Staphylococcus aureus 10 в 4 степени: Бактериологическая лаборатория — ГУЗ «Полоцкая центральная городская больница»

Кроме этого, золотистый стафилококк может быть выявлен:

• в костной ткани – инфекция проникает при переломах или тяжелых ранениях;
• в фурункулах, карбункулах и абсцессах – как правило, инфицируется волосяная луковица, и процесс воспаления запускается снова и снова даже на фоне проводимого лечения;
• на коже – у ребенка появляются высыпания, дерматиты.

Нередко выявляется золотистый стафилококк у грудничка в кале. Диагностироваться это может еще в роддоме – инфицирование происходит во время тяжелых родов на фоне сниженного иммунитета у недоношенных детей или младенцев с врожденными патологиями.

Самое тяжелое состояние при инфицировании аэробной бактерией – токсический шок. Он отличается характерными симптомами – резким повышением температуры до критических показателей, тошнотой, острой болью в голове, сыпью на теле, появлением гнойного отделяемого из имеющихся ран. В таком случае никакие исследования не проводятся – только золотистый стафилококк может вызвать данное состояние. Назначается срочная терапия.

Лечение золотистого стафилококка

Антибиотики против золотистого стафилококка не всегда эффективны, поэтому их назначают лишь на начальной стадии развития заболевания. Эффективными будут только антибиотики последнего поколения – цефалоспорины и другие непенициллинового ряда.

Чаще всего врачи применяют комбинированную терапию. Если требуется лечение золотистого стафилококка в горле у ребенка, то будут назначены:

• обработка слизистой антисептическими растворами – хлорфиллиптом;
• иммуностимулирующие препараты;
• антистафилококковый бактериофаг.

Многих интересует, как вылечить золотистый стафилококк в зеве, который вызывает частые ангины, ларингиты, тонзиллиты. Без назначений врача не обойтись – привычные лекарственные препараты не помогают либо дают кратковременный эффект выздоровления. Специалист даст рекомендации по обработке слизистой глотки антисептическими растворами, проведет исследование на восприимчивость бактерии к антибиотикам и сделает медикаментозные назначения.

Чаще всего колонии рассматриваемых бактерий обнаруживаются в носу – они могут годами там находиться и не вызывать никаких заболеваний. Если же ребенок часто простужается, имеет отставание в росте и развитии, то хронических патологий не избежать. Как лечить золотистый стафилококк в носу у детей:

• госпитализировать ребенка в лечебное учреждение;
• проводить ежедневную санацию слизистой носа и глотки, так как имеется большой риск распространения инфекции;
• выполнять назначения врача для снятия тяжелых симптомов.

Независимо от того, какой именно орган поражен стафилококком, обязательно будут назначаться витамины, иммуномодуляторы и пробиотики для восстановления кишечной микрофлоры.

Длительность лечения стафилококковой инфекции – от 7 до 30 дней, что зависит от своевременности диагностирования заболевания и выявления больших колоний бактерии. Если терапия проводится в точном соблюдении назначений лечащего врача, то прогноз по заболеванию благоприятный.

Более подробно о том, как передается золотистый стафилококк и какие симптомы укажут на наличие аэробных бактерий, можно узнать на нашем сайте Добробут.ком.

Анализ кала на стафилококк в Москве

Стафилококковые бактерии получили свое название благодаря своей форме в виде шара. На данный момент известно о существовании пятидесяти видов стафилококков. Данная группа микроорганизмов разделилась на две части. Одни стафилококки прекрасно уживаются с человеком, не причиняя ему вреда. Другие становятся причиной достаточно серьезных заболеваний.

Наибольшую опасность представляет золотистый стафилококк, который способен поражать любой орган, в том числе мозг сердце и мочеполовые органы. Сердечно-сосудистая, мочеполовая центральная нервная система являются самыми уязвимыми в этом отношении. Заражение может проходить как воздушно-капельным путем или при контакте через кожу и слизистые. Данный возбудитель является причиной многих заболеваний. Его очень трудно уничтожить, так как он с легкостью приспосабливается к любым неблагоприятным условиям, устойчив к действию большинства видов антибиотиков и антисептиков. Не боятся эти возбудители и 98% спирта, не погибая при обработке поверхностей. Для обнаружения бактерии используют анализ кала, мочи, крови, мазки со слизистых.

Показания к анализу

Проявление стафилококковой инфекции весьма специфично, поэтому врач отправляет пациента на обследование при обнаружении следующих симптомов:

• Кожных высыпаний.
• Насморка.
• Боли в горле.
• Кашля, влажного или сухого.
• Повышенной температуры.

В тяжелых случаях, из-за отравления токсинами выделяемыми бактериями, может произойти потеря сознания, так как продукты жизнедеятельности микроорганизмов вызывают падение давления.

При размножении стафилококков в кишечнике появляются все признаки дисбактериоза. В этом случае у пациента появляются следующие жалобы:

• Тошнота, которая сменяется частыми продолжительными рвотами.
• Плохой аппетит или отвращение к еде.
• Разлитые боли в области живота.
• Понос, при котором в кале имеется слизь и примесь крови.

Данные симптомы характерны для многих патологий и не всегда связанных со стафилококками, но в пяти процентах случаев при анализе обнаруживают именно бактерии этого вида.

В группу риска по инфекционным заболеваниям, спровоцированным золотистым стафилококком, входят люди с ослабленным иммунитетом:

• Новорожденные дети.
• Пожилые люди.
• Пациенты, прошедшие курс лучевой терапии.
• Страдающие СПИД и носители ВИЧ.

Проблемы с желудочно-кишечным трактом, спровоцированные стафилококками, могут возникнуть не только по причине отравления, но и из-за длительного приема антибиотиков и других типов препаратов, уничтожающих нормальную флору в кишечнике. Обследование на стафилококки проходят все работники хирургических и родильных отделений.

Подготовка к процедуре

При подготовке к данному виду обследований необходимо соблюсти ряд правил, лишь в этом случае будет получен максимально точный результат.

• За семь дней до проведения исследования прекращают прием всех медикаментов, особенно антибиотиков и противовоспалительных.
• Накануне анализа нельзя принимать слабительные средства.
• Материал для изучения должен оказаться в лаборатории не позднее трех часов с момента взятия.
• Кал непродолжительное время можно хранить в холодильнике.
• Для хранения и доставки кала используют только стерильную емкость.

Ложный результат может появиться из-за подавления патологической бактериальной флоры лекарственными препаратами. А также при нарушении правил забора образца для исследования.

Как проводится анализ

При обнаружении стафилококков в кале могут быть использованы несколько методов:

• Микроскопический.
• Серологический.
• Бактериологический.

При первом случае кокки определяются и подсчитываются при окрашивании по Граму. Второй метод является скорее вспомогательным и проводится параллельно с изучением фекалий. На пробу берут кровь и в плазме ищут антитела к возбудителю.

При третьем методе проводят посев в питательную среду бактерий, и после увеличения колонии проводят изучение внешнего вида выращенных бактерий. К примеру, колония золотистого стафилококка имеет ровный край с радужным венчиком вокруг и цвет окрашивания от золотистого до белого.

Анализ кала при положительном результате первого анализа берется повторно через три дня.

Нормы и расшифровка результата

Анализ может иметь два значения: положительный и отрицательный.

При отрицательном вредных микроорганизмов не обнаруживают среди выращенных экземпляров.

При положительном возбудители в кале есть, и значение приобретает их количественный показатель. При незначительном количестве, речь идет о носительстве. Потенциальный возбудитель есть, но его рост подавляется иммунитетом. Если число бактерий превышает 10 в 4 степени, то речь идет о полноценном воспалительном процессе, вызванном стафилококками.

Данная статья размещена исключительно с целью ознакомления в познавательных целях и не является научным материалом или профессиональным медицинским советом. За диагностикой и лечением обратитесь к врачу.

Вопросы и ответы Клиника ИПМ

Оториноларинголог

Добрый день, Наталья!

Candida albicans — данный микроорганизм относится к условно-патогенным, т. е. в умеренных количествах является нормальной частью микрофлоры и вызывает заболевания только при избытке. Чрезмерному росту этих микроскопических грибов препятствует нормальная бактериальная флора кожи и слизистых, а также защитные факторы организма. C. albicans присутствует у 80 % популяции людей, не вызывая болезней. Заболевание, вызванное грибами рода Candida, – кандидоз возникает при нарушениях иммунных механизмов защиты.Наличие в организме человека грибов кандида (C. Albicans) еще не означает развитие кандидоза. При приемлимом состоянии иммунитета развитие заболевания не происходит. Выделение Сandida spp. из нестерильных тканей (кожа, слизистые ротовой полости и половых путей) в количестве, не превышающем 104 КОЕ/мл, при отсутствии клинической картины кандидоинфекции расценивают как бессимптомное носительство. Следует отметить также, что кандида достаточно часто соседствует с патогенной бактериальной флорой, которая создает благоприятные условия для активного развития грибковой инфекции.

Золотистые стафилококки в норме могут располагаться на коже, слизистой оболочке носа и реже в гортани, влагалище, кишечнике. Около 20 % населения являются постоянными носителями этой бактерии, которая может сохраняться на кожных покровах и слизистых оболочках верхних дыхательных путей. Если у человека слабая иммунная система или нарушен нормальный состав микрофлоры, то при повреждении кожи (слизистых оболочек) золотистый стафилококк может приводить к разнообразным местным и системным инфекционно-воспалительным поражениям. Если бактериологический посев на стафилококк дал положительные результаты, то это значит следующее: — у пациента острая инфекция, вызванная стафилококком; — пациент – бессимптомный носитель стафилококка.

