В мазке лейкоциты 20 30: Что означают анализы? Микроскопия. | Румянцева, md

Этот метод показывает только:

• Наличие или отсутствие воспаления (по количеству лейкоцитов) – ВНИМАНИЕ! много лейкоцитов при отсутствие воспаления может быть следствием попадания в мазок крови.
• Диагностировать следующие заболевания (гонорея, трихомониаз, молочница, бактериальный вагиноз)
• Обнаружить неспецифическую флору (при воспалении, вызванном неспецифическими микроорганизмами)
• Описать состояние нормальной флоры влагалища

Таким образом, с помощью обычного мазка вам должны поставить или исключить следующие диагнозы:

• Гонорея
• Бактериальный вагиноз (хотя и существует 4 критерия постановки этого диагноза в клинической практике достаточно характерного цвета выделений, рыбного запаха и наличия ключевых клеток в мазке)
• Кандидозный вульвовагинит (молочница)
• Заподозрить наличие воспалительного процесса в органах малого таза (лейкоцитоз, неспецифическая флора)
• Трихомониаз (сложный диагноз: в высохшем мазке у трихомонад отпадают жгутики и они становятся не отличимые от макрофагов (обычных клеток крови), поэтому диагноз можно не поставить, про трихомониаз см. ниже)

Этот метод позволяет определить состав флоры и количество возбудителя (то есть много его или мало), и кроме этого, установить, к каким антибиотикам в наибольшей степени он чувствителен.

Бак.посев чаще всего берут из влагалища, канала шейки матки и полости матки.

Когда целесообразно брать бак.посев:

• Если в мазке обнаружено много лейкоцитов и неспецифическая флора
• В программе лечения бесплодия или перед плановой беременностью (посев берется из цервикального канала и полости матки)
• При выявлении в ПЦР уреаплазмы (посев проводится на специальной среде)
• При лечении всех видов ВЗОМТ

В целом это все, больше распространенных показаний нет. Назначать бак.посев в других случаях, или просто так – не целесообразно.

Это самый распространенный метод диагностики в настоящий момент и именно с ним связано большинство недоумений.

Этот метод диагностики позволяет определить ДНК возбудителя, то есть при использовании этого метода мы отвечаем только на один вопрос – если в материале хотя бы несколько специфических фрагментов микроорганизма.

О чем это говорит – положительный результат может быть даже в случае если микроорганизмов крайне мало и если микроорганизм уже погиб (но ДНК осталась).

Когда это имеет значение – если контроль после лечения проведен слишком рано (остались погибшие микроорганизмы) – можно решить, что лечение оказалось не эффективным. В другом случае поставить диагноз, при том что возбудителя заболевания крайне мало (это имеет значение при вопросе о необходимости лечения уреаплазмоза).

Какие инфекции имеет смыл диагностировать с помощью ПЦР:

• Хламидии (в мазке они не определяются)
• Вирус папилломы человека
• Вирус простого герпеса
• Цитомегаловирус (имеет значение преимущественно перед плановой беременностью или во время нее)
• Уреаплазма (только Parva, T960 – нет)
• Микоплазма ?

Все, другие возбудители диагностируются в обычном мазке или вообще не имеют значения. И нет никакого смысла определять методом ПЦР (гонорею, бактериальный вагиноз или молочницу) Крайне редко, в спорных случаях это возможно, но всем подряд – крайне не целесообразно. Поэтому когда вам предлагают сдать анализ ПЦР на 10-15, то 20 возбудителей – помните – это не целесообразно!!!

При использовании этого метода определяется был ли когда-нибудь или имеется ли в настоящее время контакт организма с конкретным возбудителем заболевания. При этом оценивается количество специальных белков крови (иммунноглобулинов), которые бывают нескольких классов. Как правило определяют три класса M,G и A. О чем говорит наличие каждого из этих классов иммунноглобулинов?

• Иммуноглобулины класса М (IgM) – появляются в крови первыми, сразу же после контакта организма с возбудителем заболевания постепенно нарастают, а потом исчезают. То есть наличие IgM говорит о том, что заболевание находится в острой стадии и протекает в вашем организме в настоящий момент.
• Иммунноглобулины класса G (IgG) – по сути отражают память иммунной системы о контакте с возбудителем – это значит, что их наличие указывает на то, что вы когда-то болели этим заболеванием, заболевание прошло острую фазу (IgM уже пропали), что у вам была сделана прививка или у вас есть иммуннитет к этому возбудителю. Неважно, наслаждаетесь ли вы слотами для мобильных казино или лучшими онлайн-слотами на своем рабочем столе, мы предлагаем лучшие онлайн-слоты РВ казино которые игроки ищут каждый день. Так что, если вы любите играть в лучшие онлайн-слоты для развлечения или ищете серьезные онлайн-слоты на реальные деньги, у нас есть все, что вам нужно, в том числе лучшие приветственные бонусы и другие отличные акции, быстрые выплаты и безопасное банковское обслуживание на вашем счету. компьютер или в дороге через мобильный телефон, круглосуточная поддержка клиентов и многое другое!. Концентрация (титр) этого иммунноглобулина пр контакте с возбудителем нарастает совместно с IgM, затем IgM исчезает, а титр IgG сохраняется на высоком уровне и постепенно уменьшается.
• Иммунноглобулин класса А (IgA) – этот иммунноглобулин в основном ответственен за обеспечение местного иммунитета слизистых оболочек, но его растворимая форма имеет значение при повышении его титра в крови при диагностике хламидиоза.

Титры (концентрации) описанных выше иммунноглобулинов бывают разными и трактовать эти показатели можно по-разному. Бывает, что титр иммунноглобулина бывает сомнительным и сделать заключение по такому анализу трудно.

Итак, с помощью серологического метода можно определить:

• наличие острой стадии заболевания (присутствие IgM)
• наличие иммунитета к конкретному возбудителю (наличие Ig G; например к краснухе, гепатиту и.т.д.)
• установить факт недавно перенесенного заболевания (высокие показатели IgG)
• факт носительства (к примеру, для герпеса – наличие IgG)

Теперь разберемся, как это работает на практике – самые распространенне случаи.

Кандидозный вульвовагинит (молочница)

Симитомы: зуд, белые творожистые выделения
Анализы: достаточно осмотра и общего мазка
Лечение: обычно хватает 1-2 приемов флюконазола (по 150 мг – дифлюкан, дифланзон и.т. д.) или свечи – диапазон большой. Дополнительно ничего не требуется.

Бактериальный вагиноз
Симптомы: белые сливкообразные выделения, запах “рыбы”
Анализы: достаточно осмотра и общего мазка (в мазках – гарднереллы и ключевые клетки), пцр и др. исследования избыточны.
Лечение: 2 варианта: трихопол (метронидазол) или орнидазол (орнидазол) по 500 мг 2 раза в день после еды или свечи далацин (клиндамицин) – 3-5 дней. Все.

Трихомониаз

Симптомы: водянистые пенистые выделения из половых путей
Анализы: осмотр, мазок (в мазке часто не обнаруживаются), ПЦР (может не показать), есть достоверный метод – смотреть мазок сразу же после забора в капл, но его практически никто не делает.
Лечение: всего два препарата: метронидазол (Трихопол) и орнидазол (Тиберал) – принимаются одинаково по 500 мг два раза в день после еду – 5 дней. В 90% случаев этого достаточно.

Трихомониаз – видео версия:

Симптомы: зеленовато-желтоватые выделения, могут быть просто мутноваты
Анализы: осмотр, мазок, можно дополнить ПЦР
Лечение: обычно досточно 1-2 уколов (к примеру, Роцефин 1 гр. внутримышечно 1 раз в день 2 дня)
Обычно гонорея сочетается с хламидиозом и\или трихомониазом, поэтому к лечению добавляют трихопол или тиберал на 5 дней и берут ПЦР на хламидии – при выявлении хламидий лечение дополняют.

Хламидиоз

Симптомы: как правило, сомптомов нет, или просто имеются более обильне выделения измененного цвета
Анализы: ПЦР, можно дополнить анализом крови на IgG и Ig A к хламидиям
Лечение: несколько вариантов: азитромицин (Сумамед) по 1 гр. на 1й-3й-7й и 14 день лечения однократно; вильпрофен (джозомицин) по 1т 2 раза в день 10-14 дней (или 1 таб. 3 раза в день 10 дней) – много разных схем. Есть и другие схемы с другими антибиотиками, но они используются реже. Важно – никаких иммунномодуляторов, ферментов и пр.

Герпес

Симптомы: болезненные пузырьки, которые лопаются и на их месте образуются эрозии.
Анализы: осмотр, ПЦР, кровь на IgG и Ig M к герпесу.
Лечение: ацикловир, валтрекс – схемы и дозы разные
Важно: за несколько дней до появления пузырьков и после полного заживления, можно заражать герпесом партнера.

Несколько слов про уреаплазмы и микоплазмы. Сначала небольшой обзор.

Уреаплазмы и микоплазмы

Видео: Уреаплазма

Роль этих возбудителей в гинекологической и урологической практике довольно неоднозначна. Так получилось, что в нашей стране с приходом ПЦР диагностики эти возбудитетли стали в один ряд с инфекциями, передаваемыми половым путем, и стали разрабатываться самые разнообраные схемы их лечения.

При этом отношение запада к этим возбудителям сохранялось спокойным.

До сих пор в Америке и Европейских странах рутинного скрининга пациентов на аналичие этих возбудителей не проводится. Выявление уреаплазм и микоплазм признано трудоемким, и в основном проводится в научно орентированных лабораториях. Все же внимание к этим возбудителям на западе есть.

Уреплазмы и микоплазмы считаются комменсалами (живут в норме) в половых путях как мужчин, так и женщин. По различным данным более чем у 60% сексуально активных женщин выявялется уреаплазма.

Большое внимание уреаплазменной инфекции уделяется в отношении ее роли в акушерской патологии. Отдельные исследования показывают значение этого возбудителя в формировании таких состояний как: хорионамнионит, преждевременный разрыв плодных оболочек, преждевренные роды, гипотрофия плода. Важно отметить, что уреплама во всех этих случаях выявлялась в околоплодной жидкости, а не в цервикальном канале.

Роль уреплазменной инфекции была выявлена в формировании пневмонии у новорожденных и хронических заболеваний легких, не зависимо от вида родоразрешения. Этот возбудитель выявляется в трахее новорожденных, в большей степени у рожденных до 34 недель. Так у новорожденных весом менее 2500 гр. уреплазма выделется в 34% случаев.

В то же время у доношенных детей уреаплазменная инфекция легких – редкость. В частности это объясняется тем, что частота уреплазменных хорионамнианитов (воспаление околоплодных оболочек) выше до 32 недель. Наличие хорионамнионита сказывается на трансплацентарном пассаже иммуноглобулинов, что приводит к более высокой инфицированности новорожденных, родившихся раньше срока.

Вы заметили, что ни в одной схеме лечения я не использую иммунномодуляторы и другие препараты.

Не секрет, что западная медицина не использует иммуномодуляторы в схемах лечения воспалительных заболеваний. Все иммуномодулирующие и иммуностимулирующие препараты, предстваленные на нашем рынке, исключительно отечественного производства. Ни один из этих препаратов не прошел клиничские исследования по формату GCP, а именно этот формат исследований, принятый во всем мире, предполагает доказательство эффективности препаратов и определяет полный спектр возможных побочных эффектов. Дизайн таких исследований очень сложный и требования к препаратам повышенные. Такие исследования, как правило, международные, мультицентровые и плацебо-конролируемыме.

Сама идея иммуномодулятора неплохая, однако, реализована она слишком примитивно. «Подстегивание» иммунной системы с целью активизации естественных механизмов борьбы с инфекцией – так регламентируется основная задача этих препаратов. Однако, иммунная система намного сложнее, чем это представляется на первый взгляд.

Когда в организм вводится раздражающий фактор, никто не знает, в каком состоянии находится иммунная система. Активизация неспецифического ответа на раздражитель теоритически должна способствовать улучшению лечебного эффекта антибактериальных препаратов, за счет перевода всей иммунной системы в активирвоанное положение.

Но проблема заключается в том, что не возможно изучить в какой степени у каждого конкретного пациента активизируется иммунная система, как долго длится этот ответ, какие механизмы активизируются паралелльно, как быстро эта система истощается и какой обратный эффект у этого «экстренного подстегивания» будет.

Легко можно предположить, что быстрый клинический эффект от такого допинга может обратиться большей частотой рецидивов заболевания за счет истощения иммунной системы. Кроме этого, возможна активизация аутоиммунных процессов, ну и самое неприятное – отсроченные эффекты – риск развития злокачественных заболеваний иммунной системы.

Пусть все перечисленные возможные последствия лечения никогда не случатся, но особенность введения на рынок лекарственного препарата предполагает его длительное изучение и доказательство его безопасности. Такого в отношении иммуномодуляторов сделано не было. Препараты слишком быстро выскочили на рынок, а система учета побочных эффектов лекарственных препаратов у нас практически не работает. Именно поэтому мы до сих пор не знаем, какой процент уже случившихся осложнений существует.

Таким образом, хочется еще раз обратиться к зравому смыслу и обычной логике. У нас в стране есть все препараты, которыми западная общественность лечит своих пациентов, без использования иммуномодуляторов и других вспомогательных средств, и их пациенты вылечиваются. Так зачем рисковать и испытвать на себе препарты, не имеющие достоверных сертификатов безопасности, признанных во всем мире.

Нужные и не нужные анализы (видео)

Клинические случаи тромбоцитопении — ФГБУ Поликлиника №2

С.В. Кулешова, А.А. Алтаева, Е.А.Кузнецова

Клинические случаи ложной и  истинной тромбоцитопении в амбулаторной практике.

ФГБУ «Поликлиника №2» Управления делами Президента РФ, 119146, Москва, Россия

Статья посвящена лабораторным нюансам диагностики тромбоцитопений в практике амбулаторно-поликлинического звена. На примере двух разных пациентов показана важность знаний базовых исследований в дифференциальной диагностике ложных и истинных тромбоцитопений.

Ключевые слова: тромбоцитопения, ЭДТА-зависимая тромбоцитопения, подсчёт тромбоцитов по Фонио.

В деятельности клинико-диагностической лаборатории  амбулаторно-поликлинического звена на долю общего анализа крови приходится до 30% от всех  выполненных анализов.

Обычно общий клинический анализ крови состоит из данных гематологического анализатора, а при отклонении в лейкоформуле – и дифференцированного подсчета лейкоцитов в мазке крови при световой микроскопии.

Сегодняшний уровень гематологических анализаторов позволяет выдавать до 70% результатов анализов без микроскопии мазка.

Тем не менее, врач  не должен слепо доверять лабораторным анализаторам, а должен быть последней инстанцией, после проверки и одобрения которой результаты будут валидированы.

В работе врача клинической лабораторной диагностики мелочей не бывает. В потоке работы выбрать из  данных гематологического анализатора те, которые нуждаются в дополнительных исследованиях, непросто. Примером необходимости широкого круга знаний и умений врача КДЛ может служить тромбоцитопения — снижение числа тромбоцитов в отсутствие иных отклонений при подсчете форменных элементов и в мазке крови. К тромбоцитопениям относят состояния, при которых количество тромбоцитов периферической крови составляет менее 150 х 109/л. Количество тромбоцитов 50х109/л еще позволяет проводить полостные операции при сохранении гемостаза. Количество тромбоцитов ≤ 20 х109/л. относится  к критическим величинам с точки зрения клинической лабораторной диагностики [1]. Таким пациентам , согласно национальному стандарту показана трансфузия тромбоцитного концентрата [2].  Для подсчёта количества тромбоцитов унифицированными признаны:

• подсчёт в крови с помощью гематологического анализатора;
• подсчёт в мазках по методу Фонио.

Снижение количества тромбоцитов в анализе крови может быть истинным и тогда потребует немедленных действий согласно тяжести тромбоцитопении. Снижение количества тромбоцитов в анализе крови может не быть истинным. Тогда оно будет отражать индивидуальные особенности пациента или будет следствием ошибки на преаналитическом этапе.  Кроме  истинных тромбоцитопений возможно снижение количества  тромбоцитов, которое  обычно возникает из-за несвоевременного пропускания крови через анализатор, либо из-за  спонтанной агрегации тромбоцитов. Ложные снижения количества тромбоцитов могут встречаться при широком спектре нарушений, таких как аутоиммунные заболевания, вирусные и бактериальные инфекции, хронические воспалительные заболевания. Спонтанная агрегация тромбоцитов может быть проявлением таких факторов как иммунологический (антитромбоцитарные антитела), химический (антикоагулянты) и физический (температурный). Венозная кровь предпочтительнее для проведения общего анализа крови. На сегодняшний день в качестве антикоагулянта используют калийные соли этилендиаминтетрауксусной кислоты – ЭДТА (ethylene-diamine-tetra-acetic acid). ЭДТА-зависимая тромбоцитопения является следствием взаимодействия антитромбоцитарных антител с антигенами тромбоцитов в присутствии ЭДТА и при воздействии низких температур.  По данным зарубежных авторов на долю ЭДТА-зависимой псевдотромбоцитопении  приходится от 0,07-0,11% от всех анализов крови [3].  ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения проявляется в уменьшении количества тромбоцитов, причем эти явления прогрессируют по мере увеличения времени, прошедшего после взятия крови. Чтобы избежать агрегации рекомендуется пропускать кровь через анализатор   в промежутке 0-5 мин. или через 1 час и более после взятия крови [4]. В промежутке 5 мин. — 1 час происходит временная агрегация тромбоцитов, что может привести к их ложному снижению в пробе крови. Непосредственно после взятия крови исключается возможность спонтанной агрегации тромбоцитов. 

Мы хотим продемонстрировать важность такой рутинной методики как подсчёт тромбоцитов по методу Фонио. А также двумя клиническими случаями подчеркнуть необходимость  для врача клинической лабораторной диагностики быть не только аналитиком , но и работать с микроскопом.

Первый клинический случай  привычен в амбулаторной практике.

Пациентка М., 1962 года рождения. Обратилась за справкой в бассейн в рамках ежегодной диспансеризации. На момент осмотра активно  жалоб не предъявляет. Общее состояние удовлетворительное. Температура тела 36.6°С. Сознание: ясное. Кожные покровы: розовые. Видимые слизистые розовые. Питание нормальное. Лимфоузлы: не увеличены. Щитовидная железа — не увеличена. Отеков нет. Костно-суставная система без патологии. Тоны звучные, ритм правильный. Патологические шумы не выслушиваются. ЧСС 68 в мин. САД 120/80 рт.ст. ДАД 120/80мм рт.ст Живот: не увеличен, участвует в дыхании, при пальпации мягкий, безболезненный. Печень не увеличена. Физиологические отправления в норме. Система мочевыделения:
Мочеиспускание не нарушено. Симптом поколачивания отрицательный с обеих сторон.

