Бактериофаг от клебсиеллы: Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный: цена, отзывы, инструкция

Содержание

Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Klebsiella polyvalent bacteriophage purified р-р д/приема внутрь, местн. и наружн. прим. 20 мл: фл. 4 шт. (36442)

Препарат используют для приема внутрь (через рот), в виде клизм, аппликаций, орошений, введения в полости ран, вагины, матки, носа, пазух носа, а также в дренированные полости: абсцессов, брюшную, плевральную, мочевого пузыря, почечной лоханки.

Внутрь препарат принимают натощак за 0,5-1 час до приема пищи.

Рекомендуемые дозировки препарата

Возраст пациента	Доза на 1 прием при различных способах введения препарата
Возраст пациента	внутрь (мл)	в клизме (мл)
0-6 мес	5	10
6-12 мес	10	20
от 1 года до 3 лет	15	20-30
от 3 до 8 лет	20	30-40
от 8 лет и старше	20-30	40-50

Лечение гнойно-воспалительных заболеваний с локализованными поражениями должно проводиться одновременно как местно, так и приемом препарата внутрь.

В случае обработки полости гнойного очага химическими антисептиками перед применением бактериофага она должна быть промыта стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида.

При лечении озены и склеромы препарат используют для промывания полости носа и слизистой оболочки верхних дыхательных путей, для введения в полости пазух носа (по клиническим показаниям), а также при поражении глотки, гортани, трахеи в виде ингаляций (без подогрева и использования ультразвука). Доза препарата для обработки слизистых носа и верхних дыхательных путей 10-20 мл. После промывания слизистых в полость носа по очереди в каждый носовой ход вводят турунды, смоченные препаратом, и оставляют на 1 час. Процедуру повторяют 2-3 раза в день в течение 20-40 дней. Поскольку озена и склерома являются хроническими заболеваниями, с целью профилактики обострений рекомендуется 1 раз в год проводить 20-40 дневные курсы лечения по вышеприведенной схеме.

При лечении ангин, фарингитов, ларингитов

препарат используют для полосканий полости рта и глотки 3 раза в день по 10-20 мл, курс лечения 7-10 дней.

При лечении бронхитов, пневмоний препарат принимают внутрь 3 раза в день по 10-20 мл, а также применяют в виде аэрозолей и ингаляций (без подогрева и использования ультразвука), курс лечения 15-20 дней.

При лечении отитов препарат используют для.промывания и введения в полость среднего уха по 2-5 мл 1-3 раза в день. Курс лечения 7-15 дней.

При лечении воспалений пазух носа препарат используют для промывания полости носа, носоглотки и пазух носа в дозе 5-10 мл и введения в пазухи 2-3 мл. Процедуру повторяют ежедневно однократно в течение 7-10 дней. Кроме того, препарат вводят в полость носа в виде турунд, смоченных бактериофагом, по очереди и в каждый носовой ход и оставляют в течение 0,5-1 часа. Процедуру повторяют 3 раза в день, курс лечения 7-15 дней.

При лечении стоматитов и хронических пародонтитов препарат используют в виде полосканий полости рта 3-4 раза в день в дозе 10-20 мл, а также введением в пародонтальные карманы турунд, пропитанных бактериофагом клебсиелл, на 5-10 мин, курс лечения 7-10 дней.

При конъюнктивитах и кератоконъюнктивитах препарат применяют по 2-3 капли 4-5 раз в день, курс лечения 5-7 дней; при гнойной язве роговицы — по 4-5 капель в день в течение 7-10 дней; при гнойных иридоциклитах — по 6-8 капель каждые 3 часа в сочетании с приемом внутрь в терапевтических дозировках в течение 7-10 дней.

При абсцессах после вскрытия и удаления гнойного содержимого препарат вводят в количестве меньшем, чем объем удаленного гноя ежедневно однократно, курс лечения 7-10 дней.

При перитонитах и плевритах препарат вводят в дренированные полости брюшную и плевральную через дренажные трубки ежедневно однократно 20-70 мл, курс лечения 10-15 дней.

При остеомиелитах препарат вводят в полость раны через турунды, дренажи в количестве 10-30 мл ежедневно однократно, курс лечения 15-20 дней.

При лечении нагноений ран препарат применяют в виде орошения, аппликаций, повязок, введения в дренаж в дозе 5-50 мл в зависимости от очага поражения не менее одного раза в день, курс лечения 10-15 дней.

При лечении гнойно-воспалительных гинекологических заболеваний (нагноений ран, эндометритов, вульвитов, бартолинитов, кольпитов, сальпингоофоритов) препарат используют для орошений, аппликаций, вводят в полости ран, вагины, матки по 5-20 мл один раз в день в течение 7-10 дней.

При циститах, пиелонефритах, уретритах препарат принимают внутрь в терапевтической дозе 3 раза в день за 1 час до еды в течение 10-20 дней. В том случае, если полость мочевого пузыря или почечной лоханки дренированы, препарат вводят через цистостому, или нефростому 1-3 раза в день по 20-50 мл в мочевой пузырь и 5-7 мл в почечную лоханку, курс лечения 7-15 дней.

При гастоэнтероколитах, панкреатитах, холециститах, а также дисбактериозах кишечника

бактериофаг принимают внутрь в возрастных дозировках 3 раза в день за 1 час до еды в течение 7-15 дней (по клиническим показаниям). При неукротимой рвоте препарат применяют в виде высоких клизм 2-3 раза в день по 20-40 мл. При дисбактериозе кишечника препарат может применяться с препаратами нормофлоры.

Для профилактики внутрибольничных хирургических инфекций препарат используют для обработки послеоперационных и свежеинфицированных ран в дозе 5-50 мл в зависимости от очага поражения ежедневно однократно в течение 5-7 дней.

Применение препарата у детей до 1 года (включая недоношенных детей).

При гастоэнтероколите, пневмонии и сепсисе новорожденных препарат применяют, через рот 2-3 раза в сутки по 3-5 мл за 30 минут до кормления. В случаях неукротимой рвоты препарат применяют в виде высоких клизм (через газоотводную трубку или катетер) ежедневно однократно в дозе 5-10 мл. Возможно сочетание ректального (в виде высоких клизм) и перорального применения препарата: курс лечения 7-15 дней (по клиническим показаниям). При рецидивирующем течении заболевания возможно повторное проведение курсов лечения.

С целью профилактики возникновения внутрибольничной инфекции у новорожденных детей бактериофаг применяют по эпидемическим показаниям внутрь по 3-5 мл 3 раза в день за 30 минут до кормления в течение всего срока пребывания в стационаре.

При лечении омфалитов, пиодермии, инфицированных ран бактериофаг применяют в виде аппликаций по-5-10 мл 2-3 раза в день (марлевую салфетку смачивают бактериофагом и накладывают на пупошгую ранку или пораженный участок кожи) в течение 7-15 дней.

Применение препарата не исключает использование других антибактериальных и противовоспалительных препаратов.

Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный 20 мл №4

ИНСТРУКЦИЯ
Форма выпуска
Раствор для приема внутрь, местного и наружного применения.

Упаковка
4 флакона по 20 мл.

Фармакологическое действие
Препарат вызывает специфический лизис бактерий Klebsiella pneumoniae.

Показания
Лечение и профилактика заболеваний, вызванных бактериями Klebsiella pneumonia в составе комплексной терапии:

Заболевания желудочно-кишечного тракта (гастроэнтероколит, холецистит, панкреатит, дисбактериоз кишечника).
Воспалительные заболевания новорожденных и детей раннего возраста (гастроэнтероколит, дисбактериоз кишечника, омфалит, пемфигус, пиодермия, септицемия и септикопиемия различной локализации).
Хирургические инфекции (нагноения ран, гнойные поражения кожи, ожоги, перитонит, плеврит, мастит, остеомиелит, абсцесс).
Урогенитальные инфекции (цистит, пиелонефрит, уретрит, эндометрит, вульвит, бартолинит, кольпит, сальпингоофорит).
Гнойно-воспалительные заболевания уха, горла, носа, пазух носа, ротовой полости, глотки, гортани, бронхов, легких и плевры (отит, ангина, фарингит, ларингит, стоматит, пародонтит, гайморит, фронтит, бронхит, пневмония, плеврит).

Посттравматический конъюнктивит, кератоконъюнктивит, гнойная язва роговицы и иридоциклит.
Профилактика внутрибольничных инфекций, вызванных клебсиеллами. Важным условием эффективной фаготерапии является предварительное определение фагочувствительности возбудителя.

Противопоказания
Гиперчувствительность к компонентам препарата.

Применение при беременности и кормлении грудью
Применение данного препарата при беременности и в период кормления грудью возможно при наличии инфекций, вызванных фагочувствительными штаммами клебсиелл (по рекомендации врача).

Особые указания
При помутнении препарат не применять!

Вследствие содержания в препарате питательной среды, в которой могут развиваться бактерии из окружающей среды, вызывая помутнение препарата, необходимо при вскрытии флакона соблюдать следующие правила:

Тщательно мыть руки.
Обработать колпачок спиртсодержащим раствором.
Снять колпачок, не открывая пробки.

Не класть пробку внутренней поверхностью на стол или другие предметы.
Не оставлять флакон открытым.
Вскрытый флакон хранить только в холодильнике.
При использовании малых доз (2-8 капель) препарат необходимо отбирать стерильным шприцем в объеме 0,5-1 мл.

Препарат из вскрытого флакона при соблюдении условий хранения, вышеперечисленных правил и отсутствии помутнения может быть использован в течение всего срока годности.

Влияние на способность к вождению автотранспорта и управлению механизмами

Отсутствует.

Состав
Раствор содержит:

Активное вещество: стерильный очищенный фильтрат фаголизата Klebsiella pneumonia 20 мл.

Вспомогательные вещества: 8-гидроксихинолина сульфата моногидрат 0,0001 г/мл.

Способ применения и дозы
Препарат используют для приема внутрь (через рот), в виде клизм, аппликаций, орошений, введения в полости ран, вагины, матки, носа, пазух носа, а также в дренированные полости: абсцессов, брюшную, плевральную, мочевого пузыря, почечной лоханки.

Bнутрь препарат принимают натощак за 0,5-1 час до приема пищи.

Рекомендуемые дозы препарата:

Возраст пациента 0-6 мес — 5 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 10 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента 6-12 мес — 10 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 20 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента от 1 года до 3 лет — 15 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 20-30 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента от 3 до 8 лет — 20 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 30-40 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента от 8 лет и старше — 20-30 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 40-50 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Лечение гнойно-воспалительных заболеваний с локализованными поражениями должно проводиться одновременно как местно, так и приемом препарата внутрь.

При лечении ангин, фарингитов, ларингитов препарат используют для полосканий полости рта и глотки 3 раза в день по 10-20 мл, курс лечения 7-10 дней.

При лечении бронхитов, пневмоний препарат принимают внутрь 3 раза в день по 10-20 мл, а также применяют в виде ингаляций (без подогрева и использования ультразвука), курс лечения 15-20 дней.

При лечении отитов препарат используют для промывания и введения в полость среднего уха по 2-5 мл 1-3 раза в день. Курс лечения 7-15 дней.

При лечении воспалений пазух носа препарат используют для промывания полости носа, носоглотки и пазух носа в дозе 5-10 мл и введения в пазухи 2-3 мл. Процедуру повторяют ежедневно однократно в течение 7-10 дней. Кроме того, препарат вводят в полость носа в виде турунд, смоченных бактериофагом, по очереди в каждый носовой ход и оставляют в течение 0,5-1 часа. Процедуру повторяют 3 раза в день, курс лечения 7-15 дней.

При лечении стоматитов и хронических генерализованных пародонтитов препарат используют в виде полосканий полости рта 3-4 раза в день в дозе 10-20 мл, а также введением в пародонтальные карманы турунд, пропитанных бактериофагом клебсиелл, на 5-10 мин, курс лечения 7-10 дней.

При конъюнктивитах и кератоконъюнктивитах, препарат применяют по 2-3 капли 4-5 раз в день, курс лечения 5-7 дней; при гнойной язве роговицы — по 4-5 капель в день в течение 7-10 дней, при гнойных иридоциклитах — по 6-8 капель каждые 3 часа в сочетании с приемом внутрь в терапевтических дозировках в течение 7-10 дней.

При абсцессах после вскрытия и удаления гнойного содержимого препарат вводят в количестве меньшем, чем объем удаленного гноя ежедневно однократно, курс лечения 7-10 дней.

При перитонитах и плевритах препарат вводят в дренированные полости -брюшную и плевральную через дренажные трубки ежедневно однократно 20-70 мл, курс лечения 10-15 дней.

При остеомиелитах препарат вводят в полость раны через турунды, дренажи в количестве 10-30 мл ежедневно однократно, курс лечения 15-20 дней.

При лечении нагноений ран препарат применяют в виде орошения, аппликаций, повязок, введения в дренаж в дозе 5-50 мл в зависимости от очага пораженияне менее одного раза в день, курс лечения 10-15 дней.

При циститах, пиелонефритах, уретритах препарат принимают внутрь в терапевтической дозе 3 раза в день за 1 час до еды в течение 10-20 дней. В том случае, если полость мочевого пузыря или почечной лоханки дренированы, препарат вводят через цистостому или нефростому 1-3 раза в день по 20-50 мл в мочевой пузырь и 5-7 мл в почечную лоханку, курс лечения 7-15 дней.

При гастроэнтероколитах, панкреатитах, холециститах, а также дисбактериозах кишечника бактериофаг принимают внутрь в возрастных дозировках 3 раза в день за 1 час до еды в течение 7-15 дней (по клиническим показаниям). При неукротимой рвоте препарат применяют в виде высоких клизм 2-3 раза в день по 20-40 мл. При дисбактериозе кишечника препарат может применяться с препаратами нормофлоры.

Для профилактики внутрибольничных хирургических инфекций препарат используют для обработки послеоперационных и свежеинфицированных ран в дозе 5 -50 мл в зависимости от очага поражения ежедневно однократно в течение 5-7 дней.

Применение препарата у детей до 1 года (включая недоношенных детей).

При гастроэнтероколите, пневмонии и сепсисе новорожденных препарат применяют через рот 2-3 раза в сутки по 3-5 мл за 30 минут до кормления. В случаях неукротимой рвоты препарат применяют в виде высоких клизм (через газоотводную трубку или катетер) ежедневно однократно в дозе 5-10 мл. Возможно сочетание ректального (в виде высоких клизм) и пероралыюго применения препарата. Курс лечения 7-15 дней (по клиническим показаниям). При рецидивирующем течении заболевания возможно повторное проведение курсов лечения.

