5. Биохимические свойства
Стафилококки разлагают с образованием кислоты без газа глюкозу, фруктозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, глицерин, манит, не разлагают салицин, дульцит, раффинозу. Ферментация маннита рассматривается как свойство патогенных видов стафилококков. Эти микроорганизмы продуцируют уреазу, каталазу, сероводород, восстанавливают нитраты в нитриты, не разлагают крахмал, инсулин, гиппуровокислый натрий, не образуют индол.
На желатине уже через 1—2 суток отмечают довольно интенсивный рост по уколу, к 4—5-му дню отчетливо видно разжижение среды в форме воронки. Наличие у патогенных стафилококков протеолитического фермента обусловливает их свойство разжижать желатину и свернутую кровяную сыворотку, а также свертывать и пептонизировать обычное и лакмусовое молоко.
При определении биохимических свойств стафилококков учитывают их ДНК-азиую активность, которой также обладают патогенные стафилококки. С этой целью применяют следующие компоненты: щелочной МПА (рн 8,4—8,6), раствор натриевой соли ДНК (в стерильной дистиллированной воде — 20 мг/1 мл воды) с добавлением нескольких капель 2 %-ного NaOH, хлористый кальций, 1 н. раствор соляной кислоты. Методика определения ДНК- азной активности следующая: к расплавленному охлажденному агару добавляют раствор натриевой соли ДНК (1—1,5 мг/мл), стерилизуют в водяной бане кипячением 30—40 мин. После охлаждения среды до 60°С к ней асептично добавляют хлористый кальций (0,8 мг/мл), разливают в чашки Петри по 10—15 мл. Когда агар застынет (уплотнится), его подсушивают в термостате, затем засевают на поверхность МПА легким прикосновением петли испытуемую культуру стафилококка, помещают в термостат на 18—20 ч (37 °С). Получив рост колоний, в чашку вносят 4—5 мл соляной кислоты, которую сливают через 2—3 мин. Чашки просматривают, учитывают результат: просветленная зона вокруг колонии на мутном слое среды свидетельствует о продуцировании ДНК — азы (Приложении 2). Сущность реакции в том, что ДНК под действием НСl выпадает в осадок. Продуцируемый патогенными стафилококками фермент ДНК–аза деполимеризирует ДНК, и образование осадка не происходит.
6. Резистентность
Устойчивость стафилококков к неблагоприятным факторам внешней среды высокая. Они превосходно переносят высыхание, оставаясь жизнеспособными в гнойном экссудате до 200 дней, в пыли до 100 – 120 дней, длительно сохраняются в навозе, замораживание их консервирует. Повторное замораживание и оттаивание не убивает стафилококк. Сохраняют свои свойства при длительном воздействии солнечных лучей. 50% фенол убивает микроорганизм за 30 минут.
На питательных средах, в частности на полужидком агаре, сохраняются без пересевов более шести месяцев. При нагревании, например в молоке, погибают при температуре 70 °С через 1 ч, при 85° С — через 30 мин, кипячение убивает их мгновенно. Из дезинфицирующих веществ 1%-ный раствор формалина и 2%-ный раствор едкого натрия убивает этих микробов в течение 1 ч, а 1%-ный раствор хлорамина — в течение 2—5 мин. Наиболее чувствительны стафилококки к кристаллвиолету, пиоктанину, малахитовой зелени, которые в концентрации 1 : 300 000 обладают выраженным бактериостатическим действием, что позволяет с успехом использовать эти краски при стафилококковых поражениях кожи, фурункулезе, нагноении ран. Весьма устойчивы стафилококки к антибиотикам, особенно пенициллину, стрептомицину, а также сульфаниламидным препаратам. Учитывая высокую устойчивость стафилококков, их используют в качестве тест — объекта при испытании различных бактерицидных веществ — новых антибиотиков или дезинфицирующих веществ.
Фенотипическая характеристика биологических свойств коагулазонегативных стафилококков, выделенных в кардиохирургическом стационаре | Граничная
1. Казачек ЯВ, Помешкина СА, Барбараш ОЛ. Профилактика инфекционных осложнений в кардиохирургии. Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2014;(4): 62–9. doi: http://dx.doi.org/10.17802/23061278-2014-4-62-69.
2. Кузнецов МС, Козлов БН, Насрашвили ГГ, Панфилов ДС, Андриянова АВ, Петлин КА, Шипулин ВМ. Сравнительный анализ результатов применения методик элиминации стернальной инфекции в кардиохирургии. Клиническая и экспериментальная хирургия. Журнал имени академика Б.В. Петровского. 2016;(2):51–9.
3. Гостев ВВ, Гончаров АЕ, Грачева МА, Сидоренко СВ. Распространение генов комплекса Immune evasion cluster и других факторов вирулентности у Staphylococcus aureus. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2013;15(4):270–8.
4. Фалова ОЕ. Особенности лецитиназной активности Staphylococcus spp. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2013;(8–3):112–3.
5. Чуенко ЭА, Усвяцов БЯ. Характеристика антикарнозиновой активности разных видов стафилококков. Вестник Оренбургского государственного университета. 2005;(12):63–5.
6. Tegnell A, Arén C, Ohman L. Coagulase-negative staphylococci and sternal infections after cardiac operation. Ann Thorac Surg. 2000;69(4): 1104–9. doi: http://dx.doi.org/10.1016/S0003-4975(99)01563-5.
7. Богомолова НС, Большаков ЛВ, Кузнецова СМ, Орешкина ТД. Динамика устойчивости к антибиотикам и частота выделения стафилококков и энтерококков у больных отделения реконструктивной хирургии. Антибиотики и химиотерапия. 2011;56(5–6):37–45.
8. Rupp ME, Archer GL. Coagulase-negative staphylococci: pathogens associated with medical progress. Clin Infect Dis. 1994;19(2): 231–43.
9. Piette A, Verschraegen G. Role of coagulase-negative staphylococci in human disease. Vet Microbiol. 2009;134(1–2):45–54. doi:10.1016/j.vetmic.2008.09.009.
10. Ishak MA, Gröschel DH, Mandell GL, Wenzel RP. Association of slime with pathogenicity of coagulase-negative staphylococci causing nosocomial septicemia. J Clin Microbiol. 1985;22(6):1025–9. doi:0095-1137/85/121025-05$02.00/0.
11. Козлова НС, Баранцевич НЕ, Иванова ЛВ, Гоик ВГ, Шварц АП, Мокрова ЕВ, Баранцевич ЕП. Чувствительность к антибактериальным препаратам стафилококков, циркулирующих в многопрофильном стационаре. Проблемы медицинской микологии. 2015;17(4):58–62.
13. Флуер ФС. Стафилококковые энтеротоксины, их свойства и роль в качестве факторов патогенности. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2012;(2): 99–108.
14. Seiberling KA, Conley DB, Tripathi A, Grammer LC, Shuh L, Haines GK 3rd, Schleimer R, Kern RC. Superantigens and chronic rhinosinusitis: detection of staphylococcal exotoxins in nasal polyps. Laryngoscope. 2005;115(9):1580–5. doi:10.1097/01.mlg.0000168111.11802.9c.
15. Стукова ЕИ, Кениксфест ЮВ. Патогенетическое значение золотистого стафилококка при атопическом дерматите. Фундаментальные исследования. 2013;(7–3):680–7.
16. Баязитова ЛТ, Тюрин ЮА, Сукманская ЕО, Куликов СН. Фенотипические характеристики кокковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите. Практическая медицина. 2007;(4):41–3.
17. Huvenne W, Hellings PW, Bachert C. Role of staphylococcal superantigens in airway disease. Int Arch Allergy Immunol. 2013;161(4): 304–14. doi:10.1159/000350329.
18. Коленчукова ОА, Смирнова СВ, Лаптева АМ. Количественный и качественный состав микрофлоры слизистой оболочки носа при полипозном риносинусите. Инфекция и иммунитет. 2016;6(4):366–72. doi: http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2016-4-366-372.
Генетическая и биохимическая характеризация стафилококков, встречающихся в Новосибирске | Козлова
2. Bond R., Loeffler A. What’s happened to Staphylococcus intermedius? Taxonomic revision and emergence of multi-drug resistance. J. Small Anim. Pract. 2012;53(3): 147-154. DOI 10.1111/j.17485827.2011.01165.x.