При выполнении общего анализа крови выявлено резкое снижение количества тромбоцитов – до 15х109/л.

Анализ  выполнялся на гематологическом анализаторе Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) производитель Roche Diagnostics (Швейцария). Препарат для микроскопии был приготовлен и окрашен на аппарате для автоматизированной окраски мазков крови Гематек (HemaTek) ,производитель Bayer Diagnostics. При подсчете лейкоформулы были обнаружены частые и большие  скопления тромбоцитов, что позволило предположить псевдотромбоцитопению. Пациентка была вызвана для повторного анализа крови. Был произведён забор крови и  приготовлены стекла для подсчёта тромбоцитов по Фонио. Унифицированный метод подсчёта в мазках крови (по Фонио) основан на подсчёте числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с последующим расчётом на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из известного содержания в этом объеме количества эритроцитов [5].  Приготовленные, фиксированные и окрашенные препараты по Романовскому — Гимзе микроскопировали с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата, где эритроциты  расположены изолированно. В  каждом поле зрения  считали число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок  до тех пор, пока не были просчитаны 1000 эритроцитов. Затем произвели пересчёт по количеству эритроцитов, полученному с анализатора.

Кровь пропустили через анализатор на 4 минуте :

Нормальное количество тромбоцитов подтвердил и подсчёт по Фонио – 235х109/л.

Данная псевдотромбоцитопения не несла геморрагического риска или риска тромбообразования для пациента.

Следующий пример является иллюстрацией истинной тромбоцитопении, подлежащей, согласно стандарту ведения больных Американского общества гематологов,  госпитализации для внутривенного введения иммуноглобулина и глюкокортикостероидов [6].   

Пациент Л, 1991 года рождения. Обратился в поликлинику к дерматовенерологу по поводу геморрагических высыпаний и кровянистых выделений из носа. Самочувствие удовлетворительное. Из анамнеза стало известно, что после длительного пребывания на морозе, в течение двух часов при температуре -24 0С самостоятельно профилактически начал принимать Парацетамол+Фенилэфрин+Фенирамин+Аскорбиновую кислоту. За два дня до обращения  появились первые высыпания, на коже ног, которые в течение  последующих дней распространились по всему телу.
Хронические заболевания отрицает. Вредные привычки отрицает. Аллергоанамнез не отягощен.

Объективное состояние больного: Состояние относительно удовлетворительное. Температура тела  36,1 С.
Кожные покровы обычной окраски, геморрагические высыпания по типу множественных петехий размером 1-3 мм. на коже туловища, конечностей, слизистой полости рта. Отеков нет. Периферические лимфоузлы не увеличены. Зев умеренно гиперемирован, налётов нет.
Система органов дыхания: Над легкими перкуторно легочный звук, при аускультации дыхание везикулярное, хрипов нет. Чд 16 в 1 мин.
Сердечно-сосудистая система: Тоны сердца звучные, ритмичные. Пульс равен чсс — 82 в 1 мин. АД 110/70 мм.рт.ст. Система органов пищеварения:
Язык влажный, обложен белым налетом. Живот мягкий, болезненный в правом и левом подреберьях. Печень + 2 см, болезненная при пальпации. Селезенка увеличена. Стул в норме. Система мочевыделения:
Мочеиспускание не нарушено. Симптом поколачивания отрицательный с обеих сторон.

Основные данные лабораторного исследования:

Общий анализ крови, проведенный на анализаторе Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) производитель Roche Diagnostics (Швейцария) выявил лейкопению, относительный лимфоцитоз и полное отсутствие тромбоцитов.

При подсчёте  тромбоцитов по методу Фонио их количество составило 4х109л.

На основании резко выраженной тромбоцитопении, клинической картины и анамнестических данных пациент был срочно госпитализирован в Центральную клиническую больницу УД ПРФ. Проведенные исследования крови и костного мозга выявили резко выраженные нарушения мегакариоцитопоэза и аутоиммунную природу тромбоцитопении. Был выставлен диагноз аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура.

Полагаем, что вышеизложенные примеры были полезны для повторения алгоритма проведения общего анализа крови и интерпретации  тромбоцитопений.

Если внутренний настрой  врача на то, что все тромбоцитопении являются ложными и не нуждаются в дополнительных исследованиях победит, то  жизнь следующего пациента окажется в опасности. Критические значения тромбоцитов должны быть среди других утвержденных в лаборатории критических лабораторных значений. И ответственность за них необходимо нести персонально врачу клинической лабораторной диагностики.

Внедрение новых технологий в лабораторную практику неизбежно, централизация лабораторной службы — мировая тенденция, но базовые знания и умения не должны уходить на второй план в повседневной работе врача клинической лабораторной диагностики.

• Национальный Стандарт Российской Федерации Технологи лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований ГОСТ Р 53079.3-2008  4.7.3

Nacional’nyj Standart Rossijskoj Federacii Tehnologi laboratornye klinicheskie. Obespechenie kachestva klinicheskih laboratornyh issledovanij GOST R 53079.3-2008  4.7.3

• Национальный Стандарт Российской Федерации Кровь донорская и ее компоненты. ГОСТ Р 53470-2009. 

Nacional’nyj Standart Rossijskoj Federacii Krov’ donorskaja i ee komponenty. GOST R 53470-2009

• Alan D.Michelson Platelets. Academic press.2012;989-1011.
• Методические рекомендации Гематологические анализаторы. Интерпретация анализа крови. 2007 .

Metodicheskie rekomendacii Gematologicheskie analizatory. Interpretacija analiza krovi. 2007 .

• Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. Под ред.В.В.Меньшикова. Медицина. 1987.

Spravochnik. Laboratornye metody issledovanija v klinike. Pod red.V.V.Men’shikova. Medicina. 1987.

• George J.N., Woolf S.H., Raskob G.E., Wasser J.S., Aledort L.M., Ballem P.J., et al. Idiopathic thrombocytopenic purpura: a practice guideline developed by explicit methods for the American Society of Hematology. Blood 1996;88:3—40.

1. Кулешова Светлана Вячеславовна, заведующая КДЛ ФГБУ «Поликлиника №2» УД П РФ , Москва, 119146, ул. 2-я Фрунзенская, д.4, (ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики ФУВ РНИМУ им. Н.И.Пирогова) [email protected]
2. Алтаева Александра Андреевна, канд.мед.наук, заведующая дерматовенерологическим кабинетом ФГБУ «Поликлиника №2» УД П РФ
3. Кузнецова Елена Алексеевна, врач КДО ФГБУ «Поликлиника №2» УД П РФ

Здраствуйте. Расшифруйте пожайлуста мои анализы. Наименование Результат Ед. изм. ШЕЙКА Лейкоциты 20 — 30 в поле зрения Слизь ++ Эпителий пластами в поле зрения ВАГИНА Лейкоциты 3-6 в поле зрения Слизь ++ Эпителий пластами в поле зрения МИКРОФЛОРА Гонококки не обнаружены Трихомонады не обнаружены «Ключевые» клетки не обнаружены; % Псевдомицелий (грибы рода Candida) не обнаружен; Другая микрофлора палочки; внутри лейкоцитов; вне лейкоцитов; Наименование Результат Качество препарата адекватный ШЕЙКА МАТКИ Описание (ш/м) Группы,пласты клеток зрелых слоев плоского многослойного эпителия,микрофлора-палочки. ЦЕРВИКАЛЬНЫЙ КАНАЛ Описание (ц/к) Группы клеток зрелых слоев плоского многослойного эпителия,группы клеток цилиндрического эпителия,единичные лейкоциты,тяжи слизи. Цитологическая картина Без особенностей для репродуктивного возраста. не совсем понимаю, что значит слизь ++, и что такое тяжи слизи

04.02.2013

Вопрос от Анна: Здраствуйте. Расшифруйте пожайлуста мои анализы. Наименование Результат Ед. изм. ШЕЙКА Лейкоциты 20 — 30 в поле зрения Слизь ++ Эпителий пластами в поле зрения ВАГИНА Лейкоциты 3-6 в поле зрения Слизь ++ Эпителий пластами в поле зрения МИКРОФЛОРА Гонококки не обнаружены Трихомонады не обнаружены «Ключевые» клетки не обнаружены; % Псевдомицелий (грибы рода Candida) не обнаружен; Другая микрофлора палочки; внутри лейкоцитов; вне лейкоцитов; Наименование Результат Качество препарата адекватный ШЕЙКА МАТКИ Описание (ш/м) Группы,пласты клеток зрелых слоев плоского многослойного эпителия,микрофлора-палочки. ЦЕРВИКАЛЬНЫЙ КАНАЛ Описание (ц/к) Группы клеток зрелых слоев плоского многослойного эпителия,группы клеток цилиндрического эпителия,единичные лейкоциты,тяжи слизи. Цитологическая картина Без особенностей для репродуктивного возраста. не совсем понимаю, что значит слизь ++, и что такое тяжи слизи — это нарушение? буду очень Вам признательна за расшифровку анализа

Ответ: Уважаемая Анна, Мазок в норме. С уважением, акушер-гинеколог центра
В нашей клинике можно сдать анализ пцр на вирус Эпштейна — Барр.

лейкоцитов и тромбоцитов | Анатомия и физиология II

Цели обучения

К концу этого раздела вы сможете:

• Опишите общую характеристику лейкоцитов
• Классифицируют лейкоциты по их происхождению, их основным структурным особенностям и их основным функциям
• Обсудить наиболее распространенные злокачественные новообразования с участием лейкоцитов
• Определите происхождение, основную структуру и функцию тромбоцитов

Лейкоцит , широко известный как лейкоцит (или WBC), является основным компонентом защиты организма от болезней.Лейкоциты защищают организм от вторжения микроорганизмов и клеток тела с мутированной ДНК, а также убирают мусор. Тромбоциты необходимы для восстановления кровеносных сосудов, когда они были повреждены; они также обеспечивают факторы роста для исцеления и восстановления. См. Рисунок 1 в эритроцитах для получения сводной информации о лейкоцитах и ​​тромбоцитах.

Характеристика лейкоцитов

Хотя лейкоциты и эритроциты происходят из гемопоэтических стволовых клеток костного мозга, они сильно отличаются друг от друга во многих существенных отношениях.Например, лейкоцитов намного меньше, чем эритроцитов: обычно их всего от 5000 до 10 000 на µ л. Они также больше, чем эритроциты, и являются единственными сформированными элементами, которые представляют собой полные клетки, обладающие ядром и органеллами. И хотя существует только один тип эритроцитов, существует множество типов лейкоцитов. У большинства из этих типов продолжительность жизни намного короче, чем у эритроцитов, у некоторых — всего несколько часов или даже несколько минут в случае острой инфекции.

Одной из наиболее отличительных характеристик лейкоцитов является их движение. В то время как эритроциты проводят свои дни, циркулируя в кровеносных сосудах, лейкоциты обычно покидают кровоток, чтобы выполнять свои защитные функции в тканях организма. Для лейкоцитов сосудистая сеть — это просто дорога, по которой они движутся, и вскоре с нее сворачивают, чтобы добраться до своего истинного пункта назначения. По прибытии им часто дают разные названия, например, макрофаг или микроглия, в зависимости от их функции.Как показано на Рисунке 1, они покидают капилляры — мельчайшие кровеносные сосуды — или другие мелкие сосуды в результате процесса, известного как эмиграция (от латинского «удаление») или diapedesis (dia- = «сквозной»; — pedan = «прыгать»), в котором они протискиваются через соседние клетки в стенке кровеносного сосуда.

Рис. 1. Лейкоциты выходят из кровеносного сосуда и затем перемещаются через соединительную ткань дермы к месту раны. Некоторые лейкоциты, такие как эозинофилы и нейтрофилы, характеризуются как гранулярные лейкоциты.Они выделяют из своих гранул химические вещества, уничтожающие болезнетворные микроорганизмы; они также способны к фагоцитозу. Моноцит, агранулярный лейкоцит, дифференцируется в макрофаг, который затем фагоцитирует патогены.

После выхода из капилляров некоторые лейкоциты занимают фиксированные позиции в лимфатической ткани, костном мозге, селезенке, тимусе или других органах. Другие будут перемещаться по тканевым пространствам очень похоже на амеб, непрерывно расширяя свои плазматические мембраны, иногда свободно блуждая, а иногда двигаясь в направлении, в котором их привлекают химические сигналы.Такое привлечение лейкоцитов происходит из-за положительного хемотаксиса (буквально «движение в ответ на химические вещества»), явления, при котором поврежденные или инфицированные клетки и близлежащие лейкоциты излучают эквивалент химического звонка «911», привлекая больше лейкоцитов к месту. . В клинической медицине дифференциальные подсчеты типов и процентного содержания лейкоцитов часто являются ключевыми показателями при постановке диагноза и выборе лечения.

Классификация лейкоцитов

Когда ученые впервые начали наблюдать окрашенные препараты крови, быстро стало очевидно, что лейкоциты можно разделить на две группы в зависимости от того, содержит ли их цитоплазма хорошо видимые гранулы:

• Гранулированные лейкоциты содержат большое количество гранул в цитоплазме.Они включают нейтрофилы, эозинофилы и базофилы (вы можете увидеть их происхождение от миелоидных стволовых клеток на рисунке 1 в разделе «Производство сформированных элементов»).
• Хотя в агранулярных лейкоцитах не полностью отсутствуют гранулы, они гораздо меньше и менее очевидны. Агранулярные лейкоциты включают моноциты, которые созревают в макрофаги, которые являются фагоцитами, и лимфоциты, которые возникают из линии лимфоидных стволовых клеток.

Гранулированные лейкоциты

Мы рассмотрим гранулярные лейкоциты в порядке от наиболее частых до наименее распространенных.Все они производятся в красном костном мозге и имеют короткий срок жизни от нескольких часов до нескольких дней. Обычно они имеют лопастное ядро ​​и классифицируются в зависимости от того, какой тип красителя лучше всего выделяет их гранулы (рис. 2).

Рис. 2. Нейтрофил имеет маленькие гранулы, окрашенные в светло-сиреневый цвет, и ядро ​​с двумя-пятью долями. Гранулы эозинофила немного больше и окрашены в красновато-оранжевый цвет, а его ядро ​​состоит из двух-трех долей. Базофил имеет большие гранулы от темно-синего до пурпурного цвета и двухлопастное ядро.

Самый распространенный из всех лейкоцитов, нейтрофилов , обычно составляет 50–70 процентов от общего количества лейкоцитов. Их диаметр составляет 10–12 µ м, что значительно больше, чем у эритроцитов. Их называют нейтрофилами, потому что их гранулы наиболее отчетливо видны с химически нейтральными пятнами (ни кислотными, ни основными). Гранулы многочисленные, но довольно мелкие и обычно имеют светло-сиреневый оттенок. Ядро имеет отчетливо выраженную лопастную форму и может иметь от двух до пяти долей, число которых увеличивается с возрастом клетки.Старые нейтрофилы имеют увеличивающееся количество долей и часто называются полиморфноядерными , (ядро с множеством форм) или просто «полисами». У молодых и незрелых нейтрофилов появляются доли, известные как «полосы».

Нейтрофилы быстро реагируют на очаг инфекции и являются эффективными фагоцитами, предпочитающими бактерии. Их гранулы включают лизоцим , фермент, способный лизировать или разрушать стенки бактериальных клеток; окислители, такие как перекись водорода; и , дефенсины, , белки, которые связываются с плазматическими мембранами бактерий и грибов и прокалывают их, так что содержимое клеток выходит наружу.Аномально высокое количество нейтрофилов указывает на инфекцию и / или воспаление, особенно вызванное бактериями, но также обнаруживается у ожоговых пациентов и других людей, испытывающих необычный стресс. Ожоговая травма увеличивает распространение нейтрофилов для борьбы с инфекцией, которая может возникнуть в результате разрушения кожного барьера. Низкое количество может быть вызвано токсичностью лекарства и другими нарушениями и может повысить восприимчивость человека к инфекции.

Эозинофилы обычно составляют 2–4 процента от общего количества лейкоцитов.Их диаметр также составляет 10–12 µ м. Гранулы эозинофилов лучше всего окрашиваются кислотным красителем, известным как эозин. Ядро эозинофила обычно имеет от двух до трех долей, и при правильном окрашивании гранулы будут иметь отчетливый красный или оранжевый цвет.

Гранулы эозинофилов включают молекулы антигистаминов, которые противодействуют активности гистаминов, воспалительных химических веществ, продуцируемых базофилами и тучными клетками. Некоторые гранулы эозинофилов содержат молекулы, токсичные для паразитических червей, которые могут проникать в организм через покровы или когда человек ест сырую или недоваренную рыбу или мясо.Эозинофилы также способны к фагоцитозу и особенно эффективны, когда антитела связываются с мишенью и образуют комплекс антиген-антитело. Высокое содержание эозинофилов типично для пациентов, страдающих аллергией, заражением паразитарными червями и некоторыми аутоиммунными заболеваниями. Низкое количество может быть связано с токсичностью лекарств и стрессом.

Базофилы — наименее распространенные лейкоциты, обычно составляющие менее одного процента от общего количества лейкоцитов. Они немного меньше нейтрофилов и эозинофилов и составляют 8–10 µ м в диаметре.Гранулы базофилов лучше всего окрашиваются основными (щелочными) красителями. Базофилы содержат большие гранулы, которые окрашиваются в темно-синий цвет, и настолько распространены, что могут затруднить просмотр двухлепесткового ядра.

В целом базофилы усиливают воспалительный ответ. Они разделяют эту черту с тучными клетками. В прошлом тучные клетки считались базофилами, покидающими кровообращение. Однако, похоже, это не так, поскольку два типа клеток развиваются из разных клонов.

Гранулы базофилов выделяют гистамины, способствующие воспалению, и гепарин, препятствующий свертыванию крови.Высокое количество базофилов связано с аллергией, паразитарными инфекциями и гипотиреозом. Низкие показатели связаны с беременностью, стрессом и гипертиреозом.

Агранулярные лейкоциты

Агранулярные лейкоциты содержат более мелкие и менее заметные гранулы в своей цитоплазме, чем гранулярные лейкоциты. Ядро простой формы, иногда с выемкой, но без отчетливых долей. Существует два основных типа агранулоцитов: лимфоциты и моноциты (см. Рисунок 1 в разделе «Производство сформированных элементов»).