Результаты анализов могут соответствовать норме.

При наличии жалоб советую обратится к врачу.

Staphylococcus aureus 10 в 5 степени — Вопрос лору

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 71 направлению: специалиста COVID-19, аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гепатолога, гериатра, гинеколога, гинеколога-эндокринолога, гомеопата, дерматолога, детского гастроэнтеролога, детского гинеколога, детского дерматолога, детского инфекциониста, детского кардиолога, детского лора, детского невролога, детского нефролога, детского офтальмолога, детского психолога, детского пульмонолога, детского ревматолога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, дефектолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, клинического психолога, косметолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, неонатолога, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, паразитолога, педиатра, пластического хирурга, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, репродуктолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, физиотерапевта, фитотерапевта, флеболога, фтизиатра, хирурга, эндокринолога.

Мы отвечаем на 97.34% вопросов.

Оставайтесь с нами и будьте здоровы!

Угревая болезнь: клинико–иммуно–микробиологические аспекты | Васильева Е.С.

Здоровье кожи в значительной мере определяется состоянием ее симбиотической микрофлоры. Бла­годаря кооперации и метаболической активности симбионтная микрофлора кожи у здорового человека противодействует ее колонизации патогенными микроорганизмами. «Колонизационная резистент­ность» кожных покровов обеспечивается механизмами, связанными с организмом хозяина (продукция жирных кислот, иммуноглобулинов, лизоцима и др.), а также с образованием кожной микрофлорой разнообразных микробных агентов (органические кислоты, бактериоцины, перекиси, антибиотики и т.д.) [2,6]. Анализ данных литературы свидетельствует, что у больных акне имеются глубокие нарушения количественного и качественного состава микрофлоры кожи [2–5,11]. Наиболее выраженные изменения проявляются в увеличении количественного содержания на коже Staphylococcus аureus и Staphylo­coccus haemoliticus [5,6] и уменьшении содержания эпидермальных стафилококков, пропионибактерий и других представителей нормофлоры кожи [1,8,10]. Выде­ленные при акне патогенные и оппортунистические микробы, как показывают данные литературы, часто обладают устойчивостью к антибактериальным средствам (например, резистентность к эритромицину у Staphylococcus epidermidis составляет 95%, у Propio­ni­bacterium acnes – 52% [9]) и повышенным патогенным потенциалом [6,12–15].

Цель исследования: оценка состава микрофлоры кожи у больных с вялотекущими, торпидными формами акне и исследование чувствительности к наиболее часто применяемым при этой патологии антимикробным средствам.
Материалы и методы. Было обследовано 137 больных с воспалительными формами угревой болезни, которые отмечали неэффективность проводимого ранее лечения.
Согласно классификации Pochi P.E. et al. (1991) были выделены основные клинические формы заболевания: папуло–пустулезная – 104 пациента (76%) и узловатая – 33 больных (24%).
Степень тяжести заболевания определяли по методу С.Н. Соок et al. (1979) в модификации B.S. Allen, J.G. Smith (1982), на основании шкалы от 0 до 8 в зависимости от выраженности акне–элементов, их количества и площади поражения. У наблюдаемых больных отмечалась средняя и тяжелая степени тяжести, о чем свидетельствуют градации 4–6 и градации 7–8 по шкале Кука. Средняя степень тяжести преобладала у 115 (84%) больных папуло–пустулезной формой акне и у 86 (63%) – узловатой.
Возраст пациентов составил от 18 до 34 лет, давность заболевания от 5 до 12 лет. Больные на протяжении 1,5–3 лет неоднократно получали антимикробные препараты как местно, так и системно, но без клинического эффекта. Наиболее часто использовались эритромицин и доксициклин.
Объектом исследования явилась кожа лица в областях поражения до лечения и идентичные по локализации участки кожи через неделю после лечения. Взятие материала осуществлялось следующим образом: 1–2 воспалительных очага с визуально выявляемыми признаками гнойного воспаления вскрывались стерильной иглой. Шпателем осуществляли надавливание на пустулы и содержимое выдавливали на стерильный ватный тампон. Тампоны тотчас доставлялись в микробиологическую лабораторию в течение 2 часов после взятия материала. Изоляция микроорганизмов из представленного биоматериала осуществлялась в микробиологической лаборатории Больницы гражданской авиации. Посев, культивирование и идентификацию микроорганизмов проводили в соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико–диагностических лабораториях лечебно–профилактических учреждений».
Посевы бактериологического материала проводили в аэробных и анаэробных условиях количественным или полуколичественным методом на плотные и жидкие питательные среды (Приказ Минздрава СССР № 535, 1985 г.; Mannual of Clinical Microbiology, 1999). Для по­лу­чения изолированных колоний использовали модификацию рассева по Дригальски. Идентификацию аэроб­ной и анаэробной флоры проводили с помощью «рутинных» методик (постановка «пестрого ряда» на 12 тестах или на микробиологическом анализаторе с автоматизированной системой i EMS Reader, Labsys­tems, Финляндия, с использованием планшет: СТАФИ–тест 16, НФЕРМ–тест 24, СТРЕПТО–тест 16, ЭНТЕРО–тест 16 производства «PLIVA–Lachema», Чехия). Использовали программы: «МИКРОБ» и «МИКРОБ–АВТОМАТ».
Предварительные результаты оценивали в день забора материала и через 24–48 часов при первичном просмотре чашек. Окончательный ответ с результатами идентификации и постановкой чувствительности к антибактериальным препаратам получали на 5–6–е сутки.
Определение чувствительности к антибиотикам проводили в соответствии с методическими указаниями МУК 4.2.1890–04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (2004), а также руководствуясь стандартами Нацио­наль­ного комитета по клиническим лабораторным стандартам США (с 2005 года – Институт клинических и ла­бо­раторных стандартов) – диско–диффузионным ме­то­дом на агаре Мюллера–Хинтона (тест Кирби и Бауэ­ра) в соответствии с руководством по микробиологии «Меди­цин­ская Микробиология» (1998) с помощью коммерческих план­шет производства ЗАО «Ставро­поль» и автоматизированной программы «МИКРОБ– АВТОМАТ». Ис­поль­зовались диски для определения чувствительности к антибиотикам: эритромицину, доксициклину, тетрациклину, азитромицину, линкомицину. Количество выросших бактерий выражали в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 мл патологического материала [7].
Результаты и обсуждение. Проведенное микробиологическое исследование позволило выделить из очагов поражения 184 штамма бактерий, из которых наиболее часто определялись в чистой культуре (всего 90 штаммов) штаммы гемолитического стафилококка (65 штаммов) и золотистого стафилококка (18 штаммов). Кроме того, были получены 94 штамма, обусловившие смешанный рост культур (2–3 и более). Встре­ча­лись комбинации стафилококков с Peptostreptococcus anaerobius, S. epider­midis, Neisseria sicca, Propionibacterium acnes.
Все микроорганизмы при первичном исследовании высевались в концентрациях более чем 104 КОЕ/мл.
Выводы: Анализ полученных результатов подтвердил данные литературы, что у больных с пустулезными формами акне из воспалительных элементов выделя­ются гемолитический и золотистый стафилококки (табл. 1). Результаты наших исследований впервые по­ка­зали, что у больных с упорно протекающим, торпидным к проводимому лечению течением дерматоза преобладающим возбудителем является Staph. haemoliticus (72%), в меньшей степени – Staph. аureus (20%), причем они выявлялись в 3–4 раза чаще других микроорганизмов. Кроме того, помимо Staph. аureus и Staph. haemoliticus, у части больных (8% случаев) выделялся пиогенный стрептококк (Streptococcus pyogenes).
Наиболее часто выделяемый у больных акне (табл. 2) гемолитический стафилококк в 78,6% случаев резистентен к эритромицину, в 48% случаев отмечается резистентность к доксициклину, в 76,7% – к тетрациклину, т.е. к тем антимикробным препаратам, которые в настоящее время традиционно используются в практической косметологии [8,9,11] для лечения больных. Эти данные позволяют нам высказать предположение, что одной из причин хронизации дерматоза и неэффективности проводимого лечения является широкое распространение антибиотикорезистентности среди основных возбудителей.
В связи с вышеизложенным считаем целесообразным:
1. Обязательное определение чувствительности к антибиотикам у всех больных; выбор антибактериального средства осуществлять с учетом этих данных.
2. Изыскание новых антимикробных средств.
3. Более широкое использование альтернативных методов лечения акне, осложненных гнойно–воспали­тель­ным процессом, к каковым можно отнести физиотерапевтические методы, иммуностимулирующие средства, использование пробиотических препаратов, содержащих микроорганизмы и проявляющих выраженную антагонистическую активность в отношении Staph. aureus и Staph. haemoliticus.