3. Cherniy V.I., Kolesnikov A.N., Kuznetsova I.V. Antibiotic therapy in emergency medicine. Donetsk: Zaslavsky Publ., 2010. (in Russian)
4. Dekhnich A.V., Edelstain I.A., Narezkina A.D., Afinogenov G.E., Akhmetova L.I., Boronina L.G., Gugutcidze E.N., Gudkova L.V., Zdzitovetcki D.E., Ilyina V.N., Kretchikova O.I., Marusina N.E., Multih I.G., Pylaeva S.I., Smirnov I.V., Suborova T.N., Taraban V.K., Furletova N.M., Hasanova S.G., Schetinin E.V., Stratchounski L.S. Epidemiology of antimicrobial resistance of nosocomial strains of Staphylococcus aureus in Russia: Results of prospective study. Kli nicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya khimioterapiya = Cli nical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy. 2002;4(4):325-337. (in Russian)
5. Dekhnich A.V., Nikulin A.A., Ryabkova E.L., Krechikova O.I. Sukhorukova M.V., Kozlov R.S., and the ROSNET Study Group. Epidemiology of antimicrobial resistance of S. aureus isolated from ICU patients in Russia: Results of prospective multicenter study. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya khimioterapiya = Clinical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy. 2008;10(4):333-345. (in Russian)
6. Ghebremedhin B., Layer F., König W., König B. Genetic classification and distinguishing of Staphylococcus species based on different partial gap, 16S rRNA, hsp60, rpoB, sodA, and tuf gene sequences. J. Clin. Microbiol. 2008;46(3):1019-1025.
7. Götz F., Bannerman T., Schleifer K-H. The Genera Staphylococcus and Macrococcus. The Prokaryotes. N. Y.: Springer, USA, 2006;5-75.
8. Karpov I.A., Kachanko E.F. Community-acquired infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA): approaches to antimicrobial therapy. Meditsinskie novosti = Medical News. 2006; 10:28-32. (in Russian)
9. Lebedeva M.N. Rukovodstvo k prakticheskim zanyatiyam po meditsinskoy mikrobiologii [A Guide to Practical Classes in Medical Microbiology]. Moscow: Meditsina Publ., 1973. (in Russian)
10. Madigan M., Martinko J. Brock Biology of Microorganisms. N. Y.: Prentice Hall, 2005. Murashkin N.N., Gluzmin M.I., Skoblikov N.Je., Bakulev A.L., Materikin A.I., Gluzmina M.M., Khotko A.A. Role of MRSA strains in the pathogenesis of severe atopic dermatitis in childhood. The ways of remission achievement. Vestnik dermatologii i venerologii = Bulletin of Dermatology and Venereology. 2012;1:66-74. (in Russian)
11. Netrusov A.I., Egorova M.A., Zakharchuk L.M., Kolotilova N.N. Praktikum po mikrobiologii [Practical Course in Microbiology]. Moscow: Akademiya Publ., 2005. (in Russian)
12. Sidorenko S.V., Rezvan S.P., Grudinina S.A., Krotova L.A., Sterkhova G.V. Results of a multicenter study of the sensitivity of staphylococci to antibiotics in Moscow and St. Petersburg. Antibiotiki i khimioterapiya = Antibiotics and Chemotherapy. 1998;7:15-25. (in Russian)
13. Sidorenko S.V., Tishkov V.I. Molecular basis of antibiotic resistance. Uspekhi biologicheskoi khimii = Success of Biological Chemistry. 2004;44:263-306. (in Russian)
14. Sievert D.M., Ricks P., Edwards J.R., Schneider A., Patel J., Srinivasan A., Kallen A., Limbago B., Fridkin S. Antimicrobial-resistant pathogens associated with healthcare-associated infections: summary of data reported to the National Healthcare Safety Network at the Centers for Disease Control and Prevention, 2009-2010. Infect. Control Hosp. Epidemiol. 2013;34(1):1-14. DOI 10.1086/668770.
15. Wang Y., Qian P.Y. Conservative fragments in bacterial 16S rRNA genes and primer design for 16S ribosomal DNA amplicons in metagenomic studies. PLoS One. 2009;4(10):e7401. DOI 10.1371/journal. pone.0007401.
76 — микробиология экзамен
61. Патогенные стафилококки: систематика, морфология, культуральные и тинкториальные свойства, биохимические особенности, антигенная структура и токсинообразование, патогенез и клиника. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками. Специфическая профилактика и лечение.
Таксономия: относятся к отделу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.
Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.
Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитичес-
кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.
Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.
Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными(образование некоторых токсинов происходит с участием профага).
Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.
Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.
Патогенез. Источником инфекции стафилококков — человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный.
Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.
Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации).
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.
Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.
Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.
Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры.
Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте( компонент клеточной стенки).
Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.
Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.
Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.
Z.�.�.�.0�| �K| ла, получаемые с помощью традиционных методов, получают из клеток различного типа и называют поликлональными.Моноклональные антитела искусственно производят против специфических антигенов, для связи с антигенами-мишенями. Лабораторное производство моноклональных антител, основанное на получении антигенов из одной клетки, позволяет получать идентичные друг другу моноклональные антитела.
При слиянии культур миеломных клеток с антителами клеток селезенки млекопитающих образуются гибридные клетки/ гибридомы, которые производят моноклональные антитела в большом количестве. Моноклональные антитела являются гораздо более эффективными методами, чем традиционные методы лечения, поскольку эти методики воздействуют не только на инородную субстанцию, но и на собственные клетки организма, что вызывает сильные побочные эффекты. Моноклональные антитела взаимодействуют только с инородными антителами/ клетками-мишенями, не оказывая или оказывая минимальные побочные эффекты.
Присутствие большого количества специфических моноклональных антител в крови говорит о присутствии в организме аномального белка. Как правило, этот белок может быть обнаружен в процессе клинического обследования и идентифицирован с помощью скринингового анализа крови, например, с помощью белкового электрофореза. Источником аномального производства моноклональных антител является популяция плазматических клеток в костном мозге.
Интерферон — полипептид, вырабатывающийся и аккумулирующийся во всех ядросодержащих клетках крови и эпителиальных клетках слизистых оболочек. Он является основным звеном противоинфекционной защиты человека. Интерфероны вырабатываются и выделяются местно, в околоклеточное пространство. Действуют преимущественно на близлежащие клетки.
В зависимости от типа клеток-продуцентов все интерфероны можно разделить на:
• а-интерфероны.
• ß-интерфероны.
• у-интерфероны.
По способу получения интерфероны делятся на:
1 .Природные, получаемые из культуры клеток лейкоцитов человека, стимулированных вирусами.
2.Рекомбинантные, продуцируемые бактериями со встроенным геном интерферона в их геном.
Показания к применению:
Препарат предназначен для профилактики и лечения гриппа, а также других ОРВИ (острых респираторных /дыхательных/ вирусных инфекций).
с изучением морфологических, биохимических, токсикогенных свойств (ВДП) в Самаре и Тольятти — Лаборатория Скайлаб
Посев из носа, зева, пазух на золотистый стафилококк — микробиологическое определение инфицированности золотистым стафилококком (Staphylococcus aureus), который приводит к развитию неспецифических инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей. Основные показания к применению: определение назального носительства у медицинского персонала, с целью профилактики внутрибольничных инфекций. Выбор эффективной антибиотикотерапии.Возбудителем стафилококовой инфекции является анаэробная грамположительная бактерия семейства Micrococcaceae рода Staphylococcus. Значимую патологическую роль в развитии заболеваний у человека играют два вида: золотистый стафилококк — Staphylococcus aureus и эпидермальный стафилококк — Staphylococcus epidermidis.
Источником инфекции является больной человек или носитель. Заболевший человек является заразным в течение гнойно-воспалительных явлений, а носитель опасен для окружающих в течение неопределенно длительного отрезка времени. Среди больных опасность представляют лица с гнойно-воспалительными заболеваниями кожи, катаральными явлениями верхних дыхательных путей и кишечника со стафилококковой этиологией. В больницах основным источником инфекции является медицинский персонал (носители инфекции).
Путь передачи — воздушно-капельный и воздушно-пылевой. Возможен бытовой путь — через грязные руки, инструментарий. Хранение загрязненных продуктов может привести к накоплению в них энтеротоксина. Чаще инфекция передается через молоко и молочные продукты с достаточным содержанием сахара (торты, мороженое).
Клинически стафилококки проявляют свое патогенное действие очень разнообразно. Эти проявления можно разделить на три группы: местные, системные, генерализованные. К первой группе (первично-гнойно-воспалительные) относят — абсцессы, фурункулы, флегмоны, пиодермию/импетиго, карбункулы. Во вторую группу входят острые и хронические заболевания глаз -конъюктивит и язва роговицы; уха и носоглотки — тонзиллит, отит, фронтит, гайморит, фарингит, лариноготрахеит; сердечно-сосудистые заболевания — миокардит и эндокардит; заболевания легких — пневмонии; мочеполовой системы — пиелонефрит, цистит, уретрит, пиелит; поражение центральной нервной системы — абсцесс мозга и менингит; поражение костно-суставной системы — остеомиелит, артриты; заболевания пищеварительной системы — энтериты, колиты, аппендицит, перитонит, парапроктит, холецистит. Серьезную опасность представляет третья группа, протекающая в виде сепсиса, характеризующаяся высокой летальностью.
