Лямблии размер: (Giardia intestinalis)

Ученые: паразиты-лямблии «взламывают» наши клетки

30 января 2018

Автор фото, Science Photo Library

Подпись к фото,

Лямблиями может быть заражена грязная вода или не прошедшая достаточной термической обработки еда

Ученые изучили механизм питания паразитов-гиардий, которые возбуждают одно из самых часто встречающихся в мире заболеваний желудка. Как оказалось, паразиты, живущие у человека в тонкой кишке, имитируют некоторые функции организма, чтобы получить доступ к питательным веществам внутри клеток тонкой кишки.

Гиардии, также известные как лямблии, паразитируют в тонкой кишке человека, других млекопитающих и птиц.

Впервые кишечная лямблия была описана чешским медиком-анатомом Лямблем в 1859 году как возбудитель лямблиоза.

В России этим заболеванием болеют главным образом дети, но лямблиоз — большая проблема в странах Азии и Африки и в регионах мира, где нет доступа к чистой воде или где едят не обработанную термически пищу.

Каждый год в мире диагностируется около полумиллиона случаев лямблиоза, но до сих пор ученым не было известно, каким образом лямблии извлекают из тканей человека питательные вещества.

Как выяснили ученые из Университета Восточной Англии, паразиты пользуются для этого механизмом, который напоминает некоторые функции человеческого организма. Статья об исследовании опубликована в журнале GigaScience.

«Готовые блюда»

Как выяснилось, лямблии, живущие в тонком кишечнике, выделяют специальные вещества, чтобы расщеплять клетки стенок тонкого кишечника, в котором они живут.

Лямблии выделяют два вида белков, которые помогают им растворить слизистую оборочку кишечника и разорвать связь между отдельными клетками, чтобы получить доступ к питательным веществам.

Один из этих белков имитирует белок тенасцин, который может либо усиливать связь между клетками, либо ослаблять ее в случаях когда это необходимо, например при заживании ран.

Но «тенасцин», который используют лямблии, предотвращает заживание связывающих клетки элементов.

«После того как гиардии ломают межклеточные барьеры, открывая доступ к питательным веществам, другие бактерии получают возможность воспользоваться этими «готовыми блюдами», что в некоторых случаях усугубляет симптомы лямблиоза».

Автор фото, Getty Images

Подпись к фото,

Лямблиоз может грозить туристам или отдыхающим, которые пьют неочищенную воду

«Плохие бактерии»

Лямблиоз как правило через некоторое время проходит, либо для его лечения используют антибиотики.

Однако примерно половина носителей лямблии не испытывают никаких симптомов заболевания.

Как говорит доктор Тайлер, это может зависеть от соотношения «хороших» и «плохих» бактерий у нас в кишечнике.

Те, кто испытывают тяжелые симптомы, по версии доктора, имеют в кишечнике больше «плохих» бактерий, которые поглощают питательные вещества, высвобождаемые лямблиями.

«У некоторых в кишечнике доминируют достаточно хорошие бактерии, которые не вызывают воспаления и болей, а могут даже от них защищать.

«Мы считаем, что у некоторых людей в кишечнике много плохих бактерий, употребляющих высвобожденные лямблиями питательные вещества и вызывающих воспаление,» — продолжает ученый.

«Лямблия наносит изначальный ущерб, высвобождая питательные вещества внутрь кишки, а потом, если у вас много плохих бактерий, начинается цикл воспаления», — говорит Тайлер.

Именно поэтому для профилактики лямблиоза полезны йогурты и другие напитки с «хорошими» бактериями, добавляет доктор.

Что такое лямблии и чем они опасны для человека?

 Лямблии это одноклеточные гельминты, которые имеют микроскопические размеры. Обитают в организме у человека, млекопитающих, паразитируют в кишечнике, двенадцатипёрстной кишке, в жёлчном пузыре, в печени. Особенно опасны лямблии в печени. Есть 2 формы существования лямблий: Вегетативная – плоские паразиты грушевидной формы, размеры которых не превышают 0,02 мм. Паразитируют в тонком кишечнике и других органах пищеварения. Глисты активно передвигаются при помощи жгутиков, питаются остатками расщеплённой пищи и размножаются. Цисты – споровая форма, при которой активная жизнедеятельность паразитов приостанавливается. Она необходима, чтобы длительное время сохранять жизнь глистам в неблагоприятных условиях. Вегетативная форма превращается в цисту, когда гельминты попадают в толстый кишечник, откуда выводятся во внешнюю среду. За пределами организма в капсулированном виде они живут месяцами, пока не попадут в тело нового носителя. Несмотря на небольшие размеры, эти гельминты наносят большой вред здоровью. Результатом их паразитирования становятся: нарушение процесса усвоения питательных веществ. Продукты жизнедеятельности лямблий негативно сказываются на работе эндокринной, нервной, сердечнососудистой  системе, поскольку паразиты влияют на состав крови. Часто возникают дерматологические заболевания. Возрастает риск развития астмы, снижается иммунитет, происходит потеря веса из-за ухудшения аппетита.

 Заражение лямблиями происходит, когда цисты попадают в организм через рот. Это может произойти 3 путями:

1- водный – при употреблении некипяченой водопроводной воды либо из природных источников.

2- Пищевой – через немытые либо необработанные термически продукты, в частности, фрукты, овощи.

3- Контактно-бытовой – при  контакте человека с животным, страдающим от лямблиоза и предметами, на которых были цисты. Для развития болезни достаточно, чтобы в организм попало 10 цист. Особенно подвержены инфицированию люди с пониженной кислотностью желудка.

Первые симптомы заболевания проявляются после заражения спустя 1-2 недели, когда паразиты начинают активно размножаться и их количество быстро увеличивается. Общим признаком инвазии является снижение веса. Другие – зависят от формы протекания болезни. Она бывает острой и хронической. Головная боль может сигнализировать о появлении лямблий

Симптомы острого лямблиоза. Острая форма заболевания продолжается 5-7 дней, но может затянуться на месяцы. Проявляется она такими симптомами: Повышенная утомляемость, раздражительность. Головные боли. Нарушения стула (запоры, поносы), метеоризм. Тошнота, возможно рвота. Резкое повышение температуры до 38°С. Боли в животе, локализуются в районе пупка. Ухудшение аппетита, чувство перенасыщения. Стремительная потеря веса. Появление сыпи на коже. От острой формы болезни чаще страдают дети. Если не начать лечение, лямблиоз переходит в

хроническую форму. Основные её признаки: Нарушения функционирования желудочно-кишечного тракта – вздутие живота, запоры либо поносы, метеоризм. Ухудшение цвета кожи, неравномерная её окраска, чрезмерная бледность лица. Высыпания на языке. Аллергические реакции, дерматиты. Чрезмерная сухость и шелушение каймы губ. Истощение нервной системы, нервозность, астения. Патологии жёлчевыводящих путей, застой жёлчи. Анорексия. Хронический лямблиоз сопровождается острой болью в животе. Люди могут быть носителями лямблий. В таких случаях их состояние здоровья не ухудшается, но для окружающих они являются источником заражения.

Симптомы лямблиоза у детей. Особенно опасен лямблиоз для детей. Самые характерные симптомы поражения у детей: отставание в физическом и интеллектуальном развитии, поскольку организм не получает нужные микроэлементы и витамины. Отказ от еды. Быстрое истощение. Повышенная температура до 37,5°С без других симптомов простуды, которая держится неделями. Постоянные поносы либо запоры. Скрежетание зубами во сне. Тянущие либо режущие боли в области живота. Постоянная вялость, пониженный тонус. Увеличенные лимфоузлы. Удушливый кашель. Лябмлии в организме приводят к ухудшению самочувствия и  нужно пройти диагностику, чтобы исключить инвазию лямблиями.

С целью подтверждения лямблиоза обязательно нужно провести лабораторный анализ. Курсы лечения назначаются строго врачом.

Профилактика.

Чтобы минимизировать риск заражения лямблиями, нужно соблюдать простые правила:

Тщательно мыть руки перед каждым приёмом пищи.

Пить лишь фильтрованную либо кипячёную воду.

Мыть фрукты, овощи.

Не купаться в водоёмах, где не предусмотрены пляжи.

Не грызть ногти.

Регулярно проводить антигельминтную профилактику домашним животным.

Необходимо приучать детей к соблюдению правил личной гигиены с раннего возраста.

При появлении признаков болезни  не заниматься самолечением, обращаться за медицинской помощью к врачу.

Помощник  энтомолога                                                       Куликовская Н.В.

Лямблии

Лямблия — это простейший одноклеточный микроорганизм семейства Giardia lamblia (синонимы Giardia intestinalis и Giardia duodenalis, в России традиционно используется название Lamblia intestinalis). Лямблия существует в двух отдельных морфологических формах: цисты (статическая форма) и трофозоиты (свободно живущая форма). В организм хозяина (человека или животного) цисты попадают оральным путем. В пищевом тракте цисты начинают преобразование в трофозоиты, которые начинают делиться и быстро колонизируют слизистую поверхность тонкой кишки. В организме хозяина происходит также обратный процесс — инцистирование или превращение трофозоита в цисту. Цисты не имеют на поверхностной мембране участков прикрепления к слизистой оболочке, поэтому практически сразу же выходят в толстую кишку и выводятся с фекалиями. Полный цикл завершается высвобождением из организма-хозяина цист, которые во внешней среде, в том числе в воде, остаются жизнеспособными длительное время. Они устойчивы к кислотам, щелочам, веществам, содержащим активный хлор, и полностью инактивируются лишь при кипячении в течение не менее 20 минут. Цисты лямблий (Gardia Lamblia Cyst) имеют овальную форму и размер 8-14 мкм в длину и 7-10 мкм в ширину. Gardia является одним из самых распространенных паразитом животных, опасным также и для человека. У последнего Giardia lamblia вызывает возникновение болезни — лямблиоза, сопровождающуюся кишечным растройством. Несмотря на то, что цисты лямблий распространяются в основном через почву, лямбиоз остается одной из основных болезней, связанных с водой. Так, в США из 502 случаев инфекций, вызванных употребление некачественной воды и зафиксированных с 1980 по 1985 год, 52% были вызваны именно Giardia lamblia /16/. Именно в силу вышеназванных причин нормами российского СанПиН и американского Агентства по Охране Окружающей Среды (USEPA) предусматривается полное отсутствие этих микроорганизмов в питьевой воде. Отсутствие в воде цист лямблий является важным показателем того, что вода очищена от целого ряда других простейших, таких как покоящиеся стадии (ооцисты) Cryptosporidium, амеб, а также энтеровирусов. Все перечисленные организмы обладают более высокой устойчивостью к обеззараживанию, чем колиформные и термотолератные колиформные организмы (E.Coli) и поэтому отсутствие в воде последних не является гарантией микробиологической безопасности воды. Такую косвенную гарантию и дает отсутствие в воде цист лямблий.

Часто встречающиеся гельминтозы — БУ «Нижневартовская городская поликлиника»

Паразиты — организмы, питающиеся за счет особей другого вида и временно или постоянно пребывающие на поверхности их тела или внутри организма.

Каждый паразит наносит вред хозяину уже одним своим присутствием, как инородное тело. Чем паразит крупнее и его масса больше, тем это механическое воздействие значительнее. Для поддержания своей жизнедеятельности и интенсивного размножения каждый паразит потребляет некоторое количество пищи хозяина.

Продукты жизнедеятельности паразитов обладают антигенными свойствами, вызывающими иммунологическую активность, аллергию или подавление иммунитета хозяина.

 

Лямблиоз — протозойное заболевание, протекающие как в виде латентного паразитоносительства, так и в манифестных формах с преимущественным поражением средних отделов желудочно-кишечного тракта.

Основным источником инвазии является человек, зараженный лямблиями.

 Второстепенную роль играют собаки и крупный рогатый скот (особенно телята) и свиньи.

 Возможным резервуаром лямблий в природе являются бобры и ондатры, которые могут инфицировать водоемы.

Механизм передачи инфекции фекально-оральный. Заражение происходит при проглатывании цист лямблий, которые могут длительно выживать во внешней среде. Во влажном кале они сохраняют жизнеспособность в зависимости от температуры окружающей среды от одних суток до 3 недель. В чистой холодной воде цисты выживают более 2-х месяцев, на поверхности хлеба и яблок — до 6 часов, на вареном картофеле — более 2 суток.

Цисты сохраняют жизнеспособность после прохождения через желудочно-кишечный тракт насекомых. В кишечнике мух они остаются живыми от 30 часов до нескольких суток, в кишечнике тараканов — до 8 суток.

— лечение больных кишечными протозоозами с контролем его эффективности через 10 — 14 дней. Критерием эффективности являются два отрицательных результата лабораторного исследования, проведенного с интервалом в 2 — 3 дня;

— установление диагноза носительства возбудителей кишечных протозоозов у лиц, относящихся к декретированным группам населения. При их согласии руководители организаций и индивидуальные предприниматели временно на период лечения и контрольных обследований после лечения переводят на другую работу. При невозможности перевода, временно на период лечения и обследования их отстраняют от работы с выплатой пособий по социальному страхованию в соответствии с законодательством Российской Федерации;

 

Профилактика и меры борьбы.

Основными мерами неспецифической профилактики являются меры по предотвращению фекального загрязнения воды, пищевых продуктов и других объектов внешней среды. Необходимо строго соблюдать правила личной гигиены, уничтожать механических переносчиков — мух и тараканов.

 

Описторхоз— природноочаговый биогельминтоз, характеризующийся поражением гепатобилиарной системы и поджелудочной железы.

 

Эпидемиология описторхоза

Источником инвазии являются зараженные описторхисами млекопитающие (домашние и дикие плотоядные, человек). Дикие плотоядные являются основным источником инвазии на большей части ареала, где человек не включен в циркуляцию возбудителя.

Основные факторы передачи: необеззараженная рыба только семейства карповых (вяленая, соленая, холодного копчения, строганина, сырая), содержащая жизнеспособных метацеркарий описторхиса. Заражение человека происходит при употреблении необеззараженной рыбы семейства карповых, содержащей жизнеспособных личинок описторхиса.

Естественная восприимчивость людей к заражению описторхисами высокая. Наибольшие показатели заболеваемости регистрируются в возрастной группе от 15 до 50 лет. Несколько чаще болеют мужчины. Заражение, как правило, происходит в летне-осенние месяцы. Часто наблюдаются повторные случаи заражения после излечения. Иммунитет нестойкий.

Описторхоз — пероральный биогельминтоз. Ареал возбудителя простирается от бассейна р. Енисей до западных границ Европы, но распространение заболевания у человека носит очаговый характер. Уровень пораженности населения описторхисами определяют социально-бытовые факторы: образ жизни (традиции, привычки), степень развития рыбного промысла, удельный вес рыбы в пищевом рационе, методы кулинарной обработки рыбы, санитарное состояние местности.

В связи с тем, что промежуточный и второй промежуточный хозяева обитают в водоемах, очаги описторхоза концентрируются вблизи рек. Крупнейший в мире очаг этого заболевания сформировался в Обь-Иртышском речном бассейне. Инвазированность сельского населения в нижнем течении р. Иртыш и среднем течении р. Обь достигает 90 — 95%, причем нередко инвазированны и дети дошкольного возраста.

Здесь регистрируются наиболее высокие показатели заболеваемости населения (до 1000 на 100 тыс.). Причина такого исключительного значения данной территории в эпидемиологии описторхоза заключается в наличии чрезвычайно развитой речной поймы, обеспечивающей условия для циркуляции возбудителя болезни. Территории с приведенными выше количественными показателями пораженности населения относятся к гиперэндемичным.

 

Развитие Opisthorchis felineus происходит с тройной сменой хозяев: первого промежуточного (моллюски), второго промежуточного (рыбы) и окончательного (млекопитающие).

К числу окончательных хозяев паразита относятся человек, кошка, собака, свинья и более 25 видов диких млекопитающих, в рацион которых входит рыба (лисица, песец, соболь, хорек, выдра, норка, водяная полевка, ондатра и др.).