Литература
1. Донецкая С.В. Обоснование тактики лечения вульгарных угрей на основании изучения индивидуальных особенностей корреляции общего и местного иммунитета. Дис… канд. мед. наук. – М., 1997. – 113 с.
2. Иванов А.А. Микроэкология кожи человека и ее взаимосвязь с иммунным статусом человека //Мат. науч.–практ. конф. «Микрофлора кожи человека – клинико–диагностическое значение». – М., 1989. – С.3–11.
3. Клемпарская Н.Н. Изменение микрофлоры кожи при действии на организм экзогенных и эндогенных факторов // Мат. науч.–практ. конф. «Микрофлора кожи человека – клинико–диагностическое значение». – М., 1989. – С.12–23.
4. Ковалев В.М. Методы комплексной терапии угревой болезни в свете новых данных о патогенетической роли нарушений содержания простагландина Е 2 и циклического 3, 5–аденозинмонофосфата., 1983, Дис… к.м.н.
5. Кутасевич Я.Ф., Маштакова И.А., Багмет А.Н., Шаповалова О.В. Микробиоценоз кожи у больных угревой болезнью и пути его коррекции. Украiнський журнал дерматолог, венеролог, косметолог. №1, березень 2003.– 43–47 с.
6. Нобл У.К. Микробиология кожи человека. – М.: Медицина, 1986. – 496 С.
7. Фельдман Ю.М., Миханева Л.Г., Шапиро А.В., Кузьменко В.Д. Ко­ли­чественное определение бактерий в клинических материалах // Лаб. дело. – 1984.– №10.– С. 616–619.
8. Braun–Falco O., G. Plewig, H.H. Wolff, W.H.C. Burgdorf Dermatology, 2000; P. 1054–1055.
9. Dreno B, Reynaud A, Moyse D, Habert H, Richet H. Erythromycin– Resistance of cutaneous bacterial flora in acne. Eur. J. Dermatol. 2001. Nov–Dec; 11(6): 549–53.
10. Holland K. T., Aldana O., Bojar R.A., Cunllife W.J., Eady E.A. Propionibacterium acnes and Acne. // Dermatology, 1998; P. 196: 67–68.
11. Kennet A. Arndt, Kathryn E. Bowers. Manual of Dermatologic Therapeutics. LWW, 2002.p.3–20.
12. Leeming J.P., Holland K.T., Cunliffe W.J. The microbial colonization of inflamed acne vulgaris lesions. Brit. J. Derm., 1988, 118 (2), 203–8.
13. Plewig G., Kligman A.M. Acne: Morphogenesis and Treatment. Berlin: Springer, 1975.
14. Plewig G., Kligman A.M. Acne: Pathogenesis; Morphologie; Therapie. Berlin etr., Springer, 1978, 348 p.
15. Webster G.F. Acne vulgaris. Clinical review. B M J 2002; Volum 325: 475–9.

.

Порекомендуйте статью вашим коллегам

2.4.4. Определение коагулазоположительных стафилококков (S. aureus) / КонсультантПлюс

2.4.4. Определение коагулазоположительных стафилококков (S. aureus).

2.4.4.1. Метод основан на способности коагулазоположительных стафилококков расти и образовывать зону просветления вокруг колоний на специальных селективных средах с яичным желтком.

С целью унифицирования метода выделения стафилококков из пищевых продуктов и приближения формулы питательной среды к международной в Институте питания АМН СССР разработан вариант агара типа Байрд-Паркер, близкий по своим свойствам к оригиналу. Для изготовления агара типа Байрд-Паркер используются отечественные реактивы и питательные основы (см. п. 4.2.3.2). Эта среда особенно рекомендуется для выделения стафилококков из продуктов, подвергнутых термической обработке. Преимущество этой среды состоит в том, что с ее применением можно выделять и учитывать стафилококки из большой ассоциации микробов. Под действием ингибирующих веществ среды рост многих представителей сопутствующей микрофлоры полностью угнетается либо изменяется морфология и окраска колоний микроорганизмов.

2.4.4.2. Посев жидких продуктов: в две колбы емкостью 200 куб. см, содержащие по 90 куб. см солевого или сахарного бульона, стерильной пипеткой вносят по 10 куб. см продукта, тщательно смешивают и помещают в термостат при (37 +/- 1) град. C на 18 — 24 часа.

2.4.4.3. Посев пастообразных продуктов (см. табл. 4): из усредненной пробы делают навески, равные 1 г, помещают в пробирки с 9 куб. см солевого и сахарного бульона, хорошо размешивают и термостатируют по п. 2.4.4.2.

2.4.4.4. После термостатирования из бульонов производят посев на чашки Петри с подсушенным агаром типа Байрд-Паркер или ЖСА (п. п. 4.2.3.2 и 4.2.3.3). Посевной материал в количестве 0,1 куб. см (2 капли) равномерно распределяют шпателем по поверхности агара. Чашки с посевами вверх дном инкубируют при (37 +/- 1) град. C в течение 24 — 48 часов.

2.4.4.5. Учет результатов: плазмокоагулирующие стафилококки (S. aureus) на среде типа Байрд-Паркер растут в виде черных, блестящих, выпуклых колоний в диаметре 1 — 1,5 мм, окруженных зоной просветления среды шириной 1 — 3 мм. Около 90% стафилококкус ауреус, выделенных из пищевых продуктов, и штаммы, образующие энтеротоксин, на агаре типа Байрд-Паркер дают зоны просветления через 24 часа инкубации при 37 град. C. Эти колонии не требуют подтверждения в принадлежности к S. aureus и подлежат учету через 24 часа инкубации.

2.4.4.6. При обнаружении вышеописанных колоний дают заключение о наличии S. aureus в засеянной массе продукта и несоответствии его нормативу.

2.4.4.7. При росте типичных по морфологии (п. 2.4.4.5) колоний, но без зон просветления их подвергают изучению в реакции плазмокоагуляции с плазмой крови кролика. При положительной реакции дают заключение о наличии S. aureus в засеянной массе продукта и его несоответствии нормативу.

2.4.4.8. Примечание: некоторые представители семейства Enterobacteriacene, энтерококков, микрококков растут на среде Байрд-Паркер, образуя черные колонии, но при этом ни один из этих микроорганизмов не образует характерных зон просветления на среде с желтком. На этой среде также могут расти дрожжи, плесени, бациллы, но их легко различить по серой окраске и по измененной форме колоний.

2.4.4.9. Учет результатов на желточно-солевом агаре (ЖСА) и изучение выделенных культур, подозрительных на S. aureus, проводится общепринятым методом.

2.4.4.10. Постановка реакции плазмокоагуляции.

Не менее 5-ти характерных колоний, подозрительных на стафилококки, с каждой чашки намечают для дальнейшего исследования, из которых приготавливают мазки-препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют. Колонии грамположительных мелких кокков, расположенных в мазке гроздьевидно, отсеивают в пробирки со скошенным мясопептонным агаром (п. 4.1.3), пробирки с посевами выдерживают в термостате при (37 +/- 1) град. C в течение 18 — 24 часов. Из культур, выросших на скошенном МПА, после предварительной проверки мазка на чистоту под микроскопом, ставят реакцию плазмокоагуляции: в пробирку с (0,50 +/- 0,01) куб. см разведенной кроличьей плазмы (п. 4.2.3.5) вносят петлю суточной агаровой культуры. Одну пробирку с плазмой оставляют незасеянной, а в другую засевают заведомо коагулазоположительный стафилококк в качестве контролей.

Пробирки помещают в термостат при температуре (37 +/- 1) град. C.

Учитывают результаты через 2, 4 часа и оставляют до утра при комнатной температуре для окончательного учета. Ускорение реакции производят за счет использования 3 — 4-часовых бульонных культур стафилококков, добавляя их по (0,10 +/- 0,01) куб. см в (0,50 +/- 0,01) куб. см разведенной цитратной плазмы.

Пробирки на свертывание плазмы следует просматривать осторожно, чтобы не разрушить начало образования сгустка.

При учете реакции плазмокоагуляции могут наблюдаться три степени активности фермента коагулазы:

++++ — сгусток плотный;

+++ — сгусток, имеющий небольшой отсек;

++ — сгусток, в виде взвешенного мешочка.

Все три варианта являются положительным результатом.

2.4.4.11. Обработка результатов:

— положительная реакция плазмокоагуляции свидетельствует о присутствии коагулазоположительных стафилококков в засеянной массе (объеме) продукта;

— отрицательная реакция плазмокоагуляции свидетельствует об отсутствии коагулазоположительных стафилококков в засеянной массе (объеме) продукта.

2.4.4.12. Примечание.

При обнаружении значительного роста коагулазоотрицательных стафилококков в исследуемом продукте микробиолог должен обратить внимание на санитарно-гигиеническое содержание молочной кухни, т.к. у детей грудного возраста некоторые варианты коагулазоотрицательных стафилококков (S. epidermidis) также способны вызывать острые стафилококковые энтериты.