Лимфоциты — единственный сформированный элемент крови, который возникает из лимфоидных стволовых клеток. Хотя изначально они образуются в костном мозге, большая часть их последующего развития и размножения происходит в лимфатических тканях. Лимфоциты являются вторым по распространенности типом лейкоцитов, на их долю приходится около 20–30 процентов всех лейкоцитов, и они необходимы для иммунного ответа. Диапазон размеров лимфоцитов довольно обширен: одни авторитетные источники признают два класса размеров, а другие — три.Обычно крупные клетки имеют размер 10–14 µ мкм, имеют меньшее соотношение ядра и цитоплазмы и большее количество гранул. Меньшие клетки обычно имеют размер 6–9 µ м с большим объемом ядра до цитоплазмы, что создает эффект «ореола». Некоторые клетки могут выходить за пределы этих диапазонов, на 14–17 µ м. Это открытие привело к классификации трех размеров.

Три основные группы лимфоцитов включают естественные клетки-киллеры, В-клетки и Т-клетки. Естественные клетки-киллеры (NK) способны распознавать клетки, которые не экспрессируют «собственные» белки на своей плазматической мембране или содержат чужеродные или аномальные маркеры.Эти «чужие» клетки включают раковые клетки, клетки, инфицированные вирусом, и другие клетки с атипичными поверхностными белками. Таким образом, они обеспечивают генерализованный неспецифический иммунитет. Более крупные лимфоциты обычно представляют собой NK-клетки.

B-клетки и T-клетки, также называемые B-лимфоцитами и T-лимфоцитами , играют важную роль в защите организма от конкретных патогенов (болезнетворных микроорганизмов) и участвуют в формировании специфического иммунитета. Одна форма В-клеток (плазматические клетки) продуцирует антитела или иммуноглобулины, которые связываются со специфическими чужеродными или аномальными компонентами плазматических мембран.Это также называется гуморальным (жидкостным) иммунитетом. Т-клетки обеспечивают иммунитет на клеточном уровне, физически атакуя чужеродные или больные клетки. Ячейка памяти представляет собой множество как В-, так и Т-клеток, которые образуются после воздействия патогена и быстро реагируют на последующие воздействия. В отличие от других лейкоцитов, клетки памяти живут много лет. В-клетки подвергаются процессу созревания в костном мозге, тогда как Т-клетки подвергаются созреванию в тимусе. Этот участок процесса созревания дает название В- и Т-клеткам.Функции лимфоцитов сложны и будут подробно рассмотрены в главе, посвященной лимфатической системе и иммунитету. Более мелкие лимфоциты являются либо В-, либо Т-клетками, хотя они не могут быть дифференцированы в нормальном мазке крови.

Аномально высокое количество лимфоцитов характерно для вирусных инфекций, а также для некоторых типов рака. Аномально низкое количество лимфоцитов характерно для длительных (хронических) заболеваний или иммуносупрессии, в том числе вызванных ВИЧ-инфекцией и лекарственными препаратами, которые часто включают стероиды.

Моноциты происходят из миелоидных стволовых клеток. Обычно они составляют 2–8 процентов от общего количества лейкоцитов. Их обычно легко узнать по их большому размеру (12–20 µ м) и зазубренным или подковообразным ядрам. Макрофаги — это моноциты, которые покинули кровообращение и фагоцитируют мусор, чужеродные патогены, изношенные эритроциты и многие другие мертвые, изношенные или поврежденные клетки. Макрофаги также выделяют антимикробные дефенсины и хемотаксические химические вещества, которые привлекают другие лейкоциты к месту инфекции.Некоторые макрофаги занимают фиксированные места, тогда как другие блуждают в тканевой жидкости.

Аномально высокое количество моноцитов связано с вирусными или грибковыми инфекциями, туберкулезом, некоторыми формами лейкемии и другими хроническими заболеваниями. Аномально низкие показатели обычно вызваны подавлением костного мозга.

Жизненный цикл лейкоцитов

Большинство лейкоцитов имеют относительно короткую продолжительность жизни, обычно измеряемую часами или днями. Производство всех лейкоцитов начинается в костном мозге под влиянием спинномозговой жидкости и интерлейкинов.Вторичное производство и созревание лимфоцитов происходит в определенных областях лимфатической ткани, известных как зародышевые центры. Лимфоциты полностью способны к митозу и могут производить клоны клеток с идентичными свойствами. Эта способность позволяет человеку сохранять иммунитет на протяжении всей жизни ко многим угрозам, с которыми он сталкивался в прошлом.

Заболевания лейкоцитов

Лейкопения — это состояние, при котором вырабатывается слишком мало лейкоцитов. Если это состояние выражено, человек может быть не в состоянии предотвратить болезнь.Чрезмерная пролиферация лейкоцитов известна как лейкоцитоз . Хотя количество лейкоцитов велико, сами клетки часто нефункциональны, что подвергает человека повышенному риску заболевания.

Лейкоз — это рак, пораженный множеством лейкоцитов. Он может включать только один конкретный тип лейкоцитов либо из миелоидной линии (миелоцитарный лейкоз), либо из лимфоидной линии (лимфолейкоз). При хроническом лейкозе зрелые лейкоциты накапливаются и не умирают.При остром лейкозе наблюдается перепроизводство молодых незрелых лейкоцитов. В обоих случаях клетки не функционируют должным образом.

Лимфома — это форма рака, при которой массы злокачественных Т- и / или В-лимфоцитов накапливаются в лимфатических узлах, селезенке, печени и других тканях. Как и при лейкемии, злокачественные лейкоциты не функционируют должным образом, и пациент уязвим для инфекции. Некоторые формы лимфомы имеют тенденцию к медленному прогрессированию и хорошо поддаются лечению. Другие, как правило, быстро прогрессируют и требуют агрессивного лечения, без которого они быстро заканчиваются смертельным исходом.

Тромбоциты

Иногда можно увидеть тромбоциты, называемые тромбоцитами , но поскольку это название предполагает, что они являются типом клеток, это не совсем точно. Тромбоцит — это не клетка, а скорее фрагмент цитоплазмы клетки, называемый мегакариоцитом , который окружен плазматической мембраной. Мегакариоциты происходят от миелоидных стволовых клеток (см. Рис. 1 в разделе «Производство сформированных элементов») и имеют большие размеры, обычно 50–100 µ м в диаметре, и содержат увеличенное лопастное ядро.Как отмечалось ранее, тромбопоэтин, гликопротеин, секретируемый почками и печенью, стимулирует пролиферацию мегакариобластов, которые превращаются в мегакариоциты.

Рис. 3. Тромбоциты происходят из клеток, называемых мегакариоцитами.

Они остаются в ткани костного мозга (рис. 3) и в конечном итоге образуют отростки-предшественники тромбоцитов, которые проходят через стенки капилляров костного мозга, высвобождая в кровообращение тысячи цитоплазматических фрагментов, каждый из которых окружен кусочком плазматической мембраны.Эти заключенные фрагменты представляют собой тромбоциты. Каждый мегакароцит выделяет 2000–3000 тромбоцитов в течение своей жизни. После высвобождения тромбоцитов остатки мегакариоцитов, которые представляют собой немного больше, чем ядро ​​клетки, потребляются макрофагами.

Тромбоциты относительно малы, 2–4 µ м в диаметре, но многочисленны, обычно 150 000–160 000 на µ л крови. После попадания в кровоток примерно одна треть мигрирует в селезенку для хранения для последующего высвобождения в ответ на любой разрыв кровеносного сосуда.Затем они активируются для выполнения своей основной функции — ограничения кровопотери. Тромбоциты сохраняются всего около 10 дней, затем фагоцитируются макрофагами.

Тромбоциты имеют решающее значение для гемостаза, остановки кровотока после повреждения сосуда. Они также выделяют различные факторы роста, необходимые для роста и восстановления тканей, особенно соединительной ткани. Настои концентрированных тромбоцитов в настоящее время используются в некоторых методах лечения для стимуляции заживления.

Заболевания тромбоцитов

Тромбоцитоз — это состояние, при котором слишком много тромбоцитов.Это может вызвать образование нежелательных тромбов (тромбоз), потенциально смертельное заболевание. При недостаточном количестве тромбоцитов, называемом тромбоцитопенией , кровь может не свернуться должным образом, что может привести к чрезмерному кровотечению.

Рисунок 4. Лейкоциты. (Микрофотографии предоставлены Медицинской школой Риджентс Мичиганского университета © 2012)

Практический вопрос

Просмотрите веб-микроскопы Мичиганского университета и более подробно изучите слайды крови.Функция Webscope позволяет перемещать слайды, как на механическом столике. Вы можете увеличивать и уменьшать увеличение. Есть возможность рассмотреть каждый из лейкоцитов индивидуально после того, как вы попытаетесь идентифицировать их по первым двум мазкам крови. Кроме того, есть несколько вопросов с несколькими вариантами ответов.

Умеете ли вы распознавать и идентифицировать различные формованные элементы? Делать это нужно будет систематически, сканируя по изображению. Стандартный метод — использовать сетку, но с этим ресурсом это невозможно.Попробуйте составить простую таблицу с каждым типом лейкоцитов, а затем сделать отметку для каждого идентифицированного вами типа клеток. Попытайтесь классифицировать не менее 50, а возможно, и 100 различных ячеек. Основываясь на процентном соотношении клеток, которое вы подсчитываете, представляют ли цифры нормальный мазок крови или что-то кажется ненормальным?

Это должен быть нормальный мазок крови.

Обзор главы

Лейкоциты участвуют в защите организма. Они выдавливаются из стенок кровеносных сосудов в результате эмиграции или диапедеза, затем могут перемещаться через тканевую жидкость или прикрепляться к различным органам, где они борются с патогенными организмами, больными клетками или другими угрозами для здоровья.Гранулярные лейкоциты, которые включают нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, происходят из миелоидных стволовых клеток, как и агранулярные моноциты. Другие агранулярные лейкоциты, NK-клетки, B-клетки и T-клетки, происходят из линии лимфоидных стволовых клеток. Самыми многочисленными лейкоцитами являются нейтрофилы, которые первыми реагируют на инфекции, особенно бактерии. Около 20–30 процентов всех лейкоцитов составляют лимфоциты, которые имеют решающее значение для защиты организма от конкретных угроз. Лейкемия и лимфома — это злокачественные новообразования, в которых участвуют лейкоциты.Тромбоциты — это фрагменты клеток, известных как мегакариоциты, которые обитают в костном мозге. В то время как многие тромбоциты хранятся в селезенке, другие попадают в кровоток и необходимы для гемостаза; они также производят несколько факторов роста, важных для восстановления и заживления.

Самопроверка

Ответьте на вопросы ниже, чтобы увидеть, насколько хорошо вы понимаете темы, затронутые в предыдущем разделе.

Вопросы о критическом мышлении

1. Одним из наиболее частых побочных эффектов химиотерапии рака является разрушение лейкоцитов.Перед следующим плановым курсом химиотерапии пациент сдает анализ крови, называемый абсолютным количеством нейтрофилов (АНК), который показывает, что его количество нейтрофилов составляет 1900 клеток на микролитр. Сможет ли его медицинская бригада продолжить курс химиотерапии? Почему?
2. Больной поступил в ожоговое отделение накануне вечером с тяжелым ожогом левой верхней конечности и плеча. Анализ крови показывает, что у него лейкоцитоз. Почему это ожидаемый результат?

1. Количество нейтрофилов ниже 1800 клеток на микролитр считается ненормальным.Таким образом, АНК этого пациента находится на нижней границе нормального диапазона, и нет причин откладывать химиотерапию. В клинической практике большинству пациентов назначают химиотерапию, если их ЧСС выше 1000.
2. Любой сильный стресс может увеличить количество лейкоцитов, что приведет к лейкоцитозу. Ожог особенно склонен к увеличению пролиферации лейкоцитов, чтобы предотвратить инфекцию, что представляет собой значительный риск, когда нарушается барьерная функция кожи.

Глоссарий

агранулярных лейкоцитов: лейкоцитов с небольшим количеством гранул в цитоплазме; в частности, моноциты, лимфоциты и NK-клетки

В-лимфоциты: (также В-клетки) лимфоцитов, которые защищают организм от определенных патогенов и тем самым обеспечивают специфический иммунитет

базофилов: гранулоцитов, окрашиваемых основным (щелочным) красителем и хранящих гистамин и гепарин

дефенсинов: антимикробных белков, высвобождаемых из нейтрофилов и макрофагов, которые создают отверстия в плазматических мембранах для уничтожения клеток

диапедез: (также эмиграция) процесс, при котором лейкоциты проталкиваются через соседние клетки в стенке кровеносного сосуда и попадают в ткани

эмиграция: (также диапедез) процесс, при котором лейкоциты проталкиваются через соседние клетки в стенке кровеносного сосуда и попадают в ткани

эозинофилов: гранулоцитов, окрашиваемых эозином; они выделяют антигистаминные препараты и особенно активны против паразитических червей

гранулярных лейкоцитов: лейкоцитов с большим количеством гранул в их цитоплазме; в частности, нейтрофилы, эозинофилы и базофилы

лейкоз: рак с участием лейкоцитов

лейкоциты: (также лейкоциты) бесцветные ядросодержащие клетки крови, основная функция которых заключается в защите организма от болезней

лейкоцитоз: избыточная пролиферация лейкоцитов

лейкопения: производство лейкоцитов на ниже нормы

лимфоцитов: агранулярных лейкоцитов линии лимфоидных стволовых клеток, многие из которых действуют в рамках специфического иммунитета

лимфома: форма рака, при которой массы злокачественных Т- и / или В-лимфоцитов накапливаются в лимфатических узлах, селезенке, печени и других тканях

лизоцим: пищеварительный фермент с бактерицидными свойствами

мегакариоцитов: клеток костного мозга, производящих тромбоциты

ячейка памяти: лимфоцитов типа B или T, которые образуются после воздействия патогена

моноцитов: агранулярных лейкоцитов линии миелоидных стволовых клеток, циркулирующих в кровотоке; тканевые моноциты — макрофаги

естественных киллеров (NK): цитотоксических лимфоцитов, способных распознавать клетки, которые не экспрессируют «собственные» белки на своей плазматической мембране или которые содержат чужеродные или аномальные маркеры; обеспечивают генерализованный неспецифический иммунитет

нейтрофилов: гранулоцитов, окрашиваемых нейтральным красителем и являющихся наиболее многочисленными лейкоцитами; особенно активен против бактерий

полиморфно-ядерный: с лопастным ядром, как видно в некоторых лейкоцитах

положительный хемотаксис: процесс, при котором клетка движется в направлении химических стимулов

Т-лимфоциты: (также Т-клетки) лимфоцитов, которые обеспечивают иммунитет на клеточном уровне, физически атакуя чужеродные или больные клетки

тромбоцитов: тромбоцитов, один из форменных элементов крови, состоящий из фрагментов клеток, отколовшихся от мегакариоцитов

тромбоцитопения: состояние, при котором слишком мало тромбоцитов, приводящее к аномальному кровотечению (гемофилия)

тромбоцитоз: состояние, при котором слишком много тромбоцитов, приводящее к аномальному свертыванию (тромбозу)

Тесты на выделения из влагалища — Клинические методы

Определение

Нормальные выделения из влагалища белые, неоднородные и вязкие.Он содержит клетки плоского эпителия влагалища в серозном транссудате, а также материал сальных, потовых и бартолиновых желез, а также секреты шейки матки. Можно увидеть небольшое количество полиморфно-ядерных лейкоцитов, вероятно, исходящих из шейки матки. PH ниже 4,5, обычно от 3,8 до 4,2. Преобладающие организмы — лактобациллы, крупные грамположительные палочки.

Количество нормальных выделений варьируется от женщины к женщине и увеличивается во время овуляции, в предменструальный период и во время беременности.Нормальные выделения не имеют неприятного запаха и не связаны с раздражением влагалища, зудом или жжением.

Методика

Различные тесты и культуры могут быть сделаны на секрете, полученном во время гинекологического осмотра. Нет ничего важнее микроскопического исследования. С помощью ватной палочки получите выделение из задней четвертины. Чтобы подготовить для мокрого препарирования , используйте один из двух следующих методов.

• Поместите образец в 1 мл физиологического раствора и встряхните, чтобы перемешать.Возьмите каплю этой смеси и поместите ее на предметное стекло.

• Поместите каплю физиологического раствора на предметное стекло и добавьте небольшое количество выделений.

В любом случае накройте покровным стеклом. Первый метод предпочтительнее, если выделения обильные, так как они разжижают выделения, и отдельные клетки видны лучше.

Стекло можно ненадолго согреть (для увеличения подвижности трихомонад), и его следует немедленно осмотреть. Следует провести тщательный поиск нескольких полей как на средней, так и на высокой мощности на предмет трихомонад, ключевых клеток и дрожжей.Трихомонады — это подвижные жгутиковые организмы размером с лейкоцит (WBC). Их лучше всего узнать по характерным скручивающим движениям. Ключевыми клетками являются вагинальные эпителиальные клетки с прикрепленными коккобациллами. Дрожжи могут быть видны как почкующиеся или гифальные формы, и лучше всего их можно увидеть при добавлении гидроксида калия.

Наконец, следует отметить наличие или отсутствие большого количества лейкоцитов. Некоторые из них могут быть нормальными, но более 10 на поле высокой мощности — это ненормально.

Следует взять дополнительный тампон и поместить немного выделений на предметное стекло.Добавьте каплю 10% гидроксида калия (КОН) и накройте покровным стеклом. Нагрейте слайд до тех пор, пока под покровным стеклом не образуются пузырьки, но не дольше. Это способствует лизису клеток, но оставляет грибки. Затем следует внимательно изучить предметное стекло на наличие почкующихся дрожжей или гиф.

pH вагинального секрета можно получить, поместив образец с боковой стенки влагалища на pH-бумагу. Бумага должна включать диапазон pH от 4,0 до выше 5.0. Нормальный pH составляет 4,5 или меньше.

Тест на запах — это тест на рыбный запах, который возникает при бактериальном вагинозе (ранее называвшемся гарднереллезным вагинитом и неспецифическим вагинитом). Капля КОН смешивается с выделениями из влагалища. Положительный результат теста не соответствует норме и имеет характерный рыбный запах.

Окраска по Граму выделений из влагалища может проводиться стандартными методами. Дрожжи будут обнаружены, и можно будет оценить преобладающую бактериальную флору (например,g., нормальные грамположительные палочки или аномальные грамотрицательные коккобациллы и палочки). Ключевые клетки можно точно идентифицировать.

Окраска слизистой оболочки шейки матки по Граму может быть полезной при оценке цервицита. Если грамотрицательные диплококки обнаруживаются внутри клеток, это является диагностическим признаком Neisseria gonorrhea. Однако это относительно нечувствительный тест, и он не должен заменять культуру. Избыток лейкоцитов (более 10 / hpf) в слизистой оболочке шейки матки указывает на хламидийный цервицит, поэтому необходимо провести соответствующие исследования.

В дополнение к информации о цитологии шейки матки, мазок Папаниколау (Пап) часто добавляет информацию о возможных вагинальных и цервикальных патогенах. Например, можно увидеть трихомонаду или дрожжи. Определенные цитологические изменения могут указывать на хламидийный цервицит. Эндоцервикальный и эктоцервикальный мазки Папаниколау должны быть получены, как описано в главе 179.