С целью профилактики возникновения внутрибольничной инфекции у новорожденных детей бактериофаг применяют по эпидемическим показаниям внутрь по 3-5 мл 3 раза в день за 30 минут до кормления в течение всего срока пребывания в стационаре.

При лечении омфалитов, пиодермии, инфицированных ран бактериофаг применяют в виде аппликаций по 5-10 мл 2-3 раза в день (марлевую салфетку смачивают бактериофагом и накладывают на пупочную ранку или пораженный участок кожи) в течение 7-15 дней.

Побочные действия
Не установлены.

Лекарственное взаимодействие
Применение препарата возможно в сочетании с другими лекарственными ср

Страница не найдена | Ліки-Інфо

ДОСТАВКА ТОВАРА ПО ВСЕЙ УКРАИНЕ

Авдеевка, Александрия, Александровск, Алмазная, Алупка, Алушта, Алчевск, Амвросиевка, Ананьев, Андрушёвка, Антрацит, Апостолово, Армянск, Артёмово, Артёмовск, Артёмовск, Арциз, Ахтырка, Балаклея, Балта, Бар, Барановка, Барвенково, Батурин, Бахмач, Бахчисарай, Баштанка, Белая Церковь, Белгород, Белз, Белицкое, Белогорск, Белозёрское, Белополье, Беляевка, Бердичев, Бердянск, Берегово, Бережаны, Березань, Березно, Березо́вка, Берестечко, Берислав, Бершадь, Бобринец, Бобрка, Бобровица, Богодухов, Богуслав, Болград, Болехов, Борзна, Борислав, Борисполь, Борщёв, Боярка, Бровары, Броды, Брянка, Бурштын, Бурынь, Буск, Буча, Бучач, Валки, Васильевка, Васильков, Ватутино, Вахрушево, Вашковцы, Великие Мосты, Верхнеднепровск, Верховцево, Вижница, Вилково, Винники, Винница, Виноградов, Вишнёвое, Владимир, Вознесенск, Волноваха, Волочиск, Волчанск, Вольногорск, Вольнянск, Ворожба, Вышгород, Гадяч, Гайворон, Гайсин, Галич, Геническ, Герца, Глобино, Глухов, Глиняны, Гнивань, Голая Пристань, Горловка, Горное, Горняк, Городенка, Городище, Городня, Городок, Городок, Горохов, Гребёнка, Гуляйполе, Дебальцево, Деражня, Дергачи, Джанкой, Дзержинск, Димитров, Днепродзержинск, Днепропетровск, Днепрорудное, Добромиль, Доброполье, Докучаевск, Долина, Долинская, Донецк, Дрогобыч, Дружба, Дружковка, Дубляны, Дубно, Дубровица, Дунаевцы, Евпатория, Енакиево, Жашков, Ждановка, Жёлтые Воды, Жидачов, Житомир, Жмеринка, Жолква, Залещики, Запорожье, Заставна, Збараж, Зборов, Звенигородка, Здолбунов, Зеленодольск, Зеньков, Зимогорье, Змиёв, Знаменка, Золотое, Золотоноша, Золочев, Зоринск, Зугрэс, Ивано, Измаил, Изюм, Изяслав, Иловайск, Ильинцы, Ильичёвск, Инкерман, Ирмино, Ирпень, Иршава, Ичня, Кагарлык, Казатин, Калиновка, Калуш, Каменец, Каменка, Каменка, Каменка, Камень, Канев, Карловка, Каховка, Керчь, Киверцы, Киев, Килия, Кировоград, Кировское, Кицмань, Кобеляки, Ковель, Кодыма, Коломыя, Комсомольск, Конотоп, Константиновка, Корец, Коростень, Коростышев, Корсунь, Корюковка, Косов, Костополь, Котовск, Краматорск, Красилов, Красноармейск, Красноград, Краснодон, Краснопартизанск, Красноперекопск, Красный Лиман, Красный Луч, Кременец, Кременчуг, Кривой Рог, Кролевец, Кузнецовск, Купянск, Ладыжин, Лановцы, Лебедин, Лисичанск, Лозовая, Лохвица, Лубны, Луганск, Лутугино, Луцк, Львов, Любомль, Люботин, Малин, Марганец, Мариуполь, Макеевка, Малая Виска, Мелитополь, Мена, Мерефа, Миргород, Мироновка, Миусинск, Могилёв, Молодогвардейск, Молочанск, Монастыриска, Монастырище, Мостиска, Мукачево, Надворная, Николаев, Николаев, Никополь, Нежин, Немиров, Нетешин, Новая Каховка, Новая Одесса, Новый Буг, Новоазовск, Нововолынск, Новгород, Новогродовка, Новомиргород, Новоград, Новодружеск, Новоднестровск, Новомосковск, Новопсков, Новоселица, Новоукраинка, Новый Роздол, Носовка, Обухов, Овруч, Одесса, Орджоникидзе, Орехов, Острог, Очаков, Павлоград, Первомайск, Первомайск, Первомайский, Перевальск, Перемышляны, Перечин, Перещепино, Переяслав, Першотравенск, Петровское, Пирятин, Погребище, Подволочиск, Подгайцы, Подгородное, Пологи, Полонное, Полтава, Попасная, Почаев, Приволье, Прилуки, Приморск, Припять, Пустомыты, Путивль, Пятихатки, Рава, Радехов, Радомышль, Радивилов, Рахов, Ржищев, Рогатин, Ровеньки, Ровно, Рожище, Ромны, Рубежное, Рудки, Саки, Самбор, Сарны, Свалява, Сватово, Свердловск, Светловодск, Севастополь, Северодонецк, Седнев, Селидово, Семёновка, Середина, Симферополь, Синельниково, Скадовск, Скалат, Сквира, Сколе, Славута, Славутич, Славянск, Смела, Снежное, Снигирёвка, Снятын, Сокаль, Сокиряны, Соледар, Старобельск, Староконстантинов, Старый Крым, Старый Самбор, Стаханов, Сторожинец, Стрый, Судак, Сумы, Суходольск, Счастье, Таврийск, Тальное, Тараща, Татарбунары, Теплодар, Тернополь, Терновка, Тетиев, Тысменица, Тлумач, Теребовля, Тростянец, Трускавец, Токмак, Торез, Тульчин, Тячев, Угледар, Угнев, Узин, Украинка, Ужгород, Умань, Устилуг, Фастов, Феодосия, Харцызск, Харьков, Херсон, Хмельник, Хмельницкий, Хорол, Хотин, Христиновка, Хуст, Хыров, Цюрупинск, Червоноград, Червонозаводское, Червонопартизанск, Черкассы, Чернигов, Чернобыль, Черновцы, Чигирин, Чоп, Чортков, Чугуев, Шаргород, Шахтёрск, Шепетовка, Шостка, Шпола, Шумск, Щёлкино, Щорс, Энергодар, Южное, Южноукраинск, Яворов, Яготин, Ялта, Ямполь, Яремче, Ясиноватая

инструкция по применению, аналоги, статьи » Справочник ЛС

Внутрь. Энтероколит, дисбактериоз кишечника — 3 раза в день за 1 ч до еды в течение 7-15 дней. На 1 прием до 6 мес — 5мл, 6-12 мес — 10 мл, от 1 года до 3 лет — 15 мл, от 3 до 8 лет — 20 мл, от 8 лет и старше — 30 мл. Цистит, пиелонефрит, уретрит — в течение 10-20 дней. Ректально 1 раз в день (в виде клизмы) в сочетании с двукратным приемом внутрь. На 1 прием до 6 мес — 10 мл; 6-12 мес — 20 мл; от 1 года до 3 лет — 30 мл; от 3 до 8 лет — 40 мл; от 8 лет и старше — 50 мл.
Местно в течение 7-20 дней при терапии гнойно-воспалительных заболеваний с локализованными поражениями в сочетании с приемом внутрь. В случае обработки полости гнойного очага химическими антисептиками перед применением бактериофага полость промыть стерильным 0,9% раствором NaCl.
Гнойные раны — в виде орошения, аппликаций, повязок, введение через дренаж не менее 1 раза в день. При абсцессах после вскрытия и удаления гнойного содержимого препарат вводят в количестве меньшем, чем объем удаленного гноя. В дренированные полости ежедневно однократно — 20-200 мл.
Остеомиелит — 10-30 мл в полость раны через турунду, дренаж. Гнойно-воспалительные гинекологические заболевания — 5-10 мл ежедневно 1 раз в день в полость вагины, матки.
Гнойно-воспалительные заболевания ЛОР-органов — 2-10 мл 1-3 раза в день в полости среднего уха, носа. Бактериофаг используют для полоскания, промывания, закапывания, введения смоченных турунд (оставляя их на 1 ч).
Цистит, пиелонефрит, уретрит — 20-50 мл в мочевой пузырь и 5-7 мл в почечную лоханку через цистостому или нефростому.
Детям до 6 мес. Сепсис, энтероколит новорожденных, включая недоношенных детей, 2-3 раза в сутки в виде суппозиториев или высоких клизм (через газоотводную трубку или катетер). При отсутствии рвоты и срыгивания препарат применяют внутрь, смешивая с грудным молоком. Возможно сочетание ректального и перорального применения препарата. Курс лечения — 5-15 дней, при рецидивирующем течении заболевания возможно проведение повторных курсов лечения. Для профилактики сепсиса и энтероколита при внутриутробном инфицировании или опасности возникновения внутрибольничной инфекции у новорожденных детей клебсифаг применяется в виде суппозиториев или клизм 2 раза в день в течение 5-7 дней.
Омфалит, пиодермия, инфицированные раны — 2 раза в день ежедневно в виде аппликации (марлевую салфетку смочить бактериофагом и наложить на пупочную ранку или пораженный участок кожи).

Ростех разработал первый в мире универсальный бактериофаг для борьбы с инфекциями

Научно-производственное объединение «Микроген» Национальной иммунобиологической компании («Нацимбио») разработало универсальный лекарственный препарат, позволяющий одной капсулой заменить прием комплекса традиционных противомикробных средств от инфекционных заболеваний. Препарат поражает только бактериальные клетки, не затрагивая необходимую для организма микрофлору.

Препарат представляет собой капсулу перорального применения, содержащую специализированный комплекс бактериофагов в сухом виде, противостоящий заболеваниям, вызванным несколькими возбудителями одновременно. Это позволяет исключить необходимость приема комплекса медикаментов для лечения и профилактики каждого заболевания по отдельности.

Действие препарата, в отличие от традиционных противомикробных средств, включая антибиотики, основано на адресном уничтожении исключительно вредоносных клеток возбудителя. Бактериофаги не затрагивают «полезную» для организма микрофлору и не обладают побочным действием, что исключает возможность дисбактериоза и появления осложнений в работе жизненно-важных органов: печени, почек, кишечника. После уничтожения патогенных бактерий, препарат полностью выводится из организма естественным путем.

Аналогичной разработки нет нигде в мире – одна капсула включила противомикробный комплекс бактериофагов для профилактики и борьбы с целым рядом распространенных бактерий
Кирилл Гайдаш, гендиректор НПО «Микроген»

«Аналогичной разработки нет нигде в мире – одна капсула включила противомикробный комплекс бактериофагов для профилактики и борьбы с целым рядом распространенных бактерий. Препарат уже создан и поступит на рынок после прохождения необходимых исследований и государственной регистрации. В настоящий момент успешно пройдены доклинические и первая фаза клинических испытаний, показавшие его безопасность», — отметил генеральный директор НПО «Микроген» Кирилл Гайдаш.

Разработка Ростеха позволит проводить лечение и профилактику заболеваний, вызываемых бактериями рода стафилококков (лат. Staphylococcus), стрептококков (Streptococcus), протеи (Proteus — P. vulgaris, P. mirabilis), клебсиеллы (Klebsiella pneumoniae), а также синегнойной (Pseudomonas aeruginosa) и кишечной палочки (Escherichia coli).

Данные бактерии являются причиной возникновения целого ряда ЛОР — заболеваний (ангина, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, пневмония, плеврит), хирургических и урогенитальных инфекций (абсцесс, гидроаденит, парапроктит, мастит, остеомиелит, цистит, пиелонефрит, эндометрит и другие), различного рода генерализованных септических и гнойно-воспалительных заболеваний новорожденных.

«Пневмо 23» или «Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный»? – meds.is

Сравнение эффективности Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Эффективность у Пневма 23 достотаточно схожа с Бактериофагом клебсиеллом поливалентным очищенным – это означает, что способность лекарственного вещества оказывать максимально возможное действие схоже.

Например, если терапевтический эффект у Пневма 23 более выраженный, то при применении Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла даже в больших дозах не получится добиться данного эффекта.

Также скорость терапии – показатель быстроты терапевтического действия у Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла примерно одинаковы. А биодоступность, то есть количество лекарственного вещества, доходящее до места его действия в организме, схожа. Чем выше биодоступность, тем меньше его потерь будет при усвоении и использовании организмом.

Сравнение безопасности Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Безопасность препарата включает множество факторов.

При этом у Пневма 23 она достаточно схожа с Бактериофагом клебсиеллом поливалентным очищенным. Важно, где метаболизируется препарат: лекарственные вещества выделяются из организма либо в неизмененном виде, либо в виде продуктов их биохимических превращений. Метаболизм протекает спонтанно, но чаще всего задействует основные органы, такие как печень, почки, лёгкие, кожу, мозг и другие. При оценивании метаболизма у Пневма 23, также как и у Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла мы смотрим, какой орган является метаболизирующим и наколько критично действие на него.

Соотношение риска к пользе – это когда назначение лекарственного препарата нежелательно, но оправдано при определенных условиях и обстоятельствах, с обязательным соблюдением осторожности применения. При этом у Пневма 23 нет никаих рисков при применении, также как и у Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла.

Также при рассчете безопасности учитывается проявляются ли только аллергические реакции или же возможная дисфункция основных органов. В прочем как и обратимость последствий от использования Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла.

Сравнение противопоказаний Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Исходя из инструкции. Количество противопоказаний у Пневма 23 достаточно схоже с Бактериофагом клебсиеллом поливалентным очищенным и составляет малое количество. Это и перечень симптомов с синдромами, и заболевания, различные внешних и внутренние условия, при которых применение Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла может быть нежелательным или недопустимым.