Из кишечника окончательных хозяев зрелые яйца описторхисов выделяются в окружающую среду. Яйца паразитов, попавшие в водоем, могут сохранять жизнеспособность 5 — 6 месяцев. В воде яйцо заглатывается моллюском рода Codiella или Opisthorchophorus. В кишечнике моллюска из яйца выходит мирацидий, проникает в полость тела и, претерпевая метаморфоз, превращается в половозрелую фазу развития — материнскую спороцисту. Размножаясь партеногенетическим путем (без оплодотворения), спороциста дает начало особям следующего, тоже партеногенетического поколения — редиям. В редиях 2-го поколения развиваются подвижные церкарии — личинки гермафродитного поколения. Время развития паразитов в моллюске в зависимости от температуры воды может составлять от 2 до 10 — 12 месяцев. Церкарии, покинув тело родительской особи, выходят из моллюска в воду и при помощи секрета особых желез прикрепляются к коже рыб семейства карповых (язь, елец, линь, плотва, лещ и др.). Затем они активно внедряются в подкожную клетчатку и мускулатуру, теряют хвост и спустя сутки инцистируются, превращаясь в метацеркарии, размеры которых составляют 0,21 — 0,33 x 0,17 — 0,25 мм. Через 6 недель метацеркарии становятся инвазионными, и содержащая их рыба может служить источником заражения окончательных хозяев. Метацеркарии в живой рыбе сохраняют свою жизнеспособность и инвазионность 5 — 8 лет. Весьма устойчивы они к воздействию низких температур. В замороженной рыбе личинки утрачивают жизнеспособность при -40 °C до 7 ч, при -35 °C до 14 ч, при -28 °C — 32 ч. Замораживание рыбы при более высокой температуре не гарантирует ее полного обеззараживания. Метацеркарии чувствительны к высоким температурам. После выделения из рыбы они погибают при 55 °C в течение 5 мин. При засолке, если доля соли в рыбе равна 14%, а плотность тузлука составляет 1,2, метацеркарии выживают в мелкой рыбе от 10 до 21 суток (в зависимости от вида рыбы), а в крупной, длиной свыше 25 см (язи, лещи, лини), — до 40 суток.

Высокая устойчивость метацеркарий к воздействию факторов окружающей среды требует соблюдения режимов обеззараживания материала и объектов внешней среды (поверхностей, лабораторной посуды и пр.) в испытательных лабораториях, проводящих исследование рыбы и готовой рыбной продукции на паразитарную чистоту.

В кишечнике дефинитивного хозяина под воздействием дуоденального сока личинки освобождаются от оболочек цист и по общему желчному протоку мигрируют в желчный пузырь и в желчные протоки печени. Иногда они могут попадать также в поджелудочную железу. Через 3 — 4 недели после заражения окончательных хозяев паразиты достигают половой зрелости и после оплодотворения начинают откладывать яйца. Выделяющиеся с фекалиями животных и человека зрелые яйца содержат личинку-мирацидий, не способную заразить дефинитивного хозяина без прохождения ее дальнейшего развития в промежуточном и дополнительном хозяине. Таким образом, выделения больного, а также загрязненные ими объекты внешней среды непосредственной эпидемической опасности для окружающих не представляют. Продолжительность жизни кошачьей двуустки может достигать 20 — 25 лет.

Санитарно-гигиенические мероприятия

 Оценку состояния рыбохозяйственных водоемов по паразитологическим показателям проводят на территориях, где существует риск заражения описторхисами, 1 раз в 5 лет или по эпидемиологическим показаниям.

Места отлова, сроки и видовой состав рыб определяют управления Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации по плану-графику, согласованному с руководством рыбодобывающих организаций.

При оценке паразитологического состояния водоема в первую очередь исследуют виды рыб, наиболее подверженные заражению. Наилучшими индикаторами неблагополучия водоема в отношении инвазии личинками описторхиса являются язь, далее по убывающей — елец, линь, красноперка, плотва, лещ, голавль, синец, белоглазка, подуст, чехонь, жерех, пескарь, уклейка, густера, гольян, верховка, щиповка.

В аккредитованных испытательных лабораториях исследуют по 20 особей промыслового размера дополнительных хозяев описторхиса (рыб семейства карповые), распространенных на этой территории. При отрицательном результате число исследуемых экземпляров рыб доводится до 40. Если отрицательный результат подтверждается, водоем считается благополучным. Рыба, выловленная в таких водоемах, допускается на реализацию без ограничений.

При обнаружении в водоеме рыб, зараженных личинками описторхиса, всю рыбу данного вида и остальных видов, способных играть роль дополнительных хозяев описторхисов, а также рыбную продукцию подвергают обеззараживанию от личинок описторхисов перед реализацией.

Вся рыбопродукция из водоема допускается к сертификации и реализации только после ее обеззараживания.

При паразитологическом контроле сырья (свежей, охлажденной и мороженой рыбы) проводят микроскопическое исследование мышечных тканей и подкожной клетчатки рыбы на наличие метацеркарий описторхиса. Не допускается в реализацию и подлежит обеззараживанию сырье, в пробе которого обнаружена хотя бы одна жизнеспособная личинка описторхиса.

Проводят обязательный паразитологический контроль каждой партии готовой рыбной продукции холодного копчения, пресервов, соленой, пряной, маринованной (бочковой), вяленой рыбы. Готовая продукция не должна содержать жизнеспособных личинок описторхиса.

Рыбу язь для приготовления вяленой продукции холодного копчения допускают после замораживания.

Санитарно-паразитологический контроль рыбы и рыбной продукции на рынках обеспечивает руководитель рынка. Рыба, содержащая жизнеспособные личинки описторхиса, подлежит обеззараживанию.

Учитывая высокую устойчивость метацеркарий описторхисов к низким температурам, замораживание рыбы при более высокой температуре не гарантирует ее обеззараживания.

Обеззараживание рыбы от личинок описторхиса обеспечивается применением смешанного крепкого и среднего посола (плотность тузлука с первого дня посола 1,20 при температуре 1 — 2 °C) при достижении массовой доли соли в мясе рыбы 14%. При этом продолжительность посола должна быть:

а) пескаря, уклейки, гольяна, верховки — 10 суток;

б) плотвы, ельца, красноперки, голавля, синца, белоглазки, подуста, чехони, жереха, щиповки, мелких (до 25 см) язей, лещей, линей — 21 сутки;

в) крупных (свыше 25 см) язей, лещей, линей — 40 суток.

Допускается более слабый или менее длительный посол «условно годной» рыбы только после предварительного ее замораживания в режимах, указанных выше.

При невозможности обеспечить режимы замораживания, гарантирующие обеззараживание рыбной продукции, ее следует использовать для пищевых целей только после горячей термической обработки или стерилизации (консервы) в соответствии с действующими технологическими инструкциями.

Заморозка: в бытовом холодильнике личинки сохраняют жизнеспособность. При температуре -40 ⁰ — 7 часов, при — 35 ⁰ — 14 часов, при -28⁰ — 32 часа.

При засолке рыбы необходимо применять 2кг соли на 10 кг рыбы. При этом продолжительность соления мелкой рыбы (до 25 см) — 14 суток; крупных (свыше 25 см) — 40 суток.

Вяление необходимо проводить с предварительным посолом в течение 2 недель из расчета 2 кг соли на 10 кг рыбы. 

Варить рыбу следует порционными кусками не менее 20 минут с момента закипания, рыбные пельмени — не менее 20 минут с момента закипания. Рыбу (рыбные котлеты) необходимо жарить порционными кусками в жире 20 минут. Крупные куски рыбы весом до 100 г следует жарить в распластанном виде не менее 20 минут. Мелкую рыбу можно жарить целиком в течение 15—20 минут. Рыбные пироги необходимо выпекать 60 минут.

При холодном копчении рекомендуется предварительный посол в течение 2 недель (из расчета 2 кг соли на 10 кг рыбы).

Лечебно-профилактические мероприятия

 Выявление инвазированных осуществляют лечебно-профилактические организации независимо от организационно-правовых форм и форм собственности, а также лица, занимающиеся частной медицинской практикой, при обращении и оказании медицинской помощи, а также при профилактических, плановых, предварительных при поступлении на работу и периодических обследованиях и осмотрах в установленном порядке.

Контрольные обследования.

Выявленные инвазированные берутся на учет в кабинетах инфекционных заболеваний или участковыми терапевтами (педиатрами) с заполнением контрольной карты диспансерного наблюдения. Контроль эффективности лечения проводят через 3 месяца после дегельминтизации. Критерии эффективности лечения — три отрицательных результата копроовоскопических исследований или однократного отрицательного результата дуоденального содержимого.

Отходы запрещается скармливать скоту, домашним животным и зверям, а также сбрасывание в водоемы.

Дифиллоботриоз зоонозный биогельминтоз с хроническим течением, характеризующийся нарушением функций верхнего отдела пищеварительного тракта, а при тяжелом течении — развитием анемии.

 Возбудитель — лентец широкий — Diphyllobothrium latum .

Его длина может достигать 2 – 10 м, в редких случаях — 15 – 20 м.

Яйца лентеца широкого выделяются из кишечника человека еще незрелыми, и их развитие происходит в воде. Дальнейшее развитие личинки происходит в заглотивших ее первых промежуточных хозяевах — различных видах веслоногих рачков.

Проглоченные различными планктоноядными рыбами и мальками хищных рыб инвазированные рачки перевариваются, а процеркоиды пробуравливают кишечную стенку и мигрируют в различные органы рыбы. У щук и налимов плероцеркоиды располагаются во внутренних органах и мышцах, у окуней и ершей — всегда в мышцах.

Патогенное действие широкого лентеца на организм человека обусловлено рядом факторов: механическим воздействием на слизистую кишечника, токсико-аллергическими реакциями, а также развитием авитаминоза.

Прикрепляясь к слизистой оболочке тонкой кишки, лентецы ущемляют ее своими ботриями, что приводит к местному изъязвлению, некротизации и атрофии.

Продолжительность жизни широкого лентеца может достигать 20 и более лет.

Профилактика дифиллоботриоза:

Выявление инвазированных людей, тщательная кулинарная обработка рыбы и икры.

При этом необходимо учитывать, что гибель паразитов при замораживании рыбы во всей массе наступает:

при -6 – 8°С через 7 суток,

при -12°С в течение 3 дней,

при -16°С через 36 ч,

при -27°С спустя 12 ч.

При посоле икры рыб в качестве самостоятельного продукта соблюдаются следующие условия:

– теплый посол (температура 15 – 16°С) проводится в 12% растворе поваренной соли в течение 30 минут, в 10% растворе — в течение часа, в 8% — 2 ч; в 6% — 6 ч;

– охлажденный посол (при температуре 5 – 6°С) производится при тех же концентрациях соли, но время экспозиции удваивается.

 

Тениаринхоз— антропонозный биогельминтоз с хроническим течением, характеризующийся преимущественно желудочно-кишечными расстройствами. Возбудитель — цепень бычий, или цепень невооруженный — Taenia saginata.

Когда стробила гельминта достигает 5 – 7 метров длины, конечные членики отрываются и вместе с фекалиями или самостоятельно выходят наружу. Они выделяются обычно поодиночке, в среднем по 6 – 8 в течение суток. В каждом членике находится до 175 тыс. яиц. Членики способны активно двигаться. Промежуточный хозяин — крупный рогатый скот (бык, буйвол, зебу, як, северный олень). Скот заражается онкосферами на пастбищах при заглатывании члеников или онкосфер с травой, сеном, водой или подлизывая мочу, находящуюся вблизи фекалий.

Цистицерки имеют форму овальных пузырьков размером от горошины до зерна фасоли (4 – 10 мм в поперечнике).

В организм — человека — цистицерки невооруженного цепня попадают при употреблении в пищу недостаточно проваренного финнозного мяса животных — промежуточных хозяев этого гельминта.

 В кишечнике человека сколекс цистицерка выворачивается наподобие пальца перчатки и прикрепляется присосками к слизистой оболочке кишки (обычно двенадцатиперстной) и начинает расти.

 От момента заражения до созревания зрелых члеников проходит около 3 месяцев. Длительность жизни паразита иногда достигает 20 лет. Бычий цепень, как правило, паразитирует у человека в единственном числе.

 

Патогенез и клиника. Скопление цепней может вызвать закупорку кишечника. Интенсивное потребление паразитом пищевых веществ, создают дефицит наиболее ценных компонентов питательных веществ, вследствие чего постоянно ощущается чувство голода, повышается потребление пищи, снижается масса тела. Постоянное выползание члеников из заднего прохода и их передвижение по коже угнетающе действует на психику больного.

 

Эпидемиология. Механизм заражения — пероральный. Фактором передачи служит мясо крупного рогатого скота и мясные изделия.

Профилактика и меры борьбы. Для обеззараживания мяса и мясопродуктов, пораженных цистицерками бычьего цепня, используют замораживание. При снижении температуры в толще мяса до -12°С все цистицерки погибают немедленно. При температуре -6 – 9°С тушу выдерживают в холодильной камере не менее 24 ч.

Куски мяса массой до 2 кг и толщиной до 8 см варят в течение 3 часов в открытых или 2,5 часа. Допускается обеззараживание говядины путем ее засолки. Куски мяса массой не более 2,5 кг засыпают поваренной солью из расчета 1 кг соли на 10 кг мяса, затем заливают 24% рассолом поваренной соли и выдерживают 20 суток.

Личная профилактика заключается в исключении из рациона сырого и недостаточно термически обработанного мяса крупного рогатого скота, а также мяса, не прошедшего ветеринарный контроль (неклейменого).

 

Тениоз — антропонозный биогельминтоз, одним из основных клинических проявлений которого является нарушение функций желудочно-кишечного тракта.

Возбудитель — цепень вооруженный (свиной) — Taenia solium.

Взрослые свиные цепни паразитируют в тонкой кишке человека, который является их единственным дефинитивным хозяином. Отделившиеся от стробилы зрелые членики выделяются наружу только пассивно с фекалиями больного. Яйца, заключенные в члениках, содержат вполне сформированную личинку, которая не нуждается в дозревании во внешней среде.

Промежуточными хозяевами чаще всего служат домашняя свинья, дикий кабан, медведь, верблюд, реже — собака, кошка, кролик, заяц и др.

Они заражаются при заглатывании члеников и онкосфер с пищей или водой.

Продолжительность жизни цистицерков у свиньи 3 – 6 лет, после чего они сморщиваются, петрифицируются и погибают.

С фекалиями выделяются преимущественно кусочки стробилы, состоящие из 5 – 6 члеников. Продолжительность жизни цепня вооруженного в кишечнике человека составляет несколько лет.

Патогенез и клиника. При неосложненном кишечном тениозе в основе патогенеза лежат те же механизмы, что и при тениаринхозе. Клинические симптомы у этих двух нозоформ идентичны, однако при тениозе они, как правило, более выражены. В основном возникают диспепсические и неврологические расстройства: нарушение аппетита, тошнота, рвота, боли в животе, неустойчивый стул, периодические головные боли, головокружение, обморочные состояния, нарушение сна.

Эпидемиология. Источником заражения является инвазированный человек, выделяющий с фекалиями членики и яйца гельминта. Рассеивание их в окружающей среде приводит к заражению промежуточных хозяев (главным образом, свиней). Люди заражаются при употреблении в пищу недостаточно термически обработанного мяса свиней, иногда мяса диких кабанов и медведей. Поскольку свиньям свойственна копрофагия, то их мясо иногда бывает очень интенсивно заражено цистицерками. Именно поэтому при тениозе в желудочно-кишечном тракте человека часто паразитирует много экземпляров цепня свиного.

Профилактика и меры борьбы.

Учитывая высокую степень устойчивости цистицерков свиного цепня к воздействию низких температур, обеззараживание свиных туш методом замораживания производится при более жестком температурном режиме. Температуру в толще мышцы свиной туши необходимо довести до -10°С и выдержать при температуре воздуха в камере -12°С в течение 10 суток.

Гименолепидоз— контагиозный гельминтоз человека и некоторых мышевидных грызунов, характеризующийся, главным образом, нарушениями функций пищеварительного тракта.

Возбудителем гименолепидоза служит карликовый цепень — Hymenolepis nana.

Карликовый цепень относится к гельминтам с упрощенным жизненным циклом, который обычно начинается и заканчивается в организме человека, то есть человек служит и промежуточным, и окончательным хозяином.

При заглатывании человеком инвазионных яиц H. nana в тонкой кишке онкосферы освобождаются от яйцевых оболочек и активно внедряются в ворсинки, где превращаются в зрелых ларвоцист

Продолжительность жизни карликового цепня, включая личиночный период развития, около 2-х месяцев.

Осложнения обострение течения язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Эпидемиология. Основным источником заражения при гименолепидозе является больной человек. Механизм передачи — фекально-оральный. Основными путями передачи служат контактно-бытовой и пищевой. Заражение может происходить непосредственно от инфицированного человека или через предметы обихода. Поэтому гименолепидоз относят к контагиозным гельминтозам. Фактором передачи инвазионного начала могут служить загрязненные яйцами гельминтов руки, ночные горшки, дверные ручки, стульчаки туалетов, игрушки, пищевые продукты, кухонная утварь, предметы обихода.