Культуры никогда не должны заменять тщательный сбор анамнеза, физикальное обследование и микроскопическое исследование влажного препарата.В зависимости от результатов влагалищного посева без микроскопического исследования секрета часто возникают ошибки в лечении. Тем не менее в некоторых случаях посев из шейки матки может быть особенно полезным.

Дрожжи будут расти как при обычном культивировании, так и на определенных средах. Трихомонады можно культивировать, но это недоступно в большинстве лабораторий. Посев из шейки матки на N. gonorrhea проводится путем помещения стерильного тампона в эндоцервикальный канал. В идеале это должно быть немедленно посеяно на определенном носителе, поскольку задержка резко снижает урожайность.Посевы хламидиоза дороги, и для получения результатов требуется неделя. Недавно стали доступны методы иммунофлуоресценции. Это дешевле, и результаты будут получены раньше.

Фундаментальная наука

Патологические выделения из влагалища вызываются различными инфекционными и неинфекционными причинами. Выделения могут быть вызваны инфекциями самого влагалища, но инфекции или воспаление шейки матки также приводят к увеличению выделений из влагалища. У многих пациентов присутствует более одной причины.

Тщательный анамнез и физикальное обследование могут помочь разделить эти два состояния и указать на их этиологию. При гинекологическом осмотре следует обратить особое внимание на наличие или отсутствие воспаления шейки матки, обычно проявляющееся в виде отека или рыхлости, а также на наличие или отсутствие слизистой оболочки шейки матки, то есть слизистых выделений в эндоцервикальном канале. Воспаление шейки матки или слизистая оболочка предполагают цервицит, но цервикальные инфекции, такие как N. gonorrhea и C.trachomatis может присутствовать без них, и его следует искать у соответствующих пациентов.

Тремя основными причинами вагинита являются трихомонада, кандидоза и бактериальный вагиноз. Их можно отличить с помощью соответствующих лабораторных тестов.

Trichomonas Vaginalis

Trichomonas vaginalis — простейшие паразиты. Лучше всего растет в умеренно анаэробных условиях при pH от 5,6 до 6,5. Его можно увидеть у бессимптомных женщин, но при симптомах он вызывает выделения от белого до желтого цвета, которые могут быть пенистыми.Классические признаки петехий влагалища относительно редки. Может присутствовать запах. Уровень pH обычно высокий (более 5,0), а выделения часто содержат множество лейкоцитов. В сложных случаях влажная подготовка выявляет множество подвижных организмов, но в более легких случаях необходимо провести тщательный поиск во многих областях, чтобы увидеть один или два подвижных организма. Мокрая подготовка не на 100% чувствительна. Было обнаружено, что пациенты с положительной культурой имеют положительную реакцию на влажную подготовку всего в 50-60% случаев. Хотя культуры более точны, они недоступны в большинстве лабораторий.Следовательно, нельзя исключать наличие трихомонады у пациентов с отрицательной влажной подготовкой. Пап-мазок также может выявить трихомонады. Выделения с большим количеством лейкоцитов у пациента, не страдающего цервицитом, свидетельствуют о трихомонаде.

Candida

Кандидозный вагинит может не вызывать выделений из влагалища, просто вызывая эритему вульвы и / или влагалища. Если есть выделения, это обычно густые белые, так называемые творожные. PH в норме. Нет аномального запаха, и тест на запах отрицательный.

Влажный препарат показывает нормальные эпителиальные клетки. Возможно небольшое увеличение количества лейкоцитов. Бактерии — это нормальные лактобациллы. Влажная подготовка может выявить дрожжи в виде почкующихся форм или псевдогифов. Гидроксид калия несколько более чувствителен, но его чувствительность варьируется и составляет всего 20% в некоторых сериях пациентов с положительным посевом. Следовательно, лечение часто должно основываться только на клинических подозрениях.

Candida можно выращивать на различных средах. Посевы более точны, чем только микроскопическое исследование, но значение положительного посева у бессимптомных пациентов неизвестно, поэтому посевы следует проводить только для подтверждения подозреваемых случаев.

Неспецифический или бактериальный вагиноз

Эта форма вагинита, вероятно, является наиболее распространенной. Диагноз ставится при наличии трех из следующих четырех критериев: прилипшие и однородные выделения; положительный запах на запах; клетки-подсказки; или pH больше 4,5. Положительный результат теста на запах вызван ароматизацией ароматических аминов в присутствии КОН. Окраска по Граму выявляет грамотрицательные коккобациллы, прикрепленные к эпителиальным клеткам. Если лейкоциты присутствуют в большом количестве, следует подозревать сосуществование трихомонад или цервицита, поскольку бактериальный вагиноз не вызывает воспалительной реакции.

Можно культивировать на Gardnerella vaginalis (т. Е. Организм, по крайней мере, частично ответственный за это заболевание), но положительный посев не является диагностическим, поскольку Gardnerella может присутствовать в небольших количествах у нормальных женщин, поэтому диагноз остается. по вышеуказанной комбинации выводов.

Цервицит

Цервицит может вызывать гнойные выделения из шейки матки. Выделения не будут иметь запаха и будут состоять из листов лейкоцитов; рН влагалища варьируется.Окраска по Граму может выявить грамотрицательные внутриклеточные диплококки, если причиной является N. gonorrhea . Необходимо сделать соответствующие тесты на гонорею и тесты на хламидиоз, но нельзя откладывать лечение, поскольку может возникнуть восходящая инфекция. обобщает лабораторные данные.

Клиническая значимость

Вагинит и цервицит — чрезвычайно распространенные состояния, вызывающие частые посещения кабинетов врача и причиняющие большой дискомфорт пациентам. Цервицит может привести к серьезным восходящим инфекциям и последующему трубному бесплодию.Из-за этого точная и своевременная диагностика обязательна. Нет оправдания попыткам диагностировать причину выделений из влагалища без использования лабораторных тестов. Самым важным является влажная подготовка, которая позволяет врачу различать три распространенные причины вагинита. Цервицит можно заподозрить на основании результатов физикального обследования или при наличии большого количества лейкоцитов при микроскопическом исследовании, особенно если они не могут быть объяснены трихомонадной инфекцией.

В некоторых случаях необходимо провести скрининг культур на гонорею и тесты на хламидиоз.Эти случаи могут включать женщин, страдающих другими заболеваниями, передающимися половым путем, такими как трихомонада; женщины с несколькими сексуальными партнерами; и, возможно, другие группы. Посевы обязательно у женщин со слизисто-зудным цервицитом.

Лечение причины выделения из влагалища должно основываться на том, что врач считает вероятным возбудителем после сбора анамнеза, физического осмотра и исследования выделений. Правильная терапия и успешный результат зависят от точности диагноза.

Ссылки

1. Brunham RC, Paavonen J, Stevens CE. и другие. Слизисто-гнойный цервицит — игнорируемый аналог уретрита у мужчин у женщин. N Engl J Med. 1984; 311: 1–6. [PubMed: 6427611]

2. Eschenbach DA. Вульвовагинальные выделения. В: Пекхэм Б.М., Шарио СС, ред. Признаки и симптомы в гинекологии. Филадельфия: Дж. Б. Липпинкотт, 1983; 254–61.

3. Fleury FJ. Вагинит у взрослых. Clin Obstet Gynaecol. 1981; 24: 407–38. [PubMed: 7307366]

4. Холмс К.К.Инфекции нижних отделов половых путей у женщин: цистит / уретрит, вульвовагинит и цервицит. В: Холмс К.К., Мард П.А., Спарлинг П.Ф. и др., Ред. Венерические заболевания. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл, 1984; 557–89.

5. Маклеллан Р., Спенс М.Р., Брокман М. и др. Клинический диагноз трихомониаза. Obstet Gynecol. 1982; 60: 30–34. [PubMed: 6896368]
6. Паавонен Дж. Физиология и экология влагалища. Scand J Infect Dis (Дополнение). 1983; 40: 31–35. [PubMed: 6582587]

7. Пиот П., Вандерхейден Дж.Gardnerella vaginalis и неспецифический вагинит. В: Холмс К.К., Мард П.А., Спарлинг П.Ф. и др., Ред. Венерические заболевания. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл, 1984; 421–27.

8. Рейн М.Ф., Мюллер М. Trichomonas vaginalis. В: Холмс К.К., Мард П.А., Спарлинг П.Ф. и др., Ред. Венерические заболевания. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл, 1984; 525–36.

9. Stamm WE, Hamson R, Alexander ER. и другие. Диагностика инфекции Chlamydia trachomatis путем прямого иммунофлуоресцентного окрашивания генитального секрета.Ann Intern Med. 1984; 101: 638–41. [PubMed: 60
10. ]
11. Tam MR, Stamm WE, Hundsfield HH. и другие. Культура. Независимая диагностика Chlamydia trachomatis с использованием моноклональных антител. N Engl J Med. 1984; 310: 1146–50. [PubMed: 6369136]

Подсчет лейкоцитов по мазку крови с помощью фурье-птихографической микроскопии

Abstract

Количество лейкоцитов (лейкоцитов) является ценным показателем для помощи в диагностике или прогнозировании различных заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, диабет 2 типа или инфекции.Подсчет лейкоцитов можно производить вручную или автоматически. Автоматические методы позволяют подсчитывать большое количество клеток, чтобы дать статистически более точное определение количества лейкоцитов в образце, но специализированное оборудование обычно стоит дорого. Ручные методы недороги, поскольку они включают только обычную установку светового микроскопа. Однако это более трудоемко и подвержено ошибкам, потому что небольшое поле зрения (FOV) микроскопа требует механического сканирования образца для подсчета адекватного количества лейкоцитов.Здесь мы исследуем использование фурье-психологической микроскопии (FPM), чтобы обойти эти проблемы ручных методов. С объективом 2x FPM может обеспечить поле обзора 120 мм ² с улучшенным разрешением, сравнимым с разрешением объектива 20x, что достаточно для недифференциального подсчета лейкоцитов только в одном поле зрения. Специалист смог подсчитать лейкоциты на изображениях FPM со 100% точностью по сравнению с подсчетом, определенным на изображениях с обычного микроскопа. Также был разработан алгоритм автоматического подсчета лейкоцитов по полученным изображениям FPM с точностью 95%, что позволило создать экономичную установку подсчета лейкоцитов с преимуществами как автоматического, так и ручного методов подсчета.

Образец цитирования: Chung J, Ou X, Kulkarni RP, Yang C (2015) Подсчет лейкоцитов из мазка крови с использованием фурье-птихографической микроскопии. PLoS ONE 10 (7): e0133489. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489

Редактор: Хуан Карлос дель Аламо, Калифорнийский университет в Сан-Диего, США

Поступила: 2 ноября 2014 г .; Принята к печати: 28 июня 2015 г .; Опубликован: 17 июля 2015 г.

Авторские права: © 2015 Chung et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах бумага.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом NIH 1DP2OD007307; Программа Caltech Innovation Initiative (CI2) 2014. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Лейкоциты являются эффекторными клетками иммунной системы и циркулируют по кровотоку и лимфатической системе. Инфекция или физическая травма приводят к воспалительной реакции, которая вызывает повышенное производство лейкоцитов для устранения травмы или инфекции. Из-за этой связи между лейкоцитами и воспалительной реакцией количество лейкоцитов является ценным показателем для диагностики и прогноза некоторых заболеваний.Несколько исследователей обнаружили, что высокое количество лейкоцитов тесно связано с риском ишемической болезни сердца [1–6], что дополнительно прояснило связь между сердечно-сосудистыми заболеваниями и воспалением [4]. Было обнаружено, что курение вызывает увеличение количества лейкоцитов, но появляется все больше доказательств того, что высокое количество лейкоцитов является предиктором ишемической болезни сердца независимо от статуса курения [5]. Мало того, что высокое количество лейкоцитов предсказывает развитие макро- и микрососудистых осложнений у пациентов с диабетом 2 типа [7], но и будущее развитие диабета 2 типа также связано с высоким количеством лейкоцитов [8].В педиатрии было обнаружено, что высокое количество лейкоцитов является индикатором бактериемической инфекции у детей [9]. Таким образом, подсчет лейкоцитов может быть ценным инструментом для прогноза заболеваний.

В самом широком смысле существует два способа подсчета лейкоцитов: автоматический и ручной метод. Проточная цитометрия — это распространенный автоматический метод, который работает путем передачи лейкоцитов в один файл через электронные детекторы [10]. Затем детекторы количественно определяют оптические и электрические свойства потока жидкости для дифференциального подсчета пяти типов лейкоцитов.Этот метод удобен для анализа больших объемов образцов крови наиболее эффективным по времени способом и становится более экономичным с развитием микрофлюидной проточной цитометрии [11]. Однако, поскольку он не захватывает никаких изображений анализируемых клеток, дальнейшее исследование морфологии и вариаций клеток практически невозможно. Более того, он не может идентифицировать клетки с аномальной физиологией, потому что его метод идентификации зависит от принятых диапазонов сигнатурных характеристик клеток в крови.Цитометрия изображений позволяет обойти эти проблемы, также получая изображения текущих аналитов в дополнение к выполнению проточной цитометрии [12]. Хотя он очень мощный, он не подходит для исследовательских лабораторий или клиник с ограниченными ресурсами из-за своей высокой цены.

Ручной метод подсчета — это альтернативный способ подсчета лейкоцитов, но с гораздо меньшей пропускной способностью. Ручной метод подсчета лейкоцитов может выполняться либо на образце мазка крови, либо на гемоцитометре с использованием стандартной системы микроскопа.Образец можно просматривать непосредственно в окуляр микроскопа или записывать в файлы изображений. Для образца мазка крови области монослоя механически сканируются для подсчета общего количества лейкоцитов [13], в то время как для гемоцитометра область с сеткой сканируется для целей подсчета [14]. Хотя ручной метод более трудоемок и отнимает много времени, он дает ученым возможность использовать широкий спектр объективов, доступных для стандартного микроскопа, для тщательного визуального анализа образцов.Высококачественные, но недорогие устройства визуализации современных технологий позволяют использовать это приложение в условиях ограниченных ресурсов [15].

Одной из технических проблем, связанных с методом ручного подсчета, является ошибка, связанная с механическим сканированием предметного стекла. Характеристики обычного микроскопа ограничены произведением его ширины полосы пропускания, а это означает, что существует компромисс между разрешением изображения и полем зрения микроскопа. Как правило, для просмотра и недифференциального подсчета лейкоцитов под обычным микроскопом нужен объектив с увеличением не менее 10x (0.25NA) [16]. Для дифференциального подсчета лейкоцитов используется масляно-иммерсионный объектив со 100-кратным увеличением (1,4NA). Однако при таком большом увеличении поле обзора очень мало, что требует механического сканирования предметного стекла во время процесса подсчета. Это неблагоприятно, потому что движение сканирования должно быть точно выровнено и контролироваться, чтобы избежать любого перекрытия областей сканирования. Еще одним недостатком использования стандартной микроскопии для ручного подсчета является физическая нагрузка на врачей, связанная с ручным сканированием предметного стекла и прямым наблюдением через микроскоп.Регулярное выполнение анализа образцов под стандартным микроскопом может быть вредным для клиницистов [17].

Здесь мы исследуем использование фурье-психологической микроскопии (FPM) в качестве решения, которое может исправить проблемы, присущие ручному методу подсчета лейкоцитов. FPM — это новый метод визуализации микроскопа, впервые описанный в [18], который может с помощью вычислений сшить вместе серию изображений с низким разрешением и широким полем обзора в области Фурье для получения изображения с более высоким разрешением и широким полем обзора.С помощью FPM можно получить изображение большой площади монослоя мазка крови без каких-либо механических движений, связанных со сканированием. FPM требует минимальных модификаций стандартной установки микроскопии, включая только светодиодную матрицу и камеру CCD. Мы демонстрируем его жизнеспособность для использования при подсчете лейкоцитов, попросив специалиста по гемоцитометрии сравнить его характеристики с характеристиками обычного микроскопа с 20-кратным увеличением, что является основной истиной в нашем исследовании. Только недифференциальный подсчет лейкоцитов проводился с помощью настройки, описанной в следующих разделах.Отмечен потенциал FPM для дифференциального подсчета лейкоцитов. Наконец, обсуждается эффективность автоматического алгоритма подсчета лейкоцитов на изображениях FPM.

Принципы FPM

FPM — это вычислительный метод, который может эффективно увеличить числовую апертуру микроскопа для получения изображения образца с высоким разрешением и сложной амплитудой с преимуществом широкого поля зрения, связанного с объективом с низкой числовой апертурой. В технологии используются два ключевых элемента: (1) тот факт, что освещение образца наклонной плоской волной в установке микроскопа приводит к боковому смещению Фурье-спектра образца в задней фокальной плоскости линзы объектива; и (2) способность восстанавливать информацию о фазе образца из его изображения интенсивности с помощью алгоритма восстановления фазы [18].Установка FPM, как показано на рис. 1, включает в себя обычную установку микроскопа, в которой источник света заменен светодиодной матрицей. Мы предполагаем, что наши светодиоды квазимонохроматические, более подробный анализ можно найти в [19]. Световое поле, излучаемое одним светодиодом, можно представить как плоскую волну в небольшой области на плоскости образца, поскольку большое расстояние (~ 8 см) между светодиодом и образцом увеличивает пространственную когерентность светодиода. Плоская волна имеет компоненты вектора (kx, ky), связанные с наклонным освещением светодиода на образце.Загорание одного светодиода приводит к смещению спектра Фурье образца на (kx, ky) в задней фокальной плоскости линзы объектива, а конечная числовая апертура (NA) линзы объектива действует как фильтр нижних частот, который пропускает только небольшая подобласть в центре смещенного спектра Фурье. Низкочастотный компонент Фурье далее распространяется на плоскость изображения и фиксируется камерой. Светодиоды загораются последовательно, так что захваченные изображения содержат частично перекрывающиеся подобласти Фурье, которые вместе охватывают весь спектр Фурье образца.Захваченные изображения разбиваются на более мелкие плитки пространственно когерентных областей, размер которых определяется теоремой Ван Циттерта-Цернике: L = 0,61 λz / a [20], где λ — длина волны светодиода, z — это расстояние от светодиода до образца, а a — радиус активной области светодиода. При размере светодиода 200 мкм x 200 мкм, расстоянии между светодиодной матрицей и образцом 8 см и длине волны 630 нм длина когерентности составляет ~ 307 мкм.Также в пределах этого измерения предполагается, что пространственно изменяющиеся аберрации постоянны. Мы реконструируем каждую плитку отдельно, так что пространственно изменяющиеся аберрации в поле зрения микроскопа могут быть устранены с помощью алгоритма реконструкции, описанного ниже.