Сравнение привыкания у Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Как и безопасность, привыкание тоже включает множество факторов, которые необходимо учитывать при оценивании препарат.

Так совокупность значения таких параметров, как «cиндром отмены» и «развитие резистентности», у Пневма 23 достаточно схоже со аналогичными значения у Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла. Синдром отмены – это патологическое состояние, возникающее после прекращения поступления в организм веществ, вызывающих привыкание или зависимость. А под резистентностью понимают изначальную невосприимчивость к препарату, этим она отличается от привыкания, когда невосприимчивость к препарату развивается в течение определенного периода времени. Наличие резистентности можно констатировать лишь в том случае, если была сделана попытка увеличить дозу препарата до максимально возможной. При этом у Пневма 23 значения «синдрома отмены» и «резистентности» достотачно малое, впрочем также как и у Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла.

Сравнение побочек Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Побочки или нежелательные явления – это любое неблагоприятное с медицинской точки зрения событие, возникшее у субъекта, после введения препарата.

У Пневма 23 состояния нежелательных явлений почти такое же, как и у Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла. У них у обоих количество побочных эффектов малое. Это подразумевает, что частота их проявления низкая, то есть показатель сколько случаев проявления нежелательного эффекта от лечения возможно и зарегистрировано – низкий. Нежелательное влияние на организм, сила влияния и токсическое действие у Пневма 23 схоже с Бактериофагом клебсиеллом поливалентным очищенным: как быстро организм восстановиться после приема и восстановиться ли вообще.

Сравнение удобства применения Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Это и подбор дозы с учетом различных условий, и кратность приемов. При этом важно не забывать и про форму выпуска препарата, ее тоже важно учитывать при составлении оценки.

Удобство применения у Пневма 23 примерно одинаковое с Бактериофагом клебсиеллом поливалентным очищенным. При этом они не являются достаточно удобными для применения.

Рейтинг препаратов составлен опытными фармацевтами, изучающий международные исследования. Отчет сгенерирован автоматически.

Дата последнего обновления: 2021-01-10 10:01:01

Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный фл.(р-р местно, орал.) 20мл №4

Bнутрь препарат принимают натощак за 0,5-1 час до приема пищи.

Рекомендуемые дозы препарата:

Возраст пациента 0-6 мес — 5 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 10 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента 6-12 мес — 10 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 20 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента от 1 года до 3 лет — 15 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 20-30 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента от 3 до 8 лет — 20 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 30-40 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).
Возраст пациента от 8 лет и старше — 20-30 доз на 1 прием при введении препарата внутрь (мл) — 40-50 доз на 1 прием при введении препарата в клизме (мл).

При лечении озены и склеромы препарат используют для промывания полости носа и слизистой оболочки верхних дыхательных путей, для введения в полости пазух носа (по клиническим показаниям), а также при поражении глотки, гортани, трахеи в виде ингаляций (без подогрева и использования ультразвука). Доза препарата для обработки слизистых носа и верхних дыхательных путей 10-20 мл. После промывания слизистых в полость носа по очереди в каждый носовой ход вводят турунды, смоченные препаратом, и оставляют на 1 час. Процедуру повторяют 2-3 раза в день в течение 20-40 дней. Поскольку озена и склерома являются хроническими заболеваниями, с целью профилактики обострений рекомендуется 1 раз в год проводить 20-40 дневные курсы лечения по вышеприведенной схеме.

При лечении ангин, фарингитов, ларингитов препарат используют для полосканий полости рта и глотки Зраза в день по 10-20 мл, курс лечения 7-10 дней.

При лечении бронхитов, пневмоний препарат принимают внутрь 3 раза в день по 10-20 мл, а также применяют в виде аэрозолей и ингаляций (без подогрева и использования ультразвука), курс лечения 15-20 дней.

При лечении отитов препарат используют для.промывания и введения в полость среднего уха по 2-5 мл 1-3 раза в день. Курс лечения 7-15 дней.

При лечении воспалений пазух носа препарат используют для промывания полости носа, носоглотки и пазух носа в дозе 5-10 мл и введения в пазухи 2-3 мл. Процедуру повторяют ежедневно однократно в течение 7-10 дней. Кроме того, препарат вводят в полость носа в вице турунл, смоченных бактериофагом, по очереди и в каждый носовой ход и оставляют в течение 0,5-1 часа. Процедуру повторяют 3 раза в день, курс лечения 7-15 дней.

При лечении стоматитов и хронических пародонтитов препарат используют в виде полосканий полости рта 3-4 раза в день в дозе 10-20 мл, а также введением в пародонтальные карманы турунд, пропитанных бактериофагом клебсиелл, на 5-10 мин, курс лечения 7-10 дней.

При конъюнктивитах и кератоконъюнктивитах препарат применяют по 2-3 капли 4-5 раз в день, курс лечения 5-7 дней; при гнойной язве роговицы — по 4-5 капель в день в течение 7-10 дней; при гнойных иридоциклитах — по 6-8 капель каждые 3 часа в сочетании с приемом внутрь в терапевтических дозировках в течение 7-10 дней.

При перитонитах и плевритах препарат вводят в дренированные полости брюшную и плевральную через дренажные трубки ежедневно однократно 20-70 мл, курс лечения 10-15 дней.

При лечении нагноений ран препарат применяют в виде орошения, аппликаций, повязок, введения в дренаж в дозе 5-50 мл в зависимости от очага поражения не менее одного раза в день, курстечения 10-15 дней.

При циститах, пиелонефритах, уретритах препарат принимают внутрь в терапевтической дозе 3 раза в день за 1 час до еды в течение 10-20 дней. В том случае, если полость мочевого пузыря или почечной лоханки дренированы, препарат вводят через цистостому, или нефростому 1-3 раза в день по 20-50 мл в мочевой пузырь и 5-7 мл в почечную лоханку, курс лечения 7-15 дней.

При гастоэнтероколитах, панкреатитах, холециститах, а также дисбактериозах кишечника бактериофаг принимают внутрь в возрастных дозировках 3 раза в день за 1 час до еды в течение 7-15 дней (по клиническим показаниям). При неукротимой рвоте препарат применяют в виде высоких клизм 2-3 раза в день по 20-40 мл. При дисбактериозе кишечника препарат может применяться с препаратами нормофлоры.

Для профилактики внутрибольничных хирургических инфекций препарат используют для обработки послеоперационных и свежеинфицированных ран в дозе 5-50 мл в зависимости от очага поражения ежедневно однократно в течение 5-7 дней.

Применение препарата у детей до 1 года (включая недоношенных детей).

При гастоэнтероколите, пневмонии и сепсисе новорожденных препарат применяют, через рот 2-3 раза в сутки по 3-5 мл за 30 минут до кормления. В случаях неукротимой рвоты препарат применяют в виде высоких клизм (через газоотводную трубку или катетер) ежедневно однократно в дозе 5-10 мл. Возможно сочетание ректального (в виде высоких клизм) и перорального применения препарата: Курс лечения 7-15 дней-(по клиническим показаниям). При рецидивирующем течении заболевания возможно повторное проведение курсов лечения.

При лечении омфалитов, пиодермии, инфицированных ран бактериофаг применяют в виде аппликаций по-5-10 мл 2-3 раза в день (марлевую салфетку смачивают бактериофагом и накладывают на пупошгую ранку или пораженный участок кожи) в течение 7-15 дней.

Характеристика четырех вирулентных бактериофагов Klebsiella pneumoniae и оценка их потенциального использования в комплексных препаратах фагов | Virology Journal

Изоляты бактерий

Клинические штаммы Klebsiella pneumoniae были получены из коллекции «МикроМир». Все штаммы исследовали на масс-спектрометре MALDI-TOF Microflex (Bruker, США) и с помощью биохимических тестов (MIKROLATEST, Erba Mannheim) с последующим анализом на спектрофотометре Multiskan Ascent (Thermo Scientific, США) перед их добавлением в коллекцию.Штаммы были получены из:

Клинические изоляты из Тулы; Серпухов; Москва; Пущино; город Уфа;
Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени М.В. Кулакова;
Московский городской научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н. В. Склифосовского;
Клиническая больница No.83 ФМБА, Москва;
Городская клиническая больница № 67 в Москве.

Штаммы являются клиническими и были получены от многих пациентов в течение нескольких лет, что позволяет говорить об актуальности коллекции и ее соответствии текущему спектру циркулирующих штаммов. Более подробная информация о характеристиках бактериальных штаммов, включая результаты MALDI-TOF и MIKROLATEST, включена в Дополнительный файл 1.

Для выделения и получения бактериофагов и проведения экспериментов использовали четыре штамма: Kl 327, Kl 325, Kl 315 и Kl 263. Эти штаммы используются в лаборатории как наиболее удобные для производства и наиболее чувствительные к бактериофагам. Для каждого бактериофага использовали отдельный штамм: Kl 327 для vB_KpnS_FZ10, Kl 325 для vB_KpnS_FZ41, Kl 315 для vB_KpnP_FZ12 и Kl 263 для vB_KpnM_FZ14.

Выделение фагов

Klebsiella фагов vB_KpnS_FZ10, vB_KpnP_FZ12, vB_KpnM_FZ14 и vB_KpnS_FZ41 были изолированы в 4-х отдельных обогатительных фабриках из канализационного района, расположенного недалеко от станции очистки сточных вод Чеховской больницы №5, собранных из канализационной станции г. Москвы.Процесс выделения начался с добавления натрий-фосфатного буфера (pH 7,0) к образцу до конечной концентрации 0,05 M, и NaCl был добавлен до конечной концентрации 1 M. Смесь инкубировали на экологическом шейкере-инкубаторе ES- 20/60 (Biosan, Латвия) в течение 60 мин при + 37 ° C и 100 об / мин. Затем отбирали супернатант и центрифугировали (6800 g, 20 мин) на центрифуге Avanti J-E с ротором JA 14.50 (Beckman Coulter, США). Затем супернатант центрифугировали в течение 2 ч при 96 200 g в ультрацентрифуге Optima L-90 K (Beckman Coulter, США) с ротором SW28.Супернатант удаляли и осадок растворяли в 1 мл 0,1 М трис-HCl буфера (pH 7,0). Полученную суспензию затем фильтровали через фильтры 1,2 мкм, 0,45 мкм и 0,22 мкм (MF-Millipore, США). Полученный фильтрат хранили при 4 ° C.

Амплификация и очистка бактериофага

Смешивали 800 мл бульона Brain Heart Infusion (BHI) и 10 мл ночной культуры клеток Klebsiella pneumoniae . В каждой встряхиваемой колбе были представлены клетки определенного штамма Klebsiella pneumoniae (Kl 327, Kl 325, Kl 315 и Kl 263).Смесь инкубировали на экологическом шейкере-инкубаторе ES-20/60 (Biosan, Латвия) в течение 2 ч при + 37 ° C и 100 об / мин. Затем в колбы добавляли 1 мл фильтрата бактериофага и инкубировали в течение ночи. Утром наблюдали лизис бактериальной культуры. Содержимое колб подвергали дифференциальному центрифугированию, а затем полученный результат фильтровали, как описано выше. Фильтраты хранили при 4 ° C в холодильнике.

Анализы бактериофаговых бляшек

Готовили суспензию клеток Klebsiella pneumoniae в физиологическом солевом растворе.Концентрация клеток в суспензии составляет приблизительно 10 ⁹ КОЕ / мл (колониеобразующих единиц на мл). Затем готовили серийные разведения (от 10 ^–1 до 10 ^–10) каждого из четырех полученных фильтратов с бактериофагами в физиологическом солевом растворе. 0,2 мл культуры и 0,1 мл специфического разведения бактериофага добавляли в пробирки с мягким агаром (0,6%), перемешивали. Полученную смесь распределяли по чашкам Петри с твердым агаром. Инкубировали 24 ч при температуре + 37 ° С в термостате (Binder GmbH, Германия).После инкубационного периода оценивали полученные бляшки.

Приготовление «чистых линий» бактериофагов и оценка морфологии бляшек

Отдельные бляшки с фрагментами агара, полученными для каждого из четырех фильтратов, вырезали из мягкого агара и помещали в разные пробирки с 1 мл физиологического раствора соли. Их инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Затем брали экстракты и повторяли этапы анализа амплификации / бляшек (было сделано 3 повтора).Полученные фильтраты хранили при 4 ° C в холодильнике. После анализа бляшек, описанного выше, оценивали морфологию бляшек.

Определение диапазона фага-хозяина

Для оценки литического спектра накопленного бактериофага использовали двухслойный метод. В качестве тест-культуры использовали 14 штаммов Klebsiella pneumoniae . Готовили суспензию клеток Klebsiella pneumoniae в физиологическом солевом растворе. Концентрация клеток в суспензии составляет примерно 10 ⁹ КОЕ / мл.0,2 мл культуры добавляли в пробирки с мягким агаром (0,6%), перемешивали, выливали в чашку Петри с агаром и давали затвердеть. Затем на мягкий агар наносили суспензию фага в нескольких разведениях. Чашки Петри инкубировали 24 ч при + 37 ° C в термостате (Binder GmbH, Германия). После инкубации оценивали наличие пятен лизиса. Чтобы убедиться, что образование пятен лизиса было вызвано литическим действием фага, были выполнены анализы бактериофаговых бляшек, как описано выше . Кроме того, был проведен анализ пятен лизиса на электронном микроскопе JEM-1011 (JEOL, Япония). Для этого из пятна лизиса брали фрагмент чашки с агаром и помещали в каплю 0,1 мл физиологического раствора. Инкубируют 25–30 мин. После этого пластину с агаром удаляли и проводили электронную микроскопию капли. Оценивали наличие бактериофагов в исследуемом материале.

Центрифугирование в градиенте CsCl

Готовили растворы с различным процентным содержанием CsCl (50, 30, 20, 10, 5).В качестве растворителя использовали 0,05 М трис-HCl буфер (pH 7,0). После этого растворы осторожно добавляли в центрифужную пробирку из ротора SW 28, наслаивая градиент от более высокой концентрации к более низкой с помощью пипетки Пастера. Последним добавляли фильтрат бактериофага. На каждом этапе контролировали фазовую однородность, не допуская их перемешивания. Пробирки уравновешивали 5% -ным раствором CsCl и помещали в ультрацентрифугу Optima L-90 K (Beckman Coulter, США). Затем центрифугировали 2 ч при 96 200 g.После центрифугирования содержимое зоны с фагом осторожно отбирали в пробирки Эппендорфа с помощью пипетки. Затем содержимое пробирок центрифугировали в течение 2 ч при 96 200 g на центрифуге Optima L-90 K (Beckman Coulter, США) с ротором SW 28. Осадок ресуспендировали в 0,05 М трис-HCl буфере (pH 7,0). Полученную суспензию фага хранили при 4 ° C в холодильнике.