Влияние низкой температуры на рост и ультраструктуру Staphylococcus spp

Abstract

Влияние колебаний температуры является важным фактором роста бактерий, особенно таких патогенов, как стафилококки, которые должны оставаться жизнеспособными в потенциально жестких и длительных условиях переноса между хозяевами. Целью этого исследования было изучить реакцию S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis на длительное воздействие низкой температуры (4 ° C) и то, как этот фактор повлиял на их последующее воздействие. рост, морфология колоний, клеточная ультраструктура и аминокислотный состав в нецитоплазматической фракции гидролизата.Клинические изоляты выращивали в оптимальных условиях, а затем подвергали воздействию условий 4 ° C в течение 8 недель. Образцы, подвергнутые холодному стрессу, и контрольные образцы оценивали с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) для выявления потенциальных ультраструктурных изменений. Чтобы определить изменения в аминокислотном составе, клетки разрушали для удаления липидных и цитоплазматических компонентов, а оставшиеся структурные компоненты гидролизовали. Затем аминокислотные профили для гидролизной фракции анализировали на предмет изменений с помощью анализа главных компонентов (PCA).Воздействие трех стафилококков на длительный низкотемпературный стресс приводило к формированию увеличивающейся доли фенотипов вариантов малых колоний (SCV). ПЭМ показала, что клетки SCV имели значительно более толстые и более диффузные клеточные стенки, чем соответствующие образцы дикого типа для S. aureus и S. epidermidis , но изменения не были значительными для S. lugdunensis . Существенные видоспецифические изменения в аминокислотном составе фракции структурного гидролизата также наблюдались в обработанных холодом клетках.Данные показали, что стафилококки реагировали на длительные периоды лечения холодовым стрессом, превращаясь в популяции SCV. Было высказано предположение, что наблюдаемые ультраструктурные и аминокислотные изменения представляют собой механизмы ответа для выживания стафилококков в неблагоприятных условиях, таким образом поддерживая жизнеспособность видов до тех пор, пока благоприятные условия не возникнут снова.

Образец цитирования: Onyango LA, Dunstan RH, Gottfries J, von Eiff C, Roberts TK (2012) Влияние низкой температуры на рост и ультраструктуру Staphylococcus spp .PLoS ONE 7 (1): e29031. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031

Редактор: Дипшиха Чакравортти, Индийский институт науки, Индия

Поступила: 12 октября 2011 г .; Одобрена: 19 ноября 2011 г .; Опубликован: 24 января 2012 г.

Авторские права: © 2012 Onyango et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана международной стипендией Университета Ньюкасла, стипендией Гидеона Ланга и исследовательским грантом Гарольда Стэннета Уильямса и Джудит Мейсон. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Хотя стафилококки принадлежат к общей флоре кожи и слизистых оболочек, они могут быстро стать условно-патогенными микроорганизмами, когда иммунная система хозяина нарушена, вызывая ряд заболеваний.Различные штаммы S. aureus стали известны своей устойчивостью к нескольким противомикробным агентам, и вместе с рядом коагулазонегативных стафилококков (ЦНС), включая S. epidermidis и S. lugdunensis , эти бактерии составляют: значительная доля внутрибольничных инфекций [1], [2], [3].

Было показано, что воздействие антибиотиков на стафилококки является одной из причин образования вариантов малых колоний (SCV). Эти варианты представляют собой субпопуляции бактерий, которые демонстрируют особенности роста, нетипичные по сравнению с таковыми у их аналогов дикого типа (WT).Как следует из названия, эти варианты характеризуются в основном негемолитическими и непигментированными крошечными колониями, примерно 1/10 размера их аналогов дикого типа [4]. Интерес к формам SCVs возник, когда они были связаны со стойкими клиническими инфекциями [5], [6]. У людей SCV связаны с хроническими стойкими инфекциями скелетной системы, сердца и легких, а также других органов, а также при использовании стационарных медицинских устройств [7]. Лечение таких инфекций стало проблемой, поскольку было показано, что SCV менее чувствительны к нескольким антибиотикам, и, кроме того, эти фенотипы лучше сохраняются внутриклеточно в клетках-хозяевах [8].Исследования, включающие модели на животных, показали, что многие вирулентные факторы, экспрессируемые фенотипами WT, вызывающие заболевание, либо не экспрессируются, либо остаются минимальными в популяциях SCV [9], [10], [11]. Вместо этого SCV активируют механизмы, которые поддерживают их прикрепление и захват клетками-хозяевами, а также запускают метаболические стратегии, которые будут способствовать их выживанию после интернализации без необходимости использования цитотоксических мер [12]. Сообщения о множественном ауксотрофизме [5], [13], [14], [15] предполагают, что определенные метаболические пути были инактивированы в SCV.Дальнейшие молекулярные исследования предоставили доказательства того, что клинические SCV имели разные фенотипы по сравнению с их родителями WT, но были способны возвращаться к форме WT [16], [17], предполагая, что фенотипические изменения включали значительные изменения метаболического гомеостаза в SCV.

Стафилококкам требуется способность выживать на неодушевленных предметах в процессе перехода от одного хозяина к другому. Они должны уметь адаптироваться к быстро меняющимся условиям окружающей среды и быть готовыми к реактивации факторов метаболизма и вирулентности, когда появляются возможности.Для хранения пищевых продуктов, растворов и биологических материалов часто используются температуры 4 ° C, поскольку большинство патогенов считаются мезофильными и поэтому не могут хорошо расти при этой температуре [18]. Стафилококки способны расти в широком диапазоне температур (6,5–46 ° C), хотя их оптимальный диапазон составляет 30–37 ° C, и было высказано предположение, что они могут выжить при экстремальных температурах <6,5 ° C и> 46 ° C в течение ограниченного периода времени. периоды времени [18]. Способность стафилококков быстро адаптироваться к колебаниям низких и высоких температур особенно важна для патогенных штаммов стафилококков, поскольку в некоторых случаях эти бактерии должны оставаться жизнеспособными вне хозяина [19].

Клеточная стенка бактерий и связанные с ней белки представляют собой интерфейс между окружающей средой и цитоплазмой. Он действует как структурный барьер против токсичных химикатов, защищает клетку от колебаний условий окружающей среды и играет важную роль в развитии инфекции и патогенности [20]. В нескольких исследованиях изучали структуру клеточной стенки устойчивых к антибиотикам штаммов S. aureus , и результаты показали, что утолщение клеточной стенки было обычным признаком, возникающим только тогда, когда бактерия выращивалась в присутствии антибиотиков [21].В этих исследованиях предполагаемая функция утолщенной клеточной стенки заключалась в связывании и секвестрации ванкомицина на большем удалении от его целевого сайта. Таким образом, была выдвинута гипотеза о том, что бактериальные клетки, подвергшиеся воздействию ряда стрессоров, могут адаптировать состав своей клеточной стенки и связанных белков для облегчения защиты от изменения условий окружающей среды. Чтобы потенциально измерить этот измененный состав, будет исследован анализ нецитоплазматической фракции и, в частности, аминокислотных изменений.

В настоящем исследовании цель исследования заключалась в том, чтобы определить, будет ли воздействие низкой температуры при 4 ° C в течение 8 недель стимулировать формирование фенотипов SCV в качестве механизма выживания клинических изолятов S. aureus , S. epidermidis . , и S. lugdunensis . Кроме того, скорость изменений числа SCV как пропорции жизнеспособных бактериальных популяций определялась в течение 8-недельного времени воздействия, а любые связанные изменения в морфологии и составе клеточной стенки оценивались с помощью ТЕМ и ГХ-МС соответственно.Было высказано предположение, что воздействие холодового стресса приведет к увеличению толщины клеточной стенки и изменению биохимического аминокислотного состава.

Материалы и методы

Бактериальные образцы

S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis были изолятами, полученными в результате более раннего исследования [22] и поддерживаемыми в качестве культурального материала в лаборатории. Изоляты надлежащим образом хранили и регулярно субкультивировали для поддержания жизнеспособности.Проверки личности регулярно выполнялись с помощью ПЦР и стандартной биохимии API® Staph.

Рост бактерий

Ночные бульонные культуры S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis использовали для создания свежих жидких культур (100 мл, выращенных в колбах на 250 мл), которые выращивали до средней экспоненциальной фазы при 37 °. C, 120 об / мин, а затем инкубировали при 4 ° C в течение 8 недель. Каждую неделю из этих жидких культур, подвергшихся холодному стрессу, получали n = 9 образцов, которые разбавляли 1 × 10 перед нанесением аликвот по 5 мкл каждого образца в трех экземплярах на колумбийский агар с лошадиной кровью (HBA, Oxoid).Засеянные планшеты инкубировали в течение 24 часов при 37 ° C, а затем исследовали. Регулярные проверки чистоты сохраняемых бульонных культур проводились с помощью анализов на основе ПЦР, чтобы гарантировать отсутствие перекрестного загрязнения во время отбора проб. Колонии, растущие из субкультивированных стрессовых бульонов, анализировали на чистоту культуры. Это было выполнено с использованием теста API® Staph (bioMérieux) и основанных на ПЦР анализах гена 16SrRNA с использованием метода Brown et al. , [23] и результаты проверены через базу данных NCBI BLAST (http: // www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/).

Характеристика колонии

Колонии были физически оценены и разделены на две группы в зависимости от размера, гемолитической активности и пигментации. Колонии характеризовались как SCV, если они представляли собой точечные колонии (<1 мм в диаметре) со сниженной гемолитической активностью и пигментацией через 24–48 часов после инкубации, как описано в литературе [17], [24], [25]. Все остальные колонии были характеризуется как дикого типа (WT).

реверсия

SCV, полученных в результате обработки холодом, тестировали на реверсию путем субкультивирования отдельных колоний (n = 9) на чашках с HBA в течение ночи при оптимальных условиях, и скорость реверсии регистрировали как процент колоний WT в общей популяции.

Подготовка образца к ТЭМ

Используемая процедура подготовки образцов для ПЭМ была объединена с методами Глауэрта [26], Дикстры и Ройсса [27]. N = 9 колоний колоний WT и SCV, выращенных на HBA, фиксировали в 2,5% глутаровом альдегиде. Вторичную фиксацию проводили в 1% растворе четырехокиси осмия. Дегидратацию выполняли в градуированной серии вода-этанол (об. / Об.), Доведенной до следующих концентраций: 10%, 30%, 50%, 70%, 90% и 100%. Инфильтрацию проводили в белой смоле LR, приготовленной в этаноле до следующих концентраций: 10%, 30%, 50%, 70%, 90% и 100% (об. / Об.).Ультратонкие срезы вырезали, окрашивали и исследовали под просвечивающим электронным микроскопом, установленным на ускоряющее напряжение 80 кВ, и изображения получали при 40–100 000X.