Рис. 1. Настройка FPM.

а) Схема установки ФПМ. Он состоит из обычного микроскопа, включающего объектив, линзу трубки, камеру и светодиодную матрицу, заменяющую конденсор для освещения образца. б) Фурье-спектр образца в задней фокальной плоскости объектива.Круглая подобласть соответствует размеру апертуры объектива. Он смещается при изменении угла освещения. в) Изменение угла освещения обеспечивается включением светодиодов в разных местах матрицы.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g001

Для каждого тайла в поле зрения можно восстановить его расширенный комплексный спектр Фурье из изображений с переменной освещенностью, применив алгоритм восстановления фазы, описанный в [21], названный алгоритмом восстановления функции встроенного зрачка (EPRY).Алгоритм итеративно решает расширенный спектр Фурье, используя изображения интенсивности в качестве ограничения в пространственной области и конечную числовую апертуру объектива в качестве ограничения смещения нижних частот в области Фурье. В этом процессе алгоритм может не только генерировать комплексное амплитудное изображение образца с высоким разрешением, но также отделить функцию зрачка и комплексную амплитудную функцию образца от изображения. Функция зрачка включает аберрации микроскопа, связанные с его системой линз, и расфокусировку, вызванную смещением образца в фокальной плоскости, оба из которых могут зависеть от расположения плитки в поле зрения.Следовательно, комплексная амплитудная функция образца представляет собой комплексное изображение образца с коррекцией аберраций и ограничением дифракции. Сшивая плитки вместе в пространственной области, мы получаем изображение интенсивности образца и информацию о фазе, отделенную от аберраций по всему полю поля зрения.

Материалы и методы

Заявление об этике

Исследование было одобрено Комитетом Калифорнийского технологического института по защите людей (IRB) Калифорнийского технологического института (IRB No.14–0464). Все образцы крови, использованные в этом исследовательском проекте, были получены после получения подписанной формы согласия от добровольцев. Добровольцы не идентифицированы с образцами в этом проекте.

Подготовка мазка крови

Мазок крови, окрашенный по Райту-Гимзе, был подготовлен для тестирования производительности FPM по сравнению с обычной микроскопией. 2,0 мг ЭДТА / мл добавляли к образцу цельной крови и 1 мкл смеси равномерно растирали по покровному стеклу с использованием другого покровного стекла под углом размазывания 30 градусов.После того, как образец был высушен на воздухе в течение 5 минут, для фиксации и окрашивания образца использовали набор для окрашивания HEMA 3 Wright-Giemsa от Fisher Diagnostics. Набор включал погружение образца на 1 секунду последовательно в три сосуда Коплина, первый из которых содержал фиксирующий раствор HEMA 3 на основе метанола, второй — раствор I HEMA 3, а последний — раствор II HEMA 3. Шаги погружения повторяли 5 раз для каждого образца. Затем образец промывали деионизированной водой и сушили на воздухе еще 5 минут.

Получение изображений с использованием FPM и обычного метода микроскопии

Микроскоп Olympus BX 41 с объективом 20x (UPlanFL N, 0,5 NA, Olympus) использовался для обычного метода подсчета лейкоцитов. С помощью цветной CMOS-камеры (MT9P031, размер пикселя 2,2 мкм) были получены изображения 20 различных областей на образце мазка крови. Для метода FPM использовался тот же микроскоп с объективом 2x (PlanApo N, 0,08 NA, Olympus) с красными светодиодами (SMD 3528, центральная длина волны 632 нм, ширина полосы ~ 10 нм после полосового фильтра) в качестве источника света, и те же 20 области были извлечены из его изображения с широким полем обзора, полученного встроенной камерой CCD (Kodak KAI-29050, 5.Размер пикселя 5 мм). В процессе захвата последовательно загорались 15 x 15 светодиодов, обеспечивая эффективную числовую апертуру ~ 0,5 для системы FPM. Весь процесс съемки занял ~ 3 минуты (ограничен яркостью светодиодов и частотой кадров камеры), а реконструкция ~ 10 минут (ограничена скоростью обработки компьютера). Мы использовали монохроматические изображения для этого исследования, потому что для идентификации лейкоцитов в образце требовалась только информация о контрасте.

Слепой подсчет лейкоцитов

Изображения 20 областей мазка крови, полученные с помощью стандартной системы 20-кратного микроскопа, были проанализированы обученным специалистом.Количество лейкоцитов для каждого изображения было сведено в таблицу, что позволило установить базовое значение для тестирования производительности FPM. Чтобы гарантировать, что исследование было слепым, специалисту было дано 2-недельное временное окно, прежде чем он проанализировал соответствующие 20 областей, полученных с помощью FPM. Более того, порядок изображений FPM был рандомизирован. Количество лейкоцитов для изображений FPM было сведено в таблицу, и 20 пар изображений FPM и обычных микроскопических изображений были сопоставлены для сравнения количества лейкоцитов в соответствующих системах в каждой области.

Результаты и обсуждение

На рис. 2 показано сравнение изображений нескольких регионов, полученных двумя способами.Поле обзора, обеспечиваемое FPM, соответствует примерно 120 мм ² в плоскости образца, с эффективной числовой апертурой 0,5 и разрешением по полному шагу 1560 нм, что дает изображение размером ~ 1 гигапиксель. Поле зрения значительно больше, чем может обеспечить микроскоп с 20-кратным увеличением и составляет около 1,2 мм ² . Сравнивая области с окном из FPM и 20-кратной стандартной микроскопии, мы можем ясно видеть ядра лейкоцитов на обоих изображениях. Фактически, ядра в основном используются для отличия лейкоцитов от мазка крови, потому что лейкоциты — единственные клетки в крови с ядром.

Рис. 2. Полное изображение в поле зрения слайда мазка крови с САД ~ 0,9 гигапикселя, полученным с помощью FPM с использованием объектива с числовой апертурой 2x 0,08 (в центре) и его увеличенных частей (вокруг).

Красные подобласти извлекаются непосредственно из полного изображения FOV, а соответствующие синие подобласти получаются объективом 20x 0,5 NA. Оба они предлагают достаточно деталей, по которым мы можем различить формы и размеры лейкоцитов и их ядер. Синий кружок в середине центрального изображения представляет относительный размер поля обзора, достигаемого объективом с 20-кратным увеличением, по сравнению с размером поля зрения FPM.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g002

В слепом сравнительном исследовании специалист смог подсчитать одинаковое количество лейкоцитов в каждой области как для обычных микроскопических изображений, так и для изображений FPM. Всего для обоих методов было подсчитано 38 лейкоцитов, и ложноположительных или ложноотрицательных показаний FPM не было. Результат представлен в Таблице 1. Это указывает на то, что изображения, полученные с помощью FPM, имеют адекватное, если не превышающее, качество для процедуры подсчета лейкоцитов и могут поставить точный диагноз.Таким образом, мы подтверждаем, что FPM является подходящей заменой стандартной микроскопии, которую гематологи могут использовать для подсчета лейкоцитов.

Ключевым преимуществом FPM, как показано на рис. 2, является его способность разрешать изображение с высоким разрешением и широким полем обзора. В этой установке мы смогли получить изображение мазка крови с полем обзора, обеспечиваемым объективом 2x 0,08 NA, с разрешением, сравнимым с объективом 20x 0,5 NA. Широкий FOV очень удобен для подсчета лейкоцитов с помощью микроскопа, потому что он исключает количество механических сканирований, которые специалисту необходимо выполнить на образце мазка крови, чтобы подсчитать количество лейкоцитов для анализа.Ручное механическое сканирование может привести к ошибкам в процессе подсчета из-за непреднамеренного перекрытия между областями сканирования вместо изображения идеально смежных областей. Однако с помощью FPM такие ошибки значительно уменьшаются за счет уменьшения количества требуемых отсканированных областей или даже устраняются, когда в одном поле зрения может быть подсчитано достаточное количество лейкоцитов. Учитывая, что для достаточной оценки общего количества лейкоцитов в крови обычно требуется около десяти 40-кратных полей зрения микроскопа, общее требуемое поле зрения составляет ~ 5 мм ² [22].FPM полностью удовлетворяет этому требованию с его объективом 2x с полем обзора 120 мм ² . Для сравнения: объектив 20x 0,5 NA имеет поле обзора 1,2 мм ² , что требует бокового сканирования слайда.

Стоит сравнить метод FPM с другими методами визуализации всего слайда (WSI), которые включают точно выровненные механические компоненты для получения изображения с высоким разрешением и широким полем обзора. У FPM есть несколько преимуществ перед этими методами. Во-первых, стабильность FPM из-за отсутствия каких-либо движущихся частей.Отсутствие движущихся частей означает меньший износ, поэтому целостность системы может сохраняться в течение более длительного периода времени. Во-вторых, и, возможно, самое большое преимущество FPM, является устойчивость FPM к возможным ошибкам, возникающим в результате неправильной настройки. В стандартном методе WSI большинство проблем с качеством изображения связаны с фокусировкой [17]. Расфокусированные изображения влекут за собой повторение нового набора изображений после правильной фокусировки объектива. В случае с FPM интенсивное повторение не требуется из-за его способности к перефокусировке [18].Поскольку изображение, которое восстанавливает FPM, является сложным изображением, содержащим как его амплитуду, так и фазу, его можно распространять цифровым способом по оси z до его правильной фокальной плоскости, обеспечивая эффективную глубину фокуса 300 мкм [18]. В результате FPM может отображать образец с неровным профилем поверхности, так что вся область находится в фокусе через отображаемое поле обзора. Образцы мазков крови с пространственно различающимися уровнями толщины или даже наклоненные образцы из-за несовпадения могут быть успешно визуализированы с помощью FPM. В-третьих, FPM намного дешевле, чем WSI.WSI обычно включает в себя прецизионный механический столик, который может стоить 100 000 ~ 150 000 долларов США за штуку [17], тогда как FPM требует только добавления недорогой светодиодной матрицы (50 долларов США) к существующей традиционной системе микроскопа.

Присутствие ядер в лейкоцитах определяется по изображениям FPM. Кроме того, можно наблюдать морфологию ядер. Большинство лейкоцитов на рис. 3 демонстрируют многодольчатую структуру ядра, которая является индикатором нейтрофилов, эозинофилов или базофилов, а один лейкоцит имеет эксцентрическое ядро, что характерно для лимфоцитов.В этом исследовании дифференциальный подсчет лейкоцитов не проводился. Однако изображения FPM с высоким разрешением предполагают, что использование объектива с более высокой числовой апертурой и более широких углов освещения светодиодами в установке FPM для дальнейшего увеличения эффективной числовой апертуры до ~ 1,4 может позволить дифференциальный подсчет лейкоцитов в нашей системе. Для читателей, заинтересованных в реализации системы FPM с высоким NA, пожалуйста, обратитесь к [23]. Кроме того, получение полноцветного изображения мазка крови может помочь нашей системе в выполнении дифференциального подсчета, поскольку цвет клеток помогает различать разные типы лейкоцитов.

Рис. 3. Несколько лейкоцитов из областей, отображаемых с помощью обычного микроскопа с 20-кратным увеличением (вверху) и FPM (внизу).

Среди этих клеток можно наблюдать различную морфологию. Самая левая клетка имеет эксцентрическое однодолевое ядро, что свидетельствует о том, что это лимфоцит, в то время как другие клетки имеют многодольчатую структуру ядра, что позволяет предположить, что они являются эозинофилами, базофилами или нейтрофилами.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g003

Четкое морфологическое различие между лейкоцитами и эритроцитами на изображениях мазков побудило нас применить алгоритм для автоматизации процесса подсчета лейкоцитов.Поскольку лейкоциты имеют заметно высокий контраст, обусловленный наличием ядра, можно разработать алгоритм для выделения высококонтрастных областей и использования их в качестве маркеров для идентификации лейкоцитов на изображениях мазков крови. Используя MATLAB, мы количественно оценили разницу в контрасте и размере лейкоцитов по сравнению с эритроцитами. Обладая этой информацией, алгоритм смог идентифицировать лейкоциты с точностью 95% по 20 полученным образцам изображений, как показано в таблице 1. Пример идентификации лейкоцитов с помощью алгоритма показан на рисунке 4.Ошибки в подсчете были обнаружены на изображениях, где (1) либо контраст ядер лейкоцитов был невысоким по сравнению с фоновыми эритроцитами, либо (2) эритроциты были скоплены в одной области, создавая контраст, такой же высокий, как у ядер лейкоцитов. в их близости. Тем не менее, с точностью подсчета 95% алгоритм может помочь врачам вручную подсчитывать большое количество образцов крови. Ожидается, что включение в программу большего количества параметров, помимо контраста и размера лейкоцитов, приведет к более высокой точности.

Рис. 4. Определение лейкоцитов с помощью алгоритма автоматического подсчета.

Алгоритм анализирует часть изображения образца, полученного с помощью FPM (слева), и выводит изображение с красными отметками на обнаруженных лейкоцитах.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0133489.g004

Заключение

Мы продемонстрировали, что FPM может быть полезен для подсчета лейкоцитов благодаря большому FOV и высокому разрешению, которые требуют только добавления недорогой светодиодной матрицы к стандартной установке микроскопа.Это значительно сокращает или даже исключает объем сканирования образца крови, необходимый для ручного подсчета лейкоцитов. Низкая стоимость FPM может позволить более широкому сообществу получать широкопольные изображения с высоким разрешением, сопоставимые с изображениями WSI, и выполнять процедуры подсчета лейкоцитов более эргономично. Цифровое получение изображений с помощью FPM также делает его хорошим кандидатом для приложений телемедицины. Дальнейшее улучшение разрешения изображения также позволит проводить дифференциальный подсчет лейкоцитов в системе FPM.Применение большего количества параметров для различения лейкоцитов в образце крови к алгоритму автоматического подсчета приведет к более высокой точности.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JC XO CY. Проведены эксперименты: JC XO RPK. Проанализированы данные: JC RPK. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: XO. Написал статью: JC.

Список литературы

1. 1. Ярнелл Дж. У., Бейкер И. А., Свитнам П. М., Бейнтон Д., О’Брайен Дж. Р., Уайтхед П. Дж. И др.Фибриноген, вязкость и количество лейкоцитов являются основными факторами риска ишемической болезни сердца. Совместные исследования болезней сердца Caerphilly и Speedwell. Тираж. 1991; 83 (3): 836–44. pmid: 1999035
2. 2. Каннел В.Б., Андерсон К., Уилсон П.Ф. Количество лейкоцитов и сердечно-сосудистые заболевания: выводы из исследования Фреймингема. ДЖАМА. 1992. 267 (9): 1253–6. pmid: 1538564
3. 3. Гримм Р. Х. младший, Нитон Дж. Д., Людвиг В. Прогностическое значение количества лейкоцитов для коронарной, рака и общей смертности.ДЖАМА. 1985. 254 (14): 1932-7. pmid: 4046122
4. 4. Бэррон Х.В., Кэннон С.П., Мерфи С.А., Браунвальд Э., Гибсон СМ. Связь между количеством лейкоцитов, эпикардиальным кровотоком, перфузией миокарда и клиническими исходами в условиях острого инфаркта миокарда: тромболизис при инфаркте миокарда 10 Substudy. Тираж. 2000. 102 (19): 2329–34. pmid: 11067784
5. 5. Браун Д. В., Джайлс У. С., Крофт Дж. Б.. Количество лейкоцитов: независимый предиктор смертности от ишемической болезни сердца среди национальной когорты.Журнал клинической эпидемиологии. 2001. 54 (3): 316–22. pmid: 11223329
6. 6. Twig G, Afek A, Shamiss A, Derazne E, Tzur D, Gordon B и др. Количество лейкоцитов и риск ишемической болезни сердца у молодых взрослых. PLoS ONE. 2012; 7 (10): e47183. pmid: 23077568
7. 7. Тонг ПК, Ли К-Ф, Со В-И, Нг М. Х., Чан В-Б, Ло МК и др. Количество лейкоцитов связано с макро- и микрососудистыми осложнениями у китайских пациентов с диабетом 2 типа. Уход за диабетом.2004. 27 (1): 216–22. pmid: 14693992
8. 8. Возарова Б., Вейер С., Линдси Р.С., Пратли Р.Э., Богардус К., Татаранни П.А. Высокое количество лейкоцитов связано с ухудшением чувствительности к инсулину и прогнозирует развитие диабета 2 типа. Диабет. 2002. 51 (2): 455–61. pmid: 11812755
9. 9. Яффе Д.М., Флейшер Г.Р. Температура и количество лейкоцитов как индикаторы бактериемии. Педиатрия. 1991. 87 (5): 670–4. pmid: 2020512
10. 10. Shapiro HM.Практическая проточная цитометрия. Нью-Джерси: Вили-Лисс; 2003.
11. 11. Huh D, Gu W, Kamotani Y, Grotberg JB, Takayama S. Microfluidics для проточного цитометрического анализа клеток и частиц. Физиологические измерения. 2005; 26 (3): R73. pmid: 15798290
12. 12. Зуба-Сурма EK, Kucia M, Abdel-Latif A, Lillard JW, Ratajczak MZ. Система ImageStream: ключевой шаг к новой эре в области обработки изображений. Folia Histochemica et Cytobiologica. 2007. 45 (4): 279–90. pmid: 18165167
13. 13.Кессель Р.Г. Основы медицинской гистологии: биология клеток, тканей и органов. Нью-Йорк: издательство Оксфордского университета; 1998.
14. 14. Turgeon ML. Клиническая гематология: теория и процедуры. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2005. 551 с.
15. 15. Бреслауэр Д. Н., Маамари Р. Н., Свитц Н. А., Лам В. А., Флетчер Д. А.. Клиническая микроскопия с помощью мобильного телефона для приложений глобального здравоохранения. PLoS ONE. 2009; 4 (7): e6320. pmid: 19623251
16. 16. Беллвуд Б., Андрасик-Каттон М.Справочник ветеринарного техника по лабораторным процедурам. Эймс: Вили-Блэквелл; 2013.
17. 17. Газнави Ф., Эванс А., Мадабхуши А., Фельдман М. Цифровая визуализация в патологии: визуализация всего слайда и не только. Ежегодный обзор патологии: механизмы заболевания. 2013; 8: 331–59.
18. 18. Чжэн Г., Хорстмейер Р., Ян С. Широкопольная фурье-психологическая микроскопия с высоким разрешением. Нат Фотон. 2013. 7 (9): 739–45.
19. 19. Хорстмейер Р., Ян С. Модель фазового пространства фурье-психологической микроскопии.Opt Express. 2014; 22 (1): 338–58. pmid: 24514995
20. 20. Мандель Л., Вольф Э. Оптическая когерентность и квантовая оптика. Нью-Йорк: издательство Кембриджского университета; 1995.
21. 21. Ou X, Zheng G, Yang C. Восстановление функции встроенного зрачка для фурье-психологической микроскопии. Opt Express. 2014. 22 (5): 4960–72. pmid: 24663835
22. 22. Фрицма Г.А., Дойг К., Родак Б.Ф. Гематология: клинические принципы и применение. Сент-Луис: Elsevier Health Sciences; 2008 г.
23. 23. Оу Х, Хорстмейер Р., Чжэн Г., Ян С. Птихография Фурье с высокой числовой апертурой: принцип, реализация и характеристика. Opt Express. 2015; 23 (3): 3472–91. pmid: 25836203

Полный анализ крови (CBC) | HealthLink BC

Обзор теста

Полный анализ крови (ОАК) дает важную информацию о видах и количестве клеток в крови, особенно эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.Общий анализ крови помогает врачу проверить любые симптомы, например слабость, утомляемость или синяки. Общий анализ крови также помогает ему или ей диагностировать такие состояния, как анемия, инфекция и многие другие расстройства.