Электронная микроскопия

Электронную микроскопию проводили с использованием фильтрата бактериофагов с высоким титром, очищенных в градиенте плотности CsCl.Образцы наносили на покрытые углеродом нитроцеллюлозные пленки, окрашивали 1% уранилацетатом и исследовали в просвечивающем электронном микроскопе (ПЭМ) JEM-1011 (JEOL, Япония). Электронные микрофотографии сделаны камерой Erlangshen ES500W (Gatan, США). Параметры бактериофагов измеряли с помощью программы ImageJ на основе изображений, полученных с помощью электронной микроскопии. В качестве маркеров использовали стандарты, основанные на измерениях длины хвоста (114 нм) бактериофага Т4. Для каждого фага измеряли 35 частиц и рассчитывали SD (стандартное отклонение).

Оценка частоты образования фаго-устойчивых форм

Клетки ночной культуры суспендировали в физиологическом солевом растворе до 10 ⁸ КОЕ / мл, 0,1 мл культуры и 0,1 мл фильтрата фага, первоначально содержащего 10 ⁸ БОЕ / мл (бляшкообразующих единиц на мл) добавляли в пробирки с мягким агаром (0,6%), перемешивали. Полученную смесь распределяли по чашкам Петри с твердым агаром. Инкубировали 24 ч при температуре + 37 ° С в термостате (Binder GmbH, Германия).После этого оценивали количество устойчивых колоний и рассчитывали частоту образования фагорезистентных форм. Полученные устойчивые колонии помещали в пробирки с 10 мл бульона BHI и перемешивали. Полученные суспензии инкубировали 2 ч при 37 ° C в термостате (Binder GmbH, Германия). Затем в пробирки добавляли митомицин С до конечных концентраций 0,2 мкг / мл, 0,5 мкг / мл и 2 мкг / мл и инкубировали в течение 24 ч при + 37 ° C в термостате (Binder GmbH, Германия).Затем суспензии центрифугировали (6800 g, 20 мин) на центрифуге Avanti JE с ротором JA 14.50 (Beckman Coulter, США), супернатанты отбирали в чистые пробирки, центрифугировали 2 ч при 96 200 g на Optima L-90 K. ультрацентрифуга (Beckman Coulter, США) с ротором SW28, и образец анализировали на электронном микроскопе на наличие фага в суспензии. Кроме того, исходную суспензию устойчивых колоний обрабатывали хлороформом, затем центрифугировали (6800 g, 20 мин) на центрифуге Avanti J-E с JA 14.50 (Beckman Coulter, США) и супернатанты были нанесены на чувствительные к фагу газоны Klebsiella pneumoniae .

Чувствительность фаговых частиц к температуре и pH

При анализе чувствительности к температуре и pH методы, используемые Jamal et al. были применены [41]. Фильтрат бактериофага инкубировали в течение 1 ч в пробирках на водяной бане (GFL, Германия) при температурах 37, 50, 55, 60, 65 и 70 ° C. Затем были приготовлены серийные разведения фильтрата бактериофага от 10 ^–2 до 10 ^–10 с шагом 10 ².Титр фага получали с помощью анализа бляшек, как описано выше. Для исследования чувствительности к pH были приготовлены пробирки с мясопептонным бульоном (MPB) (исходный pH 7,2) со значениями pH от 3 до 13. Для получения желаемых значений pH использовали 6 M растворы NaOH и HCl. MPB фильтровали через фильтры с диаметром пор 0,22 мкм (MF-Millipore, США). В пробирки добавляли по 1 мл фага с каждым значением pH и инкубировали 18 ч при + 37 ° C в инкубаторе (Binder GmbH, Германия). За pH следили после инкубационного периода.Такой же период инкубации для анализа чувствительности к pH использовали Сулеймани Сасани и Эфтехар [42]. Затем были приготовлены серийные разведения раствора с фагами от 10 ^–1 до 10 ^–10 и проведен анализ бляшек, как описано выше, для получения титра фага.

Скорость адсорбции фага

Клетки из ночной культуры суспендировали в бульоне BHI до 10 ⁹ КОЕ / мл. 5 мл бактериальной суспензии и суспензии фага, разведенных до 10 ⁷ БОЕ / мл, инкубировали в 45 мл бульона BHI на экологическом шейкере-инкубаторе ES-20/60 (Biosan, Латвия) при + 37 ° C и 100 об / мин в течение 5 дней. мин.После этого супернатант фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и подсчитывали количество свободных фагов, используя анализ бляшек, описанный выше. Снижение титра фага представляло собой количество фагов, адсорбированных на клетках. Фильтрат бактериофага использовали в качестве контроля. Снижения титра в контроле не наблюдалось. Константа адсорбции рассчитывалась по следующей формуле:

$$ k = \ left ({\ frac {- 1} {{Bt}}} \ right) \ times \ ln \ left ({\ frac {P} {{ P_ {0}}}} \ right) $$

P — концентрация свободного фага на мл, P ₀ — исходная концентрация фага, B — исходная концентрация бактерий, k — константа скорости адсорбции (мл / мин) , t — время (мин).

Одностадийная кривая роста

Смешивали 1 мл бульона BHI, суспензию клеток с конечной концентрацией 10 ⁹ КОЕ / мл и фильтрат бактериофага с конечной концентрацией 10 ⁷ БОЕ / мл. Смесь инкубировали при 37 ° C в течение 8 мин в термостате (Binder GmbH, Германия), а затем центрифугировали 2 мин при 4800 g на Centrifuge 5424 (Eppendorf, Германия). Супернатант удаляли и осадок ресуспендировали в 100 мл бульона BHI. Аликвоты 0,5 мл полученной суспензии отбирали каждые 5 мин в течение 80 мин и титр бактериофага оценивали с помощью анализа бляшек, описанного выше.Латентный период определяли как интервал между адсорбцией фага на клетке-хозяине и высвобождением потомства фага. Размер вспышки фага выражали как отношение окончательного количества высвобожденных фаговых частиц к количеству инфицированных бактериальных клеток в течение латентного периода.

Размножение фага в жидкой питательной среде и оценка титра бактериофага

Клетки из ночной культуры суспендировали в бульоне BHI до 10 ⁹ КОЕ / мл. 5 мл бактериальной суспензии, содержащей 10 ⁹ КОЕ / мл и фаг, разведенный до 10 ⁶ БОЕ / мл, инкубировали в 45 мл бульона BHI на экологическом шейкере-инкубаторе ES-20/60 (Biosan, Латвия) при +37 ° C и 100 об / мин в течение 18 часов.В качестве контроля одна колба не содержала фага, добавленного к культуре Klebsiella . Колбы инкубировали 18 ч при + 37 ° C и 100 об / мин. После этого титр фага в экспериментальной системе оценивали с использованием анализов бляшек, описанных выше. Инкубируют 24 ч при + 37 ° С в термостате (Binder GmbH, Германия). После инкубации оценивали титр фага.

Выделение и рестрикционное расщепление ДНК фага

Геномную ДНК фага экстрагировали из фильтрата бактериофага с высоким титром, очищенного в градиенте плотности CsCl.Раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) добавляли к 0,45 мл фильтрата бактериофага до конечной концентрации 25 мМ. Затем добавляли протеиназу К до конечной концентрации 100 мкг / мл и инкубировали при + 50 ° C в течение 2 часов. После этого добавляли додецилсульфат натрия (SDS) до концентрации 0,5% и инкубировали при + 55 ° C в течение 2 часов. Затем смесь нагревали в течение 20 мин при + 65 ° C для инактивации ферментов. Далее была проведена двойная экстракция хлороформом. К водной фазе добавляли 0,5 мл изопропилового спирта, после чего ДНК экстрагировали на стеклянную палочку.После трехкратной промывки в 70% растворе этанола ДНК сушили в течение 5 мин на воздухе, а затем растворяли в 0,4 мл буфера ТЕ (pH 8,0). Количество и качество экстрагированной ДНК контролировали анализом на спектрофотометре NanoDrop ND-1000 (ThermoFisher, США).

ДНК фага расщепляли рестрикционными ферментами в соответствии с протоколом производителя в течение 90 мин при + 37 ° C (при + 30 ° C для SmaI) в буфере и условиях, подходящих для рестрикционного фермента (в 50 мкл реакции: 5 единиц. фермента, 1 мкг ДНК и объем дистиллированной воды).Использовали следующие эндонуклеазы рестрикции: HindIII, HinfI, HaeIII, SspI, BamHI, EcoRV, NotI, EcoRI, KpnI, MspI, VspI, NdeI, BgII, BgIII, PvuI, SmaI. Для анализа результатов электрофорез проводили на 1% агарозном геле при 180–200 В в течение 1 ч при комнатной температуре на ячейке Sub-cell Model 92 (Biorad). В лунки добавляли 15–20 мкл (1-2 мкл буфера для нанесения на 5 мкл реакции). В качестве маркеров использовали лямбда-ДНК / HindIII (Thermo Scientific, США).

Визуализацию результатов проводили после окрашивания гелей агарозы в течение 20 мин в растворе бромистого этидия (1 мкг / мл).Для документирования результатов использовалась система DOCPRINT (Vilber Lourmat, Франция). Полученные профили рестрикции сравнивали с предсказанными in silico с помощью программы RestrictionMapper (restrictionmapper.org).

Секвенирование, сборка и аннотация генома

ДНК фага экстрагировали хлороформом [43]. Библиотека ДНК была сконструирована с использованием набора для подготовки библиотеки ДНК Nextera (Illumina, Сан-Диего, Калифорния) и секвенирована с помощью секвенатора Illumina HiSeq T1500, что дало примерно 1 миллион считываний парных концов 2 × 250.Контроль качества и первичная обработка выполнялись с использованием FASTQC и trimmomatic (HEADCROP: 20, SLIDINGWINDOW: 3: 24, MINLEN: 200, CROP: 200) [44]. Покрытие было нормализовано до × 50 с использованием BBNorm [45]. Сборка de novo производилась с использованием ассемблера MIRA [46] версии 4.9.6. Завершение контига было подтверждено сравнением с близкородственными геномами, о которых известно, что они полные (номера доступа представлены в таблице 5). Поиск в открытых рамках считывания производился с помощью MetaProdigal 2.6 [47]. Аннотации выполнены с использованием всех рецензируемых фаговых и бактериальных белков от UniProt (https: // www.uniprot.org) и все белки из баз данных детерминант устойчивости к противомикробным препаратам и факторов вирулентности бактерий: VFDB [48], CARD [49], ARG-ANNOT [50] и Resfinder [51]. Остальные ORF были аннотированы приложением hmmscan (минимальное значение е 0,001) [52] с использованием всех бактериальных профилей HMM из базы данных Pfam (https://pfam.xfam.org). тРНК была предсказана с помощью tRNAscan-SE 2.0 [53]. Все анализы, кроме указанных, были выполнены с параметрами по умолчанию. BLASTn (https: //blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) использовался для поиска сходства с другими бактериофагами, а также для расчета средней идентичности нуклеотидов и охвата запросов.

Полные геномные последовательности фагов Klebsiella pneumoniae vB_KpnS_FZ10, vB_KpnP_FZ12, vB_KpnM_FZ14 и vB_KpnS_FZ41 депонированы в GenBank под номерами доступа MK715852, 9015 9015 MK7 и 9015 9015 Необработанные чтения Illumina доступны на NCBI SRA под номерами доступа SRR10037530 , SRR10037529 , SRR10037528 и SRR10037527 соответственно.Соответствующий регистрационный номер BioProject — PRJNA562287. Инструмент GenomeVx [54] использовался для полной визуализации генома. Таксономическая идентификация была произведена GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/) на основе схемы филогенетической классификации, используемой в базе данных таксономии NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov / Таксономия).

Идентификация недавно выделенного литического бактериофага против капсульного типа K24, устойчивых к карбапенемам изолятов Klebsiella pneumoniae

Vuotto, C., Longo, F., Balice, M. P., Donelli, G. & Varaldo, P. E. Устойчивость к антибиотикам, связанная с образованием биопленок у Klebsiella pneumoniae. Патогены 3 , 743–758, https://doi.org/10.3390/pathogens3030743 (2014).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

Podschun, R. & Ullmann, U. Klebsiella spp. как внутрибольничные возбудители: эпидемиология, систематика, методы типирования, факторы патогенности. Обзоры клинической микробиологии 11 , 589–603, https://doi.org/10.1128/CMR.11.4.589 (1998).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

Брэдфорд, П. А. β-лактамазы расширенного спектра в 21 веке: характеристика, эпидемиология и обнаружение этой важной угрозы устойчивости. Обзоры клинической микробиологии 14 , 933–951, https: // doi.org / 10.1128 / CMR.14.4.933-951.2001 (2001).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

Дамьянова И. и др. . Расширение и распространение по всей стране эпидемических клонов Klebsiella pneumoniae, устойчивых к ципрофлоксацину, устойчивых к ципрофлоксацину CTX-M-15 типа β-лактамаз, в Венгрии в 2005 г. — новых «MRSA»? Журнал антимикробной химиотерапии 62 , 978–985, https: // doi.org / 10.1093 / jac / dkn287 (2008).

Артикул CAS PubMed Google ученый

Эверс, К. и др. . Клональное распространение очень успешного ST15-CTX-M-15 Klebsiella pneumoniae у домашних животных и лошадей. Журнал антимикробной химиотерапии 69 , 2676–2680, https://doi.org/10.1093/jac/dku217 (2014).

Артикул CAS PubMed Google ученый

Ли, C.-R. и др. . Глобальное распространение Klebsiella pneumoniae, продуцирующей карбапенамазу: эпидемиология, генетический контекст, варианты лечения и методы обнаружения. Frontiers in Microbiology 7 , 895, https://doi.org/10.3389/fmicb.2016.00895 (2016).