Методические указания по лабораторной диагностике стафилококкоза животных /
|
УТВЕРЖДАЮ Председатель
Главного управления _________________ А.Д. Третьяков «29» июля 1987 г. |
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ
СТАФИЛОКОККОЗА ЖИВОТНЫХ
1.1. Стафилококкоз — инфекционная болезнь сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц, характеризующаяся гнойно-воспалительными процессами в различных органах и тканях, артритами, маститами, эндометритами, а в некоторых случаях — сепсисом со смертельным исходом.
1.2. Возбудитель болезни — Staphylococcus aureus — крупные неподвижные грамположительные кокки, располагающиеся неправильными скоплениями, а также одиночно или попарно.
1.3. Диагноз на стафилококков устанавливают по результатам лабораторного исследования с учетом клинических данных.
1.4. Лабораторная диагностика стафилококкоза включает микроскопию мазков, выделение культур стафилококков с последующей их идентификацией и изучением патогенных свойств.
1.5. Для исследования в лабораторию посылают трупы мелких животных и птиц целиком, от трупов крупных животных направляют части паренхиматозных органов, головной мозг, кровь и сердце; от больных животных, в зависимости от клинических признаков — абортированные плоды, истечение из шейки матки, содержимое абсцессов, синовиальную жидкость на воспаленных суставах.
1.6. Патологический материал для исследования на стафилококковую инфекцию от животных, не подвергавшихся лечению антибиотиками, сульфаниламидными или нитрофурановыми препаратами в течение последних 10 дней.
2.1. Из доставленного материала готовят мазки и опрашивают их по Граму.
В мазках обнаруживают крупные грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде гроздьев, в мазках из гноя могут быть парные кокки, короткие цепочки.
3.1. Высевы из патологического материала делают в МПБ, на МПА или молочно-солевой агар (pH сред. 7,2 — 7,4). Высев можно проводить и на кровяной агар.
Посевы инкубируют при температуре 37 — 38 °С в течение 18 - 20 ч.
3.2. В МПБ отмечают интенсивное равномерное помутнение среды, на дне пробирки — рыхлый осадок. Иногда появляется пристеночное серовато-белое кольцо или пленка.
На МПА и молочно-солевом агаре стафилококки образуют круглые с ровными кроями, выпуклые колонии белого, кремового, золотистого или лимонно-желтого цвета.
3.3. У выделенных культур изучают морфологические, культуральные биохимические и патогенные свойства.
3.4. Для изучения биохимических и гемолитических свойств суточную культуру стафилококка пересевают в среды Гисса с глюкозой, лактозой, мальтозой, сахарозой, маннитом, дульцитом и на глюкозо-кровяной агар Нейсслера.
S. aureus ферментирует с образованием кислоту без газа глюкозу, маннит, мальтозу, сахарозу, не ферментирует лактозу и дульцит, на глюкозо-кровяном агаре Нейсслера образует β-гемолиз.
4.1. Определение патогенности проводят в реакции плазмокоагуляции, по дермонекротической пробе или биопробой на цыплятах.
4.2. Постановка реакции плазмокоагуляции.
В реакции используют сухую кроличью плазму, выпускаемую предприятиями Минздрава СССР. Для работы сухую плазму разводят согласно прилагаемому наставлению.
При необходимости приготовление плазмы в лаборатории у кролика берут кровь из ушной вены или сердца в пробирку с 5 %-ным раствором лимонно-кислотного натрия (2 мл раствора на 8 — 10 мл крови). Цитратную кровь центрифугируют: при 3000 об/мин в течение 10 мин, затем плазму отсасывают и переносят в стерильные пробирки, которые закрывают крышками и хранят в холодильнике до 3 нед. Перед употреблением плазму вводят стерильным физиологическим раствором 1:5.
Подготовленную для исследования плазму разливают по 0,5 мл в стерильные уленгутовские пробирки по количеству изучаемых культур. Затем в пробирку вносят 2 капли бульонной или одну петлю агаровой 18 — 24-часовой культуры. Одновременно ставят контроль плазмы без добавления культуры.
Пробирки помещают в термостат при температуре 37 — 38 °С. Учет реакции проводят через каждый час в течение 5 — 6 часов. При отсутствии коагуляции пробирки выдерживают при комнатной температуре 18 ч.
При положительной реакции плазмокоагуляции образуется сгусток, который не выпадает из пробирки при наклоне. В случае, когда коагулирована не вся плазма, сгусток плавает в ней.
4.3. Дермонекротическую пробу ставят на кроликах (лучше белой масти) массой 2 — 2,5 кг. Накануне у кролика на боку в 2 местах выстригают шерсть на площади 2×2 см. Суточную бульонную культуру вводят внутрикожно в выстриженные участки кожи в дозе 0,2 мл.
Наблюдение за кроликами ведут в течение 4 дн.
4.4. При выделении от птиц культур стафилококков, не обладающих плазмокоагулирующими свойствами, их патогенность определяют на 1 - 2-суточных цыплятах.
Суточную бульонную культуру в дозе 0,1 мл вводят 2 цыплятам интраорбитально во внешний уголь глазницы между глазным яблоком и краем орбиты.
Гибель цыплят наступает на 3 — 5 сут.
Культуру считают патогенной при выделении ее из паренхиматозных органов и костного мозга павших цыплят.
Наблюдение за цыплятами ведут в течение 5 сут.
Научно-популярные статьи – полезная информация на сайте ЛИТЕХ
Бактериологический метод (бактериологический анализ)
Классический бактериологический анализ отделяемого из влагалища позволяет оценить как качественный, так и количественный состав бактериальной микрофлоры. Дифференциация и идентификация микроорганизмов – определение родовой, видовой и типовой принадлежности микроорганизмов является наиболее трудоемким и ответственным этапом бактериологического исследования. Он осуществляется на основании изучения целого комплекса свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных.
При идентификации микроорганизмов необходимо работать только с чистой культурой, поскольку присутствие посторонних микроорганизмов может исказить результаты исследования и послужить поводом для ошибочного заключения.
Широкий спектр микрорганизмов, играющих роль в формировании микробиоценоза влагалища, а также в возникновении инфекционного процесса, требует изучения их ферментативной активности путем постановки большого количества различных биохимических реакций, позволяющих по сочетанию полученных результатов в комплексе с другими данными определить вид микроорганизма. Этот раздел работы наиболее трудоемкий, проводится в несколько этапов, требует приготовления большого количества питательных сред, дефицитных реактивов, посуды и т.д., что делает этот метод исследования достаточно дорогостоящим. В связи с этим, в настоящее время для идентификации микроорганизмов используются микрометоды – коммерческие микротест-системы или слайды для биохимической идентификации микроорганизмов различных групп.
Важным фактором, значительно влияющим на успех бактериологической диагностики БВ, является корректный способ взятия и транспортировки исследуемого материала. Так, взятие материала должно всегда осуществляться до начала лечения биотерапевтическими или антибактериальными препаратами или не ранее чем через 10 дней после окончания их приема, а также до начала проведения других местных терапевтических вмешательств. Накануне взятия материала пациентка не должна иметь половую связь. Для предотвращения гибели бактерий, чувствительных к различным факторам окружающей среды, и во избежании размножения в исследуемом материале бактерий-комменсалов транспротировка взятого материала в лабораторию должна осуществляться в максимально короткие сроки и в специальных транспортных средах. В настоящее время бактериологи располагают большим арсеналом коммерческих универсальных транспортных сред, которые способны сохранять в жизнеспособном состоянии весь спектр культивируемых микроорганизмов.
В зависимости от цели исследования, которая определяется в необходимости проведения точной количественной оценки микрофлоры или возможностью ограничиться ориентировочным (полуколичественным) методом, вагинальное отделяемое высевается на питательные среды двумя методами:
1. взятие вагинального отделяемого производится с помощью калиброванной петли (диаметр 3 мм) или ложечки Фолькмана, затем материал погружается в 1 мл жидкой транспортной среды, далее из материала готовят серийные разведения из расчета 10:1(объем/вес) и затем по 0,1 мл высевают на различные селективные питательные среды;
2. взятие вагинального отделяемого производится микробиологическим тампоном и засевается на среду обогощения (тиогликолевая среда) и на половину чашки Петри с селективной питательной средой с последующим рассевом (метод истощения).
Степень роста в первом случае определяется в пересчете на 1 мл вагинального отделяемого (КОЕ/мл). При полуколичественной оценке используется четыре уровня (градации) микробного обсеменения:
со среды обогащения – рост только на жидкой среде, на плотной питательной среде рост отсутствует;
скудный рост – на плотной питательной среде рост до 10 колоний микроорганизмов определенного вида;
умеренный рост – на плотной питательной среде рост от 10 до 100 колоний микроорганизмов одного вида;
умеренный рост – на плотной питательной среде рост от 10 до 100 колоний микроорганизмов одного вида;
Посев проводится на набор стандартных питательных сред, позволяющих выявить максимально возможный спектр микроорганизмов. Питательные среды должны:
• содержать необходимые для питания микроорганизма питательные вещества;
• Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроорганизма;
• иметь достаточную влажность, так как микроорганизмы питаются по законам диффузии и осмоса;
• обладать изотоничностью;
• быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур микроорганизмов.
