Лейкоциты в мазке и кокки в мазке: Урогенитальный мазок / Лаборатория анализов

Содержание

Мазок на степень чистоты гинекологический, подготовка к процедуре и цена мазка в Самаре

Мазок является методом обследования, где исследуемый материал забирается с поверхности слизистой оболочки. Цель проведения данного анализа — это оценка микрофлоры и выявление наличия воспалительных процессов.

Забор может производиться:

с шейки матки;
с мочеиспускательного канала;
с влагалища.

Полученный материал отправляется в лабораторию, где проводится исследование состава. Нормальная микрофлора содержит микроорганизмы, которые не только не приносят вреда, но и сдерживают развитие воспалительных процессов.

Определение состояния флоры является наиболее важным элементом на этапе диагностики и выбора дальнейшего лечения.

Оценка стояния флоры имеет четыре различные степени чистоты:

1 степень – рН – кислая, количество лактобацилл в норме;
2 степень – присутствуют грамположительные диплококки, при этом количество лейкоцитов небольшое, рН – кислая;
3 степень – количество клеток эпителия и лейкоцитов повышенно, количество лактобацилл ниже среднего уровня, присутствие кокковых бактерий, рН – слабокислая или щелочная;

4 степень – количество эпителий и лейкоцитов сильно превышает норму, присутствуют гноеродные микроорганизмы,количество лактобацилл крайне низкое, рН – щелочная.

Что может быть обнаружено в мазке:

Лейкоциты — клетки, которые служат для защиты организма от микробов. Количество лейкоцитов выше положенной нормы является признаком воспалительного процесса.

Атипичные клетки могут сигнализировать о предраковом состоянии.

Эпителий. Отсутствие эпителия говорит о гормональном дисбалансе в организме. Если эпителий обнаружен в слишком высоком количестве (с учётом менструальной фазы), то это может сигнализировать о воспалительном процессе.

Слизь. Если в уретре обнаружена слизь, то это также может сигнализировать о воспалении в мочевыводящих путях.

Эритроциты – это красные кровяные тельца. В случае, когда их число выше нормы, можно говорить как о воспалительных процессах, так и о возможных травмах.

Микрофлора показывает наличие и баланс различных микроорганизмов.

Ключевые клетки. Данное явление часто встречается при сниженном иммунитете и гарднереллезе.

Гарднереллы (бациллы). Высокое количество данных бактерий может закончится бактериальным вагинозом.

Кандида. Грибок, который присутствует в некотором количестве в здоровом организме. Но если число кандид превышает количество лактобактерий, возможно развитие вагинального кандидоза («молочница»). Причиной может послужить снижение иммунитета на фоне приёма антибиотиков, при беременности или общем ослаблении организма.

Кокки. Данные бактерии, могут вызывать стафилококк(сопровождается воспалением) или гонококк (гонорея — инфекция поражающая половые органы).

Стрептококк — бактерия, увеличение её количества выше нормы приводит к воспалению.

Энтерококк – присутствует в микрофлоре ЖКТ. В большом количестве энтерококк указывает на воспаление протекающее в органах мочеполовой системы или малого таза.

Трихомонада. Наиболее точно наличие этой бактерии позволяет определить процедура бактериологического посева.

Перечисленным микроорганизмам не всегда уделяют необходимое внимание при лечении инфекции, в то время, как это является залогом здорового организма в будущем. Поэтому клиника «Нью Лайф» использует самые современные методы исследования бактериологического состава, чтобы наиболее точно определить диагноз и курс последующего лечения.

Мазки

Откуда берут мазок у мужчин
Откуда берут мазок у женщин
Для чего берут мазки
Как проводится анализ мазка
Мазок при беременности
Нормы мазков и расшифровка мазков
Техника взятия мазка

Одна из самых простых и доступных диагностических процедур в урологии и гинекологии это анализ мазка из мочеполовой системы. Мазок – это нанесение биологического материала из мочеполовой системы на специальное стекло с целью последующего изучения под микроскопом.

Откуда берут мазок у мужчин

У мужчин мазок берут из мочеиспускательного канала. Для этого мужчина должен не мочиться в течение хотя бы 4 часов. Материалом для мазка служит слизь, находящаяся в мочеиспускательном канале, клетки эпителия и лейкоциты. Если в мочеполовой системе присутствует воспаление, тогда материалом для мазка служат выделения у мужчин. Иногда возникает необходимость в исследовании содержимого предстательной железы. Тогда, после массажа простаты, для мазка используют каплю секрета предстательной железы, которая выделяется после этой процедуры. Мазок берут при помощи специального инструмента. Как правило это одноразовая ложка Фолькмана или специальный зонд, покрытый синтетическими волокнами для лучшей адсорбции.

Откуда берут мазок у женщин

У женщин мазок берут из трех мест: из мочеиспускательного канала, из влагалища и из шейки матки. Связано это с тем, что из-за анатомической близости этих структур воспалительные процессы в них протекают взаимосвязанно. Мазок из уретры (мочеиспускательного канала) можно брать без использования гинекологического зеркала. Мазок из влагалища и мазок из канала шейки матки берут с использованием зеркал. Материалом для мазков служит содержимое уретры и выделения из влагалища и из шейки матки.

Для чего берут мазки

Мазки берут с целью исследования состояния слизистой различных отделов мочеполовой системы. При помощи мазка на микрофлору, например, делается вывод о наличии или отсутствии полезной и патогенной микрофлоры в мочеполовых путях. При помощи мазков можно определить есть ли воспаление и чем оно вызвано. Мазки из секрета предстательной железы позволяют диагностировать простатит. Мазки на цитологию у женщин служат для диагностики дисплазии шейки матки и онкологических состояний.Очень большую роль играет исследование мазков в диагностике ЗППП. Само по себе исследование мазка может дать исчерпывающую информацию, не требуя применения других более дорогостоящих методик. Мазок на флору как раз и служит для диагностики воспалительных заболеваний, как передающихся половым путем, так и вызванных условно-патогенными бактериями.

Как проводится анализ мазка

Мазок наносят на специальное стекло, которое называется предметным. В некоторых случаях, пока еще мазок остается жидким, его помещают под объектив микроскопа. Обычно это делается для обнаружения движущихся частиц в мазке или простейших микроорганизмов, способных к движению. Для диагностики трихомониаза такой анализ мазка является очень показательным. Все структуры, находящиеся в мазке неподвижны, только трихомонады способны к активным самостоятельным движениям. Поэтому обнаружение движущихся микроорганизмов в мазке из мочеполовой системы (из уретры или из влагалища), является патогномоничным для этого заболевания.

В большинстве же случаев мазок на стекле сразу фиксируют. Фиксация надежно прикрепляет материал мазка к предметному стеклу и способствует лучшему дальнейшему прокрашиванию.