Тест CBC обычно включает:

• Количество лейкоцитов (лейкоцитов, лейкоцитов). Лейкоциты защищают организм от инфекции. Если развивается инфекция, белые кровяные тельца атакуют и уничтожают вызывающие ее бактерии, вирус или другой организм. Белые кровяные тельца больше красных кровяных телец, но их меньше.Когда у человека бактериальная инфекция, количество лейкоцитов увеличивается очень быстро. Количество лейкоцитов иногда используется для обнаружения инфекции или для того, чтобы увидеть, как организм борется с лечением рака.
• Типы лейкоцитов (дифференциал лейкоцитов). Основными типами лейкоцитов являются нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы. Незрелые нейтрофилы, называемые палочковидными нейтрофилами, также являются частью этого теста. Каждый тип клеток играет свою роль в защите организма.Количество каждого из этих типов лейкоцитов дает важную информацию об иммунной системе. Слишком много или слишком мало различных типов белых кровяных телец может помочь обнаружить инфекцию, аллергическую или токсическую реакцию на лекарства или химические вещества, а также многие состояния, такие как лейкоз.
• Количество эритроцитов (эритроцитов). Красные кровяные тельца переносят кислород от легких к остальному телу. Они также переносят углекислый газ обратно в легкие, чтобы его можно было выдохнуть.Если количество эритроцитов низкое (анемия), возможно, организм не получает необходимый ему кислород. Если количество слишком велико (состояние, называемое полицитемией), есть вероятность, что красные кровяные тельца слипнутся и заблокируют крошечные кровеносные сосуды (капилляры). Это также затрудняет перенос кислорода эритроцитами.
• Гематокрит (HCT, объем упакованных клеток, PCV). Этот тест измеряет количество пространства (объема) красных кровяных телец, занимаемых кровью. Значение выражается в процентах красных кровяных телец в объеме крови.Например, гематокрит 38 означает, что 38% объема крови состоит из красных кровяных телец. Значения гематокрита и гемоглобина — два основных теста, которые показывают, присутствует ли анемия или полицитемия.
• Гемоглобин (Hgb). Молекула гемоглобина заполняет эритроциты. Он переносит кислород и придает кровяным тельцам красный цвет. Тест на гемоглобин измеряет количество гемоглобина в крови и является хорошей мерой способности крови переносить кислород по всему телу.
• Показатели эритроцитов. Существует три индекса эритроцитов: средний корпускулярный объем (MCV), средний корпускулярный гемоглобин (MCH) и средняя концентрация корпускулярного гемоглобина (MCHC). Они измеряются машиной, и их значения берутся из других измерений в CBC. MCV показывает размер красных кровяных телец. Значение MCH — это количество гемоглобина в среднем эритроците. MCHC измеряет концентрацию гемоглобина в среднем эритроците.Эти числа помогают в диагностике различных типов анемии. Также можно измерить ширину распределения эритроцитов (RDW), которая показывает, все ли клетки одинакового или разных размеров или форм.
• Количество тромбоцитов (тромбоцитов). Тромбоциты (тромбоциты) — это самый маленький тип клеток крови. Они важны для свертывания крови. Когда происходит кровотечение, тромбоциты набухают, слипаются и образуют липкую пробку, которая помогает остановить кровотечение. Если тромбоцитов слишком мало, может возникнуть неконтролируемое кровотечение.Если тромбоцитов слишком много, есть вероятность образования тромба в кровеносном сосуде. Кроме того, тромбоциты могут участвовать в затвердевании артерий (атеросклерозе).
• Средний объем тромбоцитов (MPV). Средний объем тромбоцитов — это среднее количество (объем) тромбоцитов. Средний объем тромбоцитов используется вместе с подсчетом тромбоцитов для диагностики некоторых заболеваний. Если количество тромбоцитов в норме, средний объем тромбоцитов может быть слишком высоким или слишком низким.

Ваш врач может назначить анализ мазка крови одновременно с общим анализом крови, но он не является частью обычного анализа общего анализа крови.В этом тесте капля крови растекается (размазывается) по предметному стеклу и окрашивается специальным красителем. Слайд исследуют под микроскопом. Регистрируются количество, размер и форма эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Клетки крови различной формы и размера могут помочь диагностировать многие заболевания крови, такие как лейкемия, малярия или серповидно-клеточная анемия.

Для чего это нужно

Общий анализ крови можно сделать, чтобы:

• Определить причину таких симптомов, как усталость, слабость, жар, синяки или потеря веса.
• Проверить на анемию.
• Посмотрите, сколько крови было потеряно, если есть кровотечение.
• Диагностика полицитемии.
• Проверить на инфекцию.
• Диагностика заболеваний крови, например лейкемии.
• Проверьте, как организм переносит некоторые виды лекарств или лучевой терапии.
• Проверьте, как ненормальное кровотечение влияет на клетки крови, и посчитайте.
• Экран для высоких и низких значений перед операцией.
• Посмотрите, слишком ли много или слишком мало определенных типов ячеек.Это может помочь найти другие состояния, например, слишком много эозинофилов может означать наличие аллергии или астмы.

Общий анализ крови может быть сделан как часть регулярного медицинского осмотра. Анализ крови может дать ценную информацию об общем состоянии вашего здоровья.

Как подготовиться

Вам не нужно ничего делать перед прохождением этого теста.

Как это делается

Ваш лечащий врач возьмет кровь на анализ:

• Оберните эластичную ленту вокруг вашего плеча, чтобы остановить кровоток.Это увеличивает размер вены под лентой, что упрощает введение иглы в вену.
• Очистите место иглы спиртом.
• Введите иглу в вену. Может потребоваться более одной иглы.
• Присоедините к игле трубку, чтобы наполнить ее кровью.
• Снимите повязку с руки, когда наберется достаточно крови.
• Поместите марлевую салфетку или ватный диск на место иглы, когда игла будет удалена.
• Надавите на место, а затем наложите повязку.

Если этот анализ крови проводится у ребенка, вместо забора крови из вены будет сделана пяточная палочка.

Как это чувствуется

Образец крови берется из вены на руке. Плечо обернуто резинкой. Может ощущаться стеснение. Вы можете вообще ничего не чувствовать от иглы или можете почувствовать быстрое покалывание или защемление.

Риски

Очень мала вероятность возникновения проблемы из-за взятия пробы крови из вены.

• На этом участке может образоваться небольшой синяк.Вы можете снизить вероятность появления синяков, если надавите на участок кожи в течение нескольких минут.
• В редких случаях после взятия пробы крови вена может опухнуть. Эта проблема называется флебитом. Для лечения этого состояния можно использовать теплый компресс несколько раз в день.

Результаты

Общий анализ крови (ОАК) дает важную информацию о видах и количестве клеток в крови, особенно эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Общий анализ крови помогает врачу проверить любые симптомы, например слабость, утомляемость или синяки.Общий анализ крови также помогает ему или ей диагностировать такие состояния, как анемия, инфекция и многие другие расстройства.

Нормальный

Нормальные значения, перечисленные здесь, называемые эталонным диапазоном, являются лишь ориентировочными. Эти диапазоны варьируются от лаборатории к лаборатории, и ваша лаборатория может иметь другой диапазон от нормального. Отчет вашей лаборатории должен содержать диапазон, который использует ваша лаборатория. Кроме того, ваш врач оценит ваши результаты на основе вашего здоровья и других факторов. Это означает, что значение, выходящее за рамки нормальных значений, перечисленных здесь, может быть нормальным для вас или вашей лаборатории.

Нормальные значения для общего анализа крови (ОАК) зависят от возраста, пола, высоты вашего проживания над уровнем моря и типа образца крови. Ваш врач может использовать все значения общего анализа крови для проверки состояния. Например, количество эритроцитов (RBC), гемоглобин (Hgb) и гематокрит (HCT) являются наиболее важными значениями, необходимыми для определения наличия у человека анемии, но показатели эритроцитов и мазок крови также помогают в диагноз и может показать возможную причину анемии.

Чтобы увидеть, хорошее ли количество лейкоцитов (WBC, лейкоцитов) и как клетки выглядят в мазке, ваш врач посмотрит как количество (количество лейкоцитов), так и дифференциал лейкоцитов. Чтобы узнать, слишком ли много или слишком мало клеток определенного типа, ваш врач посмотрит на общее количество и процентное содержание этой конкретной клетки. Существуют нормальные значения общего количества белых клеток каждого типа.

Беременность может изменить эти показатели крови. Ваш врач обсудит с вами нормальные показатели в течение каждого триместра беременности.

Мужчины:

4.5–5,5 миллионов эритроцитов на микролитр (мкл) или 4,5–5,5 x 10 ¹² / литр (л)

Женщины:

4,0–5,0 млн эритроцитов на мкл или 4,0–5,0 x 10 ¹² / л

Дети:

3,8–6,0 миллиона эритроцитов на мкл или 3,8–6,0 x 10 ¹² / л

Новорожденные Эритроцитов на мкл или 4,1–6,1 x 10 ¹² / л

Гематокрит (HCT)

Мужчины:	42% или 0–2%.42–0,52 объемная доля
Женщины:	36% –48% или 0,36–0,48 объемная доля
Дети:	29% –59% или 0,29–0,59% объема фракция
Новорожденные:	44% –64% или 0,44–0,64 объемная доля

В целом нормальный уровень гемоглобина составляет примерно одну треть от значения гематокрита.

—

Индексы эритроцитов

Средний корпускулярный объем (MCV) — Взрослые:	84–96 фемтолитров (fL)
Гемтолитры :	28–34 пикограмма (пг) на клетку
Средняя концентрация корпускулярного гемоглобина (MCHC) — Взрослые:	32–36 граммов на децилитр (г / дл)

Ширина распределения эритроцитов (RDW)

Нормальный:

11.5% –14,5%

Количество тромбоцитов (тромбоцитов)

Взрослые:	140 000–400 000 тромбоцитов на мм 3 или 140468 x 140 / Л
Дети:	150 000–450 000 тромбоцитов на мм 3 или 150–450 x 10 9 / л

Средний объем тромбоцитов

Взрослые:	7.4–10,4 мкм 3 или 7,4–10,4 мкл
Дети:	7,4–10,4 мкм 3 или 7,4–10,4 мкл

907 Мазок крови4

Нормальный:

Клетки крови нормальные по форме, размеру, цвету и количеству.

Высокие значения

Красные кровяные тельца (RBC)

• Условия, вызывающие высокие значения RBC, включают курение, воздействие угарного газа, длительные заболевания легких, болезни почек, некоторые виды рака, определенные формы сердечных заболеваний , расстройство, связанное с употреблением алкоголя, заболевание печени, редкое заболевание костного мозга (истинная полицитемия) или редкое нарушение гемоглобина, который плотно связывает кислород.
• Состояния, которые влияют на содержание воды в организме, также могут вызывать высокие уровни эритроцитов. Эти состояния включают обезвоживание, диарею или рвоту, чрезмерное потоотделение и прием диуретиков. Из-за недостатка жидкости в организме объем эритроцитов выглядит большим; это иногда называют ложной полицитемией.

Лейкоциты (лейкоциты, лейкоциты)

• Состояния, вызывающие высокие значения лейкоцитов, включают инфекцию, воспаление, повреждение тканей тела (например, сердечный приступ), тяжелый физический или эмоциональный стресс (например, лихорадку, травмы, или хирургия), почечной недостаточности, волчанки, туберкулеза (ТБ), ревматоидного артрита, недоедания, лейкемии и таких заболеваний, как рак.
• Использование кортикостероидов, недостаточная активность надпочечников, проблемы со щитовидной железой, некоторые лекарства или удаление селезенки также могут вызвать высокие уровни лейкоцитов.

Тромбоциты

• Высокий уровень тромбоцитов может наблюдаться при кровотечениях, дефиците железа, некоторых заболеваниях, таких как рак, или проблемах с костным мозгом.

Низкие значения

Красные кровяные тельца (RBC)

• Анемия снижает уровень RBC. Анемия может быть вызвана обильным менструальным кровотечением, язвой желудка, раком толстой кишки, воспалительным заболеванием кишечника, некоторыми опухолями, болезнью Аддисона, талассемией, отравлением свинцом, серповидно-клеточной анемией или реакциями на некоторые химические вещества и лекарства.Низкое количество эритроцитов также может быть замечено при удалении селезенки.
• Недостаток фолиевой кислоты или витамина B12 также может вызвать анемию, такую ​​как злокачественная анемия, которая является проблемой с усвоением витамина B12.
• Значение индексов эритроцитов и мазок крови могут помочь найти причину анемии.

Лейкоциты (WBC, лейкоциты)

Тромбоциты

• Низкие значения тромбоцитов могут наблюдаться при беременности, иммунной тромбоцитопенической пурпуре (ИТП) и других состояниях, влияющих на процесс образования тромбоцитов или разрушающих тромбоциты.
• Большая селезенка может снизить количество тромбоцитов.

Что влияет на тест

Причины, по которым вы не сможете пройти тест или почему его результаты могут оказаться бесполезными, включают:

• Если резинка была на вашей руке долгое время во время взятия пробы крови.
• Прием лекарств, вызывающих снижение уровня тромбоцитов. Некоторые примеры многих лекарств, вызывающих низкий уровень тромбоцитов, включают стероиды, некоторые антибиотики, тиазидные диуретики, химиотерапевтические препараты, хинидин и мепробамат.
• Очень высокое количество лейкоцитов или высокий уровень какого-либо типа жира (триглицеридов). Это может привести к ложно завышенным значениям гемоглобина.
• Наличие увеличенной селезенки, которая может вызвать низкое количество тромбоцитов (тромбоцитопения) или низкое количество лейкоцитов. Увеличение селезенки может быть вызвано определенными видами рака.
• Беременность, которая обычно вызывает низкий уровень эритроцитов и, реже, высокий уровень лейкоцитов.

Список литературы

Цитаты

1. Fischbach FT, Dunning MB III, ред.(2009). Руководство по лабораторным и диагностическим исследованиям , 8 изд. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс.

Кредиты

Текущий по состоянию на: 23 сентября 2020 г.

Автор: Healthwise Staff
Медицинский обзор:
Э. Грегори Томпсон, врач-терапевт
Адам Хусни, доктор медицины, семейная медицина
Мартин Дж.Габица MD — Семейная медицина

По состоянию на 23 сентября 2020 г.

Автор: Healthwise Staff

Медицинский обзор: E. Грегори Томпсон, врач внутренних болезней и Адам Хусни, доктор медицины, семейная медицина и Мартин Дж. Габика, доктор медицины, семейная медицина

Сегментация лейкоцитов и сравнение морфологии клеток с помощью линейных и простых байесовских классификаторов | BioMedical Engineering OnLine

Как показано на Рисунке 1, предлагаемую систему можно разделить на пять основных этапов: предварительная обработка, сегментация, извлечение признаков, выбор признаков и классификация.

Рисунок 1

Блок-схема предлагаемой системы.

Предварительная обработка

Поскольку существует пять различных типов лейкоцитов в зависимости от их формы, размера и наличия гранул, необходимо и очень сложно сначала сегментировать лейкоциты из каждого изображения. Очевидно, что ядра лейкоцитов на всех изображениях имеют фиолетовый цвет. Как показано на рисунке 2, среди трех цветовых компонентов RGB область ядра фиолетового цвета имеет наименьшее значение в зеленом канале по сравнению с другими областями, такими как цитоплазма или фон.Таким образом, область ядра была увеличена на входных изображениях путем усреднения значений пикселей в красном и синем каналах вместе и последующего деления суммы на значение интенсивности зеленого канала. Процесс проводился для изображений как в формате 8-битного целого числа без знака, так и в формате с плавающей запятой двойной точности, как показано на блок-схеме на рисунке 3. Затем было применено выравнивание гистограммы для перераспределения интенсивности изображения для покрытия всего диапазона яркости оба изображения. Для преобразования изображения в двоичный формат использовалось двоичное преобразование.Окончательное изображение в формате 8-битного целого числа без знака изображение I ₃ использовалось как изображение, усиленное ядром. Другой, I ₆ , использовалось как улучшенное изображение WBC.

Рисунок 2

Интенсивность пикселей среди каналов RGB в каждой области и масштабирование калибровочной линейки.

Рисунок 3

Блок-схема этапа предварительной обработки и процесса сегментации.

Сегментация ядра

После этапа предварительной обработки морфологические операторы эрозии и дилатации со структурирующим элементом плоского диска радиуса 0.33 мкм (набор данных 1 — 5 пикселей, набор данных 2 — 3 пикселя) был применен к улучшенному изображению ядра, чтобы удалить любые зашумленные пиксели.

Рисунок 4a, b приблизительно соответствует минимальной площади ядра, учитывая, что только некоторые типы лейкоцитов имеют ядра с несколькими долями, такие как эозинофил и нейтрофил. Как показано в таблице 1, хотя оба их диаметра находятся в одном и том же диапазоне 9-15 мкм, ядро ​​эозинофила обычно имеет две доли, разделенные очень узкой нитью или стойкой, в то время как ядро ​​нейтрофила имеет от двух до пяти долей, разделенных очень узкой нити или подставки.Согласно [16] отношение площади ядра к площади цитоплазмы нейтрофила составляет примерно 1: 3. Площадь ядра составляет четверть общей минимальной площади WBC. В этом эксперименте предполагалось, что предполагаемое ядро ​​нейтрофила будет разделено поровну на 3 доли. Минимальную площадь для каждого лепестка можно рассчитать следующим образом:

Рисунок 4

a нейтрофил с множеством долей, b эозинофил с множеством долей и c отверстие внутри ядра от процесса фагоцитоза лейкоцитов.{2} \)

Минимальная площадь доли ядра \ (= 26 \, {\ text {пикселей}} \ times 26 \, {\ text {пикселей}} = 676 \, {\ text {пикселей}} \)

Использовалась минимальная площадь доли ядра в 1500 пикселей и 670 пикселей для наборов данных 1 и 2 соответственно. Иногда внутри ядра действительно существовала дыра (см. Рис. 4а), вызванная процессом фагоцитоза лейкоцитов; поэтому все отверстия с площадью менее 1,49 мкм × 1,49 мкм (500 пикселей в наборе данных 1 и 220 пикселей в наборе данных 2) были заполнены.Сегментированное многодолевое ядро ​​может выглядеть как несколько клеток рядом друг с другом, что может привести к неправильной интерпретации. Поэтому было применено расширение морфологии с помощью элемента структурирования плоского диска радиусом 2 мкм (28 пикселей для изображений в наборе данных 1 и 20 пикселей для изображений в наборе данных 2), чтобы объединить их в одну ячейку.