Для выделения всего спектра факультативно-анаэробных микроорганизмов и определения их количественных характеристик обычно используется агар с добавлением 5% донорской крови.
Стафилококки представляют собой широко распространенную в природе группу микроорганизмов, объединяющую в себе наряду с сапрофитическими и болезнетворные формы с различно выраженной степенью их патогенности и вирулентности. В связи с этим, выделение стафилококков из вагинального содержимого, содержащего смешанную флору, не может являться доказательством их этиологического значения. Только выделение монокультуры стафилококка из закрытых гнойных очагов, независимо от свойств штамма является бесспорным доказательством его патогенности. Для выделения стафилококков используют отечественные питательные среды – желточно-солевой агар Чистовича, молочно-солевой агар или коммерческую среду Staphylococcus agar (Becton Dickinson). Эти среды обладают элективными свойствами, обусловленными высоким содержанием хлорида натрия, а желточно-солевой агар, кроме того, позволяет более четко, чем кровяной агар, дифференцировать патогенные и непатогенные штаммы стафилококка.
Стрептококки выделяют на среде Columbia agar (BioMerioux, Becton Dickinson, Oxoid) с добавлением лошадиной или бараньей дефибринированной крови (5%), налидиксовой кислоты (15 мг/л) и колистина (10 мг/л). Кроме стрептококков на этой среде растут коагулазопозитивные стафилококки. В связи с этим, перед идентификацией бактерии необходимо исследовать на наличие каталазы.
Для выделения энтерококков (стрептококки группы D) используют Enterococcus agar (Serva), Enterococcus agar (Difco), Slanes and Bartley agar или Bile Esculine agar (Oxoid). При проведении количественного исследования посев производится из исходного материала в разведениях 10-3 и 10-5. Во все среды, кроме Bile Esculine agar входит трифенилтетразолий хлорид (ТТХ), который, расщепляясь энтерококками, придает их колониям характерную розовую или малиновую окраску. В состав среды Bile Esculine agar входят соли желчи, к которым устойчивы энтерококки. Кроме того, в среду входят эскулин и цитрат железа. Энтерококки (энтерококк фекалис) способны гидролизовать эскулин с образованием эскулетина и глюкозы. Эскулетин, связываясь с цитратом железа, образует комплекс черного цвета, который придает характерную черную окраску колониям энтерококков и среде вокруг них.
Для выделения грамотрицательных неспорообразующих факультативно-анаэробных бактерий обычно используют среды MACCONKEY agar или Эндо (Oxoid, BioMerioux, Becton Dickinson). При количественном методе исследования посевы на эти среды осуществляют из разведений 10-5 и 10-7. При учете колоний отмечают отдельно лактозонегативные и лактозопозитивные колонии.
Для выделения дрожжеподобных грибов используется среда Сабуро с добавлением хлорамфеникола (400 мг/л). При проведении количественного исследования посев производят из разведения 10-3. Инкубация посевов проводится в течении 24-48 часов при температуре +370С.
Для выделения G.vaginalis используют коммерческие селективные питательные среды Columbia CNA agar (Becton Dickinson), Gardneralla vaginalis agar (Oxoid) или HBT Bilayer medium (BBL) в которые добавляется 10% бараньей или донорской крови. Инкубация посевов проводится при 370С в атмосфере с 5% СО2 в течение 48 часов.
Для транспортировки биологического материала при бактериологическом исследовании на микоплазмы используют только специальные транспортные среды, содержащие лошадиную сыворотку и дрожжевой экстракт производства BioMerioux или Becton Dickinson. Посев материала производится на плотную питательную среду A7 (BioMerioux, Becton Dickinson). Для культивирования, идентификации, количественного определения и определения чувствительности к антибиотикам микоплазм могут быть использованы тест-системы — Mycoplasma DOU (Sanofi Diagnostics Pasteur) или Mycoplasma IST (BioMerioux).
Для выделения лактобактерий чаще всего используют агаризованные среды MRS (Difco, Oxoid). При количественном методе исследования посев проводят из разведений 10-3 и 10-5. Для того чтобы избежать роста дрожжеподобных грибов рода Candida в среду добавляют раствор сорбиновой кислоты в 1 М NaOH из расчета 14 г/л, простерилизованную фильтрованием. Инкубацию проводят в анаэростате с газовой смесью без палладиевого катализатора при +370С в течении 48 часов.
Изоляция анаэробных бактерий остается самой деликатной процедурой. Для выращивания анаэробов необходимо создать определенные условия, сущность которых заключается в удалении молекулярного кислорода из питательной среды и пространства, окружающего эти культуры. Среды должны быть приготовлены ex tempore или, в том случае, если они приготовлены заранее, должны храниться в условиях анаэробиоза. Другим обязательным условием, обеспечивающим выделение анаэробов из исследуемого материала, является внесение большого количества посевного материала в питательную среду.
Самым простым способом удаления растворенного кислорода из питательной среды является кипячение. Непосредственно перед посевом материала пробирки с питательными средами кипятят в водяной бане в течение 10-20 минут. При кипячении из среды вытесняется воздух и, следовательно, удаляется кислород. Свежеприготовленную питательную среду быстро охлаждают, погружая в лед или подставляя под струю холодной воды, чтобы не дать ей насытиться кислородом воздуха, и используют для посева. Для уменьшения диффузии кислорода из воздуха питательные среды заливают сверху стерильным вазелиновым или парафиновым маслом (толщина слоя 1-1,5 см). Посев биологического материала производят пипеткой сквозь масло в наклонном положении пробирки.
В качестве редуцирующих веществ используют глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин, гликокол, глютатион. Активно связываются с кислородом животные ткани паренхиматозных органов. На этом свойстве животных клеток основано приготовление питательной среды Китта-Тароцци, широко применяемой для выращивания анаэробов. В жидкие питательные среды помещают иногда пористые вещества: вату, пемзу, которые адсорбируют на своей поверхности пузырьки воздуха.
Для создания бескислородных условий используют физические, химические и биологические факторы.
Физический способ культивирования анаэробов
Способ Виньяля-вейона. Берут 4-5 пробирок с 0,5% расплавленным и охлажденным до температуры 40-450С сахарным агаром. В содержимое одной из них вносят пипеткой небольшое количество исследуемого материала и тщательно размешивают. Для уменьшения концентрации материала с целью получения изолированных колоний засеянную среду в количестве, соответствующем объему внесенного материала, переносят из 1-й пробирки во 2-ю, из 2-й в 3-ю. Затем содержимым каждой пробирки заполняют капилляры трех пастеровских пипеток.
Чтобы предупредить застывание питательной среды в момент насасывания ее в пипетки, кончик их, пока он не обломан, погружают на 3-5 минут в стерильную воду при температуре 45-500С. После заполнения вытянутый конец трубки запаивают и помещают в стеклянный цилиндр с ватой на дне. Через 2-3 суток в столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов. Выросшие колонии легко изолировать. Для этого капилляр надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию микрорганизма, находящуюся в агаре, извлекают петлей и пересевают в свежую питательную среду.
Выращивание анаэробов в условиях вакуума. Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате или эксикаторе. Исследуемый материал или культуру микроорганизмов засевают в пробирки с жидкой средой или на чашки Петри с плотной питательной средой. Сразу после посева чашки со средами помещаются в микроанаэростат с палладиевым катализатором (Oxoid) для поглощения кислорода и индикатором для выявления свободного кислорода (Disposable anaerobic indicator BBL, Becton Dickinson). Катализатор перед употреблением регенерируют в сухожаровом шкафу при температуре +175-1800С в течение часа. Затем микроанаэростат закрывают, удаляют из него воздух при помощи вакуумного насоса, после чего микроанаэростат заполняют нулевым поверочным азотом. Вновь удаляют газ из микроанаэростата, заполняют его газовой смесью (10% СО2, 10% Н2, 80% N2) и помещают в термостат. Анаэробные условия в микроанаэростате могут быть созданы и при использовании коммерческих газогенерирующих пакетов для анаэробов (BioMerioux; Becton Dickinson). После 48 часов инкубации проводят первый учет чашек с отсевом типичных колоний на жидкие питательные среды для анаэробов (Rosenow cysteine, Diagnostics Pasteur; Schadler with Vitamin K1, BBL, Becton Dickinson; Thioglycolate, Serva) для изучения культуральных свойств микроорганизмов и последующей идентификации, а также отсевов на плотные питательные среды, которые затем культивируют в аэробных условиях, чтобы убедиться, что выросшие микроорганизмы не являются факультативно-анаэробными. После первого учета чашки возвращают в микроанаэростат и инкубируют еще в течение 72 часов. Затем повторно изучают морфологию колоний, обращая особое внимание на появление черного пигмента, и производят отсев в жидкие питательные среды материал из тех колоний, которые отсутствовали при первом учете чашек, т. е. через 48 часов инкубации.