Профилактика и меры борьбы. Большое значение имеют меры личной профилактики: строжайшее соблюдение правил личной гигиены, привитие гигиенических навыков детям (мытье рук перед едой и после посещения туалета, искоренение привычки у детей младшего возраста сосать пальцы и грызть ногти).

Аскаридоз

Возбудителем аскаридоза человека является аскарида человеческая — Ascaris lumbricoides.

Взрослые самцы и самки аскарид паразитируют обычно в тонкой кишке человека.

Выделение яиц самками заканчивается к 7 месяцу их жизни. Продолжительность жизни состовляет от 11-13 месяцев.

Осложнения. Одно из наиболее серьезных осложнений — непроходимость кишечника, которая образуется вследствие рефлекторного спазма или закупорки просвета кишечника клубком аскарид. Проникновение аскарид в червеобразный отросток иногда вызывает аппендицит.

Эпидемиология. Единственным источником инвазии является зараженный аскаридозом человек, выделяющий с фекалиями огромное количество яиц. Одна самка выделяет до 240 тыс. яиц в сутки. Механизм передачи преимущественно фекально-оральный. Факторами передачи служат главным образом почва, руки, пища, в меньшей степени вода.

 Аскаридоз — один из наиболее распространенных гельминтозов. Профилактика и меры борьбы. Необходимо мыть руки перед приемом пищи и после загрязнения их землей; употреблять в пищу только тщательно промытые и ошпаренные кипятком овощи, ягоды и фрукты, особенно редис и морковь, которые тесно контактируют с землей. Ягоды, имеющие шероховатую поверхность или дольчатое строение (клубника, земляника, малина и др.) следует обмывать 1% раствором питьевой соды, а затем чистой водой.

Трихоцефалез

Характеризуется хроническим течением (до 3 – 5 лет). Нередко протекает бессимптомно или субклинически. Самки власоглава откладывают в сутки от 1000 до 3500 незрелых яиц.

Эпидемиология. Источник инвазии, механизм и пути передачи трихоцефалеза в основном такие же, как при аскаридозе.

Профилактика и меры борьбы. Меры профилактики трихоцефалеза сходны с мерами, проводимыми при аскаридозе. Они заключаются в своевременном выявлении и лечении инвазированных, в охране окружающей среды от фекального загрязнения, соблюдении правил личной гигиены и тщательном мытье овощей и фруктов перед употреблением их в пищу.

 

Энтеробиоз — (контагиозный антропонозный гельминтоз, проявляющийся перианальным зудом, диспепсическими расстройствами и невротическими реакциями (особенно у детей).

В самке находится (от 5000 – 17000 тыс. яиц в каждой). Во время сна острицы выползают из анального отверстия и откладывают яйца в перианальных складках хозяина, после чего погибают. Длительность их жизни не превышает 1 месяца.

Осложнения. Наиболее частыми осложнениями являются энтеробиозные аппендициты, обусловленные сочетанием инвазии острицами и вторичной бактериальной инфекцией; энтеробиозный эндометрит и раздражение тазовой брюшины в результате миграции самок остриц через половые пути женщин.

Источник инвазии — больной человек. Механизм передачи — фекально-оральный.

Энтеробиоз — один из наиболее широко распространенных гельминтозов человека.

Профилактика и меры борьбы. Необходимо строго соблюдать правила личной гигиены. Ногти должны быть коротко острижены, и при каждом мытье рук подногтевые пространства надо тщательно очищать. Перед едой и после посещения уборной следует мыть руки. Необходимо искоренить свойственную некоторым детям привычку брать пальцы в рот и грызть ногти. В помещениях ежедневно производится влажная уборка с использованием дезинфектантов, все вещи и предметы протираются от пыли. Эффективным способом является кварцевание помещений.

 Инвазированные острицами подлежат обязательному лечению в амбулаторных или стационарных условиях (при необходимости изоляции по эпидемиологическим показаниям) на основании их добровольного информированного согласия и с учетом права на отказ от медицинского вмешательства.

Инвазированные острицами лица, относящиеся по роду своей профессиональной деятельности к декретированному контингенту, на период лечения (в соответствии с трудовым законодательством) переводятся на другую работу, не связанную с риском распространения энтеробиоза. При невозможности перевода таких работников временно (на период лечения и контрольного лабораторного обследования) отстраняют от работы с выплатой компенсации в установленном законодательством порядке. Взрослое население, профессионально не относящееся к декретированным контингентам, на период лечения от работы не отстраняется.

Детей, инвазированных острицами, являющихся источниками распространения энтеробиоза, не допускают в дошкольные образовательные учреждения, на период лечения и проведения контрольного лабораторного обследования.

 При плановых профилактических обследованиях детей в организованных коллективах и выявлении 20% и более инвазированных острицами на период лечения из детского коллектива не отстраняют. Химиопрофилактику проводят одновременно всем детям и персоналу препаратами, разрешенными для этих целей, в установленном порядке в соответствии с инструкцией на препарат.

 На период проведения лечебно-профилактических мероприятий впервые поступающих детей или длительно отсутствовавших в детский коллектив не принимают.

Трихинеллез— зоонозный биогельминтоз, вызываемый личинками трихинелл и характеризующийся острым течением, лихорадкой, выраженными аллергическими проявлениями и поражением поперечнополосатой мускулатуры.

Основным возбудителем трихинеллеза человека служит один из видов рода трихинелл — Trichinella spiralis

Длительность жизни самок трихинелл в кишечнике человека составляет 3 – 6 недель. За это время одна самка отрождает от 200 до 2000 личинок, размером около 0,1 мм. Через слизистую оболочку кишечника личинки проникают в лимфатическую, а затем в кровеносную систему и током крови разносятся по всему организму хозяина.

Миграция личинок начинается на 6 й день после заражения. Личинки активно проникают из капилляров в мышечные волокна поперечнополосатой скелетной мускулатуры. Там они увеличиваются в размерах до 0,8 – 1 мм, начинают свертываться спиралью. Вокруг них начинает образовываться капсула и спустя 18 – 20 дней личинки становятся инвазионными. С 6 го месяца после инвазирования в капсулах начинается процесс обызвествления, при этом многие личинки погибают, но некоторые сохраняют жизнеспособность в течение 25 и более лет.

Трихинеллы чаще всего поражают наиболее активно работающие мышцы, обильно снабжаемые кровью, насыщенной кислородом: ножки диафрагмы, межреберные, жевательные, глазодвигательные, шейные мышцы, мышцы гортани и языка.

Наиболее часто первыми симптомами заболевания являются лихорадка, головная боль, развитие отеков лица и крапивницы.

Температура, как правило, поднимается внезапно до 39 – 40°С и держится на высоком уровне в течение 7 – 8 дней. Одновременно с повышением температуры появляются отеки век, а затем и всего лица. 

 

Профилактика и меры борьбы.

– предотвращение поедания свиньями трупов грызунов и других животных

– обязательное исследование на трихинеллез туш всех забиваемых свиней и недопущение в пищу свинины, не прошедшей ветеринарно-санитарный контроль.

 

 

Информацию подготовил: врач-эпидемиолог БУ «Нижневартовская городская поликлиника» Егорова И.А.

Количество просмотров: 3337

Лямблиоз — что это за «зверь»?

Главная/О больнице/Статьи/Лямблиоз — что это за «зверь»?

Сегодня темой нашего разговора с врачом-педиатром стала такая часто встречающаяся у детей болезнь, как лямблиоз. На все интересующие нас вопросы согласилась ответить сотрудница детской городской больницы № 2 Святой Марии Магдалины Людмила Егоровна Никитина, врач-педиатр высшей квалификационной категории с большим стажем работы.

Людмила Егоровна, расскажите нашим читателям, насколько опасен лямблиоз?

Впадать в панику совершенно не нужно, однако это действительно серьёзная проблема, и «страусиная политика» в данных случаях тоже не рекомендуется. Следует обратить на неё пристальное внимание и выполнить все назначения врача. Да, к сожалению, заболеваемость лямблиозом высокая, распространена она повсеместно среди детей и взрослых. Особенно высокая заражённость детей в раннем и школьном возрасте, но может заболеть даже новорождённый.

Как ребёнок может заразиться лямблиозом?

Источником заражения является больной или носитель лямблий: либо человек, либо животное (хотя прямое заражение от животных окончательно не доказано). Лямблии прекрасно чувствуют себя в воде, где и размножаются. Они попадают в организм через рот, с грязных рук, продуктов питания. Лямблии выделяются с калом и могут сохранять свою жизнеспособность в воде до нескольких месяцев. Однако они погибают при кипячении. Заражение может произойти даже при употреблении льда, немытых фруктов и овощей, при купании. При несоблюдении общегигиенических навыков заражение происходит и в домашних условиях.

Каковы симптомы этой болезни?

Возбудитель может очень длительное время находиться в организме человека, не вызывая при этом никаких болезненных ощущений. Размножаются лямблии в полости кишечника, преимущественно в верхних отделах. Острого начала чаще всего не бывает. Симптомы развиваются постепенно, исподволь.

Возможно, конечно, и бессимптомное носительство, но оно встречается не часто. Мама обращает внимание на снижение аппетита, появление бледности, темных кругов под глазами, может появиться запах изо рта. Маленький ребёнок не жалуется, а дискомфорт проявляется капризами или агрессивностью. Дети постарше жалуются на боли в животе вокруг пупка сразу после еды, снижение аппетита, головную боль, быстрое насыщение при еде. Боли могут усиливаться во время или после еды, проходить после дефекации. Подчас ребёнку просто хочется полежать после еды.

Чёткая связь с приёмом пищи устанавливается чаще к школьному возрасту, появляются «голодные» боли, бывает тошнота. Ребёнок становится раздражительным, эмоционально лабильным. На коже часто отмечаются проявления аллергии в виде покраснения, шелушения. Могут истончаться и тускнеть волосы, ломаться ногти. Ребёнок даже может значительно потерять в весе. Часто у детей с хроническим течением лямблиоза может быть неустойчивость стула. Бывают изменения со стороны нервной системы: раздражительность, плаксивость, беспокойный сон, сердцебиение.

Какова диагностика лямблиоза?

Она трудна, и это, в первую очередь, связано с тем, что он проходит очень часто под маской других заболеваний. Опытный доктор всегда сможет заподозрить заболевание по вышеперечисленным признакам, но, в любом случае, необходима лабораторная диагностика лямблиоза — исследование кала и крови. В нашем стационаре исследуется кал на лямблии и кровь на антитела к лямблиям, то есть на те защитные белки, которые вырабатываются в организме при лямблиозе.

Помимо этого целесообразно сделать копрограмму, чтобы установить, как у ребёнка переваривается пища. У маленьких детей рекомендуем исследовать кал на дисбактериоз. В нашей больнице можно выполнить все эти анализы и получить квалифицированную консультацию педиатра.

Какие услуги ещё оказывает больница?

Наша больница является многопрофильным стационаром для лечения детей как с хирургической, так и с педиатрической патологией, причём самой разноплановой. Больница является государственной и работает по полисам ОМС и ДМС. Кроме этого функционирует отделение платных услуг. Мы предлагаем для лечения палаты повышенной комфортности, где может находиться мама вместе с ребёнком. Также мы приглашаем на консультации ведущих специалистов нашего стационара.

При желании родителей, дети могут пройти предоперационное лабораторное обследование непосредственно в день операции. Возможно прохождение ряда диагностических исследований без госпитализации. Недавно мы разработали программы по типу платной мини-госпитализации на наши основные профильные отделения.

ЛОР-операции у нас делаются под детским наркозом.

Каковы, на Ваш взгляд, преимущества больницы перед бесплатными государственными медицинскими учреждениями и частными клиниками?

Одним из самых существенных преимуществ нашей больницы является её высококвалифицированный кадровый состав, на протяжении ряда лет накапливающий клинический и научно-практический опыт. Немаловажно и наше месторасположение, позволяющее удобно и быстро добираться практически из любого уголка города. В отличие от частных лечебных учреждений, мы, прежде всего, смотрим на болезнь, которую надо лечить.

статьи о ветеринарии «Свой Доктор»

Лямблии являются простейшими одноклеточными организмами, которые обитают в тонком кишечнике собак и кошек. Лямблии встречаются на всей территории России, Европы, Соединенных Штатов, а также в других частях света. Болезнь при которой происходит поражение животного лямблями носит название «лямблиоз»

Каким же образом лямблии размножаются и затем передаются?

Кошка заражается, поедая кисты паразита. Кисты трансформируются и превращаются в свою следующую форму,находясь в тонком отделе кишечника, которая называется трофозоитом. У трофозоитов имеются жгутики, похожие по структуре на волосы, которые позволяют им быстро передвигаться, затем они размножаются делением на две части, прикрепляясь при этом к стенке кишечника. После неизвестного числа делений, трофозоит образует вокруг себя капсулу и попадает в фекалии. Выделяясь с калом, лямблии могут загрязнять окружающую среду, впоследствии заражая других животных и людей.

Каковы симптомы лямблиоза?

Большинство случаев заражение лямблиозом никак не проявляется . В редких случаях, особенно у молодых животных, болезнь проявляется признаками диареи, которая может быть острой , прерывистой или хронической . Как правило,животные болеющие лямблиозом не теряют аппетит, но при этом могут терять в весе. Это обусловлено тем, чтов кишечнике, лямблии препятствуют нормальному усвоению питательных веществ , при этом повреждая нежную слизистую оболочку кишечника, и мешают пищеварению.

Заразен ли лямблиоз кошек для людей?

Лямблиоз является наиболее распространенной кишечно-паразитарной инфекцией человека и потенциально может передаваться от кошек к человеку. В прошлом считалось, что кошки и собаки, наряду с дикой природой, были основным источником инфекций для людей. Тем не менее, существует множество видов лямблий, и эксперты не могут ответить на вопрос общие ли они для человека и животных.

Если ваша кошка имеет диагноз «лямблиоз», правила личной гигиены важны для предотвращения случайного распространения паразита в организм человека.

Какие методы диагностики лямблиоза существуют?

Лямблиоз диагностировать достаточно трудно, поскольку простейшие имеют слишком маленький размер и не выделяются при каждой дефекации. Материалом для исследования является кал животного, который необходимо собрать с двух-трех дефекаций. Небольшое количество кала должно быть смешано с водой и помещено на предметное стекло, которое исследуют под большим увеличением.

Как лечить лямблиоз?

Наиболее часто для лечения лямблиоза используется препарат под названием Метронидазол. Этот антибиотик очень горький, поэтому выпускается в форме таблеток с покрытием. Для того, чтобы получить правильную дозу для кошек, таблетки должны быть разделены. Лечение проводят в течении 5-7 дней. Также для лечения лямблиоза показана поддерживающая, симптоматическая терапия, которую сможет назначить Вам ветеринарный врач.

В большинстве случаев прогноз при данном заболевании благоприятный, за исключением тех случаев когда животное истощенно или ослаблено.

Как можно предотвратить заражение лямблиозом?

Кисты лямблий достаточно устойчивы, а значит могут жить несколько недель или месяцев вне хозяина во влажных и холодных условиях. А значит источник инфекции для Вашего питомца может быть на газоне, парке, питомнике и в других областях, которые загрязнены фекалиями других животных. Вы должны держать вашего питомца от районов, загрязненных фекалиями других животных, а также следить за тем чтобы Ваш любимец не подбирал какие-либо предметы на улице.

ПРОФИЛАКТИКА ЛЯМБЛИОЗА — Роспотребнадзор информирует — Новости — Главная — Официальный сайт городского округа Карпинск

Лямблиоз – человеческая паразитарная инфекция, чаще протекающая как бессимптомное паразитоносительство; может проявляться нарушением функции желудочно-кишечного тракта и дискинезией желчевыводящих путей.

 Возбудитель – жгутиковое простейшее Лямблия, паразитирующее в тонкой кишке и желчевыводящих путях. В организме хозяина существует в вегетативной форме и в виде цист, выделяемых наружу с испражнениями.

 Лямблиоз регистрируют среди всех возрастных групп, основной контингент – дети дошкольного возраста. Цисты лямблий длительно сохраняются во внешней среде (до 2-3 месяцев).

 При лямблиозе нарушаются процессы усвоения жиров, углеводов и витаминов. В желчных протоках лямблии быстро погибают под действием желчи. Частое их обнаружение при дуоденальном зондировании связано с попаданием лямблий со стенок двенадцатиперстной кишки. Однако обусловленное ими нарушение моторики желчевыводящих путей способствует присоединению вторичных бактериальных инфекций. Продолжительность инкубационного периода – 1-3 недели.