Основной этап это окрашивание мазка. Если смотреть на неокрашенный мазок, то картина будет похожей на то, как если бы наложить несколько прозрачных стекол одно на другое. Естественно, что будет трудно заметить каие-либо элементы. Для того, чтобы различать бактерии, лейкоциты и клетки пользуются специальными красителями. Краситель применяют в зависимости от того, с какой целью берется мазок. Например при мазке на микрофлору используют краску по Граму, а для цитологических исследований применяют метод окраски по Папаниколау. Методика окраски основана на способности клеток и внутриклеточных структр по-разному воспринимать краситель. После окрасе невидимые клеточные элементы проявляются и происходит анализ мазка. Если целью является выявление воспалительных заболеваний мочеполовой системы, то анализ мазка ведется при увеличении 900 раз с применением иммерсионного объектива микроскопа. Прежде всего оценивают лейкоциты в мазке. Количество лейкоцитов в мазке является показателем наличия или отсутствия воспаления. Лейкоциты это клетки крови, которые повышаются в месте развития воспаления и служат защитой для распространения инфекции по организму. Для каждого отдела мочеполовой системы существую нормы мазков и соответственно нормы лейкоцитоза в мазке. Например для мужчин нормой считается наличие до 5 лейкоцитов в поле зрения микроскопа в мазке из мочеиспускательного канала. Для женщин нормы другие. Во влагалище количество лейкоцитов в мазке не должно превышать 5. В канале шейки матки – не выше 30 лейкоцитов в поле зрения. Большое количество лейкоцитов в мазке сигнализирует о воспалительной реакции в том месте, откуда взят мазок. Таким образом лейкоциты в мазке несут очень важную информацию. В дальнейшем ведется поиск причины, обусловившей появление повышенного лейкоцитоза. Для выяснения причины повышенного лейкоцитоза берут мазок на флору. На самом деле и лейкоциты в мазке и мазок на флору берется один раз и исследование происходит одномоментно. В мазке можно увидеть различные бактерии: гонококк, стафилококк, кишечную палочку, энетрококк и т.д, а также трихомонады и грибки. Некоторые бактерии и грибки выглядят достаточно специфично и их трудно спутать с каким-либо еще возбудителем. Другие же бактерии невозможно идентифицировать без специального анализа – бактериологического посева.

Мазок при беременности

Мазок при беременности берется для того, чтобы контролировать состояние микрофлоры влагалища. Мазок на микрофлору ничем не отличается от обычного мазка из влагалища. Иногда применяют термин мазок на степень чистоты. Степень чистоты влагалища является производным от количества лейкоцитов в мазке и от особенностей микрофлоры. Например палочковая флора с нормальным количеством лейкоцитов является нормой, а кокки в мазке и высокие лейкоциты в мазке яляются признаком инфекции.

Нормы мазков и расшифровка мазков

Нормы мазков разные в зависимости от места, откуда мазок берется и в зависимости от фазы менструального цикла у женщин. Нормы мазков описывают количество лейкоцитов в мазке, присутствие клеток эпителия, их форму и количество, наличие слизи и бактерий. При взятии мазка на онкоцитологию критерии нормы другие: ключевую роль играет форма клеток и ядер. При анализе мазков в лаборатории дают заключение, в котором указано количество лейкоцитов в мазке, состав микрофлоры, клеточные элементы в мазке, дополнительные включения. Расшифровку мазков проводит лечащий врач. При расшифровке мазка необходимо учитывать не только данные лаборатории, но и другие сведения. Например, если в мазке оказалось повышенное число лейкоцитов, но не обнаружено патогенной микрофлоры, необходимо продолжить диагностический поиск и направить пациента на дополнительные методы исследования, например на ПЦР для выявления хламидиоза, уреаплазмоза или микоплазмоза. Данные возбудители не видны в микроскоп и для их обнаружения мазок не годится. Естественно, врач учитывает вероятность наличия этих заболеваний у пациента и опирается на более ранние исследования.

Техника взятия мазка

От техники мазка зависит в конечном итоге результат исследования. Если забор сделан неправильно, то результаты могут быть совершенно бесполезными. Особенно выжен этот вопрос при взятии мазка на цитологию. При подозрении на ЗППП также необходимо придерживаться определеннной техники взятия мазков. Иногда после мазка у женщин могут наблюдаться кровянистые выделения из влагалища.

Это связано с тем, что канал шейки матки, особенно при воспалении – цервиците – очень легко подвержен ранениям. Ничего страшного данные кровянистые выделения не представляют. Как правило они проходят очень быстро. У мужчин также после взятия мазка кровянистые выделения появляются редко.

в акушерстве и гинекологи мы работаем по таким направлениям как:

Ведение беременности с ранних сроков до родов
Женская консультация
TORCH инфекции (торч-инфекции)
Антифосфолипидный синдром
Базальная температура
Беременность
Ветрянка при беременности
Планирование беременности
Лекарства при беременности
Внематочная беременность
Восстановление промежности после родов
Выделения у женщин из влагалища, выделения при беременности
Выкидыш (самопроизвольный аборт)
Рецидивирующее невынашивание беременности

Генитальный герпес во время беременности
Задержка месячных

Замершая беременность
Инфекции мочевыводящих путей у беременных
Интимная пластика без операции
Календарь беременности
Лактация
Многоводие у беременных
Овуляция
Определение пола ребенка
Отеки при беременности
Первые признаки беременности: симптомы беременности
Прерывание беременности
Пренатальный скрининг (двойной и тройной тест)
Резус конфликт при беременности
Тест на беременность
Токсикоз при беременности
Узи-диагностика синдрома Дауна и других хромосомных аномалий

Лечим такие проблемы:

Аденомиоз
Андексит
Бактериальный вагиноз
Бели
Боли внизу живота
Боль при мочеиспускании
Боли при месячных: если в месячные болит
Бесплодие
Бесплодие при метаболическом синдроме: бесплодие у женщин с избыточной массой тела
Необъясненное бесплодие
Вагинальное кровотечение
Вагинит
Вирус папилломы человека (ВПЧ)
Восстановление проходимости маточных труб
Воспаление придатков
Воспаление шейки матки
Генитальный герпес
Гиперплазия эндометрия
Гарднереллез
Дисплазия шейки матки
ИППП
О схемах лечения ЗППП
Зуд половых органов
Кондиломы
Киста яичника

Климакс
Кровь в моче (гематурия)
Кольпит
Мастопатия
Маточное кровотечение
Месячные (менструация)
Миома матки
Микоплазмоз
Молочница
Папилломавирус

Поликистоз яичников
Полипы
Противозачаточные средства
ПМС — предменструальный синдром
Рак матки
Рак шейки матки
Ранний климакс (ранняя менопауза)
Синдром поликистозных яичников
Спираль (внутриматочная спираль)
Трихомониаз
Уреаплазмоз
Хламидиоз
Цервицит
Цистит
Частое мочеиспускание
Эрозия шейки матки
Эндометрит
Эндометриоз
Эндоцервицит

Оперативная гинекология:

Диагностическая гистероскопия (офисная)
Хирургическая гистерорезектоскопия
Диагностическая лапароскопия
Лапароскопическая пластика маточных труб
Лапароскопическая миомэктомия
Лапароскопическое лечение внематочной беременност

Лапароскопическое лечение эндометриоза
Лапароскопическое лечение пролапса органов малого таза

Лапароскопическое удаление кисты яичника
Лапароскопическое лечение поликистоза яичников (дриллинг)
Пластика малых половых губ
Пластика влагалища после родов
Хирургическое лечение недержания мочи
Хирургическое лечение бартолинита (киста, абсцесс бартолиниевой железы)

В урологии мы работаем по таким направлениям как:

Агглютинация
Аденома предстательной железы
Баланопостит
Баланит
Бесплодие

Вирус папилломы человека
Водянка яичка
Генитальный герпес
Задержка мочи
ЗППП

О схемах лечения ЗППП
Профилактика ЗППП
Импотенция
Кондиломы
Киста почки

Микоплазмоз
Папилломавирус
Пиелонефрит
Приапизм
Простатит

Преждевременное семяизвержение
Рак предстательной желез
Трихомониаз
Эпидидимит

Эректильная дисфункция
Хламидиоз
Уреаплазмоз
Уретрит

Лабораторная оценка чрезвычайных ситуаций с инфекционными заболеваниями – клинические методы

NCBI Книжная полка. Служба Национальной медицинской библиотеки, Национальных институтов здоровья.