Подготовка проб для исследования аминокислот

После 8-недельного периода воздействия клетки собирали и экстрагировали на компоненты клеточной стенки и мембран в соответствии с методами Hanaki et al. [28] и de Jonge et al. [29]. Клетки разрушали кипячением со стеклянными шариками в течение ½ часа.Суспензию центрифугировали при 3000 g в течение 5 мин и супернатант отбрасывали. Осадки клеток, содержащие фрагменты клеточной стенки и мембраны, затем лиофилизировали. Липидные компоненты мембран лиофилизированных образцов экстрагировали, добавляя хлороформ: метанол в соотношении 2–1 об. / Об. До конечного объема 3 мл. Образцы перемешивали, а затем центрифугировали 5–10 мин при 3500 об / мин и 4 ° C. Нижние фазы хлороформа аспирировали в пробирки для экстракции объемом 8 мл. Эту процедуру повторяли еще дважды с добавлением одного хлороформа и объединением образовавшихся фаз хлороформа.Остаточные суспензии метанола переносили в пробирки для дериватизации объемом 8 мл и центрифугировали в течение 5–10 мин. Эти гранулы лиофилизировали для удаления метанола перед гидролизом в кислоте. Осушенный осадок метанола гидролизовали, добавляя к образцу 200 мкл 6 М HCl, и суспензию инкубировали в течение 6 часов при 100 ° C. После этого образцы охлаждали и сушили вымораживанием.

Аминокислотный анализ гидролизованной клеточной стенки / белкового экстракта

Высушенные гидролизованные образцы были подготовлены для анализа с использованием набора Ez∶Faast ™ (Phenomenex® EZ∶faast ™) и разделены для анализа с помощью газовой хроматографии (ГХ), которая подходит для обнаружения более 40 аминокислот и родственных производных.Процедура включает твердофазную экстракцию с помощью ионообменной хроматографии, дериватизацию с образованием пропиловых эфиров аминокислот и заключительную стадию экстракции жидкость / жидкость перед анализом с помощью ГХ. Лиофилизированные гидролизованные образцы ресуспендировали в 500 мкл воды milliQ и экстрагировали, следуя 8-ступенчатой ​​процедуре, как указано производителем, с использованием норвалина в качестве внутреннего стандарта. Анализ образцов, дериватизированных EZ∶Faast ™, выполняли на системе ГХ Hewlett Packard HP 6890 series, снабженной пламенно-ионизационным детектором и колонкой ZB-PAAC-MS (10 м × 0.Внутренний диаметр 25 мм), поставляемый Phenomenex® Inc. Метод прибора включал раздельное впрыскивание (соотношение 15: 1) с температурой инжектора 250 ° C и скоростью потока через колонку 0,5 мл / мин. Объем инъекции для всех образцов был установлен на уровне 2,5 мкл.

Статистический анализ

Эксперименты проводили трижды (каждый в трех экземплярах, n = 9) для обеспечения воспроизводимости результатов. Анализ главных компонентов (PCA) проводили с использованием SIMCA-p + (12.0, Umetrics, Швеция), [30]. Все данные были предварительно обработаны логарифмическим преобразованием, центрированием среднего значения и масштабированием единичной дисперсии до генерации PCA.Оптимальная сложность модели PCA была определена в соответствии с процедурой перекрестной проверки (CV) [31]. CV включал семь раундов моделирования исключенных данных, в то же время все данные были исключены один раз, как это реализовано в SIMCA-P +. Сканирование резко отклоняющихся данных проводилось по критическому ортогональному расстоянию до модели и с помощью прибора Hotelling T ² в пределах размеров модели. Ни один из методов не выявил ложных данных. Доверительные интервалы нагрузок оценивали методом складывания ножей с использованием результатов CV.

Результаты

Бульонные культуры S. aureus S. epidermidis и S. lugdunensis , подвергнутые длительному воздействию температуры 4 ° C после начального роста при 37 ° C, дали ряд вариантов колоний при пересеве на чашки с HBA с вариации в размере, пигментации и гемолитической активности. Способность образовывать варианты малых колоний (SCV) в ответ на стресс при 4 ° C наблюдалась у всех трех видов стафилококков, хотя их частота в популяциях различалась между видами, а их численность была связана с продолжительностью стресса.На начальных этапах стресса (1-2 недели) наиболее многочисленным типом колонии, наблюдаемым в культуре для каждого вида, была колония WT. SCV также присутствовали в это время, хотя они составляли <40% населения (Рисунок 1). Однако при длительной инкубации в условиях температурного стресса наблюдался сдвиг в динамике популяции: SCV-колонии представляли> 50% популяции через 3 недели для S. epidermidis (R ² = 0,51, p <0,05) и через 7 недель. для S. lugdunensis (R ² = 0.97, р <0,05). Культуры S. aureus не давали значимых значений SCV до истечения пяти недель инкубации (R ² = 0,78, p <0,05).

Рисунок 1. Изменение процентного состава SCV-колоний популяций культур S. aureus S. epidermidis и S. lugdunensis , подвергшихся температурному стрессу при 4 ° C в течение 8 недель (n = 9) .

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031.g001

SCV, вызванные температурой, имели размер колонии <1 мм и демонстрировали пониженную пигментацию с небольшим и переменным диапазоном гемолиза на HBA (рис. 2).Сравнения окрашенных по Граму клеток также суммированы на Фигуре 2, показывающей заметную разницу в интенсивности окрашивания между каждым типом колоний для всех 3 исследованных видов. Для определения интенсивности красителя использовалась упрощенная цветовая шкала и шкала от 1 до 5, где 5 - самая темная интенсивность, а 1 - самая светлая интенсивность. Клетки колонии WT постоянно окрашивались в темно-фиолетовый цвет и имели среднее значение ± SD 4,7 ± 1,0 (n = 20), в то время как клетки SCV всегда окрашивались значительно светлее со средним значением 2.1 ± 1,0 (n = 20).

Рисунок 2. Морфологические различия в размере, пигментации, гемолизе и окрашивании по Граму между WT и соответствующими SCV у S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis .

Колонка (A) показывает различия в размере и пигментации между колониями WT (слева), которые больше и более пигментированы, чем их SCV (справа), которые являются маленькими с уменьшенной пигментацией (шкала представляет собой 1 мм). Колонка (B) показывает различия в ответе на окрашивание по Граму с окрашиванием клеток WT (слева) значительно темнее, чем их соответствующие SCV (справа).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031.g002

Идентификация вида

Чтобы убедиться, что наблюдаемая смешанная популяция колоний не являлась контаминантами, WT и подозреваемые SCV всех трех видов оценивали по показаниям API® Staph и с помощью ПЦР гена 16S рРНК. ПЦР всех протестированных колоний SCV подтвердила, что их идентичность соответствует исходному исходному материалу WT. Результаты API® Staph для колоний дикого типа дали положительный результат для соответствующих им исходных видов, но результаты для SCV были неубедительными, что соответствовало предполагаемым изменениям метаболического гомеостаза, описанным в литературе.Для дальнейшей оценки идентичности SCV было показано, что эти колонии превращаются в колонии WT при субкультивировании на чашках с HBA и инкубировании при 37 ° C. SCV возвращались после 2 субкультур в условиях хранения клеток в течение 4 недель или меньше при 4 ° C, и до трех субкультур для восстановления, которые наблюдались для культур, хранящихся в течение 5-8 недель. Эти ревертанты, образованные таким образом из субкультуры, впоследствии были подтверждены как сходные с родительскими штаммами как с помощью API® Staph, так и с помощью ПЦР.

Электронная микроскопия

фиксированных колоний WT и SCV (n = 9 каждая) были разделены и исследованы с использованием ТЕМ.Результаты выявили нарушения внешнего вида цитоплазматических компонентов, перегородок, симметрии клеток и свойств клеточной стенки SCV-клеток по сравнению с их родительскими WT-клетками. Микрофотографии клеток WT каждого вида показали четко выраженное образование перегородок, происходящее в основном через середину клетки, делящее клетку на две симметричные дочерние клетки (рис. 3). Напротив, клетки SCV показали более диффузные перегородки и преимущественно более «асимметричные» клеточные деления, при этом одна дочерняя клетка оказалась существенно меньше другой, как показано на рисунке 3 (a) для SCV S aureus .Оценка симметричных и асимметричных делений клеток в n = 100 клеток от каждого типа колонии от всех трех видов была проведена и суммирована в Таблице 1, которая подтвердила, что популяции SCV имели значительно большую долю своих клеток с очевидной «асимметричностью». деления клеток по сравнению с соответствующими клетками дикого типа (p <0,01).

Рисунок 3. ТЕМ-изображения (a) S. aureus , (b) S. epidermidis и (c) S. lugdunensis WT и SCV клеток, показывающие их соответствующие ультраструктурные характеристики.

Клетки WT имели четко очерченные клеточные стенки по сравнению с SCV, которые имели более толстые, более диффузные клеточные стенки после воздействия стресса (4 ° C).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031.g003

Таблица 1. Анализ частоты очевидных «симметричных» и «асимметричных» делений клеток в WT по сравнению с SCV-клетками из TEM клеточные препараты S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis .

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031.t001

Дальнейший анализ ТЕА показал, что клетки SCV имели более диффузные клеточные стенки, которые также оказались толще, чем их родительские штаммы. Чтобы установить, действительно ли были существенные различия, измерения толщины стенок были выполнены для n = 300 клеток на тип колонии для каждого вида. Для каждой ячейки измерения были взяты из трех отдельных областей, и среднее значение этих значений записали как толщину стенок этой конкретной ячейки.Для каждой подготовленной реплики было записано не менее десяти микрофотографий и изучались 10 полей зрения для каждой микрофотографии, чтобы записать различные данные (диффузные и утолщенные клеточные стенки и образование асимметричных перегородок) и убедиться, что ультраструктурные изменения не были артефактами. Анализ этих данных выявил значительные различия в толщине стенок между колониями WT и SCV S. aureus и S. epidermidis . Средняя (± стандартное отклонение) толщина клеточной стенки для S. aureus SCV (24 ± 7 нм) была значительно больше, чем у их соответствующих клеток WT (17 ± 3 нм). S. epidermidis SCV-клетки также были значительно толще (33 ± 15 нм) по сравнению с их клетками WT (27 ± 5 нм). Не было существенной разницы в толщине клеточной стенки между клеток S. lugdunensis WT (24 ± 5 ​​нм) и их соответствующими клетками SCV (24 ± 6 нм).

Анализ основных компонентов

Из-за изменений в морфологии, наблюдаемых на снимках ПЭМ SCV-клеток после воздействия 4 ° C, было высказано предположение, что будут сопутствующие изменения в составе белков, связанных с клеточной стенкой и клеточной стенкой.Таким образом, фракции клеточной стенки, полученные из клеток SCV и WT S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis , расщепляли и гидролизовали для определения аминокислотного состава с помощью газовой хроматографии. Данные по аминокислотному составу были сопоставлены с 3 изолятами стафилококков, выращенных в качестве контрольных образцов в культурах при 37 ° C или подвергнутых длительному холодовому стрессу при 4 ° C (n = 9 для каждой комбинации). Полная матрица данных была подвергнута PCA визуализации решения 3 основных компонентов (PC) в соответствии с перекрестной проверкой (CV) с объясненными отклонениями 82% R ² X и 72% по CV (Q ² X).Однако вклад третьего ПК в совокупную CV составлял менее 5%, поэтому он не принимался во внимание.

Проверка оценок PCA выявила 3 ​​кластера, в которых образцы стафилококков, независимо от штамма, выращенного при 37 ° C, были помещены в контрольную группу, смоделированную близко к ориджину (рис. 4). Образцы S. aureus , обработанные холодом, сформировали второй кластер, который моделировали с обычно высокими значениями t1 для всех аминокислот, но близкими к нулю баллами t2. Эта ориентация указывает на то, что всех аминокислот было больше во всех обработанных холодом S.aureus по сравнению с контрольными образцами. Напротив, обработанные холодом образцы S. epidermidis и S. lugdunensis , которые накладывались друг на друга, имели близкие к нулю баллы в первом ПК, но низкие t 2 баллов по сравнению с контрольными образцами. Данные показали, что все 3 вида имели сходные профили аминокислотного состава в клеточной стенке при выращивании в оптимальных условиях при 37 ° C, то есть в контрольных образцах. Однако, когда клетки подвергались длительному холодовому стрессу при 4 ° C, все 3 штамма ответили существенным изменением состава аминокислот в их клеточных стенках и связанных с ними белков.Однако S. aureus показал очень уникальный и характерный ответ, который явно отличался от реакции, вызванной S. epidermidis и S. lugdunensis .

Рис. 4. Разброс показателей анализа основных компонентов (PCA) (t1 по сравнению с t2), построенный на основе данных аминокислотного профиля клеточной стенки стафилококка.

Культуры стафилококков выращивали в идеальных условиях при 37 ° C, представляющих контрольные образцы (Cont), или подвергали длительному воздействию 4 ° C в течение 8 недель (TE) перед взятием образцов и анализом аминокислот.Три различных штамма, S. aureus (SA), S. epidermidis (SE) и S. lugdunensis (SL), были исследованы в повторностях (n = 9) для каждого штамма на предмет реакции на температурные условия.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031.g004

Расположение всех обработанных холодом образцов S. aureus справа от диаграммы разброса PCA обусловлено высокими значениями t1 (как показано на рисунке). на рисунке 4), что является результатом повышения уровня аминокислот во всех S.aureus (см. PC1, то есть ось x на рисунке 4). Паттерны корреляции индивидуальных аминокислотных уровней с PC-компонентами были получены путем нагрузок. Они были определены как корреляция между отдельными ПК и содержанием отдельных аминокислот во включенных образцах. Для первого ПК в настоящем исследовании все корреляции были положительными для образцов S. aureus по сравнению с эталоном, что определяется в целом положительной корреляционной структурой при нагрузках p 1.Эта полная корреляционная картина между холодно обработанными S. aureus и контрольными образцами соответствовала нагрузкам, показанным на рисунке 5.

Рис. 5. Показатели p1 для аминокислот из экстрактов клеточной стенки S. aureus после длительного воздействия при 4 ° C в течение 8 недель по сравнению с соответствующими культурами, выращенными в идеальных условиях при 37 ° C, представляющими контрольные контрольные образцы.

S. aureus отреагировал на холодовой стресс в целом увеличением аминокислотного состава в этой фракции по сравнению с контролем, т.е.е. контрольные образцы от всех трех штаммов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0029031.g005

Аминокислотные изменения, характеризующие реакции на холодовую терапию S. epidermidis и S. lugdunensis , были ортогональны ответу t 1. поскольку отдельные образцы варьировались в основном в направлении ПК2 (рис. 4). Кроме того, направление корреляции PCA было обратным по сравнению с PC1, на что указывает расположение обработанного холодом S.epidermidis и lugdunensis на более низкие баллы t 2 по сравнению с контрольными образцами. На практике это означало, что отрицательные нагрузки в PC2 указывали на повышенные уровни аминокислот в обработанных холодом образцах из S. epidermidis и lugdunensis по сравнению с контрольными образцами, например. APA и GLN, как правило, были выше, а SER и ASN были ниже в обработанных холодом образцах S. epidermidis и lugdunensis по сравнению с контрольными образцами.Эти ответы включали значительные изменения аминокислотных профилей по сравнению с соответствующими контрольными культурами, например, с повышением содержания аминокислот. SER, ASP и MET и снижение, например, THR, GLU и GLN (см. Все загрузки для ПК2 на рисунке 6).

Рисунок 6. Показатели p2 для аминокислот из экстрактов клеточной стенки S. epidermidis и S. lugdunensis после длительного воздействия при 4 ° C в течение 8 недель по сравнению с соответствующими культурами, выращенными в идеальных условиях при 37 ° C, что соответствует эталонные контрольные образцы.

S. epidermidis и S. lugdunensis ответили на холодовой стресс существенным изменением аминокислотных профилей по сравнению с соответствующими контролями. Следует подчеркнуть, что PC2 обратно коррелировали с обработкой холодом, так что отрицательные нагрузки, например — 0,20 для GLN указывает на повышенный уровень аминокислот в обработанных холодом образцах S. epidermidis и S. lugdunensis , и наоборот.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0029031.g006

Обсуждение

Когда культуры стафилококков подвергались воздействию температуры 4 ° C, культур S. epidermidis и S. lugdunensis генерировали SCV быстрее, чем культуры S. aureus . В конечном итоге все три вида образовали колонии SCV, но 100% конверсия никогда не наблюдалась в течение 8-недельного периода воздействия 4 ° C. Зависимое от времени увеличение пропорций SCV в отобранных популяциях указывает на процесс адаптации, в котором возрастающее преобладание SCV представляет собой естественный отбор SCV с повышенной способностью к выживанию в неблагоприятных условиях [32].Фенотипическое переключение было отмечено у S. aureus как эффективная бактериальная стратегия против иммунного ответа хозяина и успешного установления хронической инфекции [33]. Это явление имеет эволюционное значение, поскольку оно дает избирательное преимущество для выживания бактерий в неблагоприятных условиях окружающей среды. В этом исследовании было предложено, что этот механизм будет полностью подходящим для периодов выживания между потенциальными хозяевами для этих комменсалов (условно-патогенных микроорганизмов) в отличие от спорообразующих бактерий, таких как бациллы, которым может потребоваться выживание в течение продолжительных периодов времени в более экстремальных условиях. условия водного лишения, воздействия УФ-излучения и токсичных химикатов.Хотя образование SCV произошло у S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis после воздействия 4 ° C, было отмечено, что SCV учащались в культурах коагулазонегативных стафилококков (ЦНС) при температуре быстрее, чем в S. aureus . Изменчивость колоний ранее наблюдалась в ЦНС в ответ на лечение антибиотиками [34], но было высказано предположение, что, возможно, об этой особенности не сообщалось, поскольку измененные морфологические характеристики были неверно интерпретированы как контаминация, а не как представление фенотипического разнообразия [34].