 Острая форма лямблиоза: характерны диарея продолжительностью от 5-7 суток до нескольких недель, уменьшение массы тела и признаки хронической интоксикации (синева под глазами, головная боль, утомляемость). У подростков чаще преобладают признаки дискинезии желчевыводящих путей: боли в животе, увеличение печени, запоры. У детей раннего возраста быстро формируется синдром нарушенного кишечного всасывания (не усваивает сахара, жиры и витамины) с присоединением аллергических реакций. У части больных возможно самоизлечение.

 Хроническая форма лямблиоза протекает в виде периодических обострений, характеризующихся вздутием живота, поносами, болями в подложечной области.

 Диагностика лямблиоза

 Дуоденальное зондирование. Введение зонда в двенадцатиперстную кишку с целью получения ее содержимого.

 Обнаружение лямблий в кале

При острых формах выделение паразита начинается с 5-7-го дня болезни. При хронических формах выделение цист носит периодический характер, поэтому для подтверждения диагноза рекомендуют проводить исследования испражнений с интервалом в 1 неделю в течение 4-5 недель.

 В Краснотурьинске за 2012 год отмечается рост заболеваемости лямблиозом на 50% по сравнению с аналогичным периодом прошлого года, зарегистрировано 29 случаев заболевания (показатель на 100 тыс. населения 44,54).

В Карпинске за 2012 год отмечается снижение заболеваемости лямблиозом  на 31% по сравнению с аналогичным периодом прошлого года, зарегистрировано 7 случаев заболевания.

В Волчанске за 2012 год заболеваемость лямблиозом на уровне прошлого года – зарегистрировано 3 случая заболевания.

В комплексе профилактических мероприятий лямблиоза основная роль принадлежит санитарно-гигиеническим мероприятиям,  так как основной путь заражения лямблиозом – попадание грязи в рот через загрязнённые руки, игрушки, пищу и воду.

 

Giardia lamblia — microbewiki

Сканирующая электронная микрофотография (СЭМ) трофозоита Giardia lamblia, показывающая внешние ультраструктурные детали.

Страница микробной биореальмы рода Giardia lamblia

Классификация

Таксоны высшего порядка

Домен	Эукариота
(ранг не указан)	Diplomonadida group
(ранг не указан)	Diplomonadida
Семья	Hexamitidae
Подсемейство	Giardiinae
Род	Лямблии

Виды

Другие названия: Лямблии кишечные, Лямблии двенадцатиперстные

Описание и значение

Giardia lamblia — жгутиковый микроаэрофильный микроорганизм, впервые обнаруженный Ван Левенгук в 1681 году, который обнаружил его в своем собственном диарейном стуле.Трофозоит G. lamblia , вегетативная, подвижная форма G. lamblia имеет грушевидную форму и уникальную морфологию, такую ​​как два идентичных ядра, вентральный диск для прикрепления к кишечнику хозяина и жгутики [см. Также # Структура трофозоита ]. Киста является репродуктивной формой и состоит из защитной стенки кисты, а также четырех ядер.

Род Giardia выделен более чем из 40 видов. Известно, что вид G. lamblia заражает человека, млекопитающих, рептилий, птиц, коров, овец и свиней, в зависимости от штамма (Adam 2001).

G. lamblia является одной из основных причин заболеваний, передающихся через воду во всем мире (CDC, 2004), а инфекция приводит к лямблиозу (характеризующемуся нарушением всасывания и тяжелой диареей). Кишечная инфекция, вызванная лямблиозом, особенно серьезна в развивающихся странах, где возникновение лямблиоза в значительной степени связано с загрязнением источников воды. В США G. lamblia было обнаружено как в питьевой, так и в рекреационной воде. В связи с высокой распространенностью лямблиоза г.lamblia представляет значительный интерес в клиническом исследовательском сообществе. Однако патогенетические механизмы до конца не изучены. [См. Также #Pathology].

G. lamblia также имеет важное значение в эволюционной биологии. Считается, что из-за отсутствия митохондрий G. lamblia отличается от одной из самых ранних ветвей эукариот до начала эндосимбиотических отношений митохондрий (было предложено название царства «Archezoa»). Однако в настоящее время эта теория обсуждается.Новые доказательства в генетике, например, путем сравнения гена, кодирующего валил-тРНК-синтетазу (Hashimoto et al, 1998), и открытия сложных клеточных механизмов (таких как локализованные митохондриально-подобные механизмы транспорта электронов (Lloyd, 2002). ) предполагают, что это могут быть более продвинутые организмы, которые когда-то были несущими митохондрии, но с тех пор потеряли их. Секвенирование полного генома G. lambdia в настоящее время находится в стадии разработки, но полученные на данный момент результаты уже предоставили много информации о его эволюционной истории.

Структура генома

G. lamblia имеет два ядра одинакового размера, каждое из которых содержит полный геном одинакового размера (Yu et al, 2002). Оба ядра транскрипционно активны и реплицируются одновременно во время деления клетки. (Адам, 2001).

Геном G. lamblia состоит из 1,2 миллиона пар оснований, распределенных между пятью линейными хромосомами, каждая из которых фланкирована последовательностью теломер (5’TAGGG3 ’), сравнимой с другими эукариотами (Le Blancq et al, 1991).Упаковка хромосом осуществляется коровыми гистонами, но механизм немного отличается от других эукайот (Yee et al, 2007). [См. Также # Текущее исследование].

Геном имеет среднее содержание GC 46% (проект генома Giardia lamblia). Полное картирование генома G. lamblia (штамм WB) в процессе (завершено на 95%, по состоянию на август 2007 г.) с использованием секвенирования «дробовиком». На данный момент предсказано 6488 открытых рамок считывания (ORF), из которых 4746 транскрибируются.

Тем не менее, исследования проводились на основе частичного генома.Его сравнение с другими видами эукариот открыло новую перспективу в эволюции этого вида.

Исследования по сравнению вышестоящей последовательности с генами, кодирующими цитоскелетный белок, обнаружили несколько согласованных последовательностей, например, богатую АТ область 5’AATTAAAAA3 ’, находящуюся между -30 и -70 выше. Эти последовательности были предложены в качестве промоторных областей для G. lamblia , хотя они относительно короче, чем у других эукариот. Было обнаружено, что показанная выше богатая АТ область важна для транскрипции.Кроме того, недавние исследования показали, что промоторов G. lamblia , в частности, AT-богатые, «TATA» -подобные области, вызывают продукцию стерильных антисмысловых транскриптов (Teodorvic et al, 2007).

Гены, кодирующие гомологи митохондриальных белков, таких как белок теплового шока 70 и шаперонин 60 (cpn60), были идентифицированы в геноме G. lamblia (Roger et al, 1998), и их экспрессия была обнаружена на протяжении всего жизненного цикла. кроме периода эксцистанции.Это говорит о том, что Gardia не была премитохондриальной, но включала митохондриального предка, но с тех пор потеряла их. В том же контексте гены, кодирующие вали-тРНК синтетазу (ValRS), которые, как полагают, происходят из митохондрий, также были обнаружены в геноме G. lamblia (Hashimoto et al, 1998).

Структура ячеек

Структура трофозоита

Вегетативная форма G. lamblia , трофозоиты, имеют длину от 12 до 15 мкм и ширину от 5 до 9 мкм.Они обладают уникальными характеристиками морфологии: биядерная структура (каждая содержит полный набор генома (Yu, et al, 2002), четыре пары жгутиков, вентральный диск и срединное тело. Два ядра почти идентичны, не имеют видимые ядрышки и расположены симметрично.

Считается, что цитоскелет трофозоитов, в частности вентральный диск, играет главную роль в его прикреплении к кишечнику хозяина (Adam, 2001). Белки, которые находятся исключительно на вентральном диске, такие как актинин, альфа-актинин, миозин и тропомизин (Feely et al, 1982), а также лектин (Farthing et al, 1986), были предложены в качестве биохимических агентов, участвующих в вложение.Четыре пары жгутиков расположены на передней правой, задней, каудальной и вентральной сторонах организма. Каждая состоит из 11 микротрубочек (включая две основные микротрубочки).

Центрин, белок цитоскелета, был обнаружен в трофозоитах. Исследования иммунофлоресценции выявили его присутствие во всех системах микротрубочек у трофозоитов, включая жгутики, срединные тела, базальные тела, а также адгезивный диск (Corrêa et al, 2004). Это предполагает, что центрин лямблий может быть белком, связанным с микротрубочками, и он может участвовать в подвижности и адгезии.

Специализированные мембранные структуры для транспорта электронов и генерации мембранного потенциала, наблюдаемые в митохондриях (Lloyd 2002), также были обнаружены на цитоплазматической мембране трофозоитов, что указывает на их эволюционную связь с митохондриями.

Эндоплазматический ретикулум (ER) или структуры, подобные Гольджи, необходимые для транспортировки белков у эукариот, не наблюдались в трофозоитах G. lamblia под микроскопом. Однако обычные ER-связанные белки, такие как шаперонин BiP, были идентифицированы в обширной мембраносвязанной системе (Soltys et al, 1996).Это предполагает наличие ER-подобной структуры с функциональностью, аналогичной таковой у других эукариот. Присутствие белка ARF, необходимого для отрастания пузырьков, также указывает на присутствие Golgi-подобной структуры (Lujan et al, 1995), хотя необходимы дальнейшие исследования.

Структура кисты

Микрофотография кисты лямблии лямблии методом йодного окрашивания.

Киста G. lamblia имеет диаметр от 7 до 10 мкм и содержит четыре ядра. Киста покрыта 0.Стенка кисты толщиной 3 ~ 0,5 мкм. Стенка кисты состоит из двух слоев: внешнего нитевидного слоя и внутреннего перепончатого слоя (в дальнейшем состоящего из двух мембран). (Adam, 2001) После эксцистации одна киста превращается в двух трофозоитов.

Метаболизм

Форма цисты имеет более низкую скорость метаболизма по сравнению с трофозоитами (примерно 10 ~ 20% трофозоитов), и она стимулируется этанолом (Paget et al, 1989).

Трофозоит G. lamblia микроаэрофилен, лишен митохондрий и основан на цитохром-опосредованном окислительном фосфорилировании.(Адам, 2001). Они могут выполнять аэробный и анаэробный метаболизм в зависимости от концентрации кислорода в окружающей среде, хотя в основном они полагаются на ферментацию. К тому же брожение проводится даже в присутствии кислорода.

Аэробный и анаэробный метаболизм

Метаболическая активность трофозоитов зависит от концентрации кислорода и глюкозы. При отсутствии кислорода преобладает метаболизм глюкозы, а основным продуктом является аланин. В присутствии кислорода производство аланина подавляется (Papanastasiou et al, 1997).Когда концентрация кислорода достигает 46 мкМ, основными продуктами метаболизма становятся CO2 и ацетат.

Общие ферменты для кислородной детоксикации, такие как супероксиддисмутаза, каталаза, пероксидаза, не были обнаружены в трофозоите G. lamblia (Brown, 1995). В G. lamblia управление окислительным стрессом, как полагают, осуществляется с помощью класса тиоредоксинредуктазы дисульфидредуктазы, который использует цистин в качестве первичного акцептора электронов (Brown et al., 1996b).Недавние открытия показали, что цитоплазматический фермент NAD (P) H менадионоксидоредуктаза (DT-диафораза) также играет роль в управлении окислительным стрессом (Sanchez et al, 2001) и может значительно усиливать рост при сверхэкспрессии (Lei et al, 2006). .

Углеводный обмен

Глюкоза необходима для роста трофозоитов, но не обязательна. Он вносит свой вклад в основной источник энергии, получаемый из углеводов. Путь метаболизма глюкозы у G. lamblia аналогичен другим эукариотам, за исключением незначительных аспектов.Например, превращение фруктозо-6-фосфата в фруктозо-1,6-бисфосфат необратимо у большинства прокариот и эукариот, катализируется фосфофруктокиназой, требует АТФ и регулируется. Однако в G. lamblia этот процесс не регламентирован. И фосфофруктокиназа не зависит от АТФ, а зависит от пирофосфата (Adam 2001, Michels et al, 2006).

Существуют доказательства того, что трофозоит использует гликоген в качестве запаса энергии для хранения энергии (Ladeira et al, 2005).

Аминокислотный обмен

G. lamblia способен синтезировать de novo только аланин (для энергетического обмена) и валин. Он полагается на извлечение всех других аминокислот из кишечника хозяина.

Тем не менее, аминокислота является важным источником энергии для вида. В основных аминокислотных путях используются аргинин и аспартат (Adam, 2000). Первый путь использует аргининдигидролазу и присутствует у многих прокариот, но на сегодняшний день только у двух эукариот.Этот путь превращает аргинин в аммиак и диоксид углерода и генерирует АТФ за счет фосфорилирования на уровне субстрата. Орнитин, продукт, используется как мембранный антипорт для импорта внеклеточного аргинина (Edwards, 1992).

Импортные аминокислоты также используются для осморегуляции и защиты. Когда осмолярность окружающей среды падает, внутриклеточный аланин выводится (Edwards et al, 1993 и Nygaard et al, 1994). Антипорт также включает транспорт L-серина, глицина, L-треонина, L-глутамина и L-аспарагина.Установлено, что цистеин играет роль в защите от кислородного отравления. Цистеин является основным источником свободных тиоловых групп на вариабельных поверхностных белках (VSP) трофозоитов, и это было показано с помощью радиоактивно меченного цистеина (Aggarwal et al, 1989).

Водородный обмен

G. lamblia вырабатывает небольшое количество водорода (2 нмоль / мин / 10 _E 7 организмов) в строгих анаэробных условиях (Llyod et al. 2002). Никаких идентифицируемых гидрогеносом не обнаружено, хотя они часто встречаются у других производящих водород видов, таких как трихомонады).

Экология

Жизненный цикл G. lamblia состоит из двух стадий: цисты и трофозоитов. Киста обладает высокой устойчивостью к хлорированию, озонолизу и может выжить в холодной воде при температуре от 4 до 8 градусов по Цельсию (Али и др., 2003). Часто встречается в зараженной воде и фекалиях инфицированного человека. Форма трофозоита — это вегетативная форма G. lamblia , которая обнаруживается в тонком кишечнике инфицированных людей. Он также может быть обнаружен в их кале.Трофозоит почти исключительно находится в кишечнике человека, его основной нише.

Приобретение и Excystation

Обнаружение лямблий происходит главным образом через кисту, фекально-оральным путем или, в непромышленных регионах, через загрязненную воду. Киста защищена от желудочного сока хозяина стенкой кисты. Исследования показали, что его прохождение через желудок хозяина создает кислую среду, которая способствует инициированию эксцистанции, превращения кисты в трофозоит.(Elmendorf et al, 2003 и Adam 2001) Эксцистанции также способствуют протеаза поджелудочной железы и цистеиновая протеаза CP2. Кроме того, были собраны доказательства того, что эксцистанция может подавляться антителами к стенке кисты, антагонистами кальмодулина TFP и W7 (Bernal et al, 1998) и агглютинином зародышей пшеницы (Meng et al, 1996).

Приложение и размножение

Трофозоит прикрепляется к стенке тонкой кишки с помощью вентрального диска и размножается в просвете.Считалось, что прикрепление осуществляется за счет гидродинамической силы, создаваемой под диском с помощью вентральных жгутиков (Holberton et al, 1974). Другой предложенный механизм прикрепления включает поверхностный лектин, обнаруженный на вентральном диске трофозоитов, который связывается с маннозой. (Фартинг и др., 1986).

Размножение и инцистация (образование кисты) осуществляется в средней и средней части тощей кишки (тонкий кишечник) хозяина. Метаболическая активность трофозоитов может вызывать диарею, мальабсорбцию и потерю веса — состояние, известное как лямблиоз [подробнее см. Патология].У некоторых пациентов симптомы могут не развиваться. Причина этого неизвестна, но считается, что штамм паразита и факторы хозяина могут иметь значение (Thomson, 2000).

Энцистанция

Encystation можно наблюдать под микроскопом, а подробные механизмы описаны биохимическими методами.

Энцистация происходит при слабом щелочном pH 7,8 в присутствии жирных кислот, конъюгированных с солями желчных кислот (Gillin et al, 1988). Исследования in vitro показали, что инцистация вызывается холестерином и воздействием солей желчных кислот и жирных кислот (Kane et al, 1991 и Gillin et al, 1996), но это остается спорным.