Уокер Х.К., Холл В.Д., Херст Дж.В., редакторы. Клинические методы: анамнез, физические и лабораторные исследования. 3-е издание. Бостон: Баттервортс; 1990.

Клинические методы: анамнез, физические и лабораторные исследования. 3-е издание.

Показать подробности

Содержание

Критерий поиска

Стивен Г. Баум.

Диагностика любой серьезной инфекции требует неотложной помощи. Самая безобидная на вид респираторная инфекция может перейти в смертельный менингит в течение нескольких часов, а незначительные симптомы со стороны мочевыводящих путей могут предвещать синдром тяжелого сепсиса. В недавних публикациях подчеркивается разработка новых методов лабораторных культур для быстрой идентификации инфекционных агентов. В лучшем случае эти методы требуют нескольких часов и чувствительны ко многим артефактам сбора и хранения образцов до того, как образец попадет в лабораторию.

Точная оценка возможных причин серьезной инфекции может быть сделана врачом, проводящим осмотр, в течение от нескольких минут до часа после первого осмотра больного с лихорадкой. Это достигается сочетанием тщательно отобранного анамнеза и физических характеристик с надлежащим сбором образцов и использованием нескольких простых методов окрашивания. Целью этого быстрого диагностического исследования является выявление возбудителя, позволяющее использовать наименьшее количество возможных антибиотиков, которые сочетают в себе надлежащий антимикробный спектр с наименьшей токсичностью для пациента.

Выбор правильного терапевтического средства чрезвычайно важен по нескольким причинам. Во-первых, инфекции представляют собой единственные медицинские состояния, которые могут быть подвержены истинному излечению, а не улучшению состояния. Во-вторых, у бактерий может развиться устойчивость к антибиотику с частотой, примерно пропорциональной степени использования антибиотика. Следовательно, необдуманное использование антибиотиков широкого спектра действия может сократить время, в течение которого они остаются полезными, ускоряя эволюцию новой популяции резистентных микроорганизмов. В-третьих, использование противомикробной терапии широкого спектра действия нарушает нормальную флору, способствуя чрезмерному росту условно-патогенных организмов, таких как грибы. Таким образом, врач, лечащий пациента с инфекционным заболеванием, имеет возможность изменить патогенез заболевания не только у пациента, но и у больничного населения и общества в целом. Эмерджентный характер инфекций, возможность реального излечения и потенциальные вредные последствия неправильного применения антибиотиков обязывают врача быстро и точно установить этиологию инфекции и использовать узкий спектр эффективных препаратов.

Главной предпосылкой точного лабораторного исследования любого инфекционного заболевания является надлежащий сбор соответствующих образцов. Консультантов по инфекционным заболеваниям часто просят просмотреть образцы «мокроты», используемые при первоначальной диагностике пациента, который плохо ответил на терапию, только для того, чтобы найти слюну, а не мокроту. Независимо от того, используются ли они для окрашивания и микроскопического исследования или для посева, образцы должны быть собраны надлежащим образом. Ниже приводится обсуждение лабораторной обработки четырех обычно анализируемых образцов: спинномозговой жидкости, мокроты, мочи и крови. Многие из методов, описанных для сбора и обработки этих образцов, также применимы для таких образцов, как синовиальная и плевральная жидкости.

Анализ спинномозговой жидкости при инфекции центральной нервной системы

Определение

Врач должен иметь низкий порог для проведения люмбальной пункции (ЛП) при подозрении на менингит. У детей лихорадка, ригидность затылочных мышц, головная боль и раздражительность являются очевидными основаниями для ПЛ, в то время как у пожилых пациентов ригидность затылочных мышц часто не обнаруживается, а лихорадка, сопровождающаяся спутанностью сознания или помутнением чувств, может быть единственными признаками менингита. При наличии клинических признаков повышенного внутричерепного давления перед ЛП следует провести КТ головы.

Техника

Пациента следует положить горизонтально на твердую поверхность с согнутыми шеей, ногами и спиной в позе эмбриона. Затем следует хирургически подготовить спину сначала 70% спиртом, а затем йодом. Начните с точки входа иглы и сделайте тампон спиральными движениями, распространяясь латерально к бокам, краниально к средней части спины и каудально к копчику. Это следует повторить дважды, каждый раз используя свежие тампоны, пропитанные раствором йода. Раздражение кожи от йода можно уменьшить, тщательно обмыв спину спиртом в конце процедуры.

После надевания перчаток в промежуток между вторым и третьим поясничными позвонками вводят местный анестетик. Точное положение иглы ЛП и способ ее введения описаны в учебниках по неврологии или нейрохирургии.

Необходимо иметь несколько пробирок для сбора спинномозговой жидкости (ЦСЖ). Они должны включать пробирку, взятую сначала для посева (от 0,5 до 1 мл) и другие для химического анализа белка и сахара (от 1 до 2 мл), серологического теста на сифилис (1 мл) и, что наиболее важно, пробирку для макроскопического исследования. , микроскопический подсчет клеток, дифференциальный подсчет клеток и окрашивание по Граму (от 1 до 2 мл). Дополнительную пробирку с CSF следует сохранить для будущих анализов.

Клиническое значение

В диагностике менингита нет замены общему и микроскопическому исследованию спинномозговой жидкости.

Следует указать цвет и прозрачность спинномозговой жидкости при общем исследовании . Обычно это либо «вода прозрачная», либо «желто-прозрачная», «мутная» или «крайне кровавая». Желтый цвет указывает либо на повышенное содержание белка, либо на наличие старой, гемолизированной крови. Мутность обусловлена наличием клеточных элементов или многочисленных микроорганизмов. СМЖ, видимая невооруженным глазом, может содержать клетки и микроорганизмы, поэтому ее всегда следует исследовать под микроскопом.

При микроскопическом исследовании лейкоциты (лейкоциты) должны быть подсчитаны в стандартной камере для подсчета лейкоцитов с использованием свежей и нецентрифугированной спинномозговой жидкости. Если видны клетки, не следует пытаться дифференцировать типы клеток в счетной камере. Даже при добавлении красителя, такого как метиленовый синий, этот метод дифференциального подсчета чреват ошибкой. Затем жидкость следует центрифугировать и как можно скорее провести дифференциальный подсчет на осадке, если он виден, или на самой нижней капле ЦСЖ, если видимого осадка нет. Каплю осевшей жидкости помещают на чистое предметное стекло. Его не размазывают, а дают высохнуть на воздухе. Делают два таких препарата; один фиксируется нагреванием для окрашивания по Граму, а другой окрашивается по Райту для дифференциального подсчета. Точную разницу часто можно получить из материала, окрашенного по Граму. Интерпретация количества лейкоцитов и дифференциала дана в . Это приблизительные показатели, и существует много совпадений в подсчетах и различиях между заболеваниями.

Таблица 220.1

Диагностическое значение клеток спинномозговой жидкости.

Эритроциты (эритроциты) могут присутствовать в спинномозговой жидкости в результате инфекционных или неинфекционных процессов, затрагивающих головной мозг или субарахноидальное пространство, или могут быть введены в спинномозговую жидкость в результате люмбальной пункции. Последнее явление называется «травматическим постукиванием». Этот термин не означает, что при выполнении спинномозговой пункции возникли какие-либо трудности, а скорее то, что в процессе был введен капилляр, в результате чего кровь попала в спинномозговую жидкость. О том, что это событие произошло, свидетельствует изменение количества крови (увеличение или уменьшение) при сравнении пробирки, собранной в начале LP, с пробиркой, собранной позже в ходе процедуры. Если кровь видна невооруженным глазом, это сравнение может быть сделано грубо. Если кровь видна только под микроскопом, необходимо провести подсчет на ранней и поздней пробирке. Постоянное количество крови во всех пробирках свидетельствует о том, что кровотечение произошло до ЛП. Инфекционные проявления крови в ЦСЖ приведены в .