Окрашивание по Граму применялось как рутинная процедура как часть процесса идентификации видов. Было быстро замечено, что SCV-клетки всегда окрашивались светлее, чем их соответствующие WT-клетки, что указывает на возможные несоответствия между структурами их клеточной стенки, что является основой этого метода окрашивания. Оценка нескольких образцов с использованием простой визуальной аналоговой шкалы выявила значительные различия в интенсивности окрашивания, что является дополнительным доказательством того, что изменения клеточной стенки и связанного с ней белкового состава могут быть связаны с образованием SCV-клеток в ответ на холодовой стресс.Исследование, проведенное Серадски и Томаш [21] с участием мутанта S. aureus , устойчивого к ванкомицину, показало, что этот мутант имел большое количество пептидогликана и внеклеточного мусора, который имел вид материала клеточной стенки. Считалось, что накопление материала клеточной стенки изолирует ванкомицин из среды, тем самым не позволяя ему достичь своей цели и повредить клетку. Вероятно, что утолщение клеточной стенки, наблюдаемое в образцах SCV в этом текущем исследовании, могло предотвратить проникновение некоторого количества кристаллического фиолетового красителя внутрь стенки, что привело к появлению более светлых пятен по Граму, наблюдаемых во многом так же, как Серадски и Томаш сообщили, что более толстые клеточные стенки изолировали и связали антибиотик, тем самым предотвращая его проникновение в клетку.Была высказана гипотеза о том, что более толстые клеточные стенки SCV клеток S. aureus и S. epidermidis в сочетании с изменениями аминокислотного состава у всех трех видов ограничивают поглощение красителя по Граму.

TEM клеток S. aureus и S. epidermidis SCV показали диффузные клеточные стенки, которые были значительно толще у этих видов стафилококков, тогда как между клетками WT и SCV для S.lugdunensis . Утолщение клеточной стенки было отмечено как механизм устойчивости, используемый S. aureus против проникновения клинически важных антибиотиков [35], [36]. В нашем исследовании SCV были вызваны воздействием температурного стресса с аналогичными результатами, предполагающими, что утолщение клеточной стенки может быть общей реакцией бактериальных клеток, подвергшихся стрессу. Более толстая клеточная стенка может действовать как защитный механизм для клетки от внеклеточных проблем, которые в противном случае могут поставить под угрозу жизнеспособность бактерии.В устойчивой к антибиотикам ЦНС диффузная природа клеточной стенки была идентифицирована как слизь, связанная с клеточной стенкой, которая, как считалось, усиливает прилипание и колонизацию этими видами, что делает их очень успешными в возникновении патогенеза, связанного с устройством [37]. Аналогичные ответы S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis , вызванные воздействием более холодных условий, также будут давать соответствующие преимущества в отношении адгезии и выживания на фомитах для передачи между хозяевами.Очевидно, что S. lugdunensis вызывал другой клеточный ответ на холодовую обработку по сравнению с S. aureus и S. epidermidis , поскольку не имел поддающихся измерению изменений толщины клеточной стенки. Ответы S. aureus и S. epidermidis соответствовали гипотезе о том, что воздействие холода может приводить к утолщению клеточных стенок, как это наблюдается у обработанных антибиотиками клеток [35], но это не обязательно так для все стафилококки.

Дальнейший анализ микрофотографий ПЭМ показал, что образцы SCV имели более диффузные перегородки в делящихся клетках. В этих образцах также была значительно более высокая доля очевидных «асимметричных» делений клеток в S. aureus S. epidermidis и S. lugdunensis , причем дочерние клетки меньшего размера наблюдались в 81, 65 и 72% образцов SCV по сравнению только с 38. , 29 и 33% наблюдались в образцах WT, соответственно. Каль и соавторы также [15] задокументировали нарушение образования перегородок в своем исследовании клинического S.aureus SCV и предположил, что это могло привести к нарушению разделения клеток. Sianglum и др. [38] отметили тот же результат, когда S. aureus лечили новым антибиотиком, и пришли к выводу, что антибиотик прерывает процессы деления клеток. Саньял и Гринвуд [39] наблюдали эту характеристику у культур S. epidermidis , обработанных антибиотиком тейкопланином. ПЭМ-микрофотографии их образцов показали, что клетки подверглись делению на две дочерние клетки, но перегородки были сформированы ближе к одному полюсу клетки, а не прямо через середину клетки, подобно тому, что наблюдалось в этом текущем исследовании.Они не рассматривали возможные причины этой характеристики. Ультраструктурные изменения, наблюдаемые у S. aureus S. epidermidis и S. lugdunensis в ответ на длительное воздействие 4 ° C, согласуются с гипотезой о фенотипе выживания. продуцируется в популяции бактерий, подвергшихся стрессу, частота которых увеличивается при длительном воздействии. Было высказано предположение, что такой ответ будет совпадать с изменениями в биохимическом составе структуры клеточной стенки для оптимизации выживания клетки.Анализ экстрактов переваренных стенок и белков из клеток, собранных после роста в идеальных условиях (WT), по сравнению с таковыми из клеток, собранных после последующих 8 недель хранения при 4 ° C, выявил существенные изменения в аминокислотном составе.

Проверка оценок PCA показала ортогональную разницу в аминокислотном составе клеточной стенки и связанных белков между обработанными низкой температурой S. aureus с одной стороны, по сравнению с S. epidermidis и S.lugdunensis , напротив. Сравнение было проведено с использованием показателей аминокислот дикого типа для всех трех видов стафилококков, и применима прямая интерпретация, поскольку в пределах дикого штамма наблюдались незначительные вариации в уровнях аминокислот, не зависящие от штамма. Математическая интерпретация очевидной ортогональной кластеризации S. aureus по сравнению с S. epidermidis и S. lugdunensis в PC1 по сравнению с PC2, влечет за собой полное различие в физиологической реакции между двумя кластерами.Увеличение концентраций аминокислот, наблюдаемое в S. aureus , интерпретировалось как пропорциональное увеличение белков, связанных с клеточной стенкой, с соответствующими качественными различиями, поскольку все измеренные аминокислоты были повышены в разной степени. Напротив, S. epidermidis и lugdunensis , по-видимому, демонстрировали существенные качественные изменения в аминокислотном составе, которые соответствовали бы качественным изменениям включения белка. Далее был сделан вывод, что пропорции белков, связанных с клеточной стенкой, у S.epidermidis и S. lugdunensis были подобны своим соответствующим контрольным WT.

Данные предполагают, что все три вида адаптируются путем изменения профилей аминокислотного состава клеточной стенки и связанных структурных белков, что подразумевает изменение состава белков. Дальнейшие выводы относительно возможной уникальной стратегии адаптации S. aureus в различных штаммах Staphylococcus при воздействии окружающей среды потребуют дополнительных эмпирических данных.Однако настоящие результаты соответствуют клиническим наблюдениям тяжелой патогенности, наблюдаемой у инфекций S. aureus по сравнению с другими видами стафилококков, что можно объяснить улучшением выживаемости за счет быстрой и радикальной адаптации [40]. Будущие исследования будут включать попытки идентифицировать изменения белков, которые могут произойти в ответ на стрессы окружающей среды. Более глубокое понимание белковых реакций, связанных с клеточной стенкой, на стимулы и стрессы окружающей среды может дать новое понимание для разработки противомикробных стратегий.

В заключение, результаты этого исследования достоверно показали, что воздействие низких температур на S. aureus , S. epidermidis и S. lugdunensis вызывает морфологические, ультраструктурные и биохимические изменения в составе клеточной стенки, которые определяют их фенотипические результаты. Изменения, связанные с фенотипом SCV, были временными, а не генетическими, о чем свидетельствует способность вернуться к фенотипу WT после субкультуры без стресса. Быстрое переключение между двумя фенотипами обеспечивает гибкость бактерий, что служит преимуществом, когда требуются быстрые реакции на колебания окружающей среды.

Благодарности

Мы благодарим Трейси Харрисон и Крейга Эванса за их помощь в проведении ПЦР изолятов. Демин Чжу и Син Дин Ван за помощь в работе с ТЕА.

Вклад авторов

Эксперимент задумал и спроектировал: ЛАО ТКР РХД. Проведены эксперименты: ЛАО. Проанализированы данные: ЛАО ТКР РЖС. Написал статью: ЛАО РХД ТКР Ю.Г. ЦвЭ.