Сегментация лейкоцитов

Проблемы, обнаруживаемые при сегментации лейкоцитов, заключаются в разнообразии форм и размеров. Более того, цвет цитоплазмы лейкоцитов неотличим от соседних эритроцитов, что еще больше усложняет задачу.Для получения более точных результатов необходима дальнейшая обработка. Поскольку цитоплазма окружает все ядро, предполагалось, что все пиксели, связанные с пикселями ядра, являются кандидатами в WBC. Это могут быть только белые кровяные тельца или белые кровяные тельца, примыкающие к другим клеткам.

Метод разделения соседних клеток выполняется в предположении, что ядро ​​находится в центре лейкоцитов. Таким образом, радиальные линии были созданы от центра выпуклого ядра до границы интересующего объекта, как описано уравнениями.(1) и (2)

$$ \ left [{\ begin {array} {* {20} c} {y_ {1}} \\ {y_ {2}} \\ \ end {array}} \ right] = \ left [{\ begin {array} {* {20} c} 1 & {x_ {1}} \\ 1 & {x_ {2}} \\ \ end {array}} \ right] \ left [{\ begin {array} {* {20} c} {a_ {0}} \\ {a_ {1}} \\ \ end {array}} \ right], $$

(1)

$$ y \ left (x \ right) = \ frac {{x — x_ {2}}} {{x_ {1} — x_ {2}}} y_ {1} + \ frac {{x — x_ { 1}}} {{x_ {2} — x_ {1}}} y_ {2}, $$

(2)

где \ (\ left ({x_ {1}, y_ {1}} \ right) \) — координата центра выпуклого ядра, а \ (\ left ({x_ {2}, y_ {2}) } \ right) \) — координата в каждой позиции на границе интересующего объекта.

Общее количество белых пикселей вдоль каждой линии, представляющее длину каждой радиальной линии, должно быть примерно одинакового значения. Иногда ядро ​​находится не в центре клетки, и выбранный объект может не быть отдельной клеткой, см. Рис. 5b – d. Чтобы справиться с этими проблемами, была создана выпуклая оболочка выбранного ядерного объекта, чтобы избежать случая многолепесткового ядра. Затем из выбранного объекта было вычтено изображение ядра выпуклой оболочки. Затем на вычтенном изображении были проведены радиальные линии от центра тяжести выпуклой оболочки до границы выбранного объекта.Наконец, было подсчитано общее количество белых пикселей вдоль каждой радиальной линии, и пороговое значение было установлено как среднее значение общего количества белых пикселей, найденных для каждой строки с дополнительными 2 мкм (30 пикселей для набора данных 1 и 20 пикселей для набора данных 2). чтобы компенсировать случай, когда ядра не в центре. Если количество пиков превышало пороговое значение, оно считалось частью соседних ячеек.

Рисунок 5

Оценочная модель, когда линия сиреневого цвета представляет границу ядра, синяя линия представляет границу лейкоцитов, красная линия представляет границу эритроцитов, а радиальная линия — линия, которая начинается от центр ядра и длина равна длине большой оси выпуклого ядра. a — d Представляют различное положение ядра, в то время как синяя звезда является потенциальной точкой границы ячейки.

Тогда было три возможных результата: (1) весь объект идентифицируется как WBC, если не существует смежных ячеек, (2) объект находится рядом с некоторыми другими ячейками, и в этом случае требуется дальнейшая сегментация и (3) объект площадь составляет более 20% от всей области изображения (рассчитывается исходя из отношения максимально возможной площади в случае 2 к общей площади).В этом случае была применена морфологическая дилатация с дисковым структурирующим элементом радиусом 6 мкм, или минимальным диаметром эритроцитов в сегментированном ядре. Наконец, операция «И» использовалась для объединения интересующего объекта с расширенным изображением. На следующем шаге сегментации учитывалась только часть объекта, членом которого является сегментированное ядро.

Поскольку эритроциты являются наиболее распространенным компонентом на изображениях мазков крови, их диаметр можно оценить с помощью калибровочной линейки.У каждого лейкоцита есть ядро, цитоплазма и несколько гранул. Один только детектор края с трудом может различить настоящую границу лейкоцитов. Однако внешний край интересующего объекта можно считать границей лейкоцита, если его радиальные линии от центра ядра меньше, чем большая ось выпуклого ядра. Модели этого исследования, когда ядро ​​не находится в центре WBC, показаны на рисунке 5. Каждая радиальная линия соответствует уравнениям

$$ \ begin {align} x_ {2} & = x_ {1} + r \ cos \ тета, \; \ hfill \\ y_ {2} & = y_ {1} + r \ sin \ theta, \ hfill \\ \ end {align} $$

(3)

, где точка \ (\ left ({x_ {1}, y_ {1}} \ right) \) — центр выпуклого изображения ядра, точка \ (\ left ({x_ {2}, y_ {2}) } \ right) \) — конечная точка радиальной линии, \ (r \) — длина большой оси выпуклого изображения ядра, а \ (\ theta \) — угол радиальной линии для \ (\ theta = \ left [{0, 0.1, 0.2, \ ldots, 2 \ pi} \ right] \).

Сначала был применен алгоритм края Кэнни для создания изображения кандидата края. Затем проводились радиальные линии с радиусом, равным длине большой оси выпуклого объекта, с началом координат на границе изображения выпуклой оболочки. Рассматриваемые точки должны были соответствовать двум условиям: они находились в конце пересечения между краевой точкой и радиальной линией, а конечная точка радиальной линии в выбранном объекте на изображении RGB, см. Рисунок 6a, должна иметь ноль. значение интенсивности.Любые краевые точки на радиальных линиях, показанные синими точками на рис. 6d, g, j, были краями-кандидатами. Более радиальные линии обеспечили более мелкие сегментированные результаты. Углы между радиусными линиями составляли 0,3, 0,2 и 0,1 рад соответственно. Затем прямая аппроксимация методом наименьших квадратов для формы эллипса, предложенная Фитцгиббоном и др. [17] был применен к этим кандидатам. По полученным параметрам эллипса можно было провести линию границы WBC. Затем операция «И» была применена к предполагаемой области ядра и окончательной сегментации клеток.Результаты показаны на рисунке 6k. Наконец, область цитоплазмы также была сегментирована путем вычитания области сегментированных клеток из области сегментированного ядра.

Рисунок 6

Сегментация ячеек шаг. a Выбранный объект в RGB, b сегментированное ядро, c выпуклая оболочка области ядра, d линия радиусов с центром в центроиде выпуклой оболочки, радиус равен длине большой оси, угол между радиусами равен 0,3 рад, синяя точка является точкой-кандидатом, e применен прямой метод наименьших квадратов для подгонки эллипса к точке-кандидату, f сегментированный результат: красный контур — это область ядра, зеленый контур — ячейка область, g — i и j — l — это повторяющийся шаг d — f с углом между линиями радиусов 0.2 и 0,1 рад соответственно.

Извлечение и отбор признаков

Критериями, используемыми для выделения значимых признаков, являются наличие гранул, количество долей ядра, интенсивность цвета и значения дисперсии в ядре и цитоплазме, разница в значениях цвета мазка и размер клетки или ядра. Большое количество характеристик можно выделить как из результатов сегментации ядра, так и из результатов клеточной сегментации. Некоторые интересные особенности, использованные в этой статье: средняя интенсивность, дисперсия, количество вогнутых точек, площадь, соотношение площадей, периметр, округлость, энтропия и соотношение интенсивности.Однако были выбраны только те функции, которые имеют высокую корреляцию с предсказанием класса. В этой статье для выбора подходящих функций была применена техника SFS.

Элементы, извлеченные из двоичного сегментированного изображения

Сегментированные области ядра и клетки представляют собой связанную область в двоичном изображении \ (O_ {i}, i> 0 \), как в уравнении. (4)

$$ O_ {i} \ left ({x, y} \ right) = \ left \ {{\ begin {array} {* {20} c} {1, \ quad для \, точек \ , на \, \, объект} \\ {0, \ quad for \, background \, points} \\ \ end {array}} \ right.{N — 1} O_ {i} \ left ({x, y} \ right). $$

(5)

Отношение площадей рассчитывается как отношение площади ядра к площади клетки. {2}}}.{L — 1} p \ left ({r_ {j}} \ right) {\ text {log}} _ {2} \ left [{p \ left ({r_ {j}} \ right)} \ right] . $$

(9)

Количество вогнутостей определяется путем вычитания сегментированного изображения ядра из его выпуклой оболочки. Как показано на рисунке 7d, общее количество точек пересечения и пороговый уровень, разделенный на два, составляет общее количество вогнутостей.

Рисунок 7

Интересующий объект во втором случае. a Исходное изображение, b изображение предварительной обработки, c интересующий объект, d , e вогнутая проверка и f сегментированная ячейка.

Среднее отношение интенсивности — это соотношение между двумя цветами в каждой области. Это исследование рассматривает среднее соотношение интенсивности каналов G сегментированного ядра и областей клетки. Также использовалось среднее соотношение интенсивностей между каналами R и B сегментированной области цитоплазмы сегментированной области.

В этом исследовании использовались следующие 15 признаков:

1. 1.

   средних значений интенсивности красных каналов в области ядра,

2. 2.

   дисперсия значений интенсивности красных каналов в области ядра,

3. 3.

   средних значений интенсивности зеленых каналов в области ядра,

4. 4.

   дисперсия значений интенсивности зеленых каналов в области ядра,

5. 5.

   средняя интенсивность в области цитоплазмы в зеленом канале,

6. 6.

   дисперсия значений интенсивности зеленых каналов в области цитоплазмы,

7. 7.

   количество вогнутых точек, найденных в области ядра,

8. 8.

   соотношение площади ядра и клетки,

9. 9.

   площадь ядра,

10. 10.

    округлость ячейки,

11. 11.

    энтропия ядра в синем канале,

12. 12.

    энтропия клетки в красном канале,

13. 13.

    отношение среднего значения интенсивности в красном и синем канале в области цитоплазмы,

14. 14.

    отношение среднего значения интенсивности в красном и зеленом канале в области ячейки,

15. 15.

    отношение среднего значения интенсивности в зеленом и красном каналах в области ядра.

Классификация

Результат сегментированной области ядра может быть использован для идентификации базофила.Как указывалось ранее, базофил имеет гранулы по всей клетке, а его площадь составляет более 100 × 10 ⁻¹² м ² , это исследование оценило минимальный диаметр базофила, как показано в Таблице 1, (22 500 пикселей и 10 000 пикселей в области для набора данных 1 и 2 соответственно), которая больше, чем все другие гранулоциты, но между моноцитом и большим лимфоцитом; тогда как значения интенсивности в красном и синем каналах имеют более высокую дисперсию, чем у обоих агранулоцитов. Итак, площадь ядра, разброс интенсивности в красных и синих каналах сегментированной области, относят к базофилам.Сегментация клеток на базофилы может быть выпуклой оболочкой ядра.

Прямой выбор функций использовался для выбора важных функций. Однако некоторые функции имели другой диапазон по сравнению с другими. Следовательно, их необходимо нормализовать перед любой классификацией. Это было сделано путем нормализации единичного вектора.

Затем был использован линейный классификатор для распознавания каждого типа лейкоцитов и затем сравнение результатов классификации с наивным байесовским классификатором. Поскольку общее количество изображений для каждого типа клеток может варьироваться, для перекрестной проверки использовалась десятикратная методика Leave One Out.

LOINC 49498-9 — Лейкоциты [количество / объем] в крови по оценке

Термин Описание

В мире гематологии оценочное количество клеток существовало в течение многих лун, и они сообщаются либо качественно, либо количественно и проводятся строго с помощью анализа мазков крови.

Мазок Расчетное количество лейкоцитов и тромбоцитов, которые не просто сообщаются как пониженные / адекватные / много, но фактически оцениваются как числовые результаты, такие как оценка 4 К / куб.м для лейкоцитов или 400 К / куб.м для тромбоцитов.Это все равно, что делать ретический подсчет, подсчитывая такое количество полей по типу оценки «мазок».

Этот оценочный подсчет лейкоцитов является количественным подсчетом вручную. Сообщаем номер.
См. Лабораторную процедуру:

A. Оценка мазка по количеству лейкоцитов:

1. Используйте масляно-иммерсионный объектив 50X.
2. Подсчитайте количество как неповрежденных, так и разрушенных лейкоцитов в каждом из 10 микроскопических полей в разных областях слайда, где эритроциты слегка перекрываются. Разделите общее количество на 10, чтобы установить среднее количество лейкоцитов на поле, и умножьте это среднее на 3000, чтобы получить расчетное количество лейкоцитов / мм³.Не округляйте среднее значение, например, если среднее значение 5,7, не округляйте до 6, а для большей точности оставьте число на одном месте после десятичной точки.
3. Если количественное количество лейкоцитов составляет 25 000 клеток / мм³.

III. ССЫЛКИ:

A. Атлас цветов и инструкция по морфологии клеток периферической крови, Барбара Х. О’Коннор, 1984, с. 20.
Б. Принципы и процедуры, Барбара А. Браун, 6-е издание, 1993 г., стр. 104.
Источник: Regenstrief LOINC

Описание детали

LP14419-3 Лейкоциты
Лейкоциты или лейкоциты (лейкоциты) — это иммунные клетки, которые борются с инфекциями, новообразованиями и другими воспалительными состояниями и опосредуют аллергические реакции.В кровотоке обычно присутствуют пять типов лейкоцитов, которые происходят из одинаковых стволовых клеток костного мозга. Пять типов лейкоцитов делятся на две группы в зависимости от наличия или отсутствия гранул в цитоплазме. Гранулоциты включают нейтрофилы, базофилы и эозинофилы. Негранулоциты включают лимфоциты и моноциты. Нейтрофилы борются с инфекцией, поглощая и переваривая бактерии. Эозинофилы и базофилы реагируют на аллергические реакции и способны поглощать комплексы антиген-антитело.Моноциты фагоцитируют бактерии и выделяют интерферон для стимуляции иммунной системы. Лимфоциты делятся на Т-клетки и В-клетки. Т-клеточный иммунитет является клеточным и включает активацию фагоцитов, а В-клеточный иммунитет использует антитела для борьбы с инфекцией. Как повышенное, так и низкое количество лейкоцитов могут быть маркерами инфекции и злокачественности, а низкое количество лейкоцитов связано с множеством первичных и вторичных иммунодефицитов, в зависимости от типа (ов) лейкоцитов, выходящих за пределы допустимого диапазона. (Руководство Мосби по диагностическим и лабораторным тестам, Кэтлин Деска Пагана; Тимоти Джеймс Пагана, Elsevier St.Луи, Мо © 2010) Источник: Regenstrief LOINC

Рекомендации по подходу, анализ крови и периферический мазок, анализ костного мозга

• Редакционная коллегия PDQ по лечению взрослых. Лечение хронического миелогенного лейкоза (PDQ®): версия для специалистов в области здравоохранения. 5 марта 2021 г. [Medline]. [Полный текст].

• Пилы CL. Хронический миелолейкоз. N Engl J Med . 1999, 29 апреля. 340 (17): 1330-40. [Медлайн].

• Druker BJ, Sawyers CL, Kantarjian H, et al.Активность специфического ингибитора тирозинкиназы BCR-ABL при бластном кризе хронического миелолейкоза и острого лимфобластного лейкоза с филадельфийской хромосомой. N Engl J Med . 2001, 5 апреля. 344 (14): 1038-42. [Медлайн]. [Полный текст].

• Kantarjian H, Sawyers C, Hochhaus A, et al, для Международной исследовательской группы STI571 CML. Гематологические и цитогенетические ответы на мезилат иматиниба при хроническом миелолейкозе. N Engl J Med .2002 28 февраля. 346 (9): 645-52. [Медлайн]. [Полный текст].

• Merx K, Muller MC, Kreil S, et al. Раннее снижение уровней транскриптов мРНК BCR-ABL предсказывает цитогенетический ответ у пациентов с хронической фазой CML, получавших иматиниб после неэффективности интерферона альфа. Лейкемия . 2002 Сентябрь 16 (9): 1579-83. [Медлайн]. [Полный текст].

• Talpaz M, Silver RT, Druker BJ и др. Иматиниб вызывает стойкие гематологические и цитогенетические ответы у пациентов с хроническим миелолейкозом в ускоренной фазе: результаты исследования фазы 2. Кровь . 2002 15 марта. 99 (6): 1928-37. [Медлайн]. [Полный текст].

• Kantarjian HM, Cortes JE, O’Brien S, et al. Терапия мезилатом иматиниба у впервые диагностированных пациентов с филадельфийской хромосомно-позитивной хронической миелогенной лейкемией: высокая частота ранних полных и основных цитогенетических ответов. Кровь . 2003 г. 1 января. 101 (1): 97-100. [Медлайн]. [Полный текст].

• Шах Н.П., Тран С., Ли Ф.Й. и др. Преодоление устойчивости к иматинибу с помощью нового ингибитора киназы ABL. Наука . 2004 г. 16 июля. 305 (5682): 399-401. [Медлайн].

• Volpe G, Panuzzo C, Ulisciani S, Cilloni D. Устойчивость к иматинибу при ХМЛ. Cancer Lett . 2009 8 февраля. 274 (1): 1-9. [Медлайн].

• Faderl S, Talpaz M, Estrov Z, O’Brien S, Kurzrock R, Kantarjian HM. Биология хронического миелолейкоза. N Engl J Med . 1999 г. 15 июля. 341 (3): 164-72. [Медлайн].

• Факты и цифры о раке 2021.Американское онкологическое общество. Доступно по адресу https://www.cancer.org/content/dam/cancer-org/research/cancer-facts-and-statistics/annual-cancer-facts-and-figures/2019/cancer-facts-and-figures- 2019.pdf. Дата обращения: 23 мая 2021 г.

• Статистика рака: лейкемия — хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ). Программа надзора, эпидемиологии и конечных результатов Национального института рака. Доступно по адресу https://seer.cancer.gov/statfacts/html/cmyl.html. Дата обращения: 23 мая 2021 г.