Микроаэрофилы (G.vaginaluis и Lactobacillus sp.) выращиваются в условиях пониженного содержания О2 в атмосфере СО2 в эксикаторе.
Анаэростат – прибор для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях – представляет собой толстостенный металлический цилиндр с герметически привинчивающейся крышкой, на которой имеются вакууметр и два крана для присоединения к вакуум-насосу.
Коммерческие микроанаэростаты (BbioMerioux, Becton Dickinson, Oxoid) представляют собой пластиковые цилиндры различного объема с металлическими плотно закрывающимися крышками, на которых также имеются вакууметр и два крана.
Химические методы выращивания анаэробов
(Метод Аристовского)
Материал, исследуемый на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно которого кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфат натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда устанавливают на подставке чашки с посевами. Прибор помещают в термостат при температуре 370С на 24-48 часов.
Биологический метод выращивания анаэробов
(по Фортнеру)
В чашку Петри наливают толстым слоем 5% кровяной агар с 1-2% глюкозы. Посередине чашки в питательной среде вырезают стерильным скальпелем канавку шириной 1-1,5 см, которая делит питательную среду на две половины. Одну из них засевают культурой анаэробов или исследуемым на их наличие биологическим материалом, другую половину – культурой аэробов: Serratia marcescens или E.coli. Перед посевом чашки подсушивают в термостате, чтобы анаэробы вместе с капельками влаги не могли попасть на другую сторону чашки. Засеянные чашки закрывают, а свободное пространство между дном и крышкой заклеивают лейкопластырем, чтобы предупредить поступление в чашку кислорода извне. В термостате чашки устанавливают вверх дном. Быстрорастущие аэробы, поглощая находящийся в чашке кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробов.
Большинство грамотрицательных анаэробных бактерий могут быть изолированы на средах с добавлением канамицина (100 мг/л), ванкомицина (7,5 мг/л), гемина (10 мг/л), витамина К3 (менадион, 1,5 мг/л) или К1(фитоменадион, 1,5 мг/л), а также бараньих эритроцитов (5%). К базовым относятся среды Columbia agar Base (BBL, Becton Dickinson; BioMerioux), Schaedler agar или Wilkins Chalgren agar (Oxoid). При количественном методе исследования материал засевают из 10-6, 10-7 и 10-8 разведений. Срок инкубирования составляет 48 часов при температуре 350С.
Для выделения бифидобактерий используют среду Блаурокка. Для предотвращения роста аэробных бактерий в среду добавляют азид натрия в концентрации 100 мг/л. При количественном методе исследования посев производят из 10-5, 10-7 и 10-9 разведений. При полуколичественном методе исследования посев проводят методом агаровых столбиков в полужидкой питательной среде, либо на плотной питательной среде на чашке Петри. Инкубацию проводят в микроанаэростате при +370С в течении 48 часов. В том случае, если посев производился в толщу среды, после инкубации отмечают образование зоны задержки роста и газообразование. В агаре бифидобактерии образуют характерные колонии, напоминающие гречишные зерна, но могут также образовывать колонии в форме дисков.
Грамположительные анаэробные кокки выделяют на базовых средах (Columbia agar Base и др. см. выше), с добавлением бараньей крови (5%), налидиксовой кислоты (10 мг/л) и колистина (10 мг/л) или фенилэтилалкола (2,5 г/л).
Выделение бактерий рода Mobiluncus проводят с использованием Columbia agar Base с добавлением 2,5% лошадиной сыворотки, 15 мкг/мл налидиксовой кислоты и 1,0 мкг/мл тинидазола. Возможно использование и другой селективной среды – Columbia agar Base с добавлением 5% бараньей крови, 10 мкг/мл колистина и 15 мкг/мл налидиксовой кислоты. Инкубация посевов производится в анаэробных условиях 4-5 дней при температуре +370С.
Для выделения клостридий используют плотную среду RCM (Oxoid). В прбирки с расплавленной средой, разлитой по 9 мл и охлажденной до +480С, засевают взятый материал (при количественном методе исследования посев производят из 10-3, 10-5 и 10-7 разведений). Быстро ресуспендируют, затем в каждую пробирку добавляют небольшое количество (1,5 см) расплавленной среды RCM, содержащей метиленовую синьку в концентрации 1:20000 для того, чтобы предохранить среду от диффузии кислорода. Учет результатов производится через 16-18 часов инкубации. Для выделения C.perfringens используют селективную питательную среду TSC (Oxoid). В среду добавляют Д-циклодекстрин (400 мг/л) и эмульсию яичного желтка (50 мг/л) (Oxoid). С.perfringens на этой среде приобретают черный цвет, из за содержания в ней метабисульфита натрия и цитрата железа. Наличие эмульсии яичного желтка позволяет различить лецитиназопозитивные клостридии.
Культуральные признаки микрооганизмов определяются характером их роста на питательных средах. Будучи постоянными для каждого вида микроорганизма, они являются важным диагностическим признаком.
Идентификация выделенных чистых культур бактерий в зависимости от целей может быть ориентировочной (определение рода) или финальной (определение вида).
Видовая идентификация выделенных чистых культур бактерий проводится общепринятыми методами с использованием номенклатуры Берджи и сведений, обобщенных в руководствах по клинической микробиологии.
При видовой идентификации стафилококков учитываются пигмент, способность гемолизировать эритроциты, продуцировать лецитиназу, коагулировать плазму. Характерная пигментация колоний патогенных стафилококков, относящиеся к виду S. aureus, определяется при их росте на селективной питательной среде, содержащей высокую концентрацию NaCl (7,5%), маннит в качестве источника углеводов и желатин. Патогенные стафилококки, дают на этой среде колонии с желтой пигментацией. Ферментацию маннита определяют путем нанесения на изолированную колонию капли раствора бромтимолового синего (0,04%). В случае смены цвета красителя на желтый реакция считается положительной. На этой же среде возможно определение способности стафилококков сбраживать желатину. Для этого на изолированную колонию наносят каплю 20% водного раствора сульфосалициловой кислоты (реакция Stone). В случае положительной реакции через 10 минут вокруг колонии появляется прозрачная зона. Для подтверждения принадлежности бактерий к виду S.aureus проводятся тесты на выявление плазмокоагулазы и ДНК-азы. ДНК-азная активность выявляется на среде DNA agar (Oxoid) путем пересева материала из подозрительных колоний штрихами от центра к краю чашки. После инкубирования нуклеазная активность стафилококков выявляется при нанесении на среду красителя толуидинового синего (0,1%), при этом вокруг колоний, образованных S. aureus, появляется зона порозовения среды. Для подтверждения принадлежности стафилококков к виду S.aureus можно также воспользоваться идентификационными системами Staphyslide – Test (BioMerioux), принцип работы которых основан на агглюцинации эритроцитов, сенсибилизированных человеческим фибриногеном. Биохимическая идентификация стафилококков проводится при помощи тест-систем API 20 Staph и RAPIDEC staph (BioMerioux).
Видовая идентификация стрептококков основана на их биохимической активности и может быть проведена при использовании тест-системы API 20 Strept (BioMerioux).
Видовая идентификация грамотрицательных неспорообразующих факультативно-анаэробных бактерий производится при помощи тест систем API 20E (BioMerioux). Оксидазопозитивные бактерии (Pseudomonas spp., Aeromonas spp. и др.) идентифицируются с помощью тест системы API 20NE (BioMerioux). Для идентификации лактозопозитивных бактерий могут быть использованы тест-системы Enterofermtub, а лактозонегативных Oxifermtub (BioMerioux, Becton Dickinson). Кроме того, для идентификации всех грамотрицательных бактерий может быть использована тест-система BBL CRYSTAL (Becton Dickinson) или полуавтоматическая система «Sceptor» (Becton Dickinson) с использованием полистироловых планшетов для видовой идентификации грамотрицательных факультативно-анаэробных бактерий.
При отсутствии вышеперечисленных тест-систем энтеробактерии могут быть идентифицированы с помощю 12 биохимических тестов, которые выявляют:
• способность энтеробактерий ферментировать глюкозу, лактозу, мальтозу,
• маннит, сахарозу;
• способность расти на цитратном агаре Симмонса;
• отношение к мочевине и молонату натрия;
• подвижность и способность продуцировать сероводород и индол.
Для видовой идентификации C.albicans, обладающей способностью продуцировать характерные для них хламидоспоры, подозрительные колонии (белые или розовые) пересевают со среды Сабуро на среду PCB (Diagnostics Pasteur) методом укола в толщу среды. Пробирки с пересевами инкубируют при комнатной температуре 24-48 часов. После инкубации определяют небольшой участок в зоне роста микроорганизмов и делают разветвленный мазок между двумя стеклами. Мазки изучают с помощью темнопольной микроскопии, при этом хламидоспоры ищут в зонах образования филаментов с находящимися на них бластоспорами. В случае отсутствия хламидоспор проводят повторный пересев. Если при этом вновь получают отрицательный результат, проводят биохимическую идентификацию дрожжеподобных грибов при помощи системы API 20C Aux (BioMerioux) или Micotube (BioMerioux, Becton Dickinson). Также видовая идентификация грибов рода Candida может быть проведена с помощью микробиологической системы Quantum (Abbot).