Ссылки

1. 1. Франк К.Л., Патель Р. (2008) Staphylococcus lugdunensis — Не средний коагулазонегативный стафилококк.Вестник клинической микробиологии 30: 55–62.
2. 2. Schaberg DR, Culver DH, Gaynes RP (1991) Основные тенденции микробной этиологии внутрибольничной инфекции. Американский медицинский журнал 91: приложение 3B72–75.
3. 3. Носкин Г.А., Рубин Р.Дж., Шентаг Дж.Дж., Клюйтманс Дж., Хедблом ЕС и др. (2005) Бремя инфекций Staphylococcus aureus для больниц в США. Архивы внутренней медицины 165: 1756–1761.
4. 4. Оньянго Л.А., Данстан Р.Х., Робертс Т.К. (2008) Варианты стафилококков в небольших колониях: патогенез и эволюционное значение в возникновении и поддержании проблемных человеческих инфекций.Журнал питания и экологической медицины 17: 56–75.
5. 5. von Eiff C, Becker K (2003) Варианты небольших колоний: еще один механизм, с помощью которого Staphylococcus aureus может уклоняться от иммунного ответа и антимикробной терапии. В: Fluit AC, Schmitz FJ, редакторы. MRSA: текущие перспективы. Уаймондем, Великобритания: Caister Academic Press. С. 253–273.
6. 6. Hoffstadt RE, Youmans GP (1932) Staphylococcus aureus : диссоциация и ее связь с инфекцией и иммунитетом.J Infect Dis 51: 216–242.
7. 7. Seifert H, Wisplinghoff H, Schnabel P, von Eiff C (2003) Варианты небольших колоний Staphylococcus aureus и инфекция, связанная с кардиостимулятором. Emerg Infect Dis 9: 1316–1318.
8. 8. Проктор Р.А., фон Эйфф С., Каль BC, Беккер К., Макнамара П. и др. (2006) Варианты небольших колоний: патогенная форма бактерий, способствующая хроническим и рецидивирующим инфекциям. Nat Rev Microbiol 4: 295–305.
9. 9. Sifri CD, Baresch-Bernal A, Calderwood SB, von Eiff C (2006) Вирулентность вариантов небольших колоний Staphylococcus aureus в модели инфекции Caenorhabditis elegans .Заражение иммунной 74: 1091–1096.
10. 10. Баддур Л. М., Симпсон В. А., Уимс Дж. Дж., Хилл М., Кристенсен Г. Д. (1988) Фенотипический отбор малых колоний вариантных форм Staphylococcus epidermidis в модели эндокардита на крысах. J Infect Dis 157: 757–763.
11. 11. Йонссон И.М., фон Эйфф С., Проктор Р.А., Петерс Дж., Райден С. и др. (2003) Вирулентность мутанта hemB, демонстрирующего фенотип варианта маленькой колонии Staphylococcus aureus в мышиной модели септического артрита.Microbiol Patho 34: 73–79.
12. 12. Vaudaux P, Francois P, Bisognano C, Kelley WL, Lew DP, et al. (2002) Повышенная экспрессия фактора слипания и фибронектин-связывающих белков мутантами hemB Staphylococcus aureus , экспрессирующими фенотипы небольших колоний. Infect Immun 70: 5428–5437.
13. 13. Sherris JC (1952) Два небольших варианта колонии S. aureus , выделенные в чистой культуре из закрытых инфицированных поражений, и их потребности в диоксиде углерода.J Clin Pathol 5: 354–355.
14. 14. Макнамара П.Дж., Проктор Р.А. (2000) Staphylococcus aureus вариантов малых колоний, перенос электронов и стойкие инфекции. Int J Antimicrob Agents 14: 117–122.
15. 15. Каль BC, Беллинг Дж., Райхельт Р., Херрманн М., Проктор Р.А. и др. (2003) Тимидин-зависимые варианты небольших колоний Staphylococcus aureus обнаруживают грубые морфологические и ультраструктурные изменения, соответствующие нарушенному разделению клеток.J Clin Microbiol 41: 410–413.
16. 16. Adler H, Widmer A, Frei R (2003) Появление устойчивого к тейкопланину варианта небольшой колонии Staphylococcus epidermidis во время терапии ванкомицином. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 22: 746–748.
17. 17. Seifert H, Oltmanns D, Becker K, Wisplinghoff H, von Eiff C (2005) Staphylococcus lugdunensis Инфекция, связанная с кардиостимулятором. Emerg Infect Dis 11: 1283–1286.
18. 18. Прескотт Л. М., Харли Дж. П., Кляйн Д. А. (2002) Рост микробов — влияние факторов окружающей среды на рост.Микробиология. 5-е изд. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл.
19. 19. Сингх В.К., Хаттангади Д.С., Джотис Е.С., Сингх А.К., Чемберлен Н.Р. и др. (2008) Инсерционная инактивация дегидрогеназы альфа-кетокислот с разветвленной цепью в Staphylococcus aureus приводит к снижению содержания жирных кислот в мембране с разветвленной цепью и повышенной восприимчивости к определенным стрессам. Прикладная и экологическая микробиология 74: 5882–5890.
20. 20. Дмитриев Б.А., Тукач Ф.В., Холст О., Ритчел Э.Т., Элерс С. (2004) Третичная структура муреина клеточной стенки Staphylococcus aureus .Журнал бактериологии 186: 7141–7148.
21. 21. Серадски К., Томаш А. (1997) Ингибирование обновления клеточной стенки и автолиза ванкомицином у мутанта Staphylococcus aureus с высокой устойчивостью к ванкомицину. Журнал бактериологии 179: 2557–2566.
22. 22. Батт Х.Л., Данстан Р.Х., МакГрегор Н.Р., Робертс Т.К., Зербес М. и др. (1998) Связь токсинов, повреждающих мембраны, от коагулазонегативных стафилококков и хронической боли в орофациальных мышцах.J Med Microbiol 47: 577–584.
23. 23. Браун Г.К., Мартин А.Р., Робертс Т.К., Эйткен Р.Дж. (2001) Обнаружение Ehrlichia platys у собак в Австралии. Aust Vet J 79: 554–558.
24. 24. von Eiff C, Peters G, Becker K (2006) Концепция варианта малой колонии (SCV) — роль стафилококковых SCV в хронических инфекциях. Травма, Int J Care Раненые 37: S26 – S33.
25. 25. Kipp F, Becker K, Peters G, von Eiff C (2004) Оценка различных методов определения устойчивости к метициллину в вариантах небольших колоний Staphylococcus aureus .J Clin Microbiol 42: 1277–1279.
26. 26. Глауэрт AM (1975) «Фиксация, обезвоживание и заделка биологических образцов». В: Глауэрт AM, редактор. Кембридж: Биомедицинская пресса Эльзевьера-Северной Голландии. 207 с.
27. 27. Дикстра М.Дж., Ройсс Л.Е. (2003) Подготовка образцов для электронной микроскопии и методы. В: Дикстра М.Дж., Ройсс Л.Е., редакторы. Биологическая электронная микроскопия: теория, методы и устранение неисправностей. 2-е изд. NY: Kluwer Academic / Plenum publishers.534 с.
28. 28. Ханаки Х., Лабищински Х., Инаба Й., Кондо Н., Мураками Х. и др. (1998) Увеличение количества муропептидов, не содержащих глутамин, в пептидогликане устойчивого к ванкомицину штамма Staphylococcus aureus Mu50. Журнал антимикробной химиотерапии 42: 315–320.
29. 29. de Jonge BLM, Chang Y-S, Gage D, Tomasz A (1991) Пептидогликановая композиция высокоустойчивого к метициллину штамма Staphylococcus aureus . Журнал биологической химии 267: 11248–11254.
30. 30. Джексон Дж. Э. (1991) Руководство пользователя по основным компонентам. Нью-Йорк: Вили.
31. 31. Wold S (1978) Перекрестная проверка количества компонентов в факторных моделях и моделях главных компонентов. Технометрика 20: 397–405.
32. 32. Woese CR (1987) Бактериальная эволюция. Microbiological Reviews 51: 221–271.
33. 33. Tuchscherr L, Medina E, Hussain M, Volker W., Heitmann V, et al. (2011) Смена фенотипа Staphylococcus aureus : эффективная бактериальная стратегия, позволяющая избежать иммунного ответа хозяина и вызвать хроническую инфекцию.EMBO Mol Med 3: 129–141.
34. 34. Леунг MJ, Nuttall N, Pryce TM, Coombs GW, Pearman JW (1998) Вариация колоний в Staphylococcus lugdunensis . J Clin Microbiol 36: 3096–3098.
35. 35. Цуй Л., Ма Х, Сато К., Окума К., Теновер Ф.К. и др. (2003) Утолщение клеточной стенки является общим признаком устойчивости к ванкомицину у Staphylococcus aureus . J Clin Microbiol 41: 5–14.
36. 36. Cui L, Murakami H, Kuwahara-Arai K, Hanaki H, Hiramatsu K (2000) Вклад утолщенной клеточной стенки и ее неамидированного компонента глутамина в устойчивость к ванкомицину, выражаемую Staphylococcus aureus Mu50.Противомикробные агенты и химиотерапия 44: 2276–2285.
37. 37. Hogt AH, Dankert J, Feijen J (1983) Инкапсуляция, образование слизи и поверхностная гидрофобность коагулазонегативных стафилококков. FEMS Microbiol Lett 18: 211–215.
38. 38. Sianglum W, Srimanote P, Wonglumsom W, Kittiniyom K, Voravuthikunchai SP (2011) Протеомный анализ клеточных белков метициллин-устойчивого Staphylococcus aureus , обработанных родомиртоном, новым кандидатом в антибиотики.PLoS ONE 6: 1–10.
39. 39. Саньял Д., Гринвуд Д. (1993) Исследование под электронным микроскопом устойчивых к гликопептидам антибиотиков штаммов Staphylococcus epidermidis . Журнал медицинской микробиологии 39: 204–210.
40. 40. Abu-Qatouseh LF, Chinni SV, Seggewiss J, Proctor RA, Brosius J, et al. (2010) Идентификация дифференциально экспрессируемых малых небелковых РНК в Staphylococcus aureus , демонстрирующих как нормальный, так и вариантный фенотип с малой колонией.Журнал молекулярной медицины 88: 565–575.

Золотистый стафилококк, устойчивый к метициллину | Nature Reviews Disease Primers

Распространенность и молекулярная характеристика Staphylococcus aureus в образцах стула человека | Устойчивость к противомикробным препаратам и инфекционный контроль

Токсины | Бесплатный полнотекстовый | Таргетинг на токсины золотистого стафилококка: потенциальная форма антивирулентной терапии