Есть две фазы энцистации. На ранней стадии белки клеточной стенки синтезируются и транспортируются на периферию. Повышенный синтез белков клеточной стенки делает структуру, подобную Гольджи, легко видимой с помощью электронной микроскопии (Reiner et al, 1990). Белки, содержащие сигнатуру, богатую лейцином, перенаправляются в специфичные для энцистации транспортные везикулы (ESV), видимые под световой микроскопией (Hehl et al, 2000).

Поздняя фаза включает сборку стенки кисты и морфологические изменения.Сборка начинается с филаментов стенки кисты, затем с филаментозного слоя клеточной стенки (Adam, 2001). В ходе поздней фазы энцистации трофозоит теряет подвижность. В конечном итоге получается неприлипающая киста, включающая два физически соединенных трофозоита с четырьмя ядрами.

Патология

Лямблиоз является клиническим проявлением инфекции G. lamblia . Для него характерны тяжелая диарея, недостаточное питание и незначительное повреждение эпителия кишечника.Полный патогенез неизвестен, но существует несколько теорий.

Предполагается, что нарушение эпителия тонкой кишки вызвано индуцированным апоптозом (Chin et al, 2002). Недавно эта теория была доказана in vitro. Наблюдались как внутренние, так и внешние пути апоптоза энтероцитов. Кроме того, Bcl-2 подавлялся, и было проанализировано действие каспазы-3 (Panaro et al, 2007). Однако эта теория, похоже, зависит от штамма. Также было показано, что G.lamblia увеличивает проницаемость однослойного эпителия двенадцатиперстной кишки in vitro за счет фосфорилирования F-актина и зон окклюзии в энтероцитах (Scott et al, 2002).

Кроме того, иммунное уклонение G. lamblia достигается за счет вариации экспрессии вариантно-специфических поверхностных белков (VSP), семейства вариабельных антигенных создателей с неизвестной функцией (Singer et al, 2000). Селективное давление на паразита бывает как положительным, так и отрицательным и зависит от ВСП. Также могут быть задействованы специфические для хозяина факторы.

Хотя наиболее заметными клиническими проявлениями лямблиоза являются диарея и мальабсорбция, подробные механизмы не описаны полностью. Однако колонизация микробом, по-видимому, вызывает укорочение микроворсинок (Scott et al, 2000), уплощение ворсинок или атрофию (Williamson et al., 2000). Считается, что эти механизмы могут работать синергетически с другими механизмами, такими как включение дисахаразы и протеазы, вызывая общие симптомы (Muller et al, 2005).

Недавно проведенное исследование показало, что при лямблиозе диарея является причинной комбинацией утечки жидкости, мальабсорбции и мальсекреции: подавление протеина плотного соединения клаудина 1 и эпителиального апотоза вызывает нарушение натрий-зависимой абсорбции глюкозы, что приводит к активному хлориду. секреция ионов. Следовательно, вода попадает в просвет, вызывая диарею (Troeger, 2007).

Применение в биотехнологии

На сегодняшний день не было задокументировано.

Текущие исследования

г.lamblia строго исследуется из-за его значения в эпидемиологии, клинической медицине и эволюционной биологии.

• В связи с широким распространением болезней, передаваемых через воду, вызываемых G. lamblia , это одно из основных направлений исследований эпидемиологов. Poereira et al. Оценили распространенность лямблиоза среди госпитализированных детей, страдающих диареей, в Гоянии, Бразилия, и определили несколько факторов риска инфекции G. lamblia (Pereira et al, 2007).Эти факторы риска включают: количество детей в семье, гигиену питания, присутствие кошек и посещение детских садов. Подобные исследования в настоящее время проводятся CDC и другими правительственными агентствами по всему миру (CDC, 2004). Выявление таких факторов риска позволяет лицам, определяющим политику, бороться с болезнью с точки зрения законодательства и служб общественного здравоохранения.

• Изучена лекарственная устойчивость G. lamblia (клоны штамма WB C6) к нитазоксаниду и метронидазолу (Muller et al, 2007).Транскрипция нескольких белков, участвующих в формировании устойчивости, таких как пируват-оксиредуктазы 1 и 2, нитроредуктаза, VSP и протеин-дисульфид-изомеразы 2 и 4, была количественно оценена и коррелирована с каждым штаммом. И было обнаружено, что у каждого штамма синтез определенного набора белков подавлялся. Более того, было обнаружено, что экспрессия VSP резко изменилась под действием лекарств. Те же исследователи планируют объединить геномные и протеономические методы, чтобы детально понять клеточные механизмы и их роль в устойчивости паразита к лекарствам.

• При исследовании генетической структуры G. lamblia (Yee et al, 2007) были обнаружены гены ядерных гистонов h3a, h3b, h4 и h5, но не ген линкерного гистона h2. Сравнение последовательностей показывает сходные последовательности как в кодирующей, так и в 5’-некодирующей областях. Это указывает на недавнюю дупликацию или преобразование гена. Это исследование предлагает альтернативный механизм уплотнения генов в G. lamblia , который может быть реализован без гистона h2, чтобы оптимизировать транскрипцию богатой генами ДНК этого вида.Такое понимание было бы основополагающим в знании экспрессии генов у этого вида.

• Проект генома Giardia lamblia в Морской биологической лаборатории в Masshuttes, в котором секвенирование дробовика используется для получения полного генома G. lamblia , в настоящее время находится в стадии реализации. Аннотированные сборки генома выпускаются регулярно и доступны исследователям во всем мире. Анализ функции генов в настоящее время проводится в сотрудничестве с доктором Фрэнсис Гиллин из отдела молекулярной патологии Калифорнийского университета в США.Это исследование имеет большое значение для эволюционной биологии, поскольку оно даст представление об истории G. lamblia ‘: его связи с митохондриями и его роли в качестве моста между прокариотами и эукариотами. Полный геном также поможет исследователям идентифицировать возможные гены, кодирующие токсины, и, возможно, получить лекарства, которые могут подавить паразита.

Список литературы

1. Адам, Р. Д. и Адам. 2001. Биология лямблий.Обзоры клинической микробиологии, 14 (3), 447-.
2. Aggarwal, A., J. W. Merritt, Jr., and T. E. Nash. 1989. Богатые цистеином варианты поверхностных белков Giardia lamblia. Мол. Biochem. Паразитол. 32: 39–47.
3. Али, С.А., и Хилл, Д.Р. 2003. Лямблии кишечные. Текущее мнение по инфекционным болезням, 16 (5), 453-60.
4. Бернал Р. М., Р. Товар, Дж. И. Сантос и М. Л. Муньос. 1998. Возможная роль кальмодулина в эксцистации Giardia lamblia. Паразитол. Res. 84: 687–693.
5. Браун, Д.М., Апкрофт, Дж. А., Апкрофт, П. 1995. Свободнорадикальная детоксикация при Giardia duodenalis. Mol Biochem Parasitol 72: 47–56.
6. Браун, Д.М., Апкрофт, Дж. А., Апкрофт, П. 1996b. Класс тиоредоксинредуктазы дисульфидредуктазы у простейших паразитов Giardia duodenalis. Mol Biochem Parasitol 83: 211–220.
7. Центр по контролю за заболеваниями, Информационный бюллетень по инфекции лямблиозами. 2004. Проверено 29 августа 2007.
8. Chin AC, Teoh DA, Scott KG, et al. 2002. Штамм-зависимая индукция апоптоза энтероцитов с помощью Giardia lamblia нарушает функцию эпителиального барьера каспазо-3-зависимым образом.Infect Immun 2002; 70: 3673–3680.
9. Corrêa, G, Morgado-Diaz, JA, & Benchimol, M., 2004. Центрин в Giardia lamblia — ультраструктурная локализация. Письма по микробиологии FEMS, 233 (1), 91-6.
10. Эдвардс, М. Р., Л. А. Кнодлер, Дж. Р. Уилсон и П. Дж. Шофилд. 1993. Транспорт и метаболизм аланина Giardia Кишечник. Мол. Biochem. Паразитол. 61: 49–57.
11. Эдвардс, М. Р., П. Дж. Скофилд, У. Дж. О’Салливан и М. Костелло. 1992. Метаболизм аргинина при культивировании Giardia Кишечник.Мол. Biochem. Паразитол. 53: 97–103.
12. Элмендорф, Х.Г., Доусон, Южная Каролина, и Маккаффери, Дж. М.. 2003. Цитоскелет Giardia lamblia. Международный журнал паразитологии, 33 (1), 3-28.
13. Фартинг MJG, Pereira MEA, Keusch GT 1986. Описание и характеристика поверхностного лектина из Giardia lamblia. Infect Immunol 1986; 51: 661-7.
14. Фили, Д. Э., Дж. В. Шоллмейер и С. Л. Эрландсен. 1982. Giardia spp .: Распределение сократительных белков в прикрепительной органелле.Exp. Паразитол. 53: 145–154.
15. Гиллин, Ф. Д., Д. С. Райнер и С. Э. Баучер. 1988. Факторы тонкого кишечника способствуют инцистации Giardia lamblia in vitro. Заразить. Иммун. 56: 705–707.
16. Гиллин Ф. Д., Райнер Д. С. и Маккаффери Дж. М. 1996. Клеточная биология примитивных эукариот Giardia lamblia. Анну. Rev. Microbiol. 50, 679-705
17. Хашимото Т., Санчес Л. Б., Ширакура Т., Мюллер М., Хасегава М. 1998. Вторичное отсутствие митохондрий в Giardia lamblia и Trichomonas vaginalis, выявленное филогенией валил-тРНК синтетазы.Proc Natl Acad Sci USA 1998; 95: 6860-5.
18. Хашимото Т., Л. Б. Санчес, Т. Ширакура, М. Мюллер и М. Хасегава. 1998. Вторичное отсутствие митохондрий у Giardia lamblia и Trichomonas vaginalis, выявленное филогенией валил-тРНК синтетазы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 95: 6860–6865.
19. Хел, А. Б., М. Марти и П. Колер. 2000. Стадия-специфическая экспрессия и нацеливание химер белок стенки кисты — зеленый флуоресцентный белок в лямблиях. Мол. Биол. Ячейка 11: 1789–1800.
20. Холбертон Д.В. и Маршалл Дж.1995. Анализ консенсусных последовательностей в промоторах гена цитоскелета лямблий. Nucleic Acids Res 1995; 23: 2945-53. Ссылка.
21. Holberton DV. 1974. Приложение Giardia — гидродинамическая модель, основанная на активности жгутиков. Журнал Эксперта Биол 1974; 60: 207-21.
22. Кейн, А. В., Уорд, Х. Д., Кеуш, Г. Т. и Перейра, М. Е. А. 1991. Инцистация Giardia lamblia in vitro: крупномасштабное производство цист in vitro и различия штаммов и клонов в эффективности энцистации. J. Parasitol. 77, 974-981
23. Ladeira, RB, Freitas, MA, Silva, EF, et al.2005. Гликоген как углеводный запас энергии в трофозоитах Giardia lamblia. Паразитологические исследования, 96 (6), 418-21.
24. Le Blancq, S. M., R. S. Kase, and L. H. Van der Ploeg. 1991. Анализ рРНК Giardia lamblia, кодирующей теломеры с [TAGGG] n в качестве теломерного повтора. Nucleic Acids Res. 19: 5790–5790.
25. Лей Ли, Чинг С. Ван 2006. Вероятная молекулярная основа восприимчивости лямблий к кислороду Молекулярная микробиология 59 (1), 202–211.
26. Ллойд, Д., Харрис, Дж. К., Марулис, С. и др.2002. «Примитивный» микроаэрофил Giardia Кишечник (син. Lamblia, duodenalis) имеет специализированные мембраны с функциями транспорта электронов и создания мембранного потенциала. Microbiology, 148 (Pt 5), 1349-54.
27. Лухан, Х. Д., А. Маротта, М. Р. Моватт, Н. Шаки, Дж. Липпинкотт-Шварц и Т. Э. Нэш. 1995. Индукция развития структуры и функции Гольджи у примитивных эукариот Giardia lamblia. J. Biol. Chem. 270: 4612–4618.
28. Мэн Т.К., М.Л. Хецко и Ф.Д. Гиллин. 1996. Ингибирование эксцистации Giardia lamblia антителами против стенок кисты и агглютинином зародышей пшеницы. Заразить. Иммун. 64: 2151–2157.
29. Michels, PA, & Rigden, DJ. 2006. Эволюционный анализ метаболизма 2,6-бисфосфата фруктозы. ИУБМБ жизнь, 58 (3), 133-41.
30. Muller N, Allmen NV. 2005. Недавние исследования реакций слизистых оболочек, связанных с инфекциями Giardia lamblia. Международный журнал паразитологии 35 (2005) 1339–1347
31. Muller, J, & Muller.2007. Характеристика клонов Giardia lamblia WB C6, устойчивых к нитазоксаниду и метронидазолу. Журнал антимикробной химиотерапии, 60 (2), 280-.
32. Найгаард, Т., К. К. Беннет, Г. Гроссман, М. Р. Эдвардс и П. Дж. Шофилд. 1994. Отток аланина Giardia Кишечник. Мол. Biochem. Паразитол. 64: 145–152.
33. Пэджет Т. А., Э. Л. Джарролл, П. Мэннинг, Д. Г. Линдмарк и Д. Ллойд. 1989. Дыхание в цистах и ​​трофозоитах Giardia muris. J. Gen. Microbiol.135: 145–154.
34. Panaro MA, Cianciulli A, Mitolo V, Mitolo C.I, Acquafredda A, Brandonisio O, Cavallo P. 2007. Каспазозависимый апоптоз эпителиальной клеточной линии HCT-8, индуцированный паразитом Giardia Кишечник. FEMS Immunol Med Microbiol. 2007 Aug 20;
35. Папанастасиу П., Т. Брудерер, Ю. Ли, К. Боммели и П. Колер. 1997. Первичная структура и биохимические свойства вариантно-специфического поверхностного белка лямблий. Мол. Biochem. Паразитол. 86: 13–27.
36. Pereira, MGC, ATWILL, ER и BARBOSA, AP.2007. Распространенность и связанные факторы риска заражения Giardia lamblia среди детей, госпитализированных с диареей в Гоянии, штат Гояс, Бразилия. Rev. Inst. Med. троп. С. Пауло, май / июнь 2007 г., том 49, номер 3, с.139-145
37. Райнер, Д. С., М. Маккаффери и Ф. Д. Гиллин. 1990. Сортировка белков стенки кисты по регулируемому секреторному пути во время дифференцировки примитивных эукариот, Giardia lamblia. Евро. J. Cell Biol. 53: 142–153.
38. Roger AJ, Svard SG, Tovar J et al. 1998 г.Митохондриально-подобный ген шаперонина 60 у Giardia lamblia: свидетельство того, что на дипломонаде когда-то был эндосимбионт, родственный предку митохондрий. 1998. Proc Natl Acad Sci USA, 95: 229-34.
39. Санчес, Л. Б., Элмендорф, Х., Нэш, Т. Е., Мюллер, М., 2001. NAD (P) H: менадион-оксидоредуктаза амитохондриального эукариота Giardia lamblia: более простой гомолог фермента позвоночных. Микробиология 147: 561–570.
40. Scott KG, Meddings JB, Kirk DR, et al. 2002. Кишечная инфекция, вызванная Giardia spp.снижает функцию эпителиального барьера в зависимости от киназы легкой цепи миозина. Гастроэнтерология 123: 1179–1190.
41. Скотт, К.Г., Логан, М.Р., Кламмер, Г.М., Теох, Д.А., Бурет, А.Г., 2000. Микроворсинчатые изменения щеточной границы Джеюнала у мышей, инфицированных Giardia muris: роль Т-лимфоцитов и интерлейкина-6. Заразить. Иммун. 68, 3412–3418.
42. Зингер С.М., Элмендорф Х.Г., Конрад Дж. Т., Нэш Т.Э. 2000. Биологический отбор вариантов специфических поверхностных белков в Giardia lamblia. J. Infectious Diseases 2001; 183: 119-124
.
43. Солтыс, Б.Дж., М. Фалах и Р. С. Гупта. 1996. Идентификация эндоплазматического ретикулума у ​​примитивных эукариот Giardia lamblia с использованием криоэлектронной микроскопии и антител к Bip. J. Cell Sci. 109: 1909–1917.
44. Теодорович, С. Уоллс, CD. и Элмендорф, HG. 2007. Двунаправленная транскрипция является неотъемлемой особенностью промоторов Giardia lamblia и способствует обилию стерильных антисмысловых транскриптов по всему геному. Исследование нуклеиновых кислот, 2007, Vol. 35, № 8 2544-2553. Ссылка.
45. Томпсон, Р.C.A., 2000. Лямблиоз как повторно возникающее инфекционное заболевание и его зоонозный потенциал. Int. J. Parasitol. 30. С. 1259–1267.
46. Troeger, H, Epple, HJ, Schneider, T. и др., 2007. Влияние хронической инфекции Giardia lamblia на транспорт эпителия и барьерную функцию в двенадцатиперстной кишке человека. Гут, 56 (3), 328-35.
47. Yee, J, Tang, A, Lau, WL, et al. 2007. Ядро гистоновых генов Giardia Кишечник: геномная организация, структура промотора и экспрессия. BMC молекулярная биология, 8, 26-.
48. Ю., ЛЗ. Бирки, К. Виллиа-младший, Адам, Род. 2002. Каждое из двух ядер лямблий имеет полные копии генома и равномерно делится при цитокинезе. ЭУКАРИОТИЧЕСКАЯ КЛЕТКА, апрель 2002 г., стр. 191–199 a

Отредактировал студент Д. Лау из Рэйчел Ларсен

Под редакцией KLB

Эталонный геном в масштабе хромосом для Giardia Кишечник WB

Получение ДНК и секвенирование

G. Кишечник WB / C6 (АТСС 50803) культивировали согласно ссылке. ¹³ в среде TYDK в плотно закрытых наклонных культуральных пробирках при 37 ° C. Полную геномную ДНК экстрагировали из 2,3 × 10 ⁸ трофозоитов с использованием набора Qiagen Blood & Tissue Kit 50 (согласно инструкциям производителя) и очищали с использованием экстракции фенол-хлороформ. Затем его дополнительно очищали с помощью Qiagen Genomic-tip 20 / G. Концентрацию и качество экстрагированной ДНК определяли с помощью NanoDrop и электрофореза в геле агрозы. Геномную ДНК (5,6 мкг г) секвенировали с помощью PacBio RS II с использованием 8 клеток SMRT в Центре генома Упсалы в Лаборатории науки для жизни (Университет Упсалы), что дало 411 835 прочтений за 3.6 млрд баз (таблица 1). Чтения имеют длину N50 12,7 кбит / с, и 10% из них длиннее 20 кбит / с.