Микроорганизмы могут быть обнаружены окрашиванием по Граму или препаратами туши. Этиологию более чем 80% случаев бактериального менингита можно определить при исследовании образца спинномозговой жидкости, окрашенного по Граму. Эту процедуру можно выполнить за 2 минуты, и ее никогда не следует оставлять на потом лаборанту. Результаты экспресс-метода окрашивания по Граму показаны вместе с описанием и интерпретацией некоторых наиболее распространенных микроорганизмов, вызывающих менингит. Для теста с индийскими чернилами к одной капле осадка центрифугированной спинномозговой жидкости на предметном стекле добавьте одну каплю чернил. Накройте влажный препарат покровным стеклом и исследуйте под «высоким сухим» увеличением. Обнаружение почкующихся организмов, видимых в виде ярких пятен в конфигурации «восьмерка» на темном фоне туши, свидетельствует о наличии криптококков (см. ). При отсутствии почкования другие видимые элементы не следует называть криптококками.

Таблица 220.2

Микроорганизмы в спинномозговой жидкости.

СМЖ для посева следует как можно скорее доставить в бактериологическую лабораторию. В ожидании культивирования ЦСЖ можно хранить в инкубаторе, чтобы максимизировать жизнеспособность любых присутствующих организмов.

Анализ мокроты при инфекциях дыхательных путей

Определение

Окрашивание мокроты по Граму, возможно, является наиболее точным способом диагностики легочных инфекций. Поскольку в носоглотке всегда есть микроорганизмы, посев мокроты часто оказывается положительным для некоторых бактериальных микроорганизмов. Эта положительная культура может вводить в заблуждение в случаях гриппа, микоплазмы или легионеллезной пневмонии. Напротив, когда этиологическими агентами являются анаэробы, как при аспирационной пневмонии, их присутствие невозможно выявить с помощью обычных методов посева мокроты. Исследование мокроты, окрашенной по Граму, покажет, присутствует ли бактерия в качестве преобладающего вида и содержит ли мокрота полиморфноядерные лейкоциты, указывающие на бактериальную инфекцию. Наличие многочисленных крупных плоскоклеточных клеток, даже если они заполнены бактериями, указывает на то, что образец был контаминирован слюной и поэтому не подходит для диагностических целей.

Техника

Мокроту можно собрать либо в виде свежевыкашляемого образца, либо путем аспирации через назотрахеальную трубку после быстрой инстилляции 5–10 мл физиологического раствора. Транстрахеальная аспирация необходима лишь в редких случаях для получения мокроты.

Образец мокроты распределяют по предметному стеклу с помощью палочки-аппликатора или путем сжатия образца между двумя предметными стеклами. После того, как образец высохнет на воздухе, его фиксируют нагреванием и окрашивают по Граму, как описано для спинномозговой жидкости, за одним исключением. Образец мокроты будет иметь толстые и тонкие участки. Если попытаться полностью обесцветить толстые области, тонкие области могут быть чрезмерно обесцвечены. Поэтому следует оставлять наиболее густые участки мокроты голубого цвета.

Клиническое значение

При исследовании под микроскопом наилучшей областью для поиска микроорганизмов является та, где ядра лейкоцитов имеют розовый цвет. При бактериальной пневмонии следует отметить много полиморфноядерных лейкоцитов и резкое преобладание одного морфологического типа организма; то есть при пневмококковой пневмонии следует видеть только грамположительные диплококки при исключении почти всех других бактериальных форм. Исключение составляют случаи аспирационной пневмонии, при которой можно увидеть много различных типов микроорганизмов, указывающих на то, что многие типы были аспирированы изо рта. Последствия различных паттернов, наблюдаемых при окрашивании мокроты по Граму, приведены на рис.

Таблица 220.3

Диагностическое значение результатов окрашивания мокроты по Граму.

Анализ мочи при инфекции мочевыводящих путей

Определение

Исследование мочи на наличие инфекции включает обнаружение лейкоцитов и/или бактерий. В отличие от спинномозговой жидкости моча обычно содержит некоторое количество лейкоцитов и легко контаминируется бактериями. Следовательно, правильная оценка требует специальных шагов при сборе, подготовке и хранении образца. Используя несколько простых методов, можно показать, что инфекция мочевыводящих путей существует, и сделать обоснованное предположение о вероятном возбудителе и, следовательно, о соответствующей терапии. Повторяя эти процедуры через 24 часа после начала лечения, можно также решить, была ли эффективна выбранная терапия. Во многих случаях все это можно сделать до того, как микробиологическая лаборатория сообщит о результатах первоначального посева.

Методика

Пациенты, у которых моча должна быть исследована на наличие инфекции, делятся на две группы: пациенты с постоянным мочевым катетером и без него. У пациентов без катетеров рекомендуется брать чистую порцию средней порции мочи. Периуретральную область следует сначала очистить мыльным раствором, чтобы избавиться от загрязняющей резидентной флоры, а затем промыть стерильной водой или физиологическим раствором, чтобы избежать антибактериального действия мыла при культивировании мочи. Во избежание контаминации мочи фекалиями у пациенток важно, чтобы очищение периуретральной области проводилось от отверстия уретры к промежности, а не в обратном направлении. У мужчин важно оттянуть крайнюю плоть, если она имеется, перед очисткой периуретральной области. Следует избегать чистящих средств, отличных от мыла, таких как содержащие гексахлорофен (например, pHi-so-Hex) и соединения четвертичного аммония (например, Zephiran). Первые могут высушивать уретру, делая ее восприимчивой к инфекции, а вторые легко контаминируются псевдомонадами. Важность образца из средней части мочеиспускательного канала заключается в том, что начальное мочеиспускание вымывает бактерии, которые обычно находятся в дистальном отделе уретры. У пациентов, которые не могут сотрудничать, может потребоваться получение мочи путем введения временного катетера. Это должно быть сделано с использованием стерильной техники и процедур очистки, описанных выше.

У пациента с постоянным катетером надлежащим методом получения мочи является протирка порта спиртом и аспирация мочи стерильным шприцем. Если порт не предусмотрен, можно использовать шприц и иглу малого диаметра. В этом случае дистальную резиновую часть закрытой дренажной системы необходимо очистить спиртовым тампоном, а затем проколоть резиновую трубку и вывести мочу. Удостоверьтесь, что просвет трубки, дренирующей мочевой пузырь, введен, а не просвет трубки, которая ведет к надутому баллону. Для этого катетер должен быть проколот дистальнее бифуркации или трифуркации. Систему трубок никогда не следует отсоединять для получения мочи, поскольку «закрытые» современные системы сбора мочи играют важную роль в предотвращении инфекции у катетеризированных пациентов. Пластиковую часть дренажной системы нельзя прокалывать, так как она не будет самоуплотняться. Моча для диагностики инфекции никогда не должна браться из мешка для сбора. Эта моча не свежая и часто заражена бактериями, независимо от наличия или отсутствия инфекции мочевыводящих путей.