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

Эстебан-Кантос, А. и др. . Популяция Klebsiella pneumoniae, продуцирующая карбапенемазу, отличается и более клональна, чем популяция, восприимчивая к карбапенемам. Противомикробные препараты и химиотерапия 61 , e02520–16, https://doi.org/10.1128/AAC.02520-16 (2017).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

де Ман, Т. Дж. Б. и др. . Геномный анализ панрезистентного изолята Klebsiella pneumoniae, США, 2016 г. Американское общество. Microbiology 9 , e00440–18, https://doi.org/10.1128 / mBio.00440-18 (2018).

Артикул Google ученый

Андраде, Л. Н. и др. . Гены вирулентности, капсульные и плазмидные типы изолятов Klebsiella pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью CTX-M (-2, -8, -15) и KPC-2 из четырех крупных больниц Бразилии. Диагностическая микробиология и инфекционные заболевания 91 , 164–168, https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2018.01.007 (2018).

Артикул CAS PubMed Google ученый

10.

млн лет назад, Ю. и др. . Микробиологическая характеристика изолятов Klebsiella pneumoniae, вызывающих инфекции кровотока, в пяти больницах третичного уровня в Пекине, Китай. Журнал глобальной устойчивости к противомикробным препаратам 12 , 162–166, https://doi.org/10.1016/j.jgar.2017.10.002 (2018).

Артикул PubMed Google ученый

11.

Hu, L. et al. . Появление blaNDM-1 среди клинических изолятов Klebsiella pneumoniae ST15 и ST1031 в Китае. Диагностическая микробиология и инфекционные заболевания 75 , 373–376, https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2013.01.006 (2013).

Артикул CAS PubMed Google ученый

12.

Янь, Дж. Дж., Ван, М. С., Чжэн, П. Х., Цай, Л. Х. и Ву, Дж. Дж. Ассоциации основных международных устойчивых клонов высокого риска и вирулентных клонов со специфическими группами аллелей ompK36 у Klebsiella pneumoniae на Тайване. Новый микроб и новые инфекции 5 , 1–4, https://doi.org/10.1016/j.nmni.2015.01.002 (2015).

Артикул Google ученый

13.

Родригес, К., Мачадо, Э., Рамос, Х., Пейше, Л. и Новаис, Э. Распространение ESBL-продуцентов Klebsiella pneumoniae у госпитализированных пациентов: успешная история международных колн (ST15, ST147, ST336) и эпидемических плазмид (IncR, IncFIIκ). Международный журнал медицинской микробиологии 304 , 1100–1108, https: // doi.org / 10.1016 / j.ijmm.2014.08.003 (2014).

Артикул PubMed Google ученый

14.

Вублик Д. и др. . Вспышка ST15 и ST348 Klebsiella pneumoniae, продуцирующих KPC-3, в больнице Португалии. Эпидемиология и. Инфекция 145 , 595–599, https://doi.org/10.1017/S0950268816002442 (2017).

Артикул CAS Google ученый

15.

Matheeussen, V. et al. . Возникновение устойчивости к колистину при лечении рецидивирующей пневмонии, вызванной карбапенемазой, продуцирующей Klebsiella pneumoniae. Диагностическая микробиология и инфекционные заболевания 94 , 407–409, https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2019.02.014 (2019).

Артикул CAS PubMed Google ученый

16.

Марковская, Р. и др. . Распространение успешного международного клона ST15 и клонального комплекса 17 среди болгарских CTX-M-15, продуцирующих K.pneumoniae. Диагностическая микробиология и инфекционные болезни 89 , 310–313, https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2017.08.012 (2017).

Артикул PubMed Google ученый

17.

Brisse, S. et al. . wzi — экспресс-метод определения капсульного типа для штаммов Klebsiella . Журнал клинической микробиологии 51 , 4073–4078, https: // doi.org / 10.1128 / JCM.01924-13 (2013).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

18.

Чжоу К. и др. . Использование полногеномного секвенирования для отслеживания, контроля и характеристики региональной экспансии β-лактамазы расширенного спектра, продуцирующей ST15 Klebsiella pneumoniae. Scientific Reports 6 , 20840, https://doi.org/10.1038/srep20840 (2016).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed PubMed Central Google ученый

19.

Уити, С., Картмелл, Э., Эйвери, Л. М. и Стефенсон, Т. Бактериофаги — потенциал для применения в процессе очистки сточных вод. Наука об окружающей среде в целом 339 , 1–18, https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2004.09.021 (2005).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed Google ученый

20.

Голкар, З., Багасра, О. и Пейс, Д. Г. Бактериофаговая терапия: потенциальное решение кризиса устойчивости к антибиотикам. Журнал инфекций в развивающихся странах 8 , 129–136, https://doi.org/10.3855/jidc.3573 (2014).

Артикул PubMed Google ученый

21.

Tabassum, R. et al. . Полный анализ генома фага Siphoviridae TSK1, показывающий потенциал удаления биопленки против Klebsiella pneumoniae. Scientific Reports 8 , 17904, https://doi.org/10.1038/s41598-018-36229-y (2018).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed PubMed Central Google ученый

22.

Kubler-Kielb, J. et al. . Капсульные полисахаридные и липополисахаридные структуры двух изолятов вспышки Klebsiella pneumoniae, устойчивых к карбапенемам. Carbohydrate Research 369 , 6–9, https://doi.org/10.1016/j.carres.2012.12.018 (2013).

Артикул CAS PubMed Google ученый

23.

Bellich, B. et al. . Структура капсульного полисахарида штамма Klbesiella pneumoniae KK207-2, продуцирующего KPC-2, и назначение функций гликозилтрансфераз. Международный журнал биологических макромолекул 130 , 536–544, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2019.02.128 (2019).

Артикул CAS PubMed Google ученый

24.

Pan, Y.-J. и др. .Идентификация трех подовирусов, инфицирующих Klebsiella, включая деполимеразы капсул, которые переваривают определенные типы капсул. Микробный. Биотехнология 12 , 472–486, https://doi.org/10.1111/1751-7915.13370 (2019).

Артикул CAS Google ученый

25.

Pan, Y.-J. и др. . Идентификация капсульных типов у устойчивых к карбапенемам штаммов Klebsiella pneumoniae путем секвенирования wzc и значения для лечения капсульной деполимеразы. Противомикробные препараты и химиотерапия 59 , 1038–1047, https://doi.org/10.1128/AAC.03560-14 (2015).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

26.

Ackermann, H. W. Частота морфологических описаний фагов в 2000 г. Архив вирусологии 146 , 843–857, https://doi.org/10.1007/s007050170120 (2001).

Артикул CAS PubMed Google ученый

27.

Вуотто, К. и др. . Образование биопленок и устойчивость к антибиотикам у штаммов мочи Klebsiella pneumoniae. Журнал прикладной микробиологии 123 , 1003–1018, https://doi.org/10.1111/jam.13533 (2017).

Артикул CAS PubMed Google ученый

28.

Булл, Дж. Дж., Вегге, С. С., Шмерер, М., Чаудри, В. Н. и Левин, Б. Р. Фенотипическая резистентность и динамика ускользания бактерий от фагового контроля. PLoS ONE 9 , e94690, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094690 (2014).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed PubMed Central Google ученый

29.

Сид, К. Д. Борьба с фагами: как бактерии защищаются от вирусной атаки. Патогены PLoS 11 , e1004847, https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004847 (2015).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

30.

Schroll, D., Rogers, S., Adhya, S. & Merril, C.R. Бактериофаг K1-5 кодирует два разных белка хвостовых волокон, что позволяет ему инфицировать и реплицироваться как на штаммах K1, так и на K5 Escherichia coli. Журнал вирусологии 75 , 2509–2515, https://doi.org/10.1128/JVI.75.6.2509-2515.2001 (2001).

Артикул Google ученый

31.

Друлис-Кава, З. и др. . Выделение и характеристика KP34 — нового φKMV-подобного бактериофага для Klebsiella pneumoniae. Прикладная генетика и молекулярная биотехнология 90 , 1333–1345, https://doi.org/10.1007/s00253-011-3149-y (2011).

Артикул CAS Google ученый

32.

Cao, F., et al. Оценка эффективности бектериофага при лечении пневмонии, вызванной Klebsiella pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью у мышей. Хиндави Идентификатор статьи 752930, https://doi.org/10.1155/2015/752930 (2015).

33.

Thurow, H., Niemann, H., Rudolph, C. & Stirm, S. Деполимеразная активность в капсулах-хозяевах частиц бактериофага, активных в отношении штаммов Klebsiella K20 и K24. Virology 58 , 306–309, https://doi.org/10.1016/0042-6822(74)-4 (1974).

Артикул CAS PubMed Google ученый

34.

Hsieh, P.-F., Lin, H.-H., Lin, T.-L., Chen, Y.-Y. И Ван, Ж.-Т. Два Т7-подобных бактериофага, K5-2 и K5-4, каждый кодирует две капсульные деполимеразы: выделение и функциональная характеристика. Scientific Reports 7 , 4624, https://doi.org/10.1038/s41598-017-04644-2 (2017).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed PubMed Central Google ученый

35.

D’Andrea, M. M. et al. . φBO1E, недавно открытый литический бактериофаг, нацеленный на продуцирующую карбапенемазу Klebsiella pneumoniae пандемической клональной группы 258 линии клады II. Scientific Reports 7 , 2614, https: // doi.org / 10.1038 / s41598-017-02788-9 (2017).

Артикул ОБЪЯВЛЕНИЯ CAS PubMed PubMed Central Google ученый

36.

Джамал, М., Хуссейн, Т., Дас, С. Р. и Андлиб, С. Характеристика фага Z Siphoviridae и изучение его эффективности против планктонных клеток и биопленок Klebsiella pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью. Журнал медицинской микробиологии 64 , 454–462, https://doi.org/10.1099/jmm.0.000040 (2015).

Артикул CAS PubMed Google ученый

37.

Сима К., Харджай К. и Чхиббер С. Доказательства терапевтического потенциала бактериофага Kpn5 при ожоговой раневой инфекции, вызванной Klebsiella pneumoniae у мышей BALB / c. Журнал микробиологии и биотехнологии 20 , 935–941, https://doi.org/10.4014/jmb.0909.09010 (2010).

Артикул CAS Google ученый

38.

Chhibber, S., Kaur, S. & Kumari, S. Терапевтический потенциал бактериофага при лечении крупозной пневмонии, опосредованной Klebsiella pneumoniae B5055, у мышей. Журнал медицинской микробиологии 57 , 1508–1513, https://doi.org/10.1099/jmm.0.2008/002873-0 (2008).

Артикул PubMed Google ученый

39.

Sambrook, J., Fritsch, E. F. & Maniatis, T. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нет. Эд. 2 стр. Xxxviii + 1546 стр., Юго-Западный медицинский центр Техасского университета, США (ISBN 0879693096) (1989).

40.

Кинг, А. М. К., Адамс, М. Дж., Карстенс, Э. Б. и Лефковиц, Э. Дж. Таксономия вирусов: Девятый доклад Международного комитета по таксономии вирусов . Academic Press, Сан-Диего, Калифорния, США (ISBN 978-0-12-384684-6) (2011).

41.

Mirzaei, M. K. & Nilsson, A. S. Выделение фагов для фаговой терапии: сравнение точечных тестов и эффективности анализов посевов для определения круга хозяев и эффективности. PLoS ONE 10 , e0118557, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0118557 (2015).

Артикул CAS Google ученый

42.

Адамс, М. Х. Бактериофаг, издательство Inter-science. Нью-Йорк, США, стр. 450–456 (номер записи : : 19602204111) (1959).

43.

Ди Лалло, Г. и др. . Выделение и частичная характеристика бактериофагов, заражающих Pseudomonas syringae pv.actinidiae, возбудитель бактериального рака киви. Journal of Basic Microbiology 54 , 1210–1221, https://doi.org/10.1002/jobm.201300951 (2014).

44.

Dömötör, D. et al. . Сравнительный анализ двух бактериофагов Xantomonas arboricola pv. juglandis. Инфекция, генетика и эволюция 43 , 371–377, https://doi.org/10.1016/j.meegid.2016.06.011 (2016).

Артикул CAS PubMed Google ученый

45.

Петтит, Р. К. и др. . Микропланшетный анализ аламарового синего для определения чувствительности к биопленке Staplylococcus epidermidis. Противомикробные препараты и химиотерапия 49 , 2612–2617, https://doi.org/10.1128/AAC.49.7.2612-2617.2005 (2005).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

46.

О’Тул, Г. А. и Колтер, Р. Инициирование образования биопленок у Pseudomonas fluorescens WCS365 происходит через множественные конвергентные пути передачи сигналов: генетический анализ. Молекулярная микробиология 28 , 449–461, https://doi.org/10.1046/j.1365-2958.1998.00797.x (1998).

Артикул PubMed Google ученый

47.

Гоуришанкар, С., Мосиома, Н. Д. и Пандиан, С. К. Ассоциированные с кораллами бактерии как многообещающий антибиотикопленочный агент против метициллин-резистентных и чувствительных биопленок Staphylococcus aureus. Доказательная дополнительная и альтернативная медицина, идентификатор статьи 862374, https: // doi.org / 10.1155 / 2012/862374 (2012).

48.

Liao, Y.-C., Lin, H.-H., Sabharwal, A., Haase, E. M. и Scannapieco, F. A. MyPro: цельный конвейер для автоматической сборки и аннотации генома прокариот. Журнал микробиологических методов 113 , 72–74, https://doi.org/10.1016/j.mimet.2015.04.006 (2015).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

49.

Овербек, Р. и др. . SEED и быстрое аннотирование микробных геномов с использованием технологии подсистем (RAST). Nucleic Acids Research 42 , D206 – D214, https://doi.org/10.1093/nar/gkt1226 (2014).

Артикул CAS PubMed Google ученый

50.

Лукашин, А. В., Бородовский, М. GeneMark.hmm: Новые решения для поиска генов. Nucleic Acids Research 265 , 1107–1115, https: // doi.org / 10.1093 / nar / 26.4.1107 (1998).

Артикул Google ученый

51.

Мейер-Кольтхофф, Дж. П. и Гекер, М. ВИКТОР: геномная филогения и классификация прокариотических вирусов. Биоинформатика 33 , 3396–3404, https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btx440 (2017).

Артикул CAS PubMed PubMed Central Google ученый

52.

Rambaut, A. FigTree 1.4.3 — графический просмотрщик филогенетических деревьев и программа для создания готовых к публикации рисунков. Молекулярная эволюция, филогенетика и эпидемиология , http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree (2006).

53.