Для облегчения исправления базовых ошибок данные длительного чтения PacBIO были дополнены данными последовательности короткого чтения (Illumina) с высоким охватом (100X). Эти данные для кратковременного считывания были получены из G. кишечник WB / C6, выращенных в среде TYDK согласно ¹³ в колбе для культуры ткани объемом 25 мл. Полную геномную ДНК экстрагировали из 1 × 10 ⁷ трофозоитов с использованием набора Qiagen Powersoil Kit (в соответствии с инструкциями производителя).Приблизительно 1 мкг г геномной ДНК получали для конструирования библиотеки Illumina Truseq (размер фрагмента 300 п.н.) и подвергали секвенированию по парным концам (75 п.о.) на Illumina HiSeq 2000 в соответствии с инструкциями производителя. Это сгенерировало 16 миллионов парных чтений.

Сборка генома

Анализ SMRT (v2.3.0) конвейер ¹⁴ , предоставленный Pacbio, использовался для чтения Pacbio. Все программное обеспечение, упомянутое ниже без информации о версии, было получено из конвейера анализа SMRT.Считывания были собраны de novo с HGAP ¹⁴ с последующим вызовом согласованной последовательности с помощью Quiver ¹⁴ . Это дало 80 контигов. Затем эти контиги были сопоставлены с оптическими картами пяти хромосом (рис. 1a) ¹² с помощью MapSolver (v3.2.0), предоставленного OpGen. Соседние контиги затем были сшиты вместе следующим образом: если между соседними контигами были идентифицированы перекрытия, два контига были объединены на основе выровненной перекрывающейся последовательности; Если перекрытия не обнаружено, два контига были сшиты с Ns между ними, чтобы представить зазор с размером, определяемым выровненной оптической картой.Получившиеся пять каркасов были загружены в рабочий процесс BridgeMapper ¹⁴ , который производит разделенное выравнивание с использованием BLASR. Раздельное выравнивание было визуализировано с помощью SMRT View, и никаких неправильных сборок и структурных отклонений обнаружено не было. PBJelly (v15.8.24) ¹⁵ использовался для дальнейшего закрытия пробелов в пяти каркасах с использованием считываний Pacbio. Затем каркасы были дополнительно отполированы с помощью Quiver ¹⁴ , и считывания, которые не удалось сопоставить с каркасами, были собраны независимо с помощью canu (v1.4) ¹⁶ . Контиги Canu и пять каркасов были объединены и дополнительно отполированы с помощью Quiver. В результате получилось 35 каркасов, из которых пять основных составляют 97% от общего размера при 12,6 Мбит / с, что немного больше, чем у старого черновика генома (Таблица 1). Пять основных каркасов, представляющих пять хромосом Giardia , содержат только четыре внутренних пробела по сравнению со 137 пробелами в старой версии (Таблица 1, Рис. 1b).

Рис. 1

Почти полные пять хромосом.( a ) Карты рестрикционного фермента (MluI) пяти хромосом выровнены с геномными последовательностями, расщепленными MluI in silico . Каждая вертикальная линия внутри прямоугольников представляет собой участок разреза рестрикционным ферментом. Разрывы в геномных последовательностях представлены горизонтальной линией вне рамок. ( b ) Круговой график сравнения старых пяти хромосом (слева) с новыми пятью хромосомами (справа). Хромосомные последовательности представлены серым цветом в крайнем круге с пробелами в белых полосах, а теломерные повторы — в красном.Совпадения BLASTN между двумя геномами показаны синими лентами посередине. Пакет R circlize (v0.4.8) использовался для построения кругового графика ³⁹ .

На этапе аннотации ниже мы заметили, что некоторые полноразмерные гены были усечены в новом черновом геноме из-за сдвига рамки, вызванного гомополимерными ошибками, вызванными считыванием PacBio. Считывания секвенирования ДНК компании Illumina были сопоставлены с черновым вариантом ссылки с использованием компонента выравнивания короткого чтения BWA (v0.7.15) ¹⁷ , а файл выравнивания bam был отсортирован с помощью samtools (v1.8) ¹⁸ и его функция mpileup использовалась для генерации списка файлов pileup для базовой информации сопоставления. Файл Pileup был проанализирован, и индексы и SNP были обновлены, когда альтернативная база / indel имеет поддержку не менее 50% из не менее 10 отображенных операций чтения. Это привело к обновлению 50 SNP, затрагивающих 20 генов, и 85 обновленных индексов, влияющих на 38 генов.

Оценка гетерозиготности

Показания Illumina были повторно выровнены по базовому исправленному эталонному геному с использованием BWA (v0.7.15) и samtools (v1.8) Повторно сгенерирован результат mpileup. Сайты SNP (или гетерозиготности аллельной последовательности (ASH)), упомянутые ниже, назывались в положениях с охватом по меньшей мере 20X оснований с альтернативным основанием по меньшей мере в 10% считываний.

Аннотации генома

Ранее опубликованный геном G. Кишечник WB был загружен из GiardiaDB (v36.0) ¹⁹ , а аннотация была перенесена в новый референсный геном с помощью RATT (v0.95) ²⁰ . GlimmerHMM (v3.0.1) ²¹ и Prodigal (v2.6.3) ²² были использованы для предсказания гена de novo , и 500 аннотаций, переданных через RATT, были отобраны для обучения предсказанию GlimmerHMM. Информация о сходстве из BLASTP ²³ с базой данных NR и информация о домене из поиска по консервативному домену (CD) ²⁴ были объединены для функциональной аннотации. RATT передал аннотации и новых прогнозов были объединены, а те, которые противоречат друг другу из трех источников, были проверены вручную. Считывания РНК-Seq (SRR10063826 ²⁵ ) были картированы в геном с помощью BWA (v0.7.15), а картографическая информация использовалась в качестве руководства для структурных аннотаций. Аннотации, созданные вручную Giardia исследователями ¹⁹ , также были включены в функциональную аннотацию. Несогласованные аннотации между старой и новой версиями были дважды проверены, чтобы убедиться, что обновленная аннотация является улучшением. Для генов с множеством копий была исследована синтения между двумя версиями, чтобы определить наиболее подходящий геноид для гена, попытка сохранить согласованность синтении между двумя версиями геномов.

Интроны в Giardia были опубликованы в различных статьях ^2,26,27 , но не были собраны и интегрированы в геном. В этой версии аннотации мы интегрировали все 8 цис-сплайсированных интронов и 5 транс-сплайсированных интронов (Таблица 1). Поиск нового общего интронного мотива не выявил новых кандидатов в интроны.

Всего мы аннотировали 4963 гена, кодирующих белок, плюс еще 306 псевдогенов в новом геноме (Таблица 1). Хотя количество генов уменьшено по сравнению со старым геномом, новый геном в среднем имеет более длинные гены и меньшие межгенные области (Таблица 1).Процент кодирования остается прежним.

18S, 28S и 5S рибосомные РНК (рРНК) были предсказаны с использованием rnammer (v1.2) ²⁸ . Последовательность 5.8S рРНК была извлечена из NCBI, затем произведен поиск по новому геному с помощью BLASTN, чтобы найти все копии. тРНК идентифицировали с помощью тРНКscan-SE (v1.23) ²⁹ . В новом геноме больше дублированных копий тРНК и рРНК (Таблица 1). 5 S рРНК находятся внутри, а 18S, 5.8S и 28S рРНК находятся на большинстве концов хромосом (рис.2). Две частичные 18S рРНК сидят на двух концах самого большого внутреннего разрыва на 5′-конце хромосомы 5 (рис. 2), что указывает на то, что незаполненный разрыв может быть вызван тандемными копиями рРНК. Если это так, он сделает эту область рибосомных РНК (28S + 5,8S + 18S) длиной 318 т.п.н., то есть примерно 86 копий рРНК.

Рис. 2

Круговой график пяти хромосом. Хромосомные последовательности представлены серым цветом в крайнем круге с промежутками в белых полосах, а теломеры — в красном. Внутренние треки организованы как: GC%, ARP / NEK, (ψ) обратные транскриптазы / рРНК, (ψ) VSP / HCMP, плотность кодирования, плотность SNP, области со сходством.Области со сходством представляют совпадения BLASTN с самим собой с идентичностью последовательностей> 95% и длиной> 2000 п.н. Круговой график был нарисован с помощью пакета R circlize (v0.4.8) ³⁹ .

Аннотации и распределение семейства генов

Giardia имеет большую группу белков, богатых цистеином, которые делятся на 3 подгруппы, включая вариантные поверхностные белки (VSP), мембранные белки с высоким содержанием цистеина (HCMP) и белки с высоким содержанием цистеина (HCPs). ). VSP секретируются на мембрану и, таким образом, несут 5′-сигнальный пептид и имеют определенный 3′-хвост с трансмембранным доменом, за которым следует пентапептидный мотив CRGKA.VSP без надлежащего сигнального пептида, предсказанные signalP (v5.0b) ³⁰ , были либо скорректированы на правильный стартовый кодон, если возможно, либо аннотированы как псевдоVSP (pVSP, ψVSP). Помимо отсутствия надлежащего сигнального пептида, ψVSP также имеют тенденцию располагаться в массивах без надлежащих стартовых кодонов. В итоге у нас есть 133 VSP по сравнению с 196 в старом геноме и еще 208 ψVSP.

Из 133 ВСП 38 в дублированных парах. 12 пар имеют ориентацию → ←, а 7 пар имеют ориентацию ← →.Среди 7 пар, направленных друг от друга, 4 пары содержат остаток обратной транскриптазы между ними, а одна содержит промежуточную киназу NEK (Таблица 2).

Таблица 2 Расположение пар ВСП.

Киназа NEK и произвольно названный белок 21.1 имеют общие домены анкирин-повторов, и в старом геноме имеется 179 киназ NEK и 242 белка 21.1. В новом геноме гены, содержащие анкирин-повтор, названы следующим образом: белки, содержащие как киназный домен, так и анкирин-повтор, называются киназами NEK, и их 184; Белки, содержащие только анкириновые повторы, называются белком 1 с анкириновыми повторами (ARP-1), и их 267 (+5 псевдокопий); Белки с анкириновым повтором, а также с доменом (ами) с цинковыми пальцами, называются белком 2 с анкириновыми повторами (ARP-2), и их 33; Белки с анкириновым повтором, а также с доменом (ами), отличным от домена цинкового пальца, называются белком 3 с анкириновым повтором (ARP-3), и их 5.Домены были найдены с помощью поиска HMMER3 (v3.0) ³¹ против Pfam (v31.0) ³² .

При сравнении геномов из разных изолятов Giardia уже наблюдалось, что консервативная синтения в геномах Giardia разрывается в областях, обогащенных мультигенными семействами, включая семейства богатых цистеином белков, NEK и ARP ³ . С помощью этого почти полного генома мы могли видеть, как эти семейства генов распределены по хромосомам (рис.2). Семейства генов расположены по всем хромосомам. Геном Giardia упакован генами, кодирующими 81% генома и небольшой межгенной областью. Однако области вокруг VSP имеют тенденцию быть бедными генами (Рис. 2, зеленые точки на кодирующей дорожке%), и эти области также имеют более высокую вариацию аллельной последовательности в картированных считываниях (Рис. 2, красные точки на дорожке SNP).

Роль гамма-лямблий в формировании вентрального диска Giardia lamblia | Паразиты и переносчики

Выращивание

G. lamblia трофозоитов

Трофозоитов G.lamblia WB (ATCC30957; American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA) выращивали в течение 72 часов при 37 ° C в среде TYI-S-33 (2% гидролизата казеина, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, 0,2%). % NaCl, 0,2% l-цистеина, 0,02% аскорбиновой кислоты, 0,2% K ₂ HPO ₄ , 0,06% KH ₂ PO ₄ , 10% телячьей сыворотки и 0,5 мг / мл бычьей желчи, pH 7,1 ) [22].

Giardia Синхронизация трофозоитов с использованием афидиколина и анализа проточной цитометрии

Для синхронизации Giardia , афидиколин (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) в концентрации 5 мкг / мл добавляли к клеткам, выросшим до примерно 60% конфлюэнтности. Контрольные клетки обрабатывали 0,05% ДМСО, который использовали для солюбилизации 5 мкг / мл афидиколина. После 6-часовой инкубации при 37 ° C среду заменяли свежей культуральной средой TYI-S-33, не содержащей лекарств, и инкубировали еще 3 часа.

Проточный цитометрический анализ различных клеток (обработанный ДМСО контроль, обработанный афидиколином и промытый афидиколином трофозоитов) выполняли, как описано ранее [3].Вкратце, собранные клетки ресуспендировали в 50 мкл культуральной среды TYI-S-33 и обрабатывали 150 мкл фиксатора клеток (1% Triton X-100, 40 мМ лимонной кислоты, 20 мМ двухосновного фосфата натрия и 200 мМ сахароза, pH 3,0) при комнатной температуре в течение 5 мин. Образцы разбавляли 350 мкл разбавляющего буфера [125 мМ MgCl ₂ в фосфатно-солевом буфере (PBS: 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10,1 мМ Na ₂ HPO ₄ и 2 мМ KH ₂ PO ₄ , pH 7,4)], а затем хранили при 4 ° C до использования.Фиксированные клетки реагировали с 2,5 мкг РНКазы A (Sigma-Aldrich) и 10 мкг / мл йодида пропидия (Sigma-Aldrich) в течение 30 мин при 37 ° C. Клетки оценивали относительно содержания в них ДНК с помощью проточной цитометрии и программного обеспечения FlowJO (FlowJo Llc, Ashland, OR, США).

Двумерный гель-электрофорез (2-DGE)

экстрактов Giardia и анализ изображений

Один миллиграмм белковых экстрактов был приготовлен из примерно 3 × 10 ⁸ трофозоитов, арестованных афидиколином (клетки G1 / S-фазы) и трофозоиты высвобождаются из опосредованного афидиколином ареста (клетки G2-фазы) путем ресуспендирования их в буфере для образцов 2-DGE (7 M мочевина, 2 M тиомочевина, 100 мМ DTT, 4.5% CHAPS и 40 мМ Tris). Полоски геля с иммобилизованным градиентом pH (IPG) (pH 3–10, 18 см; GE Healthcare, Упсала, Швеция) пропитывали экстрактами на ночь. Регидратированные полоски IPG обрабатывали для последовательного изоэлектрического фокусирования при 80 кВ. Разделение по второму измерению проводили при комнатной температуре на гелях для электрофореза (PAGE) 9-17% додецилсульфата натрия (SDS) -полиакриламидного геля (20 × 25 см). Полосы белка на геле визуализировали окрашиванием Кумасси. 2-ДГЭ эксперимент проводился дважды.Окрашенные гели сканировали с использованием денситометра для визуализации GS-710 (Bio-Rad, Hercules, Калифорния, США) и анализировали с помощью программного обеспечения для анализа изображений Melanie 5 (GE Healthcare). Нанесение надписей на изображения производилось с помощью программы Adobe Photoshop v.7.0. Анализ этих двумерных (2-D) гелей был выполнен в Yonsei Proteome Research Center (Сеул, Корея).