Моча не должна центрифугироваться перед окраской по Граму. Окраску по Граму готовят следующим образом. Каплю неотжатой мочи помещают на чистое предметное стекло и дают высохнуть, не размазывая. Затем образец фиксируют нагреванием и окрашивают, как описано для спинномозговой жидкости (10). Аппроксимацию лейкоцитов обычно проводят путем центрифугирования мочи и исследования капли осадка под высокосухим объективом микроскопа без предварительного окрашивания.

Рисунок 220.1

Метод окрашивания по Граму.

После окрашивания моча должна быть отправлена на посев для подтверждения наличия, типа и количества бактерий. Если мочу не культивируют сразу, ее необходимо хранить в холодильнике, чтобы большое количество колоний не отражало просто размножение бактерий после сбора мочи.

Клиническое значение

Количество колоний более 100 000 (10 ⁵ ) микроорганизмов на миллилитр хорошо коррелирует с другими признаками инфекции. Необычно увидеть бактерии при окрашивании мочи по Граму, если только количество микроорганизмов не превышает 100 000/мл. Сопоставляя эти два факта, если в окрашенной по Граму моче обнаруживаются бактерии, можно предположить, что количество микроорганизмов превышает 100 000/мл, и, следовательно, вероятность инфекции высока.

Двумя наиболее распространенными типами бактерий являются грамотрицательные палочки или грамположительные кокки. Последние можно увидеть в виде коротких цепочек, что свидетельствует о том, что это стрептококки, скорее всего, энтерококки. Грамположительные кокки в скоплениях, вероятно, являются стафилококками, а S. saprophiticus в настоящее время признан распространенным патогеном нижних мочевыводящих путей. Грамотрицательные палочки обычно не поддаются дальнейшей идентификации с помощью окрашивания по Граму, за исключением специалистов. Грамотрицательные кокки могут принадлежать к роду Acinetobacter.

Точный подсчет лейкоцитов в моче не очень полезен для установления наличия инфекции мочевыводящих путей. В неинфицированной моче можно обнаружить от 1 до 10 лейкоцитов на поле зрения при большом увеличении; от 10 до 50 указывает на инфекцию. Некоторые исследования показали, что, как и в случае подсчета бактерий, наличие любых лейкоцитов в неочищенной моче имеет клиническое значение.

Видообразование микроорганизма может быть полезным для определения места его происхождения и того, является ли он результатом рецидива или повторного заражения. Дальнейшее лабораторное исследование также даст информацию о чувствительности организма к антибиотикам. Однако не обязательно изменять первоначальную терапию, если пациент чувствует себя хорошо и если повторное окрашивание мочи по грамму не позволяет выявить микроорганизмы. Многие антибиотики концентрируются в моче и эффективны даже тогда, когда тесты на чувствительность in vitro предсказывают неудачу.

Оценка по Граму >10 ⁵ микроорганизмов на миллилитр мочи дает высокую степень уверенности в том, что у пациента инфекция мочевыводящих путей. И наоборот, отсутствие такого количества микроорганизмов не может служить доказательством того, что у пациента нет инфекции. Две группы, у которых наблюдается относительно низкое количество бактерий при наличии инфекции, — это женщины с инфекциями нижних отделов мочевыводящих путей (так называемый уретральный синдром) и пациенты с постоянными мочевыми катетерами. У катетеризированных пациентов время репликации организма уменьшается, поскольку моча из мочевого пузыря немедленно выходит через катетер. У женщин с инфекциями нижних мочевыводящих путей, у которых S. saprophiticus является распространенным патогеном, частое мочеиспускание также может быть причиной относительно низкого количества колоний. Врач должен использовать клинические критерии, наличие пиурии, а иногда и повторное обнаружение небольшого количества одного и того же микроорганизма, чтобы решить, инфицирован ли пациент.

Анализ крови при бактериемии

Определение

В ходе многих инфекций микроорганизмы попадают в кровоток. У некоторых инфицированных пациентов кровь может быть единственным местом, из которого можно культивировать микроорганизмы. Посев крови следует брать у всех госпитализированных пациентов с тяжелыми инфекциями мочевыводящих путей, легких, органов брюшной полости, костей, центральной нервной системы или сосудистого дерева.

Методика

При инфекциях, отличных от эндокардита, достаточно двух или трех наборов культур крови. При подозрении на эндокардит рекомендуется пять наборов культур. Каждый набор культур крови (обычно два флакона в наборе: один для аэробных и один для анаэробных культур) должен быть взят из разных венепункций. Посев крови следует проводить в течение периода от нескольких часов до суток. Практика взятия крови из одного большого шприца и разделения ее на несколько флаконов для культур крови неадекватна. Если заражение происходит до аликвотирования, все культуры крови будут положительными на один и тот же микроорганизм, но это не будет иметь такого же диагностического значения, как множественные положительные культуры, полученные из нескольких мест в разные периоды времени.

Руки являются предпочтительным местом для забора крови. Можно использовать либо локтевую ямку, либо более дистальную точку. Область следует обработать сначала 70%-ным спиртом, а затем раствором, содержащим йод, и дать высохнуть перед выполнением венепункции. Если необходимо пальпировать область для обнаружения вены, венепунктурист должен либо надеть стерильные перчатки, либо подготовить свои пальцы, чтобы не загрязнить область. После забора крови ее следует перелить в соответствующие флаконы, не меняя иглы и не протирая крышки флаконов дезинфицирующим средством. Игла, используемая для венепункции, и крышки флаконов должны быть стерильными. Любая дополнительная обработка увеличивает вероятность заражения или попадания бактерицидного материала в культуральный флакон. Обязательно поместите достаточный объем крови (5–10 мл) в каждую бутылку с культурой.

Клиническое значение

Обычные культуральные исследования крови обычно позволяют поставить диагноз. Два дополнительных метода могут быстро оказаться полезными в случаях подозрения на бактериемию. Первый – это поиск гнойничковых поражений на конечностях. Гнойничковые или угревидные поражения часто встречаются на лице и туловище у здоровых неинфицированных людей. Однако они редко встречаются на конечностях, особенно на кистях и стопах, и могут указывать на бактериемию. При обнаружении эти поражения следует осторожно протереть спиртом, вскрыть или аспирировать шприцем и иглой, а содержимое окрасить по Граму. Если микроорганизмы идентифицированы, можно поставить немедленный предварительный диагноз. Затем материал можно отправить на подтверждающую культуру и определение чувствительности к антибиотикам. Этот подход полезен при гонококковом, менингококковом и пневмококковом сепсисе.

Второй метод — окрашивание по Граму «лейкоцитарной пленки». При центрифугировании цельной крови, как и при определении гематокрита, лейкоциты концентрируются в виде белого слоя на границе раздела плазмы и эритроцитов. Этот слой называется лейкоцитарной пленкой. При наличии бактериемии высокого уровня циркулирующие лейкоциты могут содержать фагоцитированные микроорганизмы. Можно разбить пробирку для микрогематокрита в области лейкоцитарной пленки, сцедить каплю крови с высоким содержанием лейкоцитов на предметное стекло, смазать ее и окрасить по Граму. Хотя это малоэффективная процедура (т. е. она будет положительной примерно в 5% случаев бактериемии, в большей степени при стафилококковой и менингококковой бактериемии, когда количество кровяных колоний может быть очень высоким), ее легко выполнить, и она может дать немедленные диагностические результаты.