При идентификации гарднереллы учитывается морфология колоний на селективной питательной среде через 2-4 дня инкубации. Обычно колонии бывают выпуклыми, шарообразными с гемолизом. При микроскопии – мелкие палочки или коккобациллы, по отношению к окраске по Граму – грамвариабильные. Каталазо- и оксидазоотрицательные, продуцируют кислоту при гидролизе крахмала и мальтозы, чувствительны к метронидазолу и триметоприму.
Ориентировочная идентификация лактобактерий проводится микроскопическим методом (окраска мазка по Граму), которая позволяет оценить морфологию клеток. В мазках лактобактерии имеют вид прямых палочек, расположенных в виде блоков, не имеют спор. Бактерии рода Lactobacillus не образуют каталазы и оксидазы.
Идентификация факультативно-анаэробных лактобактерий проводится с помощью систем индикаторных бумажных для идентификации лактобактерий (СИБ-Л) и планшета биохимического, дифференцирующего лактобактерии (ПБДЛ) (НИИЭМ, г. Нижний Новгород). Идентификации подвергаются грамположительные каталазоотрицательные палочки, выросшие через 48 часов на среде MRS. Для выделения чистой культуры проводится двукратное пассирование отдельных колоний. Дифференциация основана на выявлении ферментативных свойств штаммов по их действию на углеводы и многоатомные спирты (глюкоза, меллибоза, манноза, мелецитоза, рамноза, салицин). Учет результатов проводится через 72 часа инкубации при температуре +370С. Интерпритация результатов биохимического тестирования производится при помощи таблиц биохимических свойств лактобактерий.
Анаэробные штаммы лактобактерий идентифицируются с помощью полуавтоматической системы «Sceptor» (Becton Dickinson), после предварительного исключения способности тестируемых бактерий к спорообразованию.
Ориентировочная идентификация облигатно-анаэробных грамотрицательных бактерий проводится по следующим критериям: рост в присутствии желчи (диски 5 мг, BioMerioux), бриллиантового зеленого (диски 100 мкг, BioMerioux) и канамицина (диски 1000 мкг, BBL, Becton Dickinson), ферментация глюкозы, наличие черного пигмента. Используя эти тесты, бактерии делят на 4 группы:
1 группа — Bacteroides fragilis. Все бактерии этой группы сбраживают глюкозу и способны расти в присутствии желчи и канамицина, бриллилантовый зеленый подавляет их рост;
2 группа – бактерии рода Prevotella. Бактерии этой группы растут в присутствии канамицина, но не растут в присутствии желчи и бриллиантового зеленого, обладают сахаролитической активностью – сбраживают глюкозу. Некоторые виды могут образовывать черный пигмент на кровяных средах после 5-7 дней инкубации;
3 группа – род Porphyromonas. Асахоролитические бактерии, не растущие в присутствии желчи и бриллиантового зеленого, но растущие в присутствии канамицина, образуют черный пигмент. Бактерии этой группы чувствительны еще и к ванкомицину (диски 5 мкг, BBL, Becton Dickinson).
4 группа – бактерии рода Fusobacterium. Эти бактерии не растут в присутствии желчи и канамицина, но растут в присутствии бриллиантового зеленого.
Для выявления группы Prevotella melaninogenica/ Porphyromonas asacharolytica и некоторых других строгих анаэробов (Fusobacterium spp., Clostridium dificile) первичные посевы возможно исследовать в лучах длинноволнового ультрафиолетового излучения, при использовании люминисцентного микроскопа с фильтрами ФС 1-2 и СЗС 24-4. При наличии микроорганизмов группы Pr.melaninogenica / P.asacharoliticus колонии светятся малиновым цветом. Зеленое свечение характерно для Fusobacterium spp. или Clоstridium dificile.
Финальная идентификация облигатно-анаэробных грамотрицательных бактерий проводится с применением биохимической идентификационной системы для этих бактерий API (BioMerioux), а также на полуавтоматической системе «Sceptor» (Becton Dickinson) c использованием полистироловых планшетов для грамотрицательных облигатно-анаэробных бактерий.
Грамположительные анаэробные кокки могут быть идентифицированы на основании их чувствительности к новобиоцину (диски 25 мкг) и по их биохимическому профилю с применением биохимической идентификационной системы rapid ID32 A (API – BioMerioux) или полуавтоматической системы «Sceptor» (Becton Dickinson) с использованием полистироловых планшетов для видовой идентификации грамположительных анаэробных кокков.
Ориентировочная идентификация бифидобактерий проводится микроскопическим методом (окраска мазка по Граму), который позволяет оценить морфологию клеток. В мазках бифидобактерии обычно имеют вид прямых или разветвленных палочек X,Y и V-образной формы с утолщениями на концах. Бактерии рода Bifidobacterium синтезируют фермент фруктозо-6-фосфатфосфокетолазу (Ф6-ФФК), не образуют индол и каталазу, не восстанавливают нитраты, не сбраживают адонит (рубит), дульцит, эритрит, глицерин, рамнозу и альфа-метил-D-маннозид.
Биохимическая идентификация клостридий может быть осуществлена при помощи идентификационных систем API 20A или RapID Ana II (BioMerioux).
Видовая идентификация гарднерелл проводится по морфологическим критериям (окраска по Граму – грамвариабельные коккобациллы) и на основании биохимической идентификации при помощи идентификационных систем API 20 Strep или API Zym (BioMerioux).
Ввиду отсутствия единых представлений о показателях нормы из-за, прежде всего, технической сложности культивирования облигатно-анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов в настоящее время не определены четкие критерии нормоценоза вагинальной микрофлоры, пограничных состояний и БВ. Чаще всего при бактериологической диагностике вагинального отделяемого используются следующие критерии:
Нормоценоз
• общее количество микроорганизмов в вагинальном отделяемом составляет 106-108 КОЕ/мл;
• абсолютное преобладание лактобактерий;
• условно-патогенные микроорганизмы в низком титре — <104 КОЕ/мл;
Бактериальный вагиноз
• массивное микробное обсеменение вагинального отделяемого с общим количеством микроорганизмов, превышающим 109 КОЕ/мл;
• отсутствие лактобактерий или резкое снижение их титра до 104 КОЕ/мл и менее;
• полимикробный характер микрофлоры с абсолютным преобладанием облигатно-анаэробных микроорганизмов и G.vaginalis [17].
При проведении классического бактериологического исследования необходимо учитывать тот факт, что само по себе обнаружение отдельных видов облигатных анаэробов и G.vaginalis не всегда равнозначно микробиологическому диагнозу БВ, т.к. G.vaginalis и облигатно-анаэробные микроорганизмы могут быть частью индигенной микрофлоры. Поэтому, бактериологический анализ должен, в первую очередь, основываться на интегральной оценке микрофлоры с учетом не только ее видового и количественного состава, но и количественного соотношения отдельных ее компонентов.
Биохимический и молекулярный анализ клинических изолятов Staphylococcus aureus у госпитализированных пациентов
Золотистый стафилококк является условно-патогенным микроорганизмом человека и животных, вызывающим множество заболеваний. Всего было получено 100 изолята Staphylococcus aureus из клинических образцов, взятых у госпитализированных пациентов. Предполагаемые клинические изоляты Staphylococcus aureus были фенотипически идентифицированы с помощью различных биохимических тестов.Молекулярная идентификация была проведена с помощью ПЦР с использованием видоспецифичных пар праймеров 16S рРНК, и, наконец, 100 изолятов оказались положительными как Staphylococcus aureus . Отобранные изоляты были дополнительно проанализированы с помощью нескольких тестов микробиологической диагностики, включая тесты на гидролиз желатина, протеазу и липазу. Было обнаружено, что 78%, 81% и 51% изолятов были положительными по гидролизу желатина, протеазной и липазной активности соответственно. Анализ антибиограмм выделенных штаммов Staphylococcus aureus по отношению к различным антимикробным агентам выявил характер устойчивости от 57 до 96%.Наше исследование также показывает, что 70% штаммов принадлежат к MRSA, 54,3% — к VRSA и 54,3% — к MRSA и VRSA. Все идентифицированные изоляты были подвергнуты обнаружению генов mec A, nuc и hlb , и было обнаружено, что 70%, 84% и 40% содержат mec A, nuc и hlb . гены соответственно. Текущее исследование очень важно и информативно для инфекций Staphylococcus aureus с высокой степенью множественной лекарственной устойчивости, включая также метициллин и ванкомицин.