Верма В., Харджай К. и Чхиббер С. Характеристика Т7-подобного литического бактериофага Klebsiella pneumoniae B5055: потенциального терапевтического агента. Current Microbiology 59 , 274–281, https: // doi.org / 10.1007 / s00284-009-9430-у (2009 г.).

Артикул CAS PubMed Google ученый

Фаговая терапия для лечения вирулентной инфекции Klebsiella pneumoniae на модели мыши

https://doi.org/10.1016/j.jgar.2019.09.018Получить права и содержание

Основные моменты

•: Klebsiella pneumoniae является новым патогеном человека и животных.
•: Термотолерантный литический бактериофаг был выделен и охарактеризован in vitro в качестве кандидата для фаговой терапии.
•: Белковые составляющие литического фага анализировали с помощью SDS-PAGE и nLC-MS / MS.
•: Терапевтическая эффективность наблюдалась через 2 часа после заражения вирулентным K. pneumoniae на модели мышей BALB / c.

Реферат

Цели

Klebsiella pneumoniae — важный развивающийся патоген людей и животных, приводящий к серьезным клиническим последствиям. Увеличение использования антибиотиков способствовало появлению устойчивых к карбапенемам и β-лактамаз расширенного спектра (БЛРС), продуцирующих К.pneumoniae штаммов. В последнее время все большее распространение получила фаговая терапия как возможная альтернатива возникающей устойчивости к противомикробным препаратам. Это исследование было выполнено для оценки терапевтических эффектов нового литического фага (VTCCBPA43) на модели пневмонии мышей с целью изучения эффективности фаговой терапии против вирулентной инфекции K. pneumoniae .

Методы

Хвостатый фаг VTCCBPA43 оценивали по его кинетике роста, диапазону хозяев in vitro, а также чувствительности к температуре и pH.Компоненты белка анализировали с помощью SDS-PAGE и nLC-MS / MS. Терапевтическая эффективность наблюдалась через 2 часа после заражения вирулентным K. pneumoniae на модели мышей BALB / c.

Результаты

Было обнаружено, что фаг VTCCBPA43 обладает высокой температурной толерантностью (до 80 ° C). Он был наиболее активен при pH 5, имел размер взрыва 172 БОЕ / мл и имел узкий диапазон хозяев. Он был идентифицирован как KP36-подобный фаг с помощью протеомики дробовика. После интраназального введения разовой дозы (2 × 10 ⁹ БОЕ / мышь) после заражения вирулентным K.pneumoniae , наблюдали присутствие биологически активного фага in vivo и значительное снижение бактериальной нагрузки легких во все моменты времени. Уменьшение тяжести поражения предполагало общие положительные эффекты фаговой терапии VTCCBPA43 на модели пневмонических мышей.

Заключение

Это исследование представляет собой первое доказательство in vivo эффективной фаговой терапии против инфекции K. pneumoniae интраназальным путем.

Ключевые слова

Фаговая терапия

Пневмония

Модель мыши

Возникающая устойчивость к противомикробным препаратам

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Цитирующие статьи

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Выделение и характеристика двух фагов Klebsiella pneumoniae, кодирующих дивергентные деполимеразы

1. Введение

Klebsiella pneumoniae — инкапсулированная грамотрицательная бактерия, которая может быть найдена как свободноживущий организм в естественной среде. Кроме того, K. pneumoniae является условно-патогенным микроорганизмом, вызывающим инфекции в основном легких и мочевыводящих путей, хотя в тяжелых случаях могут возникать менингит и сепсис.Благодаря широкому применению антибиотиков и благоприятным возможностям передачи штаммы K. pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью, особенно устойчивые к карбапенемам [1,2], распространились в больницах и в обществе. K. pneumoniae принадлежит к приоритетной группе ESKAPE, определенной ВОЗ, в которую также входят Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa и Enterobacter spp. [3]. Таким образом, K. pneumoniae считается важной мишенью для разработки новых методов лечения.Бактериофаги (фаги) представляют собой интересную терапевтическую альтернативу, поскольку они заражают бактерии особым образом, избегая дисбактериоза [4]. Однако в случае бактерий с высокой вариабельностью, таких как K. pneumoniae, использование фагов становится проблематичным. Было высказано предположение, что инфекционность фага в значительной степени определяется типом капсулы бактерий [5], что затрудняет лечение широкого спектра штаммов K. pneumoniae, поскольку большинство описанных до сих пор фагов специфичны для одного или нескольких типов капсул.На основании этого было предложено использование фаговых коктейлей, в которых взаимодействия между фагами могут генерировать синергизм, улучшающий бактериальный лизис и ограничивающий возникновение резистентности [6]. Из-за высокой гетерогенности K. pneumoniae это часто становится затруднительным. для определения факторов вирулентности этого вида [7]. Тем не менее, капсула K. pneumoniae является одним из таких факторов вирулентности, и гипервирулентность была связана с различиями в экспрессии генов, вовлеченных в капсулу, или с измененными фенотипами капсулы [8].Было обнаружено, что большинство фагов K. pneumoniae кодируют деполимеразы, которые представляют собой ферменты, способные переваривать экзополисахаридную капсулу путем расщепления гликозидных связей [9,10]. Разрушение или потеря капсулы делает бактерии восприимчивыми к фаговой инфекции или лечению антибиотиками, что предполагает терапевтический потенциал фаговых деполимераз [5,11,12,13,14]. Хотя большинство описанных фагов кодируют одну деполимеразу и в результате инфицируют один или несколько типов капсул, сообщалось, что некоторые фаги кодируют несколько деполимераз.На сегодняшний день наиболее ярким примером является случай фага ØK64-1, который кодирует девять различных деполимераз [15]. В целом, было описано ограниченное количество ферментов в отдельных активных капсульных типах [16]. В дополнение к их потенциальным терапевтическим применениям фаговые деполимеразы были предложены для капсульного типирования [17]. По этим причинам открытие новых деполимераз фагов Klebsiella против различных капсульных типов является интересной темой с потенциальным биомедицинским применением. Недавно наша группа выделила и охарактеризовала четыре новых фага K.pneumoniae (от πVLC1 до πVLC4) из проб окружающей среды в Валенсии, Испания [18]. Все они были тесно связаны филогенетически, принадлежали к роду Drulisvirus, кодировали только одну деполимеразу и демонстрировали очень узкий диапазон капсульного типа. Используя аналогичный протокол, здесь мы выделили два новых фага с высокой литической активностью, которые мы назвали πVLC5 и πVLC6. В отличие от ранее описанных фагов, эти новые изоляты были способны инфицировать несколько эталонных капсульных типов Klebsiella spp.Анализ всего генома показал, что πVLC5 и πVLC6 кодируют дивергентные деполимеразы, что потенциально объясняет тропизм их хозяина.

3. Обсуждение

Экзополисахаридная капсула K. pneumoniae является основным фактором вирулентности и источником разнообразия, осложняющего лечение [28]. Еще относительно мало известно о разнообразии Klebsiella sp. фаги и молекулярные механизмы, позволяющие инфицировать разные типы капсул. Хотя предыдущие исследования предполагали, что деполимеразы играют ключевую роль в распознавании и проникновении фагов в эти бактерии, необходимы дополнительные данные для установления более общих закономерностей.Недавно наша группа фенотипически и молекулярно охарактеризовала четыре новых вируса Drulisvirus, инфицирующих капсульный тип K22 [18]. Несмотря на то, что этот капсульный тип не очень распространен, он был обнаружен среди клинических изолятов с множественной лекарственной устойчивостью. Более того, разнообразие капсул Klebsiella широко распространено, а это означает, что ни один капсульный тип не может монополизировать большую часть клинических изолятов, и, следовательно, для эффективной борьбы с этим патогеном необходимо нацелить большинство типов.Здесь мы охарактеризовали два новых фага, способных инфицировать не только K22, но и другие капсульные типы. Филогенетические анализы полного и основного геномов рода Drulisvirus группируют новые фаги вместе с ранее описанным фагом Klebsiella Vb_KpnP_SU552A. Однако филогения РНК-полимеразы не поддерживает эту группировку, помещая πVLC5 с другими фагами πVLC. Эти результаты, вместе с отсутствием гомологии в одном из шипов на хвосте, предполагают определенную степень мозаичной структуры генома вирусов вируса Друлис.Горизонтальное приобретение генов шипов на хвосте кажется особенно актуальным в случае ORF58 фага Klebsiella πVLC5 и ORF58 πVLC6. Первый представляет собой уникальную структуру среди фаговых последовательностей, описанных до сих пор, поскольку он лишь отдаленно родственен другим фагам из другого семейства. Напротив, второй хвостовой шип фага Klebsiella πVLC6 также присутствует у четырех других фагов того же рода с высоким уровнем идентичности. Что касается общего хвостового шипа, присутствующего у всех представителей рода Drulisvirus и некоторых родственных фагов (Przondovirus и Phikmvvirus), ферментативный домен обнаружен только в фагах πVLC, каждый из которых обладает общей способностью инфицировать капсульные типы K22.Интересно, что образцы фага πVLC5 отбирали в том же месте, что и фаги πVLC1 и πVLC2, и эти три фага, по-видимому, образуют монофилетическую группу в соответствии с филогенией РНК-полимеразы. Однако они различались по своим деполимеразным доменам и полногеномному филогенетическому положению. Это указывает на то, что события обмена генами участвовали в адаптации к специфическим экологическим нишам [22]. Оба описанных фага были способны лизировать капсульные типы K22 и K37. Кроме того, в обоих случаях вокруг бляшек наблюдались ореолы лизиса, предположительно в результате действия их деполимераз [29].Штаммы Klebsiella, представляющие капсульные типы K22 и K37, обладают общими генами, участвующими в синтезе полисахаридов капсул, за исключением одного гена, который обнаруживает мутацию сдвига рамки считывания [30] и общую биохимическую структуру, как объяснено выше. Это могло бы объяснить, почему оба фага, πVLC5 и πVLC6, были способны инфицировать эти два капсульных типа. В принципе, деполимераза, общая между этими двумя фагами (и фагами, ранее описанными нашей группой), должна нести ответственность за деградацию экзополисахаридов, общих между K22 и K37.Способность фага πVLC6 также инфицировать капсульный тип K13 и переваривать капсулу K2 должна быть обеспечена его второй деполимеразой из-за расхождения между биохимическими структурами капсулы. Эта вторая предполагаемая деполимераза продемонстрировала высокую нуклеотидную идентичность (96% и 100% покрытия) со вторым белком хвостовых волокон бактериофага vB_KpnP_KpV74 [16]. Соловьева и др., Клонировали и экспрессировали этот белок (kpv74_56, APZ82768.1) и показали, что он является функциональной деполимеразой против штаммов K2 и одного штамма K13, таким образом, разделяя не только нуклеотидную идентичность, но и тропизм хозяина со второй деполимеразой бактериофаг πVLC6 [22].Связь между перевариванием капсул K2 и K13 также подтверждается предыдущими исследованиями, показывающими перекрестную инфекционность между типами K2 и K13 [31]. Дополнительное взаимодействие фага πVLC6 со штаммом K3 было менее ожидаемым, поскольку биохимическая структура этого антигена лишь частично перекрывалась с K22 / K37 и K2 / K13, поэтому оба фермента могли распознавать антиген K3. Однако нет сообщений о случаях перекрестной реакции с участием этих антигенов. Насколько нам известно, единственная деполимераза, у которой подтвержден тропизм к K3, — это деполимераза фага KP32, KP32gp37 Klebsiella [5].Интересно, что этот белок является единственным из описанных до сих пор, который представляет идентичность ферментативного домена первого хвостового шипа, общего для всех фагов πVLC (Таблица S1). Таким образом, разнообразие этого ферментативного домена, а также роль второго шипа на хвосте должны быть дополнительно исследованы, чтобы объяснить тропизм K3. Наконец, мы не обнаружили какой-либо дополнительной специфичности πVLC5 к хозяину, несмотря на присутствие сильно дивергентной деполимеразы. Скрининг против дополнительных новых типов капсул, которые постоянно описываются [32], может выявить его роль.В заключение, два новых фага πVLC5 и πVLC6 показали интересные аспекты эволюции вируса Drulisvirus и предполагают, что расширение круга хозяев может происходить за счет приобретения дивергентных деполимераз. Тем не менее, до сих пор описано несколько фагов широкого спектра действия Klebsiella. Дальнейшее изучение образцов окружающей среды может выявить новые фаги более широкого действия. В будущей работе было бы также интересно изучить механизмы устойчивости, поскольку в большинстве случаев рост бактерий полностью возобновляется через несколько часов.Устойчивость in vitro, обусловленная потерей капсулы, может быть несущественной in vivo, поскольку декапсулированные мутанты имеют тенденцию быть авирулентными [33]. Наконец, еще одним многообещающим направлением исследований является тестирование синергетических эффектов между фагами и антибиотиками [34,35].

4. Материалы и методы

4.1. Бактерии

Клинический изолят 1210, полученный из больницы Ла Фе (Валенсия, Испания), использовали в качестве хозяина для тестирования образцов окружающей среды на обнаружение фагов. Кроме того, 77 эталонных штаммов Klebsiella spp.приобретенные в Statens Serum Institute (Копенгаген, Дания; Таблица S3), использовали для определения диапазона инфицирования выделенных фагов.

4.2. Выделение фагов из образцов окружающей среды

Образец воды, взятый из реки, а другой — из ирригационной канавы, использовали для выделения фагов. Для этого брали 50 мл воды и хранили при комнатной температуре до обработки в лаборатории, обычно через 1 час. После встряхивания образцы центрифугировали (4000 × g, 10 мин) и супернатанты фильтровали через 0.45 мкм и 0,22 мкм для удаления клеток и мусора. Затем 1 мл отфильтрованных образцов добавляли к 500 мкл клинического изолята 1210 K. pneumoniae и высевали на чашки Петри методом верхнего агара. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 20 часов. Затем изолированные бляшки различной морфологии извлекали путем аспирации микропипеткой и хранили при -70 ° C. Чтобы проверить изолированные бляшки и очистить их, были выполнены два дополнительных анализа бляшек и стадии сбора бляшек. Очищенные от бляшек фаги амплифицировали в жидкой среде путем инфицирования культуры бактерии с экспоненциальной фазой роста (OD ₆₀₀ = 0.4). После лизиса бактерии и остатки удаляли центрифугированием (13000 × g, 3 мин дважды), супернатанты отбирали на аликвоты и хранили при -70 ° C.