ID книжной полки: NBK334PMID: 21250176

Содержание

Кровь: хорошая, плохая и уродливая – микробиология: лабораторный опыт

Гематопоэз

Кровь — это жидкость, которая транспортирует и доставляет питательные вещества и кислород к клеткам тела, а также удаляет метаболические отходы, которые затем выводятся из организма. У позвоночных животных, таких как мы, кровь состоит из нескольких различных типов клеток (клеточных компонентов), взвешенных в водянистой жидкости, называемой плазмой, которая содержит растворенные вещества и белки (гуморальные компоненты), включая белки иммуноглобулинов, называемые антителами. Как клеточные, так и гуморальные компоненты крови транспортируются по всему телу через сердечно-сосудистую и лимфатическую системы.

Клеточный иммунитет

Производство клеток крови называется гемопоэзом и происходит на протяжении всей нашей жизни, прежде всего в костном мозге и в лимфатических узлах после рождения. Клетки крови возникают как «стволовые клетки», которые детерминированы для дифференцировки в зрелые клетки по одному из двух различных путей: миелоидного или лимфоидного .

Рис. 1. Образование клеток крови в системе кроветворения.

Наиболее часто в крови обнаруживаются эритроциты (эритроциты), происходящие из миелоидной клеточной линии. Это узкоспециализированные клетки, заполненные гемоглобином, предназначенные для транспортировки дыхательных газов в легкие и обратно. Другим типом клеток, происходящих из миелоидной линии, являются мегакариоциты, которые продуцируют

тромбоцитов (тромбоциты).

Лейкоциты (лейкоциты) являются нашей основной клеточной системой защиты от болезней. Белые кровяные тельца циркулируют и патрулируют кровь и ткани, где они обнаруживают и исследуют инородные тела, вторгающиеся в человеческое тело, иногда вступая в смертельный бой.

Лейкоциты происходят из миелоидных или лимфоидных клеточных линий. В общем, клетки миелоидной клеточной линии играют ключевую роль во врожденном (также называемом «неспецифическим») иммунном ответе. Миелоидные лейкоциты включают гранулоцитов (нейтрофилы, эозинофилы и базофилы) и моноцитов . В первую очередь это фагоциты, которые выслеживают, поглощают и уничтожают вторгшиеся объекты, одновременно посылая сообщения другим типам иммунных клеток о том, что вторжение произошло. Врожденный ответ также включает гуморальные компоненты, такие как комплемент. С большинством бактериальных инфекций, нарушающих защитные барьеры нашей кожи и слизистых оболочек, быстро и эффективно справляется наш врожденный иммунный ответ.

Клетки линии лимфоидных клеток, называемые лимфоцитами , активируются с помощью сигналов, полученных от миелоидных клеток. Лимфоциты запускают адаптивный (также называемый «специфическим») иммунный ответ. Лимфоидные клетки дифференцируются в естественные клетки-киллеры (NK), Т-клетки и В-клетки. При активации В-клетки дифференцируются в плазматические клетки, которые продуцируют антитела.

Рисунок 2. Дифференцировка гемопоэтических стволовых клеток в различные типы клеток крови.
Клетки, участвующие в адаптивном иммунном ответе Клетки, участвующие во врожденном иммунном ответе
Гуморальный иммунитет
Термин «гуморальный» относится к жидкой части крови. Хотя и врожденный, и адаптивный иммунный ответ имеют гуморальные компоненты, использование этого термина наиболее тесно связано с выработкой антител как кульминацией адаптивного иммунного ответа.
Антитела (также называемые иммуноглобулинами) представляют собой белки, которые распознают и специфически связываются с чужеродными структурами, связанными с клетками или объектами, которые называются антигены .
Рисунок 3. Структура молекулы антитела.
Антитела имеют уникальную молекулярную структуру, предназначенную для соответствия только одному типу антигена. Антитела связываются с антигенами и нейтрализуют их несколькими способами.
Антитела вырабатываются В-клетками после их активации сигналами от других иммунных клеток. Активированные В-клетки подвергаются быстрому росту и производят клон клеток, все из которых продуцируют один конкретный тип молекулы антитела.
Субпопуляция активированных В-клеток развивается в клетки памяти, которые «запоминают» антиген. Клетки памяти праймированы и готовы к повторному обнаружению антигена. Это обеспечивает биологическую основу для вакцинации, при которой иммунная система искусственно подвергается воздействию антигена, не вызывая заболевания. Антитела и клетки памяти вырабатываются так, как если бы подвергались воздействию реального антигена, и это обеспечивает будущую защиту от настоящего заболевания.
Молекулы антител сохраняются в крови и могут продолжать циркулировать в течение месяцев или лет после воздействия антигена. Как антитела, так и сами микробные антигены могут быть обнаружены и измерены в лабораторных тестах, называемых иммуноанализами, которые могут помочь в диагностике инфекционного заболевания.
Общий иммунный ответ человека изощрен и чрезвычайно сложен, и на самом деле является самостоятельным курсом. Характеристики каждого из двух «плеч» иммунной системы человека приведены в таблице 1. Наша цель в микробиологии — лучше понять типы взаимодействий, которые происходят, когда иммунная система сталкивается с вредными микробами, но также важно понимать иммунитет с точки зрения хозяев (наших комменсалов).
Антитела как косвенный индикатор инфекционного заболевания
Серологические тесты на антитела или антигены в крови широко применяются в клинических лабораториях, поскольку они подтверждают наличие инфекции. Обнаружение антител в образце пациента не обязательно является прямым признаком того, что у человека есть заболевание, а скорее показывает прошлое или настоящее воздействие возбудителя болезни.
Инфекционный мононуклеоз (ИМ), заболевание, которое может следовать за инфекцией вирусом Эпштейна-Барр (вирус герпеса человека 4) или цитомегаловирусом (вирус герпеса человека 5), является примером довольно распространенного заболевания, часто диагностируемого на основании обнаружения антител в кровь человека. Один тип иммуноанализа для IM обнаруживает «гетерофильные» антитела в сыворотке пациента. Это слабые, ранние антитела класса IgM с широкой специфичностью, продуцируемые против плохо определенных антигенов, в число которых входят эритроциты коровы, свиньи и лошади. Реакция между гетерофильными антителами и эритроцитами животных приводит к «гемагглютинации» или слипанию эритроцитов, которое можно визуально наблюдать.
По какой-либо причине у людей с инфекционным мононуклеозом и рядом других инфекционных заболеваний (гепатит и краснуха) повышен уровень гетерофильных антител. Иногда они перекрестно реагируют с «собственными» антигенами, а также могут быть обнаружены у людей с аутоиммунными заболеваниями.
Используйте надежные интернет-источники для изучения клинических признаков и симптомов, согласующихся с диагнозом инфекционного мононуклеоза (ИМ), и составьте приведенный ниже список.
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
Мы будем проводить коммерчески доступный качественный анализ для обнаружения гетерофильных антител как индикатора инфекционного мононуклеоза. Ваш инструктор продемонстрирует, как выполнять тест, используя положительный и отрицательный контроль.
Описанный ниже метод соответствует набору для монохромного цветного теста Fisher HealthCare Sure-Vue, но инструктор может заменить его другими наборами. В тест-наборе Sure-Vue используются специально обработанные эритроциты лошади. Если в образце пациента присутствуют гетерофильные антитела, эритроциты будут агглютинировать, что будет выглядеть как темные сгустки на окрашенном фоне.
Клинический сценарий
Пациентка 16-ти лет сообщает о симптомах, которые включают боль в горле и чувство боли и чрезмерной усталости. Клинические наблюдения включают лихорадку 102°F и увеличение лимфатических узлов в области шеи. Первоначальный дифференциальный диагноз, поставленный врачом, включает стрептококковую инфекцию (ангину) и инфекционный мононуклеоз. Образец крови берется и тестируется с помощью монотеста Sure-Vue.
Для проведения теста вам необходимо получить у инструктора тестовую карту, один образец сыворотки пациента и флакон с тестовым «реагентом» (взвесь лошадиных эритроцитов).
Поместите одну каплю образца пациента внутрь круга на карточке. Встряхните флакон с реагентом и добавьте одну каплю реагента рядом с каплей образца пациента.
Используя деревянную зубочистку, тщательно перемешайте две капли, чтобы объединенные капли полностью покрыли поверхность внутри круга.
Аккуратно покачивайте предметное стекло вперед и назад в течение 1 минуты, затем положите его на лабораторный стол и оставьте в покое еще на 1 минуту. Не перемещая слайд снова, посмотрите на круг, чтобы увидеть, видны ли комки.
Положительная реакция будет иметь темные сгустки среднего или большого размера на сине-зеленом фоне, равномерно распределенные по поверхности тестового круга.
При отрицательном результате комкование отсутствует, хотя может быть небольшая зернистость на зеленовато-коричневом фоне.
Был ли образец вашего пациента положительным или отрицательным для этого теста? __________________
На основании клинических признаков и результатов теста может ли врач быть абсолютно уверен, что пациент инфицирован ВЭБ или ЦМВ и что эта инфекция вызывает инфекционный мононуклеоз? Поясните свой ответ.
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________