1. Введение
Staphylococcus aureus — один из наиболее вредных видов стафилококков. Это основная причина бактериемии, пневмонии, миокардита, острого эндокардита, перикардита, остеомиелита, энцефалита, менингита, хориоамнионита, мастита и синдрома ожоговой кожи [1]. Заболеваемость и смертность людей в больницах в значительной степени вызваны стафилококковой бактериемией [2]. Патогенная способность Staphylococcus aureus явно зависит от продукции экзопротеинов и токсинов.Вид идентифицируется на основе множества общепринятых физиологических или биохимических признаков. Ключевыми признаками для Staphylococcus aureus являются пигмент колонии, свободная коагулаза, фактор слипания, белок А, термостабильная нуклеаза, липаза и продукция кислоты из маннита [1]. Кроме того, золотистого стафилококка можно идентифицировать методами ПЦР. Сообщается, что ген 16S рРНК является наиболее полезным и широко изученным таксономическим маркером [3].
Из-за чрезмерного и неконтролируемого использования антибиотиков организм становится множественной лекарственной устойчивостью, оставляя мало терапевтических возможностей для лечения против него [4].Появление метициллин-резистентного Staphylococcus aureus (MRSA) при внутрибольничных (НА) инфекциях подчеркивает, что этот вид является потенциальным патогеном, способным справиться с антимикробным агентом [5]. Ген mec A [6, 7] синтезирует пенициллин-связывающий белок (PBP2a) и является причиной устойчивости MRSA к метициллину. Этот ген находится на стафилококковой кассетной хромосоме (SCC) [8]. Кассетная стафилококковая хромосома — крупный генетический мобильный элемент, который различается по размеру и генетическому составу среди штаммов MRSA [9].Колонизированный персонал больниц и инфицированные пациенты являются основным источником MRSA [10]. Знания о выборе антибиотиков для лечения важны, так как картина чувствительности MRSA к антибиотикам может варьироваться от региона к региону [11]. Для лечения стафилококковых инфекций использовались различные классы антибиотиков, включая бета-лактамы, гликопептиды, липопептиды, оксазолидоны, аминогликозиды, макролиды и фторхинолоны [12–15]. Устойчивость стафилококков возникает к различным противомикробным препаратам, а также к ванкомицину.Следовательно, устойчивость к ванкомицину является еще одной проблемой для лечения инфекций, вызываемых этой бактерией [16].
Настоящая работа была запланирована для идентификации и характеристики изолятов Staphylococcus aureus , собранных из мазка из послеоперационной раны пациентов мужского и женского пола, госпитализированных в различные отделения Медицинского колледжа и больницы Миднапура, Миднапор, Западная Бенгалия, Индия. Цели настоящего исследования состояли в том, чтобы выяснить уровень устойчивости к MRSA и ванкомицину Staphylococcus aureus (VRSA) при внутрибольничных инфекциях и определить характер ответа на антибиотики.
2. Материалы и методы
2.1. Бактериальные изоляты и методы культивирования
С января 2013 г. по октябрь 2014 г. было собрано в общей сложности 165 недубликатных бактериальных изолятов из мужских хирургических отделений, ортопедического отделения и отделения ожогов и ран Медицинского колледжа и больницы Миднапора, Миднапор, Западная Бенгалия, Индия. . Были включены только штаммы, полученные из чистой культуры. Был включен только первый штамм от каждого пациента. Все штаммы были собраны в асептических условиях, перенесены в среду с агаром с маннитовой солью (MSA), HiMedia (Mumbai) и инкубированы в течение ночи при 37 ° C [17].
2.2. Выделение и фенотипическая идентификация
Staphylococcus aureusКаждый выделенный бактериальный образец из среды MSA первоначально оценивали на 5% агаре с овечьей кровью и инкубировали в течение ночи при 37 ° C. Каждая культура подвергалась окрашиванию по Граму и тестировалась на продукцию каталазы, свободной коагулазы, желтого пигмента и термонуклеазы (TNase), согласно Lancette и Tatini [18].
2.3. Молекулярная идентификация посредством ПЦР-амплификации гена 16S рРНК
. Бактериальные изоляты, которые, как было установлено, по определенным фенотипическим признакам были Staphylococcus aureus , были дополнительно протестированы с помощью ПЦР для подтверждения с использованием конкретных пар праймеров 16S рРНК (Таблица 1).Эти праймеры амплифицируют область 228 п.н. фрагмента гена 16S рРНК Staphylococcus aureus , который является высококонсервативным на уровне видов. Программирование ПЦР начиналось с начальной стадии денатурации при 94 ° C в течение 2 минут, за которыми следовали 35 циклов при 94 ° C в течение 30 секунд, 50 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 45 секунд, заканчивая финальной стадией расширения в 72 ° C в течение 4 мин. S. aureus ATCC 25923 использовали в качестве положительного контроля в этом эксперименте.
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.4. Биохимическая характеристика
Staphylococcus aureus ШтаммыШтаммы бактерий, которые были подтверждены как Staphylococcus aureus при видоспецифическом скрининге 16S рРНК, были дополнительно проанализированы с помощью нескольких микробиологических диагностических тестов, включая ферментацию маннита и рост при высокой концентрации соли, гидролиз желатина, гидролиз мочевины, протеазная активность на агаровой среде с молоком, продукция липазы на агаровой среде с яичным желтком (HiMedia, Mumbai) и гидролиз эскулина стандартными методами [23–26].Гемолитическую активность определяли на агаре с овечьей кровью (15 мл 5% овечьей крови в триптиказо-соевом агаре наложили на 10 мл основы кровяного агара) согласно Rodgers et al. [27].
2,5. Профиль чувствительности к антибиотикам изолированного
Staphylococcus aureus к некоторым противомикробным агентам и обнаружение VRSAЧувствительность изолятов Staphylococcus aureus к различным противомикробным агентам определяли методом дисковой диффузии с использованием коммерческих дисков, полученных от HiMedia [28].Антимикробные диски: ампициллин (30 мкг г), стрептомицин (10 мкг г), канамицин (30 мкг г), эритромицин (10 мкг г), хлорамфеникол (30 мкг г). ), цефокситин (30 мкл г), налидиксовая кислота (30 мкг г) и новобиоцин (30 мкг г). Клинические штаммы были классифицированы как чувствительные и устойчивые в соответствии с критериями оценки, разработанными в соответствии с рекомендациями Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) [29].Чтобы идентифицировать VSSA и VRSA, МИК ванкомицина определяли методом разведения микробов с использованием бульона Мюллера-Хинтона в соответствии с рекомендациями Института клинических лабораторных стандартов [29]. Staphylococcus aureus ATCC 29213 использовали в качестве чувствительных к ванкомицину контролей и Enterococcus faecalis ATCC 51299 в качестве устойчивых к ванкомицину контролей.
2.6. Обнаружение
mec A, nuc и hlb ГеныStaphylococcus aureus изолятов были подвергнуты обнаружению mec A, nuc и hlb пар специфичных генов с помощью ПЦР. Таблица 1).Амплификацию проводили в термоциклере (Eppendorf, Германия), начиная с начальной стадии денатурации при 95 ° C в течение 2 минут, затем следовали 35 циклов при 94 ° C в течение 1 минуты, 55 ° C в течение 45 секунд, 50 ° C в течение 50 секунд. , и 52 ° в течение 40 секунд для гена mec A, nuc и hlb , соответственно, и обычное удлинение при 72 ° C в течение 2 минут, заканчивающееся этапом окончательного удлинения при 72 ° C в течение 4 минут. . Для быстрой экстракции ДНК из Staphylococcus aureus от одной до пяти бактериальных колоний суспендировали в 50 мкл л стерильной воды Milli Q (Millipore-Synergy®, Индия) и нагревали при 99 ° C в течение 10 мин в аппарате 500 мк . L трубка Эппендорфа.После центрифуги при 14000 об / мин. В течение 10 мин в мини-центрифуге (Eppendorf, Германия) 2 мкл л супернатанта использовали в качестве матрицы.
