты, их нужно прекратить принимать до полного выздоровления.
Афты обрабатываются антисептическими средствами. Это может быть настой трав, раствор хлоргексидина или использование жидкости для полоскания рта с содержанием обезболивающих средств. Так как малыш не может полоскать рот, рекомендуется лечить афты родителями по инструкции с помощью тампона.
В некоторых случаях может потребоваться физиотерапия по рекомендации врача.
Перед лечением следует проконсультироваться с педиатром. Врач определит возбудителя болезни и назначит соответствующее лекарство.
Если заболевание сопровождается повышением температуры тела, могут быть назначены препараты от детской температуры. В некоторых случаях необходима коррекция иммунной системы.
Афтозный стоматит может повторяться несколько раз в год. Часто сопровождает простуду и переохлаждение. В этом случае необходим прием иммуностимулирующих препаратов и витаминных комплексов. Если стоматит часто возвращается, необходимо провести детальное обследование ребенка и исключить нарушения со стороны органов пищеварения и эндокринной системы.
Candida формы
У новорожденных наблюдается нарушение баланса микрофлоры ротовой полости. Любой сбой в работе организма приводит к дисбактериозу. Очень часто это сопровождается активным ростом грибков вида Candida, которые присутствуют в микрофлоре каждого человека.
Кандидозная болезнь имеет характерный белый налет на слизистой оболочке ротовой полости, включая язык, внутреннюю часть губ и щек. Это состояние сопровождается чувством жжения и боли, поэтому новорожденные реагируют слезами и тревогой.
Лечение поражений слизистой оболочки полости рта содовым раствором или специальными средствами от кандидоза. Родителям следует протирать малыша слизистой содой или противогрибковым раствором, уделяя особое внимание пораженным участкам ротовой полости. Мать также должна пройти курс лечения, чтобы избежать повторного заражения ребенка во время кормления грудью.
Как лечить молочницу полости рта у новорожденных и младенцев подробно расскажет врач, и он подскажет, как часто следует лечить полость рта.
Как избежать развития болезни
Часто развитие молочницы у новорожденных связано с контактом с пожилыми людьми. Детская нежная микрофлора очень чувствительна к любым раздражителям — это проявление дисбактериоза. Чтобы этого избежать и не задумываться о том, чем лучше лечить стоматит у новорожденного младенца, достаточно соблюдать простые правила общения с новорожденным.
Не стоит целовать в губы малышек, ни маму, ни родственников, это поможет избежать развития стоматита у малыша.
Пустышку и пустышку следует сполоснуть кипяченой водой перед тем, как дать ребенку. Маме ни в коем случае нельзя брать в рот соску ребенка.
Перед кормлением грудью рекомендуется обработать соски содовым раствором, чтобы избежать раздражения ротовой полости новорожденного.