• Dybko J, Jawiec B, Haus O, Urbaniak-Kujda D, Kapelko-Słowik K, Wróbel T, et al.Оценка Хасфорда может предсказать молекулярный ответ у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом: опыт одного учреждения. Маркер Дис . 2016. 2016: 7531472. [Медлайн]. [Полный текст].

• Gambacorti-Passerini C, Antolini L, Mahon FX, Guilhot F, Deininger M al et. Многоцентровая независимая оценка исходов у пациентов с хроническим миелолейкозом, получавших иматиниб. Национальный институт рака . 2011, 6 апреля. 103 (7): 553-61. [Медлайн].

• Hochhaus A, Larson RA, Guilhot F, Radich JP, Branford S, Hughes TP и др.Долгосрочные результаты лечения хроническим миелоидным лейкозом иматинибом. N Engl J Med . 2017 9 марта. 376 (10): 917-927. [Медлайн].

• Wang W, Cortes JE, Tang G, Khoury JD, Wang S, Bueso-Ramos CE и др. Стратификация риска хромосомных аномалий при хроническом миелолейкозе в эпоху терапии ингибиторами тирозинкиназы. Кровь . 2016 г. 22 марта. [Medline].

• Редакционный совет по лечению взрослых PDQ. Лечение хронического миелогенного лейкоза (PDQ®): версия для пациентов.24 апреля 2020 г. [Medline]. [Полный текст].

• «Иматиниб изменил все»: будущее теперь более обнадеживающее. Медицинские новости Medscape. Доступно на http://www.medscape.com/viewarticle/876942. 9 марта 2017 г .; Доступ: 10 марта 2017 г.

• Islamagic E, Hasic A, Kurtovic S, et al. Эффективность дженерика иматиниба в качестве терапии первой и второй линии: трехлетнее наблюдение за пациентами с хроническим миелоидным лейкозом. Clin Lymphoma Myeloma Leuk .2017 16 февраля [Полный текст].

• Saussele S, et al; Следователи EURO-SKI. Прекращение терапии ингибиторами тирозинкиназы при хроническом миелоидном лейкозе (EURO-SKI): предварительно определенный промежуточный анализ проспективного многоцентрового нерандомизированного исследования. Ланцет Онкол . 2018 июня 19 (6): 747-757. [Медлайн].

• [Рекомендации] NCCN Клинические рекомендации по онкологии (Рекомендации NCCN): Хронический миелоидный лейкоз. Национальная всеобъемлющая онкологическая сеть.Доступно на https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/cml.pdf. Версия 3.2021 — 13 января 2021 г .; Дата обращения: 23 мая 2021 г.

• [Рекомендации] Hochhaus A, Saussele S, Rosti G, Mahon FX, Janssen JJWM, Hjorth-Hansen H, et al. Хронический миелоидный лейкоз: Руководство ESMO по клинической практике по диагностике, лечению и последующему наблюдению. Энн Онкол . 2018 г., 1. 29 (Приложение 4): iv261. [Медлайн]. [Полный текст].

• [Рекомендации] Баккарани М., Дейнингер М.В., Рости Г. и др.Рекомендации European LeukemiaNet по ведению хронического миелолейкоза: 2013 г. Кровь . 2013 8 августа. 122 (6): 872-84. [Медлайн]. [Полный текст].

• Барретт А.Дж., Ито С. Роль трансплантации стволовых клеток при хроническом миелолейкозе в 21 веке. Кровь . 2015 21 мая. 125 (21): 3230-5. [Медлайн].

• Друкер Б.Дж., Талпаз М., Реста Д.Дж. и др. Эффективность и безопасность специфического ингибитора тирозинкиназы BCR-ABL при хроническом миелолейкозе. N Engl J Med . 2001, 5 апреля. 344 (14): 1031-7. [Медлайн]. [Полный текст].

• Джаббур Э., Кантарджян Х. Хронический миелоидный лейкоз: обновленная информация о диагностике, терапии и мониторинге 2020 года. Ам Дж. Гематол . 2020 июн.95 (6): 691-709. [Медлайн].

• Santos FP, Alvarado Y, Kantarjian H, Verma D, O’Brien S, Mattiuzzi G, et al. Долгосрочное прогностическое влияние использования эритропоэтических стимуляторов у пациентов с хроническим миелолейкозом в хронической фазе, получавших иматиниб. Рак . 2011 г. 1. 117 (5): 982-91. [Медлайн].

• Sawyers CL, Hochhaus A, Feldman E, et al. Иматиниб вызывает гематологические и цитогенетические реакции у пациентов с хроническим миелогенным лейкозом при миелоидном бластном кризе: результаты исследования фазы II. Кровь . 2002 15 мая. 99 (10): 3530-9. [Медлайн].

• Тан М., Гонен М., Квинтас-Кардама А. и др. Динамика ответа хронического миелолейкоза на длительную таргетную терапию выявляет лечебные эффекты на лейкозные стволовые клетки. Кровь . 2011 г. 11 августа. 118 (6): 1622–31. [Медлайн].

• Ибрагим А.Р., Элиассон Л., Апперли Дж. Ф., Милойкович Д., Буа М., Шидло Р. и др. Плохое соблюдение режима лечения является основной причиной потери CCyR и неэффективности иматиниба у пациентов с хроническим миелолейкозом, получающих длительную терапию. Кровь . 2011, 7 апреля. 117 (14): 3733-6. [Медлайн].

• Hochhaus A, Kreil S, Corbin AS, La Rosée P, Müller MC, Lahaye T. и др. Молекулярные и хромосомные механизмы устойчивости к терапии иматинибом (STI571). Лейкемия . 2002 16 ноября (11): 2190-6. [Медлайн].

• Marcolino MS, Boersma E, Clementino NC, et al. Продолжительность лечения иматинибом связана со снижением расчетной скорости клубочковой фильтрации у пациентов с хроническим миелолейкозом. Энн Онкол . 2011 Сентябрь 22 (9): 2073-9. [Медлайн].

• Дазатиниб. Национальный институт рака. Доступно по адресу https://www.cancer.gov/about-cancer/treatment/drugs/dasatinib. 5 июня 2019 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.

• Нилотиниб. Национальный институт рака. Доступно по адресу https://www.cancer.gov/about-cancer/treatment/drugs/nilotinib. 22 марта 2018 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.

• Босулиф (босутиниб) [вкладыш в упаковке]. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Pfizer, Inc., июнь 2020 г. Доступно на [Полный текст].

• Джаббур Э., Кантарджиан Х., О’Брайен С. и др. Достижение раннего полного цитогенетического ответа является основным фактором, определяющим исход у пациентов с хроническим миелолейкозом в ранней хронической фазе, получавших ингибиторы тирозинкиназы. Кровь . 2011, 27 октября, 118 (17): 4541-6; викторина 4759. [Medline].

• Hughes TP, Hochhaus A, Branford S, Müller MC, Kaeda JS, Foroni L, et al. Долгосрочное прогностическое значение раннего молекулярного ответа на иматиниб при впервые выявленном хроническом миелоидном лейкозе: анализ Международного рандомизированного исследования интерферона и STI571 (IRIS). Кровь . 11 ноября 2010 г. 116 (19): 3758-65. [Медлайн].

• FDA. Sprycel (dasatinib): Сообщение о безопасности лекарств — риск легочной артериальной гипертензии.Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Доступно по адресу https://wayback.archive-it.org/7993/20170112165154/http://www.fda.gov/Safety/MedWatch/SafetyInformation/SafetyAlertsforHumanMedicalProducts/ucm275176.htm. 11 октября 2011 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.

• Пилы CL. Еще лучшие ингибиторы киназ при хроническом миелолейкозе. N Engl J Med . 17 июня 2010 г. 362 (24): 2314-5. [Медлайн].

• Джаббур Э., Кантарджиан Х., О’Брайен С., Шан Дж., Гарсия-Манеро Дж., Виерда В. и др.Факторы прогнозирования исхода и ответа у пациентов, получавших ингибиторы тирозинкиназы второго поколения по поводу хронического миелоидного лейкоза в хронической фазе после неэффективности иматиниба. Кровь . 28 октября 2010 г. [Medline].

• Verma D, Kantarjian H, Strom SS, et al. Злокачественные новообразования, возникающие во время терапии ингибиторами тирозинкиназы (TKI) при хроническом миелоидном лейкозе (CML) и других гематологических злокачественных новообразованиях. Кровь . 2011 20 октября. 118 (16): 4353-8.[Медлайн].

• Kantarjian H, Shah NP, Hochhaus A, Cortes J, Shah S, Ayala M и др. Дазатиниб в сравнении с иматинибом при недавно диагностированной хронической фазе хронического миелоидного лейкоза. N Engl J Med . 17 июня 2010 г. 362 (24): 2260-70. [Медлайн].

• Cortes JE, Jones D, O’Brien S, Jabbour E, Ravandi F, Koller C и др. Результаты терапии дазатинибом у пациентов с хроническим миелолейкозом в ранней хронической фазе. Дж. Клин Онкол . 20 января 2010 г.28 (3): 398-404. [Медлайн]. [Полный текст].

• Mulcahy N. FDA обновляет этикетку на дазатиниб для лечения хронического миелоидного лейкоза. Медицинские новости Medscape . 26 июня 2013 г. [Полный текст].

• Джаббур Э., Кантарджиан Х.М., Саглио Дж., Стигманн Дж. Л., Шах Н. П., Боке С. и др. Ранний ответ дазатинибом или иматинибом при хроническом миелолейкозе: трехлетнее наблюдение по результатам рандомизированного исследования фазы 3 (DASISION). Кровь . 2014 23 января 123 (4): 494-500.[Медлайн]. [Полный текст].

• Shah NP, Guilhot F, Cortes JE, Schiffer CA, le Coutre P, Brümmendorf TH, et al. Долгосрочные результаты применения дазатиниба после неэффективности иматиниба при хронической фазе хронического миелоидного лейкоза: последующие наблюдения за исследованием фазы 3. Кровь . 2014 25 февраля. [Medline].

• Saglio G, Kim DW, Issaragrisil S, le Coutre P, Etienne G, Lobo C и др. Нилотиниб в сравнении с иматинибом при недавно диагностированном хроническом миелоидном лейкозе. N Engl J Med .17 июня 2010 г. 362 (24): 2251-9. [Медлайн].

• Kantarjian HM, Hochhaus A, Saglio G, et al. Сравнение нилотиниба и иматиниба при лечении пациентов с впервые диагностированной хронической фазой, филадельфийской хромосомно-положительной хронической миелоидной лейкемией: минимальное наблюдение в течение 24 месяцев рандомизированного исследования фазы 3 ENESTnd. Ланцет Онкол . 2011 Сентябрь 12 (9): 841-51. [Медлайн].

• Tasigna (нилотиниб) [вкладыш в упаковке]. Восточный Ганновер, Нью-Джерси 07936: Novartis Pharmaceuticals Corporation.Июнь 2020 г. Доступно в [Полный текст].

• Хури Х. Дж., Кортес Дж. Э., Кантарджиан Х. М., Гамбакорти-Пассерини С., Баккарани М., Ким Д. В. и др. Босутиниб активен при хронической фазе хронического миелоидного лейкоза после неудачной терапии иматинибом и дазатинибом и / или нилотинибом. Кровь . 2012 Апрель 12, 119 (15): 3403-12. [Медлайн].

• Cortes JE, Gambacorti-Passerini C, Deininger MW, Mauro MJ, Chuah C, Kim DW, et al. Босутиниб в сравнении с иматинибом при недавно диагностированном хроническом миелоидном лейкозе: результаты рандомизированного исследования BFORE. Дж. Клин Онкол . 2017 г. 1 ноября. JCO2017747162. [Медлайн]. [Полный текст].

• Тим Х Брюммендорф, Хорхе Э. Кортес, Драгана Милойкович, Карло Гамбакорти-Пассерини и др. . Босутиниб (BOS) в сравнении с иматинибом при недавно диагностированной хронической фазе (ХП) хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ): окончательные 5-летние результаты предыдущего исследования. Кровь . 2020. 136; (Приложение 1): 41-42. [Полный текст].

• Chustecka Z. FDA одобрило Понатиниб для лечения редких лейкозов.Медицинские новости Medscape. 14 декабря 2012 г. [Полный текст].

• Cortes JE, Kantarjian H, Shah NP, Bixby D, Mauro MJ, Flinn I., et al. Понатиниб при резистентных филадельфийских хромосомных лейкозах. N Engl J Med . 2012 29 ноября. 367 (22): 2075-88. [Медлайн].

• Cortes JE, Kim DW, Pinilla-Ibarz J, le Coutre P, Paquette R, et al. Испытание фазы 2 понатиниба при лейкозах с положительными хромосомами в Филадельфии. N Engl J Med .2013, 7 ноября. 369 (19): 1783-96. [Медлайн].

• Сообщение FDA по безопасности лекарств. FDA просит производителя лекарства от лейкемии Iclusig (понатиниб) приостановить маркетинг и продажи. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Доступно по адресу https://wayback.archive-it.org/7993/20170722185758/https://www.fda.gov/Drugs/DrugSafety/ucm373040.htm. 5 ноября 2013 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.

• Сообщение FDA по безопасности лекарств: FDA требует нескольких новых мер безопасности для препарата Iclusig от лейкемии; Компания ожидает возобновления маркетинга.Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Доступно по адресу https://wayback.archive-it.org/7993/20170722185750/https://www.fda.gov/Drugs/DrugSafety/ucm379554.htm. 20 декабря 2013 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.

• Saussele S, Haverkamp W, Lang F, Koschmieder S, Kiani A, Jentsch-Ullrich K, et al. Понатиниб в лечении хронического миелоидного лейкоза и острого лейкоза, положительного по хромосомам Филадельфии: рекомендации немецкой группы экспертов с особым вниманием к сердечно-сосудистым заболеваниям. Acta Haematol . 2020. 143 (3): 217-231. [Медлайн]. [Полный текст].

• Scemblix (асциминиб) [вкладыш в упаковке]. Восточный Ганновер, Нью-Джерси: Novartis Pharmaceuticals, Corp., октябрь 2021 г. Доступно на [Полный текст].

• Синрибо (омацетаксин) [вставка в упаковку]. Северный Уэльс, Пенсильвания: Teva Pharmaceuticals USA, Inc., октябрь 2012 г. Доступно на [Полный текст].

• Симонссон Б., Гедде-Даль Т., Маркеварн Б. и др. Комбинация пегилированного IFN-a2b с иматинибом увеличивает частоту молекулярного ответа у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом низкого или среднего риска. Кровь . 2011 22 сентября. 118 (12): 3228-35. [Медлайн].

• Морб Дж., Джонсон Т., Кубилис П., Майерс Л., Облон Д., Миллер А. и др. Повышение выживаемости пациентов с хроническим миелолейкозом, перенесших аллогенную трансплантацию костного мозга. Ам Дж. Гематол . 1995 Декабрь 50 (4): 304-6. [Медлайн].

• МакГлав ПБ, Битти П., Эш Р., Хоус Дж. М.. Терапия хронического миелолейкоза трансплантацией неродственного донорского костного мозга: результат 102 случая. Кровь . 1990, 15 апреля. 75 (8): 1728-32. [Медлайн].

• Deininger M, Schleuning M, Greinix H, Sayer HG, Fischer T., Martinez J, et al. Влияние предшествующего воздействия иматиниба на смертность, связанную с трансплантацией. Haematologica . 2006 апр. 91 (4): 452-9. [Медлайн].

• Лима Л., Бернал-Мизрахи Л., Саксе Д., Манн К.П., Тигиуарт М., Ареллано М. и др. Мониторинг периферической крови при хроническом миелоидном лейкозе во время лечения иматинибом, препаратами второго ряда и другими препаратами. Рак . 2011 15 марта. 117 (6): 1245-52. [Медлайн].

• Baccarani M, Saglio G, Goldman J, Hochhaus A, Simonsson B, Appelbaum F и др. Развивающиеся концепции ведения хронического миелоидного лейкоза: рекомендации группы экспертов от имени European LeukemiaNet. Кровь . 2006 15 сентября. 108 (6): 1809-20. [Медлайн]. [Полный текст].

• Бранфорд С., Рудски З., Харпер А., Григг А., Тейлор К., Даррант С. и др. Иматиниб дает значительно лучшие молекулярные ответы по сравнению с интерфероном альфа плюс цитарабин у пациентов с впервые диагностированным хроническим миелоидным лейкозом в хронической фазе. Лейкемия . 2003 17 декабря (12): 2401-9. [Медлайн].

• Кортес Дж., Талпаз М., О’Брайен С., Джонс Д., Лутра Р., Шан Дж. И др. Молекулярные ответы у пациентов с хроническим миелолейкозом в хронической фазе, получавших мезилат иматиниба. Clin Cancer Res . 2005 1 мая. 11 (9): 3425-32. [Медлайн]. [Полный текст].

• Branford S, Rudzki Z, Walsh S, Parkinson I, Grigg A, Szer J, et al. Обнаружение мутаций BCR-ABL у пациентов с ХМЛ, получавших иматиниб, практически всегда сопровождается клинической резистентностью, а мутации в АТФ-фосфат-связывающей петле (P-петле) связаны с плохим прогнозом. Кровь . 1 июля 2003 г. 102 (1): 276-83. [Медлайн]. [Полный текст].

• Press RD, Galderisi C, Yang R, Rempfer C, Willis SG, Mauro MJ, et al. Половина логарифмического увеличения BCR-ABL РНК предсказывает более высокий риск рецидива у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом с индуцированным иматинибом полным цитогенетическим ответом. Clin Cancer Res . 2007 15 октября. 13 (20): 6136-43. [Медлайн]. [Полный текст].

• Saglio G, Sharf G, Almeida A, Bogdanovic A, Bombaci F, Čugurović J, et al.Соображения по поводу ремиссии без лечения у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом: совместная перспектива пациента и врача. Clin Lymphoma Myeloma Leuk . 2018 июн.18 (6): 375-379. [Медлайн]. [Полный текст].

• Sweet K, Oehler V. Прекращение приема ингибиторов тирозинкиназы при хроническом миелоидном лейкозе: когда это безопасный вариант для рассмотрения ?. Образовательная программа по гематологии и соц. Гематол . 2013. 2013: 184-8. [Медлайн]. [Полный текст].

• Мулахи Н.Лекарство от лейкемии Понатиниб (Иклусиг) снято с рынка. Медицинские новости Medscape. Доступно на http://www.medscape.com/viewarticle/813531. 31 октября 2013 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.

• Нельсон Р. Понатиниб (Iclusig) возвращается на рынок с небольшими оговорками. Медицинские новости Medscape. Доступно на http://www.medscape.com/viewarticle/818183?src=wnl_edit_specol&uac=72886PK. 20 декабря 2013 г .; Дата обращения: 24 августа 2020 г.