Жидкостная хроматография, масс-спектрометрия

Белковые пятна на 2D-геле вырезали и расщепляли трипсином. Обработанные трипсином белки анализировали с помощью квадрупольной времяпролетной (Q-TOF) масс-спектрометрии (MS) в дополнение к масс-спектрометрии с лазерной десорбцией и ионизацией с использованием матрицы.Спектры ионов продукта собирали в режиме сбора данных, зависящего от информации, и анализировали с помощью Q-TOF MS Agilent 6530 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США). Для наборов данных жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии Q-TOF (ЖХ-МС / МС) тандемные масс-спектры были отправлены в нашу внутреннюю поисковую систему Mascot (база данных NCBI NR загружена 31 июля 2009 г.). Для идентификации белков в качестве критерия значимого результата использовалась оценка ионов талисмана> 55.

Строительство

г.lamblia , экспрессирующие HA-меченный эпитопом Glγ-гиардин

Фрагмент ДНК гена Glγ-гиардина длиной 936 п.н. (ORF GiardiaDB, номер GL50803_17230) амплифицировали из геномной ДНК G. lamblia WB с помощью ПЦР с использованием двух праймеров, γ- giardin-NcoI-F и γ-giardin-HAX3-R (таблица 1). Сайты NcoI и NotI, расположенные на концах фрагмента ДНК Glγ-гиардина, были использованы для клонирования в соответствующие сайты плазмиды pGFP.pac [23], в результате чего была получена плазмида pGlγ-giardinHAX3.pac (Таблица 2).

Таблица 1 Праймеры и морфолино, использованные в этом исследовании Таблица 2 Штаммы и плазмиды, использованные в этом исследовании

Трофозоиты выращивали в течение 72 ч на среде TYI-S-33.Тридцать микрограмм эписомальной плазмиды pGlγ-giardinHAX3.pac трансфицировали в 1 × 10 ⁷ трофозоитов электропорацией в следующих условиях: 350 В, 1000 мкФ и 700 Ом (Bio-Rad). Трансфекцию проводили сразу 5 независимыми наборами трофозоитов Giardia . Трофозоиты, несущие плазмиду pGlγ-giardinHAX3.pac, были первоначально отобраны путем добавления пуромицина (AG Scientific, Сан-Диего, Калифорния, США) в среду TYI-S-33 до конечной концентрации 10 мкг / мл, а затем обогащены в среде. содержащие 50 мкг / мл пуромицина через 4–5 дней после трансфекции.Получено 4 линии Giardia , показывающих устойчивость к пуромицину. Среди них две клеточные линии Giardia продемонстрировали экспрессию HA-меченного Glγ-гиардина, как показано в вестерн-блот-анализе с использованием антител против HA. Giardia lamblia В качестве контроля использовали трофозоитов, несущих pΔ.pac [24].

Вестерн-блоттинг и образование антител

Экстракты клеток получали из различных клеток G. lamblia (клетки без плазмиды, клетки, несущие pGlγ-giardinHAX3.pac и клетки, несущие pΔ.pac) в PBS. Экстракты разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на мембрану из поливинилиденфторида (PVDF) (Millipore, Bedford, MA, USA). Мембрану инкубировали с моноклональными мышиными анти-HA (1: 1000; Sigma-Aldrich) в блокирующем растворе [забуференный трис-солевой раствор с твином 20 (TBST): 50 мМ трис-HCl, 5% обезжиренное молоко и 0,05% твин 20. ] при 4 ° C в течение ночи. После инкубации с вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), иммунореактивные белки визуализировали с использованием системы усиленной хемилюминесценции (ECL) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).Мембраны инкубировали в стрип-буфере (Thermo Fisher Scientific) при комнатной температуре в течение 20 минут, а затем реагировали с поликлональными крысиными антителами, специфичными к протеиндисульфидизомеразе 1 (PDI1; GiardiaDB ORF № GL50803_29487) G. lamblia (1: 10000) в качестве контроля загрузки. Поликлональные антитела крысы против GlPDI1 получали с использованием рекомбинантного белка GlPDI1 [25].

Для получения рекомбинантного белка G. lamblia cyclin B (Glcyclin B; GiardiaDB OFR no. GL50803_3977) были использованы праймеры 3977-F и 3977-R (таблица 1) для амплификации ДНК-фрагмента длиной 1026 п.н. B ген.Сайты HindIII и XhoI использовали для клонирования продуктов ПЦР в pET21b (Novagen, Дармштадт, Германия), получая pET-циклинB (таблица 2). Рекомбинантный белок Glcyclin B был сверхэкспрессирован в Escherichia coli BL21 (DE3) путем добавления 1 мМ изопропилтиогалактозида (IPTG) (Sigma-Aldrich), а затем был использован для получения поликлональных антител, специфичных к Glcyclin B, путем иммунизации крыс Sprague-Dawley. 3-недельные интервалы, 200 мкг на иммунизацию). Специфичность поликлональных антител против рекомбинантного глициклина B была подтверждена их реакцией с E.coli со сверхэкспрессией рекомбинантного Glcyclin B или экстракта Giardia (см. дополнительный файл 1: рисунок S1).

Иммунофлуоресцентный анализ (IFA)

Для исследования локализации Glγ-гиардина G. lamblia , экспрессирующий HA-меченный Glγ-гиардин, прикрепляли к предметным стеклам, покрытым _L -лизином, в увлажненной камере. Присоединенные клетки фиксировали охлажденным 100% -ным метанолом при -20 ° C в течение 10 минут и подвергали проницаемости с помощью PBS / 0,5% Triton X-100 в течение 10 минут.После 1 ч инкубации в блокирующем буфере (PBS, 5% козья сыворотка и 3% BSA) клетки реагировали в течение ночи с мышиными антителами против НА (1: 100; Sigma-Aldrich) и крысиными анти-Glγ-гиардином. поликлональные антитела (1: 100). После трех 5-минутных промываний PBS клетки инкубировали с Alexafluor 488-конъюгированным антимышиным IgG (1: 100; Molecular Probes, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) и Alexafluor 555-конъюгированным анти-крысиным IgG (1: 100). ; Molecular Probes) при 37 ° C в течение 1 ч. Слайды помещали в среду для фиксации против выцветания VECTASHIELD с 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).Затем слайды исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа Axiovert 200 (Carl Zeiss, Оберкохен, Германия).

Количественный анализ ПЦР в реальном времени

Суммарную РНК получали из клеток G1 / S-фазы и G2-фазы с использованием TRizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Пять микрограммов РНК были преобразованы в комплементарную ДНК (кДНК) с использованием системы обратной транскрипции Improm-II (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). ПЦР в реальном времени выполняли с использованием системы LightCycler и набора LightCycler 480 SYBR Green I Master (Roche Applied Science, Мангейм, Германия).Условия для ПЦР в реальном времени были следующими: предварительная инкубация при 95 ° C в течение 5 минут с последующими 45 циклами амплификации при 94 ° C в течение 1 минуты, 56 ° C в течение 1 минуты и 72 ° C в течение 1 минуты. Нуклеотидные последовательности прямого и обратного праймеров, используемых для ПЦР в реальном времени, перечислены в таблице 1. Транскрипт гена, связанного с актином G. lamblia (Glactin; GiardiaDB OFR № GL50803_15113), был использован для нормализации количества мРНК в образцы кДНК.

Нокдаун экспрессии Glγ-гиардина с использованием морфолино

Экспрессия Glγ-гиардина была снижена с использованием 25-мерного морфолино для открытой рамки считывания (ORF) Glγ-гиардина от стартового кодона (Таблица 1; Gene Tools Llc, Philomath, OR , СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ).Контрольный морфолино, неспецифический олигомер, использовали в качестве контроля (таблица 1). Морфолино добавляли к 5 × 10 ⁶ клеток до конечной концентрации 100 мкМ путем электропорации. Трансфицированные клетки выращивали в течение 48 часов, а затем анализировали на уровень Glγ-гиардина с помощью вестерн-блоттинга и IFA, как описано выше.

Сканирующая электронная микроскопия (SEM)

Обработанные морфолино клетки предварительно фиксировали в фиксирующем растворе Карновского (2% глутарового альдегида, 2% параформальдегида, 0,5% CaCl2 в растворе 0.1 M какодилатный буфер, pH 7,4) с последующей промывкой в ​​0,1 M какодилатном буфере (pH 7,4) и последующей фиксацией 1,33% тетроксидом осмия в 0,1 M какодилатном буфере (pH 7,4). После этого образцы обезвоживали в абсолютном этаноле. Для наблюдения с помощью SEM обезвоженные образцы повторно гидратировали изоамиловым спиртом и обрабатывали золотым покрытием 300 Å с использованием ионного устройства для нанесения покрытий (Leica EM ACE600; Leica Microsystems, Вена, Австрия).

Просвечивающая электронная микроскопия (ТЕМ)

Для просвечивающей электронной микроскопии обработанные морфолино клетки фиксировали 2% глутаровым альдегидом-2% параформальдегидом в растворе 0.1 М фосфатный буфер (pH 7,4). Их пост-фиксировали 1% OsO ₄ в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,4) в течение 2 ч и дегидратировали в возрастающей ступенчатой ​​серии (50–100%) этанола и пропитывали оксидом пропилена. Образцы заделывали с помощью набора Poly / Bed 812 (Polysciences Inc., Уоррингтон, Пенсильвания, США). После заливки образцы полимеризовали при 65 ° C в печи для электронного микроскопа (TD-700; Dosaka EM, Киото, Япония) в течение 24 ч. Затем срезы толщиной 70 нм дважды окрашивали 6% уранилацетатом и цитратом свинца (Fisher Scientific, Rockford, IL, USA) для контрастного окрашивания.Срезы были вырезаны на Leica EM UC-7 (Leica Microsystems) с использованием алмазного ножа и перенесены на медные сетки. Все шлифы наблюдались с помощью ПЭМ (JEM-1011; JEOL, Токио, Япония) при ускоряющем напряжении 80 кВ.

Анализ адгезии

Всего 5 × 10 ⁶ трофозоитов Giardia , обработанных контрольным морфолино или морфолино против Glγ-giardin, культивировали в среде TYI-S-33. После 48 ч культивирования культуральную среду отбрасывали для удаления неприсоединенных клеток и заменяли PBS.Пробирки инкубировали на льду в течение 20 минут для отделения прикрепленных клеток. Отделенные клетки собирали центрифугированием при 3000 × об / мин в течение 15 минут при 4 ° C. Количество клеток на миллилитр определяли с помощью гемоцитометра.

В качестве контроля, нокдаун экспрессии медианного связывающего тела белка G. lamblia (GlMBP; GiardiaDB ORF № GL50803_16343) [26] выполняли путем трансфекции морфолино анти-GlMBP (таблица 1) в трофозоитов G. lamblia . .Приверженность полученных трансфектантов также контролировали, как описано выше.

Определение популяции клеточной стадии и митотического индекса

трофозоитов G. lamblia

Клетки Giardia , обработанные контролем или морфолино против Glγ-гиардина, окрашивали Гимзой, и процент клеток на различных стадиях, то есть затем определяли интерфазу, митоз, цитокинез. Клетки прикрепляли к предметным стеклам, сушили на воздухе, а затем фиксировали 100% метанолом в течение 10 мин.Затем их окрашивали 10% раствором Гимзы в течение 40 мин и промывали дистиллированной водой. После закрепления с дибутилфталатом ксилолом (Sigma-Aldrich) предметные стекла наблюдали с помощью микроскопа Axiovert 200 (Carl Zeiss).

Через 48 часов после обработки контрольным морфолино или морфолино анти-Glγ-гиардин определяли соотношение клеток с двумя ядрами и клеток с четырьмя ядрами для мониторинга митоза, как описано ранее [27]. Фиксированные клетки помещали в среду для закрепления против выцветания VECTASHIELD с DAPI (Vector Laboratories).Количество клеток с четырьмя ядрами или двумя ядрами было подсчитано в общей сложности более 300 клеток на каждое состояние.

In vitro энцистация Giardi a трофозоитов

Для индукции энцистации in vitro трофозоиты переносили в среду энцистации (среда TYI-S-33 с 10 мг / мл бычьей желчи, pH 7,8) [28]. В различные моменты времени после инкубации в среде для энцистации клетки собирали центрифугированием при 3000 × об / мин в течение 15 минут при 4 ° C.Внутриклеточные уровни Glγ-гиардина определяли с использованием антител против Glγ-гиардина. Для мониторинга процесса инцистации внутриклеточный уровень белка 1 стенки кисты (CWP1) [29] был измерен в собранных G. lamblia методом вестерн-блоттинга с использованием антител против GlCWP1 [30]. Количество GlPDI1 отслеживали как контроль загрузки. Локализацию Glγ-гиардина в инцистирующих клетках также наблюдали с помощью IFA, как описано выше.

Статистический анализ

Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов.Чтобы определить статистическую значимость этих результатов, данные были проанализированы с использованием t-критериев для парных выборок. Различия со значениями P менее 0,05 считались значимыми. На рисунках и в таблицах две звездочки обозначают значения P менее 0,01, а одна звездочка указывает значения P между 0,01 и 0,05.

Паспорта безопасности патогенов: инфекционные вещества — Giardia lamblia

ПАСПОРТ БЕЗОПАСНОСТИ ОТ ПАТОГЕНОВ — ИНФЕКЦИОННЫЕ ВЕЩЕСТВА

РАЗДЕЛ I — ИНФЕКЦИОННЫЙ АГЕНТ

НАЗВАНИЕ : Лямблии лямблии

СИНОНИМ ИЛИ ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА : Лямблии кишечника, Лямблии двенадцатиперстной кишки ^{Сноска 1} , Лямблиоз ^{Сноска 1 Сноска 2} , Лямблиоз энтерит, Лямблиоз, кишечная лямблия, beaver feveris.

ХАРАКТЕРИСТИКИ : G. lamblia — жгутиковые кишечные простейшие паразиты ^{Footnote 1} . В жизненном цикле есть две стадии: подвижная вегетативная форма (трофозоит), которая находится в тонком кишечнике и отвечает за проявления болезни, и инфекционно-резистентная форма (киста), ответственная за передачу. Кисты представляют собой тонкостенные кисты овальной формы, длиной от 10 до 20 мкм, шириной 7-10 мкм и толщиной 0,3-0,5 мкм ^{Footnote 1Footnote 2} .Трофозоиты напоминают грушу или слезу и имеют длину 9–21 мкм, ширину 5–15 мкм и толщину 1-2 мкм. ^{Footnote 3} . Трофозоит — аэротолерантный анаэроб, которому необходима глюкоза в качестве источника углеводной энергии и который делится продольным бинарным делением каждые 9–12 часов. ^{Footnote 1} . Трофозоит имеет два ядра, расположенных спереди, а также четыре пары направленных назад жгутиков, которые помогают в передвижении и прикреплении к кишечному эпителию. ^{Footnote 1} .

РАЗДЕЛ II — ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОПАСНОСТИ

ПАТОГЕННОСТЬ / ТОКСИЧНОСТЬ : Большинство инфекций протекает бессимптомно. У пациентов с симптомами могут наблюдаться тошнота, озноб, субфебрильная температура, боль в эпигастрии и внезапное начало водянистой диареи. ^{Footnote 4} . Диарея часто носит взрывной характер и имеет неприятный запах без наличия крови, газов, вздутия живота, слизи или клеточного экссудата. ^{Footnote 4} . Большинство инфекций проходят спонтанно в течение шести недель. ^{Footnote 5} .Могут возникать хронические инфекции, а диарея приводит к обезвоживанию, мальабсорбции, потере веса и нарушению функции поджелудочной железы ^{Footnote 4} . Хронические инфекции могут длиться от месяцев до лет ^{Footnote 6} . G. lamblia обычно обнаруживается в верхних отделах тонкой кишки, но может быть обнаружен в желчном пузыре и желчевыводящих путях. ^{Footnote 3} .