Количество клеток крови как индикатор здоровья и болезни
Одним из способов оценки состояния здоровья человека (или животного) является прямое или косвенное исследование клеток или метаболитов, обнаруженных в крови. В клинических лабораториях уровни различных метаболитов в плазме могут быть измерены с помощью химического анализа, а клетки крови могут быть выделены и подсчитаны с использованием автоматизированных методов.
Рис. 4. Окрашенные и неокрашенные мазки крови.
Также возможно оценить клеточные компоненты в крови, непосредственно исследуя их под микроскопом. Чтобы увидеть отдельные клетки, сначала необходимо создать на предметном стекле очень тонкую пленку крови с «распушенным краем» (один слой клеток). Неокрашенные и окрашенные мазки крови с почти идеальным «распушенным краем» показаны на рис. 4.
После окрашивания мазка крови клетки визуально исследуют под микроскопом. Одной из наиболее часто используемых дифференциальных окрасок является окраска Райта-Гимзы, при которой эритроциты окрашиваются в розовато-красный цвет, а ядра и цитоплазма лейкоцитов окрашиваются в различные оттенки фиолетового. Окрашенные мазки крови исследуют, чтобы оценить внешний вид клеток крови и подсчитать количество различных типов присутствующих лейкоцитов. Мазки крови также могут быть исследованы, чтобы увидеть, содержит ли кровь какие-либо протозойные или бактериальные патогены, связанные с заболеванием.
С точки зрения инфекционного заболевания количество лейкоцитов и относительное процентное содержание различных типов клеток могут указывать на то, есть ли у человека заболевание. Это можно отметить как отклонение (в большую или меньшую сторону) от установленных «нормальных» значений.
Нормальные диапазоны, выраженные в процентах от общего количества лейкоцитов, представлены в Таблице 2. Обратите внимание, что эти значения различаются в зависимости от возраста и пола и поэтому являются приблизительными значениями, предоставленными для целей данной лаборатории. Абсолютное количество лейкоцитов, обычно считающееся «здоровым», колеблется от 3,5 до 11 х 10 9 .0119 9 кл/л.
Отклонения от этих «нормальных» значений могут свидетельствовать о наличии активного инфекционного заболевания или заболевания, связанного с кровью.
Для типов лейкоцитов, перечисленных в таблице ниже, выясните, какие болезненные состояния связаны с относительным увеличением или уменьшением количества этого конкретного типа клеток: Условия, связанные с относительным увеличением Условия, связанные с относительным снижением Незрелые нейтрофилы, у которых ядро выглядит как одна «полоса» Лимфоциты Эозинофилы Базофилы
Чтобы определить относительное процентное содержание различных типов лейкоцитов в крови человека, важно сначала знать, как выглядит каждый тип клеток, и уметь различать их. Они будут показаны в лаборатории и/или предоставлены в виде раздаточных материалов перед началом исследования.
Дифференциальный подсчет лейкоцитов («Дифф»)
Когда дифференциальный подсчет клеток проводится в клинической лаборатории, лаборант сначала делает мазок крови либо вручную, либо с помощью аппарата, надеясь добиться идеального размытого края. Мазки обычно окрашивают красителем Райта-Гимзы, и это метод окрашивания, используемый для подготовки слайдов, которые мы будем рассматривать в этой лаборатории.
После окрашивания мазок наблюдают с помощью светового микроскопа с масляным иммерсионным объективом. Выполняется первоначальное сканирование для оценки внешнего вида эритроцитов и тромбоцитов, после чего следует более подробный анализ присутствующих популяций лейкоцитов.
Для определения относительного количества (в процентах) каждого типа лейкоцитов мазок сканируется с использованием шаблона, который не позволяет наблюдателю подсчитывать одни и те же клетки более одного раза. При обнаружении каждого лейкоцита он идентифицируется по типу клеток и записывается. Ведется «подсчет», и когда общее количество наблюдаемых клеток достигает 100, доля каждого типа может быть легко определена как количество клеток этого типа на 100. Процент рассчитывается путем умножения на 100.
Возьмите подготовленный препарат мазка крови, окрашенного Райтом, с передней скамьи. Используя шаблон сканирования, показанный на рисунке 5, и как показано, отсканируйте весь слайд. Определите и подсчитайте каждый белый кровяной тельце, которое вы видите, пока не достигнете 100 клеток.
Рис. 5. Схема сканирования для микроскопической оценки мазков крови.
Использование счетчика клеток (если он имеется в вашей лаборатории) немного упрощает процесс подсчета. Запишите свои результаты в таблицу ниже:
Группа лейкоцитов Количество ячеек Процент
Нейтрофилы (включая палочки)
Лимфоциты
Моноциты
Эозинофилы
Базофилы
Основываясь на результатах вашего дифференциального подсчета клеток, проведите анализ с точки зрения сравнения крови с «нормальными» значениями. Что говорят результаты об общем состоянии здоровья пациента? Приведите не менее трех конкретных примеров из ваших результатов, подтверждающих ваше мнение.
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
Методы окрашивания для выявления патогенов в крови
и циркулируют по всей сердечно-сосудистой системе человека. Инфекции крови могут варьироваться по степени тяжести от преходящей бактериемии (бактерии в крови) до септицемии, «септического» состояния, которое может привести к тяжелому заболеванию и смерти.
Попавшие в кровь микробы обычно атакуются, уничтожаются и удаляются иммунной системой как можно быстрее. Однако из исследований мы знаем, что некоторые высокоадаптированные микроорганизмы могут выживать и даже размножаться в клетках крови. Чтобы совершить этот подвиг, микробы должны «убедить» иммунную систему оставить их в покое, уклоняясь от врожденных или адаптивных реакций или разрушая их.
Хотя паразитарные инфекции крови, такие как малярия и сердечный червь, относительно хорошо известны, становится все более очевидным, что бактерии также вызывают долговременные инфекции, которые могут привести к хроническому заболеванию. Два примера бактерий, которые заражают и размножаются внутри клеток крови, включают Риккетсия spp. (пятнистая лихорадка Скалистых гор) и Bartonella spp. (наиболее известный тем, что вызывает заболевание, известное как «лихорадка кошачьих царапин»). Обе эти бактерии и некоторые другие относятся к зоонозным заболеваниям, которые «перекинулись» на человека. Большинство из них передаются человеку насекомыми-переносчиками, такими как блохи, вши и клещи.