4.3. Электронная микроскопия

Лизаты с высоким титром центрифугировали и супернатанты фильтровали через 0,22 мкм для удаления бактерий и остатков. Затем каплю из каждого лизата наносили на покрытый углеродом Formvar, поддерживаемый медной сеткой 300 меш. После сушки на воздухе в течение 30 мин избыток жидкости удаляли фильтровальной бумагой. Фаги отрицательно окрашивали 2% -ной фосфорновольфрамовой кислотой и исследовали под электронным микроскопом Jeol JEM-1010.

4.4. Выделение ДНК и секвенирование генома ДНК

экстрагировали обработкой отфильтрованных лизатов с высоким титром ДНКазой I для удаления неинкапсидированной ДНК, и после инактивации ДНКазы I экстракцию ДНК проводили с использованием коммерческого набора (QIAamp, QIAGEN). Затем ДНК фрагментировали обработкой ультразвуком и секвенировали на аппарате Illumina MiSeq, получая 250 считываний парных концов, которые были проверены на наличие примесей с помощью Kraken 2 [36], а затем собраны с помощью SPAdes v3.9.1 [37]. Контиги меньше 1000 нуклеотидов были отброшены, в результате чего был получен один контиг для каждого генома.PHASTER [38] и BLAST использовались для определения ближайших последовательностей в базах данных. Они были загружены, и мы использовали ProgressiveMAUVE [39] для получения полногеномного множественного выравнивания последовательностей. Полные последовательности генома доступны в Genbank (номер доступа MT197175-MT197176).

4.5. Аннотации генома

Фаги были аннотированы с помощью PHANOTATE [40], Glimmer v.3.0 [41] и Prodigal [42]. Вызовы генов и координаты начала и остановки сравнивались с настраиваемым скриптом, доступным на https: // github.com / BBeamud /. Нуклеотидные последовательности для предполагаемых ORF были извлечены с помощью seqtk subsq (https://github.com/lh4/seqtk) и использованы для функциональной аннотации. База данных фаговых нуклеотидов была создана с помощью makeblastdb из базы данных, доступной по адресу http://millardlab.org/bioinformatics/bacteriophage-genomes/. Эта база данных содержит все неизбыточные последовательности фаговых белков, депонированные в GenBank, и их аннотацию (август, 2019). В эту базу данных добавлены фаги πVLC [18]. Лучшее совпадение BLASTN негипотетических белков, когда это было возможно, было получено с отсечкой по значению е 10 ^-5.Мы также искали умеренное поведение в наших фаговых геномах, например, мобильные генетические элементы, гены устойчивости к антибиотикам или вирулентности, а также любые бактериальные гены. Локальные базы данных ICEberg v.2.0 (http://db-mml.sjtu.edu.cn/ICEberg/), Комплексная база данных устойчивости к антибиотикам (CARD, https://card.mcmaster.ca/), Факторы вирулентности патогенных Бактерии (VFDB, http://www.mgc.ac.cn/VFs/main.htm) и BacteriaDB (внутренняя база данных, 2016 г.) были использованы для этого с помощью BLASTN с отсечкой электронного значения 10 ^{. −5}.Наконец, поиск CDS проводился в локальной базе данных, построенной с использованием белков деполимеразы, включенной в Pires et al. [43]. InterProScan5 [44] и HHpred [45] использовались для дальнейшей проверки доменов и структур белков, когда было обнаружено значительное сходство.

4.6. Сравнительная геномика

Значения средней полногеномной нуклеотидной идентичности (ANI) между новыми фагами Klebsiella и другими фагами Drulisvirus были получены с использованием pANIto (https://github.com/sanger-pathogens/panito). Консервативные и уникальные гены среди Drulisvirus были получены с помощью Proteinortho v.6 [46], сравнивая ранее извлеченные нуклеотидные CDS и те, которые доступны в GenBank. Филогении с максимальным правдоподобием (ML) были сконструированы с использованием 1000 псевдорепликатов быстрой начальной загрузки с использованием модели замены GTR + G + I в IQ-TREE v.1.6.5 [47].

4,7. Определение диапазона хозяев

Точечные тесты проводили путем добавления 2 мкл капель каждого фага с высоким титром на бактериальные лужайки 77 эталонных видов Klebsiella spp. штаммы в полутвердой среде с верхним агаром и инкубируют планшеты при 37 ° C в течение 24 часов.Кроме того, мы инокулировали культуры 77 эталонных штаммов в планшеты w-96 с 10 ⁵ БОЕ фага и инкубировали культуры при 37 ° C в планшет-ридере (Multiskan) в течение 10 часов для определения силы лизиса на основе OD. измерения производятся каждые 10 мин.

4.8. Определение продукции фагового потомства

Примерно 10 ⁵ БОЕ использовали для инокуляции 500 мкл лог-фазовых бактериальных культур (OD ₆₀₀ = 0,05) в термошейкере, и культуры инкубировали при 250 об / мин и 37 ° C.При 4 hpi культуры центрифугировали (13000 × g, 2 мин) для удаления бактерий и дебриса, а супернатанты использовали для титрования. Для этого супернатанты последовательно разводили в LB, а затем использовали для анализа бляшек в культурах 1210 K. pneumoniae. Аналогичный подход был использован для определения продукции фагового потомства в полутвердых культурах. Пятна с ок. 10 ⁵ БОЕ использовали для инокуляции бактериальных культур, которые инкубировали при 37 ° C в течение 8 часов. После этого использовали микропипетку для извлечения фагов из пятна, которые ресуспендировали в LB для титрования.

4.9. Капсульная световая микроскопия

Бактерии выращивали в полутвердой среде в чашках Петри для проведения точечных тестов с суспензиями фагов (≥10 ⁷ БОЕ / мл). Через 24 ч при 37 ° C использовали петлю для мазка для отбора проб бактерий из ореолов и незасеянных областей чашки. Образцы фиксировали 2,5% формальдегидом в течение 20 мин в присутствии 100 мМ лизина, что предотвращало потерю капсулы во время фиксации [48]. После удаления фиксирующего агента центрифугированием и промывкой TE-буфером с низким содержанием соли 10% нигрозина смешивали с бактериальной суспензией на предметном стекле и добавляли 1% кристаллический фиолетовый.Препараты исследовали с помощью световой микроскопии, и наличие капсул оценивали по исключению как нигрозина, так и кристаллического фиолетового вокруг клеток.

4.10. Структурное сравнение K-антигенов

Чтобы определить, были ли структурно подобны капсульные K-антигены, которые продемонстрировали какой-либо тип взаимодействия с новыми фагами, мы загрузили атомную структуру каждого антигена с https://iith.ac.in/K-PAM/ k_antigen.html [49]. Файлы программной базы данных (PDB) были загружены и согласованы с системой молекулярной графики PyMOL (версия 2.0 Шредингер, ООО). Команда «выровнять» выполнила структурную суперпозицию с несколькими раундами уточнения, чтобы отбросить структурные выбросы. Мы получили количество выровненных атомов и среднеквадратичное отклонение атомных позиций (RMSD) между попарными выравниваниями K-антигенов.

фагов из реки Ганг сокращают биопленки in vitro и планктонный рост устойчивых к лекарствам Klebsiella pneumoniae в модели инфекции рыбок данио | AMB Express

Abedon ST, Kuhl SJ, Blasdel BG, Kutter EM (2011) Лечение фагами человеческих инфекций.Бактериофаг 1: 66–85. https://doi.org/10.4161/bact.1.2.15845

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Адамс М. (1959) Анализ фагов методом слоя агара. В кн .: Бактериофаги. Interscience Publishers, pp. 450–451

Алешкин А., Ершова О., Воложанцев Н., Светоч Е., Рубальский Е., Борзилов А., Алешкин В., Афанасьев С., Бочкарева С. (2016) Фагебиотики в лечении и профилактике инфекционных заболеваний.В: Бактериофаги: обзор и синтез вновь появляющейся области. Nova Science Publishers, Inc., стр. 105–122

Anand T, Virmani N, Kumar S, Mohanty AK, Pavulraj S., Bera BC, Vaid RK, Ahlawat U, Tripathi BN (2020) Фаговая терапия для лечения вирулентных Инфекция Klebsiella pneumoniae на мышиной модели. J Glob Antimicrob Resist 21: 34–41. https://doi.org/10.1016/j.jgar.2019.09.018

Статья PubMed Google ученый

Эндрюс Дж. М., Эндрюс Дж. М. (2001) Определение минимальных ингибирующих концентраций.J Antimicrob Chemother 48 (Дополнение 1): 5–16. https://doi.org/10.1093/jac/48.suppl_1.5

CAS Статья PubMed Google ученый

Basu S, Agarwal M, Bhartiya SK, Nath G, Shukla VK (2015) Модель раны in vivo с использованием бактериофаговой терапии биопленок pseudomonas aeruginosa. Управление раной стомы 61: 16–23

Google ученый

Blander JM, Longman RS, Iliev ID, Sonnenberg GF, Artis D (2017) Регулирование воспаления посредством взаимодействия микробиоты с хозяином.Nat Immunol 18: 851–860

CAS Статья Google ученый

Bonilla N, Rojas MI, Cruz GNF, Hung SH, Rohwer F, Barr JJ (2016) Phage on tap — быстрый и эффективный протокол для подготовки лабораторных запасов бактериофагов. PeerJ 2016: e2261. https://doi.org/10.7717/peerj.2261

CAS Статья Google ученый

Burmeister AR, Fortier A, Roush C, Lessing AJ, Bender RG, Barahman R, Grant R, Chan BK, Turner PE (2020) Плейотропия усложняет компромисс между устойчивостью к фагам и устойчивостью к антибиотикам.Proc Natl Acad Sci. https://doi.org/10.1073/pnas.1919888117

Статья PubMed Google ученый

Cao F, Wang X, Wang L, Li Z, Che J, Wang L, Li X, Cao Z, Zhang J, Jin L, Xu Y (2015) Оценка эффективности бактериофага при лечении пневмония, вызванная множественной лекарственной устойчивостью Klebsiella pneumoniae у мышей. Биомед Рес Инт 2015: 752930. https://doi.org/10.1155/2015/752930

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Capparelli R, Parlato M, Borriello G, Salvatore P, Iannelli D (2007) Экспериментальная фаговая терапия против Staphylococcus aureus у мышей.Антимикробные агенты Chemother 51: 2765–2773. https://doi.org/10.1128/AAC.01513-06

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Chan BK, Sistrom M, Wertz JE, Kortright KE, Narayan D, Turner PE (2016) Отбор фагов восстанавливает чувствительность к антибиотикам у MDR Pseudomonas aeruginosa . Sci Rep 6: 1–8. https://doi.org/10.1038/srep26717

CAS Статья Google ученый

Chhibber S, Bansal S, Kaur S (2015) Разрушение смешанной биопленки klebsiella pneumoniae B5055 и pseudomonas aeruginosa PAO с использованием бактериофагов отдельно или в сочетании с ксилитом.Microbiol (Великобритания) 161: 1369–1377. https://doi.org/10.1099/mic.0.000104

CAS Статья Google ученый

Chhibber S, Kaur S, Kumari S (2008) Терапевтический потенциал бактериофага при лечении крупозной пневмонии, опосредованной Klebsiella pneumoniae B5055, у мышей. J Med Microbiol 57: 1508–1513. https://doi.org/10.1099/jmm.0.2008/002873-0

Статья PubMed Google ученый

Christena LR, Raman T, Makala VH, Ulaganathan V, Subramaniapillai S (2016) Производное дитиазола тиона в качестве конкурентного ингибитора эффлюксной помпы NorA для сокращения клинического изолята MRSA с множественной лекарственной устойчивостью в модели инфекции рыбок данио.Appl Microbiol Biotechnol. https://doi.org/10.1007/s00253-016-7759-2

Статья Google ученый

Christensen GD, Simpson WA, Younger JJ, Baddour LM, Barrett FF, Melton DM, Beachey EH (1985) Прилипание коагулазонегативных стафилококков к пластиковым пластинам для культивирования тканей: количественная модель прикрепления стафилококков к медицинским устройствам . J Clin Microbiol 22: 996–1006. https://doi.org/10.1128/jcm.22.6.996-1006.1985

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Domingo-Calap P, Beamud B, Vienne J, González-Candelas F, Sanjuán R (2020) Выделение четырех литических фагов, инфицирующих клинические изоляты Klebsiella pneumoniae K22 из Испании.Int J Mol Sci. https://doi.org/10.3390/ijms21020425

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Dwivedi B, Schmieder R, Goldsmith DB, Edwards RA, Breitbart M (2012) PhiSiGns: онлайн-инструмент для идентификации сигнатурных генов в фагах и разработки праймеров для ПЦР для изучения разнообразия фагов. BMC Bioinf 13:37. https://doi.org/10.1186/1471-2105-13-37

CAS Статья Google ученый

German GJ, Misra R (2001) Белок TolC Escherichia coli служит рецептором клеточной поверхности для недавно охарактеризованного бактериофага TLS.J Mol Biol 308: 579–585. https://doi.org/10.1006/jmbi.2001.4578

CAS Статья PubMed Google ученый

Grillon A, Schramm F, Kleinberg M, Jehl F (2016) Сравнительная активность ципрофлоксацина, левофлоксацина и моксифлоксацина против Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa и , минимальные концентрации, подавляемые Stenotrophia, оцениваются как минимальные концентрации Stenotrophia и . PLoS ONE 11: 1–10.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0156690

CAS Статья Google ученый

Holst Sørensen MC, van Alphen LB, Fodor C, Crowley SM, Christensen BB, Szymanski CM, Brøndsted L (2012) Фазовая экспрессия капсульных полисахаридных модификаций позволяет Campylobacter jejuni избежать бактериофаговой инфекции у кур. Front Cell Infect Microbiol 2:11. https://doi.org/10.3389/fcimb.2012.00011

CAS Статья PubMed Google ученый

Hoyles L, Murphy J, Neve H, Heller KJ, Turton JF, Mahony J, Sanderson JD, Hudspith B, Gibson GR, McCartney AL (2015) Sinderen D (2015) Комбинация Klebsiella pneumoniae subsp pneumoniae-бактериофаг из слепой кишки стоки здоровой женщины.PeerJ. 12: 4. https://doi.org/10.7717/peerj.1061

Статья Google ученый

Сотрудничество исследователей Делийского исследования неонатальных инфекций (DeNIS) (2016) Характеристика и устойчивость к противомикробным препаратам возбудителей сепсиса у новорожденных, родившихся в центрах третичной медицинской помощи в Дели, Индия: когортное исследование. Ланцетный шар, Исцеление 4: e752 – e760. https://doi.org/10.1016/S2214-109X(16)30148-6