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ : Лямблии инфицированы во всем мире ^{Footnote 2} , поражая людей всех возрастов с пиком в конце лета и осенью ^{Footnote 1} .Уровень распространенности в умеренном климате составляет 2-10% среди взрослых и 25% среди детей, тогда как в тропических странах 50-80% людей являются носителями. ^{Footnote 2} . G. lamblia является наиболее часто определяемым кишечным паразитом в США, а также в Канаде. ^{Footnote 7Footnote 8} . CDC сообщает о примерно 20 000 случаев в год в США. Согласно одному отчету из Онтарио, в Канаде уровень заболеваемости в период с 1990 по 1998 год составлял 25,8 случая на 100 000 населения. ^{Footnote 8} .В развитых странах инфекция чаще всего встречается среди детей в детских садах, путешественников, среди членов одной семьи, между мужчинами-гомосексуальными партнерами и лицами с ослабленным иммунитетом ^{Footnote 4Footnote 9-Footnote 13} . Питьевая неочищенная вода является распространенным источником инфекции и может привести к эпидемиям в масштабах всего сообщества. ^{Footnote 1Footnote 14} .

ДИАПАЗОН ХОЗЯЙСТВ : Люди и млекопитающие ( например, приматы, собаки, кошки, крупный рогатый скот, овцы, свиньи, грызуны, бобры и медведи) ^{Footnote 2Footnote 15} .

ИНФЕКЦИОННАЯ ДОЗА : добровольцы были экспериментально инфицированы всего 10 цистами. ^{Footnote 4Footnote 16} .

СПОСОБ ПЕРЕДАЧИ : Инфекционные цисты G. lamblia выделяются в большом количестве с фекалиями инфицированных людей, и они заражают руки, питьевую воду, бассейн ^{Footnote 17} и пищу ^{Footnote 2} . Они могут передаваться фекально-оральным путем или через загрязненную пищу и воду. ^{Footnote 4} .Сексуальное поведение, которое способствует передаче G. lamblia , включает орально-анальный, генитально-анальный и пальцевый анальный контакт ^{Footnote 5} . Загрязненная почва и фомиты также могут содержать инфекционные цисты. ^{Footnote 6Footnote 18} .

ПЕРИОД ИНКУБАЦИИ: От 7 до 14 дней ^{Сноска 7 Сноска 8} ; однако время от проглатывания цист до обнаружения цист может быть больше, чем инкубационный период, что может привести к тому, что проба стула будет отрицательной во время появления симптомов. ^{Footnote 8} .

КОММУНИКАЦИЯ : Может передаваться от человека к человеку, особенно от лиц с плохой гигиеной полости рта и фекалий, вызывая эпидемии. ^{Footnote 1Footnote 14} .

РАЗДЕЛ III — РАСПРОСТРАНЕНИЕ

РЕЗЕРВУАР : Люди (основной резервуар), собаки, кошки, бобры и другие животные ^{Сноска 14} .

ЗООНОЗ : Да, передается человеку от различных млекопитающих ^{Footnote 2} .

ВЕКТОРЫ : Мухи — возможные механические векторы ^{Сноска 2} .

РАЗДЕЛ IV — УСТОЙЧИВОСТЬ И ЖЕСТКОСТЬ

ЛЕКАРСТВЕННАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ : Чувствительность к метронидазолу, тинидазолу, нитазоксаниду, хинакрину, фуразолидону, парамомицину и альбендазолу ^{Footnote 1Footnote 19} .

УСТОЙЧИВОСТЬ К ДЕЗИНФЕКЦИОННЫМ СРЕДСТВАМ : Цисты относительно устойчивы к хлорированию ^{Сноска 1} , но цисты Giardia в воде можно инактивировать 4 мг / л хлора через 60 минут при 5 ° C, при уровнях pH 6, 7 и 8 ^{Сноска 20} .Концентрация хлора 8 мг / л инактивирует цисты Giardia при pH 6 и 7 после контакта в течение 10 минут и при pH 8 через 30 минут. Кроме того, при 25 ° C цисты Giardia погибают при воздействии 1,5 мг / л хлора в течение 10 минут при pH 6. ^{Footnote 20} . 6% H ₂ O ₂ может использоваться как средство для дезинфекции поверхностей или для дезинфекции разливов.

ФИЗИЧЕСКАЯ ИНАКТИВАЦИЯ : Лямблии инактивируются под действием УФ-излучения (10 ДжМ ^-2 ) ^{Сноска 21} .Кисты относительно устойчивы к озонолизу. ^{Footnote 1} . Кисты подвержены кипячению и замерзанию ^{Footnote 5} .

ВЫЖИВАНИЕ ВНЕ ХОЗЯЙСТВА : Кисты могут выжить в холодной воде от нескольких недель до месяцев ^{Footnote 1Footnote 2} . При 4 ۫ ºC цисты Giardia lamblia могут выжить 11 недель в воде, семь недель в почве и одну неделю в фекалиях крупного рогатого скота. ^{Footnote 18} . Они остаются заразными в течение значительно более короткого периода при более высоких температурах — т.е.е. 25 ºC ^{Сноска 18} . Трофозоиты не выживают в окружающей среде ^{Footnote 6} .

РАЗДЕЛ V — ПЕРВАЯ ПОМОЩЬ / МЕДИЦИНСКАЯ

НАБЛЮДЕНИЕ : Следите за симптомами. Поскольку время инкубации может быть короче периода, необходимого для обнаружения кист в кале, лямблиоз не следует исключать как диагностическую возможность, если один образец кала отрицательный в начале симптомов. Поскольку Giardia выделяется с перерывами, в 50–70% случаев Giardia будет обнаруживаться в одном образце стула и в 90% случаев после трех образцов. ^{Footnote 22} .Как правило, первоначальный диагноз ставится путем выявления трофозоитов или кист в образцах кала, двенадцатиперстной жидкости или ткани тонкой кишки при прямом микроскопическом исследовании. ^{Footnote 22} . Также используются другие методы, такие как определение растворимых антигенов стула с помощью иммуноферментного анализа (EIA) или методика полимеразной цепной реакции. ^{Footnote 1Footnote 2Footnote 14} .

Примечание. Не все методы диагностики доступны во всех странах.

ПЕРВАЯ ПОМОЩЬ / ЛЕЧЕНИЕ : Обезвоживание и электролитные нарушения следует лечить симптоматически. ^{Сноска 14} .У иммунокомпетентных хозяев инфекция купируется самостоятельно; медикаментозная терапия может сократить продолжительность симптомов и предотвратить передачу инфекции. ^{Footnote 4} . Метронидазол, тинидазол и нитазоксанид показаны для лечения первой линии. ^{Footnote 23} .

ИММУНИЗАЦИЯ : Нет.

PROPHYLAXIS : Нет.

РАЗДЕЛ VI — ЛАБОРАТОРНЫЕ ОПАСНОСТИ

ИНФЕКЦИИ, ПРИОБРЕТЕННЫЕ В ЛАБОРАТОРИИ : Зарегистрировано четыре случая лабораторных инфекций ^{Footnote 24} .Один случай лямблиоза был зарегистрирован у технолога клинической лаборатории, который обрабатывал образцы, многие из которых находились в негерметичных контейнерах. ^{Footnote 24-Footnote 26} . Паразит был обнаружен в стуле человека ^{Footnote 26} , и передача считалась воздушной. ^{Footnote 25} .

ИСТОЧНИКИ / ОБРАЗЦЫ : Кал, другие жидкости и ткани организма ^{Сноска 1 Сноска 14 Сноска 27} .

ОСНОВНЫЕ ОПАСНОСТИ : Проглатывание и возможный аэрозоль ^{Сноска 25-Сноска 27} .

ОСОБЫЕ ОПАСНОСТИ : Нет.

РАЗДЕЛ VII — КОНТРОЛЬ ВОЗДЕЙСТВИЯ / ЛИЧНАЯ ЗАЩИТА

КЛАССИФИКАЦИЯ ГРУПП РИСКА : Группа риска 2.

ТРЕБОВАНИЯ К СРЕДЕ : Помещения, оборудование и методы эксплуатации уровня 2 для работы с инфекционными или потенциально инфекционными материалами и животными ^{Сноска 28} .

ЗАЩИТНАЯ ОДЕЖДА : Лабораторный халат. Перчатки при неизбежном прямом контакте кожи с инфицированными материалами или животными Необходимо использовать средства защиты глаз там, где существует известный или потенциальный риск воздействия брызг. ^{Сноска 26 Сноска 28} .

ДРУГИЕ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ : Все процедуры, которые могут привести к образованию аэрозолей, или связаны с высокими концентрациями или большими объемами, должны проводиться в боксе биологической безопасности (BSC). Использование игл, шприцев и других острых предметов должно быть строго ограничено. Дополнительные меры предосторожности следует учитывать при работе с животными или крупномасштабной деятельности.

РАЗДЕЛ VIII — ОБРАЩЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ

РАЗЛИВЫ : Дайте аэрозолям осесть и, надев защитную одежду, аккуратно накройте разлив бумажными полотенцами и нанесите соответствующее дезинфицирующее средство, начиная с периметра и двигаясь к центру.Подождите достаточное время для контакта перед очисткой, а затем повторите ^{Footnote 28Footnote 29} .

УТИЛИЗАЦИЯ : Обеззараживайте все отходы, которые содержат инфекционные организмы или контактировали с ними, перед их утилизацией в автоклаве, химической дезинфекции, гамма-облучением или сжиганием. ^{Сноска 28} .

ХРАНЕНИЕ : Инфекционный агент должен храниться в герметичных контейнерах с соответствующей маркировкой. ^{Сноска 28} .

РАЗДЕЛ IX — НОРМАТИВНАЯ И ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ

ОБНОВЛЕНО : декабрь 2011 г.

ПОДГОТОВЛЕНО : Управление по регулированию патогенов, Агентство общественного здравоохранения Канады

Хотя информация, мнения и рекомендации, содержащиеся в этом Паспорте безопасности патогенов, собраны из источников, которые считаются надежными, мы не несем ответственности за точность, достаточность или надежность, а также за любые убытки или травмы, возникшие в результате использования информации.Часто обнаруживаются новые опасности, и эта информация может быть не полностью актуальной.

Авторские права ©
Агентство общественного здравоохранения Канады, 2011 г.
Канада

Дипломная работа или диссертация | Структурное исследование брюшного диска Giardia lamblia | ID: xw42n8213

1. Дом

Структурное исследование брюшного диска Giardia lamblia

Государственное депонирование

У вас нет доступа к существующим коллекциям.Вы можете создать новую коллекцию. Цитируемый URL: https://scholar.colorado.edu/concern/graduate_thesis_or_dissertations/xw42n8213

---

Абстракция

• Giardia lamblia — одноклеточный эукариотический паразит. Он поражает людей и является одной из самых распространенных паразитарных инфекций, передаваемых в США. Прикрепление к кишечному эпителию хозяина имеет важное значение для питательной формы лямблий, трофозоитов.Центром прикрепления является цитоскелет микротрубочек, основной структурой которого является вентральный диск. Вентральный диск представляет собой большое количество сильно декорированных микротрубочек, которые образуют куполообразную правостороннюю спираль. Использование изображений большой площади нескольких томограмм отрицательно окрашенных извлеченных вентральных дисков предоставило информацию о точном пути каждой микротрубочки в массиве. Это исследование предоставило новую информацию об общем количестве, длине и организации МП в этой большой структуре.Также было обнаружено, что вентральный диск состоит из шести структурно различных регионов, которые различаются с точки зрения расстояния между микротрубочками, кривизны микротрубочек, высоты микротрубочки, а также длины и морфологии поперечных мостиков. Микротрубочки вентрального диска непрерывны и проходят через множество участков по своей длине. Белковая отделка одной микротрубочки может претерпевать множественные структурные переходы и перестройки. Криоэлектронная томография и усреднение субобъема были использованы для получения трехмерных карт плотности четырех недавно идентифицированных вентральных областей диска.Эти эксперименты выявили присутствие белков меньшей плотности во всех четырех областях вентрального диска. Эти плотности расположены как на внешней, так и на внутренней поверхности MT и, как было обнаружено, локализуются в определенных протофиламентах. Было обнаружено, что расположение и размер этих плотностей варьирует как внутри, так и между вентральными областями диска. Одна плотность, расположенная на внутренней поверхности микротрубочек, известная как внутренний белок 5 микротрубочек Giardia (GMIP5), не изменялась внутри или между областями.Было обнаружено, что эта плотность наблюдается при каждом 8-нанометровом повторе вдоль микротрубочек и приблизительно равна размеру мономера тубулина. Полученная структурная информация была использована для сужения списка возможных белковых компонентов GMIP5 с семнадцати белков до шести. Эти шесть белков включают: аннексин альфа-2, аннексин альфа-3, аннексин альфа-5, аннексин альфа-17, DAP5374 и DAP13766.

Создатель

Дата выпуска

Академическая принадлежность

Советник

Член комитета

Учредитель степени

Год начала обучения

Субъект

Последнее изменение

Тип ресурса

Заявление о правах

Язык

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Информационный бюллетень по лямблиозу — Информационные бюллетени

Что такое лямблиоз?

• Лямблиоз — это инфекция, главным образом тонкая кишка, вызываемая паразитом Giardia lamblia .Сообщалось о лямблиозе у людей и различных животных.
• Лямблиоз может поразить любого; однако это чаще встречается у младенцев, детей младшего возраста и молодых людей.

Каковы симптомы?

• Наиболее частыми симптомами лямблиоза являются диарея, спазмы желудка, вздутие живота, тошнота, жидкий и бледный жирный стул, усталость и, если симптомы сохраняются, потеря веса.
• У некоторых людей симптомы отсутствуют, однако они могут передать болезнь другим.
• Первые признаки болезни могут появиться от 3 до 25 дней после заражения.
• Инфекция может длиться месяцами, если ее не лечить.

Как распространяется?

• Организм Giardia присутствует в фекалиях инфицированных людей и животных. Заражение происходит, когда человек контактирует с фекалиями и проглатывает паразита.
• Передача инфекции наиболее вероятна, если не мыть руки после посещения туалета или после смены подгузников; пить зараженную воду; купанием в загрязненных бассейнах; при работе с инфицированными животными; и через употребление пищи, зараженной инфицированным человеком.
• Передача чаще всего происходит при контакте от человека к человеку, в таких местах, как домашние хозяйства и детские сады.
• Передача может происходить при некоторых сексуальных практиках.

Кто подвергается риску?

Наиболее подвержены риску заражения лямблиозом:

• человек, контактирующих с инфицированными детьми, например, другие дети, родители и работники по уходу за детьми
• человек, пьющих загрязненную воду, например, туристы и туристы.

Как это предотвратить?

Во избежание заражения лямблиозом:

• Всегда тщательно мойте руки с мылом и проточной водой после: использования туалета, контакта с животными, смены подгузников, других воздействий фекалий, работы в саду; и перед приготовлением еды и напитков.
• Не пейте неочищенную воду из рек или озер. Кипячение воды из этих источников убьет лямблий и других паразитов. Таблетки для очистки воды могут убить Giardia , но не могут убить других паразитов.Некоторые фильтры для воды также могут удалять этих паразитов.
• Избегайте употребления некипяченой воды из-под крана и сырых продуктов во время путешествий в страны, где водоснабжение может быть небезопасным.

Во избежание распространения лямблиоза:

• Не оставляйте маленьких детей с диареей дома, не посещайте дошкольные учреждения, детские учреждения и игровые группы в течение 24 часов после того, как их диарея полностью прекратилась.
• Не готовьте еду или питье для других, пока у вас есть симптомы.
• Не используйте плавательные бассейны в течение как минимум двух недель после полного прекращения диареи.
• Не делитесь постельным бельем, полотенцами и столовыми приборами с другими, пока у вас есть симптомы.

Как диагностируется?

Лямблиоз можно точно диагностировать только при исследовании фекалий с помощью теста, назначенного врачом. Обратитесь к врачу, если у вас есть симптомы.

Как лечится?

Людям с диареей важно пить много жидкости, чтобы избежать обезвоживания. Лекарства, отпускаемые по рецепту, в том числе метронидазол и тинидазол, используются для лечения лямблиоза.

Каковы ответные меры общественного здравоохранения?

Лямблиоз является заболеванием, подлежащим уведомлению в Новом Южном Уэльсе. Лаборатории, подтверждающие диагноз, должны уведомить медицинские учреждения, которые принимают меры для предотвращения дальнейшего распространения инфекции.