Чтобы выжить в крови, бактериальные патогены должны сначала избежать захвата и уничтожения фагоцитирующими клетками. Один из успешных подходов заключается в том, чтобы патоген заражал, а затем размножался внутри тех самых клеток, которые были посланы для их уничтожения. Эта и другие стратегии, используемые бактериями, называются «скрытым патогенезом». Стратегии атаки, используемые скрытыми патогенами, коренным образом отличаются от тех, которые используются более известными «лобными» патогенами, чья основная тактика состоит в том, чтобы прорваться через периметр хозяина, размножиться и распространиться как можно быстрее, прежде чем иммунная система сможет сплотиться для ответа. В таблице 3 сравниваются и противопоставляются эти две стратегии вторжения и заражения хозяина.
Используя тактику скрытности, некоторые микроорганизмы могут вторгаться в своих хозяев, распространяться в части тела, которые плохо защищены иммунной системой, уклоняться от фагоцитоза и обезвреживать адаптивный иммунный ответ. Многие стелс-патогены, поражающие клетки крови, также обладают способностью заражать несколько видов животных и передаются среди хозяев кровососущими насекомыми.
Мы будем искать доказательства заражения стелс-микробами, которые размножаются внутри различных типов клеток крови, исследуя мазки крови, окрашенные по Райту-Гимзе.
Anaplasma spp.
Anaplasma spp. — это бактерии-невидимки, которые вторгаются в красные и белые кровяные тельца. Примеры включают A. centrale у коров, которые проникают в эритроциты, и A. phagocytophilum у людей и других животных, которые размножаются внутри фагоцитирующих лейкоцитов.
Хотя считается, что у бактерий относительно простая жизнь, Anaplasma и другие бактерии-невидимки имеют сложный жизненный цикл. Человек и животные заражаются через укусы клещей, которые переносят Anaplasma , а также смесь других возбудителей болезней, включая Borrelia (болезнь Лайма), Ehrlichia (эрлихиоз) и вирусы, вызывающие энцефалит у некоторых пациентов.
Рис. 6. Anaplasma morulae в цитоплазме лейкоцитов.
Попадая в кровь, A. phagocytophilum связывается с поверхностными белками нейтрофилов и других гранулоцитов. После фагоцитоза бактерии посылают сигналы, подавляющие развитие фаголизосомы, а затем могут свободно размножаться внутри эндоцитарной вакуоли (называемой эндосомой).
Это образует наблюдаемую структуру, называемую морулой, внутри инфицированной клетки (обозначена стрелками на рис. 6), которую может увидеть внимательный наблюдатель в окрашенном по Райту-Гимзе мазке крови.
Получите окрашенное предметное стекло мазка крови с маркировкой Anaplasma . Сканируйте предметное стекло с помощью объектива с масляной иммерсией, и когда вы столкнетесь с фагоцитирующим типом клеток, внимательно посмотрите на цитоплазму и определите, есть ли морулы, которые будут окрашиваться в светло-фиолетовый цвет на фоне более темно-синего цвета цитоплазмы.
Подсчитайте количество наблюдаемых фагоцитов как с морулами, так и без них. Запишите свои результаты в таблицу ниже:
Морулы Anaplasma наблюдались? Количество клеток с морулами Количество клеток без морул Процент инфицированных фагоцитов
Рисунок 7. Сложный жизненный цикл бабезий.
Бабезии spp.
Бабезия spp. являются простейшими, классифицируемыми как Apicomplexa, группа, которая также включает более известный Plasmodium , вызывающий малярию, и Toxoplasma , вызывающий токсоплазмоз.
Бабезия имеет сложный жизненный цикл, включающий несколько жизненных стадий, чередующихся с несколькими хозяевами, как показано на рис. 7. Клещи вводят спорозоитов в своего хозяина, когда они прикрепляются, чтобы питаться кровью. Спорозоиты внедряются в эритроциты и развиваются сначала в трофозоитов , затем мерозоитов , которые высвобождаются и заражают близлежащие эритроциты, чтобы увековечить цикл.
Рис. 8. Трофозоиты бабезий в эритроцитах.
Трофозоиты и мерозоиты можно наблюдать как внутри, так и снаружи клеток в мазке крови, окрашенном по Райту-Гимзе. Внутри эритроцитов развивающиеся трофозоиты принимают форму «колец» или «крестов», которые окрашиваются в фиолетовый цвет и обычно отчетливо выделяются на фоне эритроцитов, имеющего розоватый цвет. Мерозоиты выглядят как аморфные капли с темно-фиолетовой точкой, которая представляет собой ядерный материал паразита.
Получите окрашенное предметное стекло мазка крови с маркировкой Babesia . Сканируйте предметное стекло с помощью масляной иммерсионной линзы и ищите признаки инфекции Babesia как внутри, так и снаружи эритроцитов. Перейдите к самой тонкой части мазка, где вы можете увидеть один слой эритроцитов. Начните подсчитывать количество эритроцитов, отмечая клетки с явными признаками развития трофозоитов и любые внеклеточные мерозоиты. Продолжайте считать, пока не наберете 100 клеток. Используйте эти данные для оценки уровня паразитемии.
Количество эритроцитов с Бабезиями трофозоитами Количество наблюдаемых мерозоитов Расчетный уровень паразитемии (трофозоиты/мерозоиты, наблюдаемые на 100 подсчитанных клеток)
Согласно научному источнику (с ссылкой на источник), какой примерно процент людей в США инфицирован бабезиями , но может протекать бессимптомно или с легкими или хроническими неспецифическими симптомами?
____________________________________________________________________________
Подумайте о последствиях, которые это может иметь для поставок крови для переливания крови в Соединенных Штатах.
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Dirofilaria Рисунок 9. Сложный жизненный цикл Dirofilaria.
Dirofilaria — это нематоды (круглые черви), также известные как сердечные черви.
Известно, что хозяевами этого типа паразитических гельминтов являются как собаки, так и кошки, и борьба с сердечными гельминтами является первоочередной задачей как для владельцев домашних животных, так и для ветеринаров.
Взрослые сердечные черви живут в правом желудочке (одной из камер) сердца у собак и в легочных артериях у кошек. Взрослые черви производят микрофилярии («детские» сердечные черви), которые можно увидеть в мазках крови. Осложнения активной инфекции сердечного червя у собак варьируются от отсутствия на ранних или легких стадиях инфекции до кашля, рвоты, затрудненного дыхания и сердечной недостаточности при запущенных инфекциях.
Рис. 10. Микрофилярии во влажном препарате цельной крови.
Получите окрашенное предметное стекло мазка крови Dirofilaria . Сканируйте предметное стекло с помощью объектива с масляной иммерсией и ищите червей-микрофилярий, которые будут явно крупнее клеток крови. На рис. 10 показано изображение одной микрофилярии в неокрашенной крови, наблюдаемое с помощью светлопольной или фазово-контрастной микроскопии. В мазке, окрашенном по Райту-Гимзе, микрофилярии выглядят как черви, только окрашенные в синий и фиолетовый цвета. Обратите внимание на размер червя-микрофилярии по отношению к эритроцитам (диаметром примерно 10 мкм). Взрослые сердечные черви могут достигать 20–30 см в длину.
Просканируйте весь препарат и отслеживайте количество обнаруженных микрофилярий.
Сколько отдельных микрофилярий вы нашли в мазке крови? _____________________________
Считать, что капля крови, из которой первоначально был сделан мазок, имела объем менее 10 мкл.