Статья Google ученый

Джарвис В.Р., Манн В.П., Хайсмит А.К., Калвер Д.Х., Хьюз Дж. М. (1985) Эпидемиология внутрибольничных инфекций, вызываемых Klebsiella pneumoniae .Инфекционный контроль 6: 68–74

CAS Статья Google ученый

Kęsik-Szeloch A, Drulis-Kawa Z, Weber-Dąbrowska B, Kassner J, Majkowska-Skrobek G, Augustyniak D, Lusiak-Szelachowska M, Zaczek M, Górski A, Kropinski AM (2013) новые литические бактериофаги, инфицирующие множественную лекарственную устойчивость Klebsiella pneumoniae . Вирол Дж 10: 100. https://doi.org/10.1186/1743-422X-10-100

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Хайрнар К. (2016) Ганг: особенный по своему происхождению.J Biol Res 23:16

Google ученый

Кумари С., Харджай К., Чхиббер С. (2011) Бактериофаг против антимикробных агентов для лечения ожоговой инфекции мышей, вызванной Klebsiella pneumoniae B5055. J Med Microbiol 60: 205–210. https://doi.org/10.1099/jmm.0.018580-0

Статья PubMed Google ученый

Lieschke GJ, Currie PD (2007) Животные модели болезней человека: рыбки данио плывут в поле зрения.Nat Rev Genet 8: 353–367

CAS Статья Google ученый

Lin TL, Hsieh PF, Huang YT, Lee WC, Tsai YT, Su PA, Pan YJ, Hsu CR, Wu MC, Wang JT (2014) Выделение бактериофага и его деполимеразы, специфичных для капсулы K1 клебсиелл pneumoniae : значение для типирования и лечения. Журнал Infect Dis 210: 1734–1744. https://doi.org/10.1093/infdis/jiu332

CAS Статья PubMed Google ученый

Малик Р., Чиббер С. (2009) Защита с помощью бактериофага K01 против смертельной инфекции, вызванной Klebsiella pneumoniae , вызванной ожоговой раной у мышей.J Microbiol Immunol Infect 42: 134–140

PubMed Google ученый

Manohar P, Tamhankar AJ, Lundborg CS, Nachimuthu R (2019) Терапевтическая характеристика и эффективность коктейлей с бактериофагами, заражающих Escherichia coli , Klebsiella pneumoniae и Enterobacter Species. Front Microbiol 10: 574. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.00574

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Merritt JH, Kadouri DE, O’Toole GA (2005) Выращивание и анализ статических биопленок текущие протоколы в микробиологии.Уайли, Нью-Йорк

Google ученый

Монферрер Э., Доминго-Калап П. (2019) Коэволюция вируса и хозяина как инструмент контроля устойчивости бактерий к фаговой терапии. Дж. Биотехнология Биомед 2:24. https://doi.org/10.26502/jbb.2642-91280013

Статья Google ученый

Neely M, Pfeifer J, Caparon M (2002) Модель бактериального патогенеза Streptococcus-рыбок данио.Infect Immun 70: 3904–3914. https://doi.org/10.1128/IAI.70.7.3904

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Novince CM, Whittow CR, Aartun JD, Hathaway JD, Poulides N, Chavez MB, Steinkamp HM, Kirkwood KA, Huang E, Westwater C, Kirkwood KL (2017) Иммуномодулирующие действия микробиоты комменсального кишечника в костном мозге и печени имеют катаболические эффекты на гомеостаз скелета у здоровья. Sci Rep 7: 5747.https://doi.org/10.1038/s41598-017-06126-x

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Oliveira H, Mendes A, Fraga AG, Ferreira A, Pimenta AI, Mil-Homens D, Fialho AM, Pedrosa J, Azeredo J (2019) Капсульная деполимераза K2 очень стабильна, устойчива к резистентности и защищает личинок и мыши из Acinetobacter baumannii sepsis. Appl Environ Microbiol. https://doi.org/10.1128/AEM.00934-19

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

Pajunen M, Kiljunen S, Skurnik M (2000) Бактериофаг phiYeO3-12, специфичный для Yersinia enterocolitica серотипа O: 3, связан с колифагами T3 и T7. J Bacteriol 182: 5114–5120. https://doi.org/10.1128/jb.182.18.5114-5120.2000

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Pan Y-J, Lin T-L, Chen C-C, Tsai Y-T, Cheng Y-H, Chen Y-Y, Hsieh P-F, Lin Y-T, Wang J-T (2017) Klebsiella Phage ΦK64-1 кодирует множественные деполимеразы для нескольких типов капсул хозяина.J Virol. https://doi.org/10.1128/jvi.02457-16

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Филлипс Дж. Б., Вестерфилд М. (2014) Модели рыбок данио в трансляционных исследованиях: склонение чаши весов к достижениям в области здоровья человека. Цифровой мультиметр Dis Model Mech 7: 739–743. https://doi.org/10.1242/dmm.015545

CAS Статья PubMed Google ученый

Сасани М.С., Ферештех Эфтехар (2020) Потенциал бактериофага, выделенного из сточных вод, при лечении инфекции крупозной пневмонии, вызванной Klebsiella pneumoniae у мышей.https://doi.org/https://doi.org/10.1007/s00284-020-02041-z

Ши И, Чен И, Ян З, Чжан И, Ю Би, Лю Х, Чен П, Лю М., Чжан С, Ло Х, Чен И, Юань З, Чен Дж, Гонг И, Пэн И (2020) Характеристика и секвенирование генома нового Т7-подобного литического фага, kpssk3, заражающего устойчивую к карбапенемам Klebsiella pneumoniae. Arch Virol 165: 97–104. https://doi.org/10.1007/s00705-019-04447-y

CAS Статья PubMed Google ученый

Сулаквелидзе А., Алавидзе З., Моррис Дж. (2001) Бактериофаговая терапия.Антимикробные агенты Chemother 45: 649–659

CAS Статья Google ученый

Саммерс WC (2012) Странная история фаготерапии. Бактериофаг 2: 130–133. https://doi.org/10.4161/bact.20757

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Tomás JM, Jofre JT (1985) Липополисахарид-специфический бактериофаг для Klebsiella pneumoniae C3.J Bacteriol 162: 1276–1279

Статья Google ученый

Tumbarello M, Viale P, Viscoli C, Trecarichi EM, Tumietto F, Marchese A, Spanu T, Ambretti S, Ginocchio F, Cristini F, Losito AR, Tedeschi S, Cauda R, Bassetti M (2012) Предикторы смертность от инфекций кровотока, вызванных Klebsiella pneumoniae K. pneumoniae, продуцирующей карбапенемазу: важность комбинированной терапии. Clin Infect Dis 55: 943–950. https: // doi.org / 10.1093 / cid / cis588

CAS Статья PubMed Google ученый

Vading M, Nauclér P, Kalin M, Giske CG (2018) Инвазивная инфекция, вызванная Klebsiella pneumoniae — это заболевание, поражающее пациентов с высокой коморбидностью и связанное с высокой долгосрочной смертностью. PLoS ONE. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0195258

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Verma V, Harjai K, Chhibber S (2009) Характеристика T7-подобного литического бактериофага Klebsiella pneumoniae B5055: потенциального терапевтического агента.Curr Microbiol 59: 274–281. https://doi.org/10.1007/s00284-009-9430-y

CAS Статья PubMed Google ученый

Xie Y, Wahab L, Gill JJ (2018) Разработка и валидация анализа на основе микротитрационного планшета для определения диапазона хозяев бактериофага и вирулентности. Вирусы. https://doi.org/10.3390/v10040189

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Zhao J, Zhang Z, Tian C, Chen X, Hu L, Wei X, Li H, Lin W, Jiang A, Feng R, Yuan J, Yin Z, Zhao X (2019) Характеристика биологии литического бактериофаг vB_EaeM_φEap-3, заражающий множественной лекарственной устойчивостью Enterobacter aerogenes .Фронтальный микробиол 10: 420. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.00420

Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Всемирная организация здравоохранения (2017 г.) Руководство по профилактике и борьбе с устойчивыми к карбапенемам Enterobacteriaceae, Acinetobacter baumannii и Pseudomonas aeruginosa в медицинских учреждениях. ВОЗ, Женева

Google ученый

Исследование на мышах показывает, что терапия бактериофагом может бороться с лекарственно-устойчивой Klebsiella pneumoniae — ScienceDaily

Использование вирусов вместо антибиотиков для приручения проблемных устойчивых к лекарствам бактерий является многообещающей стратегией, известной как бактериофаговая или «фаговая терапия».«Ученые из Национального института здравоохранения использовали два разных вируса бактериофага по отдельности, а затем вместе, чтобы успешно лечить исследуемых мышей, инфицированных множественной лекарственной устойчивостью типа 258 (ST258) Klebsiella pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью (ST258). Бактерия K. pneumoniae ST258 включена в список CDC, представляющий наибольшую угрозу устойчивости к антибиотикам в Соединенных Штатах. Высокие показатели заболеваемости и смертности связаны с нелеченными инфекциями, вызванными инфекцией K. pneumoniae .

Фаговая терапия проводится уже около столетия, хотя убедительные исследования редки, а клинические результаты — из нескольких отчетов — дали смешанные результаты. В новой статье, опубликованной в журнале mBio , ученые NIH отмечают, что фаги сегодня вызывают большой интерес из-за нехватки альтернативных вариантов лечения лекарственно-устойчивых инфекций. Возникла бактериальная резистентность даже к новейшим комбинациям лекарств, в результате чего у некоторых пациентов остается мало эффективных вариантов лечения или вообще не остается их.

В ходе исследования, проведенного в Гамильтоне, штат Монтана, в лабораториях Роки-Маунтин, входящей в Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний Национального института здоровья, и в сотрудничестве с Национальным институтом рака в Бетесде, штат Мэриленд, ученые завершили серию исследований на исследуемых мышах. инфицированы ST258. Они лечили мышей либо фагом P1, либо фагом P2, либо их комбинацией, причем все инъецировали в разное время после инфицирования ST258. В 2017 году ученые выделили фаги P1 и P2 из неочищенных сточных вод, которые они проверили на наличие вирусов, которые могут заразить ST258 — это показатель того, что фаги можно найти практически в любом месте.Фаги P1 и P2 — это вирусы отряда Caudovirales, которые естественным образом инфицируют бактерии.

Каждая из трех экспериментальных схем лечения помогла мышам вылечиться от инфекции ST258. Ученые отметили, что предоставленная доза фага была менее важна для выздоровления, чем время, когда доза была получена. Мыши, получавшие лечение через 1 час после заражения, показали самое сильное выздоровление, за ними следовали мыши, которых лечили через восемь часов после заражения, а затем те, которые лечились через 24 часа. Все контрольные мыши, получавшие физиологический раствор, быстро заболели и умерли.

Ученые также проверили кровь и ткани обработанных фагом мышей на наличие бактерий ST258 и обнаружили, что бактерий было значительно меньше во все временные точки, независимо от используемого метода лечения, по сравнению с контрольными мышами.

К сожалению, ученые также обнаружили, что бактерии ST258, обнаруженные в крови и образцах тканей мышей, обработанных фагом, уже начали развивать фагоустойчивость, и они продолжают исследовать это открытие. Группа также изучает, как результаты фаговой терапии сравниваются между образцами крови мышей, инфицированных ST258, и человеческой крови, и изучает, могут ли компоненты крови человека влиять на эффективность фага.

Это исследование представляет собой первый шаг в оценке использования фаговой терапии для лечения тяжелой инфекции K. pneumoniae ST258 у людей.

История Источник:

Материалы предоставлены NIH / Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний . Примечание. Содержимое можно редактировать по стилю и длине.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный 20 мл №4

Страница не найдена | Ліки-Інфо

инструкция по применению, аналоги, статьи » Справочник ЛС

Ростех разработал первый в мире универсальный бактериофаг для борьбы с инфекциями

«Пневмо 23» или «Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный»? – meds.is

Сравнение эффективности Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Сравнение безопасности Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Сравнение противопоказаний Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Сравнение привыкания у Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Сравнение побочек Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Сравнение удобства применения Пневма 23 и Бактериофага поливалентного очищенного клебсиелла

Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный фл.(р-р местно, орал.) 20мл №4

Характеристика четырех вирулентных бактериофагов Klebsiella pneumoniae и оценка их потенциального использования в комплексных препаратах фагов | Virology Journal

Изоляты бактерий

Выделение фагов

Амплификация и очистка бактериофага

Анализы бактериофаговых бляшек

Приготовление «чистых линий» бактериофагов и оценка морфологии бляшек

Определение диапазона фага-хозяина

Центрифугирование в градиенте CsCl

Электронная микроскопия

Оценка частоты образования фаго-устойчивых форм

Чувствительность фаговых частиц к температуре и pH

Скорость адсорбции фага

Одностадийная кривая роста

Размножение фага в жидкой питательной среде и оценка титра бактериофага

Выделение и рестрикционное расщепление ДНК фага

Секвенирование, сборка и аннотация генома

Идентификация недавно выделенного литического бактериофага против капсульного типа K24, устойчивых к карбапенемам изолятов Klebsiella pneumoniae

Фаговая терапия для лечения вирулентной инфекции Klebsiella pneumoniae на модели мыши

Основные моменты

Реферат

Цели

Методы

Результаты

Заключение

Ключевые слова

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Выделение и характеристика двух фагов Klebsiella pneumoniae, кодирующих дивергентные деполимеразы

1. Введение

3. Обсуждение

4. Материалы и методы

4.1. Бактерии

4.2. Выделение фагов из образцов окружающей среды

4.3. Электронная микроскопия

4.4. Выделение ДНК и секвенирование генома ДНК

4.5. Аннотации генома

4.6. Сравнительная геномика

4,7. Определение диапазона хозяев

4.8. Определение продукции фагового потомства

4.9. Капсульная световая микроскопия

4.10. Структурное сравнение K-антигенов

фагов из реки Ганг сокращают биопленки in vitro и планктонный рост устойчивых к лекарствам Klebsiella pneumoniae в модели инфекции рыбок данио | AMB Express

Исследование на мышах показывает, что терапия бактериофагом может бороться с лекарственно-устойчивой Klebsiella pneumoniae — ScienceDaily

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Related Post

Добавить комментарий Отменить ответ