3. Результаты
В настоящем исследовании у госпитализированных пациентов было взято 165 недупликативных образцов. Из 165 образцов 100 штаммов (60,60%) были выделены из селективной среды MSA, а затем эти изоляты были идентифицированы на Staphylococcus aureus с помощью различных биохимических тестов (Таблица 2). Окрашивание по Граму, каталаза, коагулаза и термонуклеаза были важными фенотипическими маркерами идентификации Staphylococcus aureus .В этом исследовании мы обнаружили, что 100%, 92% и 84% изолятов были положительными по каталазе, коагулазе и термостабильной нуклеазе соответственно (таблица 2). Все изоляты Staphylococcus aureus (100) в этом исследовании были подтверждены с помощью ПЦР с использованием пары видоспецифичных праймеров (таблица 1). Фермент желатиназа секретируется Staphylococcus aureus , разжижающим желатиновый белок. Настоящее исследование также показало, что 78% изолятов Staphylococcus aureus были способны продуцировать желатиназу.В таблице 3 81%, 51% и 48% выделенных штаммов продуцировали протеазу, липазу и колонии с небелым пигментом, соответственно. Настоящее исследование показало, что 40% изолятов Staphylococcus aureus были способны образовывать очищающую зону вокруг их роста на среде с кровяным агаром (таблица 4), демонстрируя, что они могут продуцировать гемолизин. Показатели резистентности Staphylococcus aureus варьировались от 57 до 96%. Устойчивость изолятов Staphylococcus aureus к ампициллину (96%), цефокситину (70%), канамицину (74%), эритромицину (81%), стрептомицину (75%), налидиксовой кислоте (89%), новобиоцину (75%) , и левомицетин (57%) (таблица 5).Было обнаружено, что все штаммы Staphylococcus aureus , выделенные в этом исследовании, обладают множественной лекарственной устойчивостью. В настоящем исследовании мы обнаружили, что уровень распространенности MRSA составляет 70%. Наше исследование также показало, что 54,3% выделенных Staphylococcus aureus были устойчивыми к ванкомицину (Таблица 6), а 54,3% устойчивых к метициллину Staphylococcus aureus были устойчивы к ванкомицину. Согласно руководству CLSI [29] штаммы, имеющие МИК ванкомицина 4–8 мкг мкг / мл, были промежуточными по ванкомицину Staphylococcus aureus .Далее мы обнаружили, что 38,6% штаммов были промежуточными по ванкомицину Staphylococcus aureus . Все фенотипически идентифицированные устойчивые к метициллину штаммы Staphylococcus aureus (MRSA) обладают геном mec A. Внеклеточная термостабильная эндонуклеаза (TNase), которая разрезает как ДНК, так и РНК, была продуцирована Staphylococcus aureus , характеризующимся своим геном nuc , специфичным для Staphylococcus aureus [21]. Было обнаружено, что 84% штаммов содержат ген nuc .ПЦР-анализ также выявил 40 штаммов, несущих ген hlb , ответственный за бета-гемолиз.
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Положительное число; процент указан в скобках. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Положительное число; процент указан в скобках. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Положительное число; процент указан в скобках. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Положительное число; процент указан в скобках; VSSA: чувствительный к ванкомицину Staphylococcus aureus ; VISA: промежуточный ванкомицин Staphylococcus aureus ; VRSA: устойчивый к ванкомицину Staphylococcus aureus ; MRSA: метициллин-устойчивый Staphylococcus aureus ; MSSA: метициллин-чувствительный Staphylococcus aureus . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Обсуждение
В настоящем исследовании в общей сложности сто (60,60%) изолятов клинических бактериальных образцов из мужских хирургических отделений, ортопедического отделения и отделения ожогов и ран Медицинского колледжа и больницы Миднапура, Миднапур, США. Западная Бенгалия, Индия, была подтверждена как Staphylococcus aureus . Виджаялакшми [30] сообщил, что инфекция области хирургического вмешательства, вызванная Staphylococcus aureus , обнаружена в 43,2% случаев в Хайдарабаде, Индия. Окрашивание по Граму, каталаза, коагулаза и термонуклеаза были важными фенотипическими маркерами идентификации Staphylococcus aureus [1].В этом исследовании мы обнаружили, что 92% изолятов были коагулазо-положительными, но остальные штаммы были коагулазо-отрицательными, хотя было обнаружено, что они были Staphylococcus aureus , что подтверждено анализом ПЦР с использованием праймеров 16S рРНК, специфичных для этого вида. Этот результат коррелирует с данными Кормана [31]. Мэтьюз и др. и Rukumani et al. [32, 33] также обнаружили атипичный коагулазонегативный Staphylococcus aureus в пищевых продуктах и клинических образцах соответственно. Sanford et al.[34] сообщили, что большинство клинических штаммов Staphylococcus aureus , ассоциированных с пневмонией, продуцировали термостабильные ДНКазы (88%) и протеазы (94%). Настоящее исследование показало, что 84% и 81% клинических штаммов продуцируют термостабильные ДНКазы и протеазы соответственно. Staphylococcus aureus , устойчивые к метициллину, представляют собой опасные для жизни бактерии в больничных условиях [5]. Исследования показывают, что большинство штаммов MRSA связано с внутрибольничной колонизацией и инфекциями [35].Все штаммы Staphylococcus aureus , выделенные в этом исследовании, обладали множественной лекарственной устойчивостью. ПЦР-амплификация гена mec A была положительной в 70% изолятов. Хан и др. [36] сообщили, что mec A, несущие штаммы Staphylococcus aureus с множественной лекарственной устойчивостью, были обнаружены у персонала больницы в ведущей больнице в Северной Индии. Уровень распространенности MRSA составил 44% в больнице третичной медицинской помощи, AIIMS, Нью-Дели [35]. В настоящем исследовании мы обнаружили, что уровень распространенности MRSA составляет 70%.Этот вывод подтверждается Баучером и Кори [5]. Они сообщили, что частота устойчивых к метициллину инфекций Staphylococcus aureus (MRSA) постоянно увеличивается при инфекциях, связанных с больницей. Повышенная распространенность инфекции, вызванной MRSA, привела к использованию гликопептидов в терапевтических целях [10]. Мы обнаружили, что 54,3% метициллин-устойчивых изолятов Staphylococcus aureus также были устойчивы к ванкомицину. Устойчивость к ванкомицину была также обнаружена в отделениях интенсивной терапии больниц третичного уровня в Хайдарабаде среди изолятов MRSA [37].Yaseen et al. [38] сообщили о высокой распространенности VRSA среди MRSA с множественной лекарственной устойчивостью у пациентов больницы Al-Jumhuory в Мосуле, Ирак, и это аналогично нашим результатам. Тивари и Сен [39] также сообщили о появлении устойчивого к ванкомицину Staphylococcus aureus (VRSA) из северной части Индии. Ген nuc используется для идентификации штаммов Staphylococcus aureus [21]. Среди 100 клинических образцов те, которые были идентифицированы как Staphylococcus aureus , 84% оказались положительными на nuc .Sahebnasagh et al. [40] обнаружили, что в больницах Тегерана, Иран, 80,2% изолятов были nuc положительными. В нашем исследовании процентное содержание гена hlb в изолятах Staphylococcus aureus составило 40. Это исследование можно сравнить с исследованием, проведенным Rusenova et al. [41], которые показали, что 31 изолят MRSA (42,5%) были положительными на бета-токсин. Однако наши данные не могли охватить все население; однако, по крайней мере, в помещении этой больницы, можно сказать, что MRSA и VRSA преобладают в больничной среде.В связи с этим предлагается проводить периодический обзор инфекций, связанных с больницей, включая тестирование на чувствительность к противомикробным препаратам. Это было бы полезно при разработке политики в отношении антибиотиков для инфекционного контроля и снижения заболеваемости MRSA и VRSA с множественной лекарственной устойчивостью.
5. Заключение
Настоящее исследование показывает высокий уровень инфекций Staphylococcus aureus с множественной лекарственной устойчивостью в хирургическом отделении, ортопедическом отделении и отделении ожогов и ран в условиях больницы.Возникновение мультирезистентных форм патогенного Staphylococcus aureus является мировой проблемой клинической медицины. Распространенность изолятов MRSA увеличивается в больничных условиях, и эти изоляты более устойчивы к ванкомицину, чем ранее изолированные MRSA. Обычный метод быстрой идентификации, основанный на фенотипических и генотипических признаках, подходит для клинических лабораторных процедур.
Конкурирующие интересы
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Благодарности
Авторы благодарны всем пациентам за сотрудничество в проведении исследования. Мы также благодарим доктора Т. К. Патака, лабораторию микробиологии, Медицинский колледж и больницу Миднапура, за предоставление клинических образцов и штаммов.
Биохимический тест на Staphylococcus aureus
На главную »Биохимический тест на бактерии» Биохимический тест на Staphylococcus aureus
Биохимический тест на Staphylococcus aureus| Основные характеристики | Свойства ( Staphylococcus aureus ) |
| Капсула | Без капсулы |
| Каталаза | Положительный (+ ve) |
| Цитрат | Положительный (+ ve) |
| Коагулаза | Положительный (+ ve) |
| Газ | Отрицательный (-ve) |
| Гидролиз желатина | Положительный (+ ve) |
| Окрашивание по грамму | Положительный (+ ve) |
| h3S | Отрицательный (-ve) |
| Гемолиз | Положительный (+ ve) — бета |
| Индол | Отрицательный (-ve) |
| Подвижность | Отрицательный (-ve) |
| MR (метиловый красный) | Положительный (+ ve) |
| Снижение содержания нитратов | Положительный (+ ve) |
| OF (окислительно-ферментативный) | Ферментативный |
| Оксидаза | Отрицательный (-ve) |
| Пигмент | В основном положительные (+ ve) |
| PYR | Отрицательный (-ve) |
| Форма | Коччи |
| Спора | Без спор |
| Уреаза | Положительный (+ ve) |
| VP (Voges Proskauer) | Положительный (+ ve) |
| Ферментация | |
| Арабиноза | Отрицательный (-ve) |
| Целлобиоза | Отрицательный (-ve) |
| DNase | Положительный (+ ve) |
| Фруктоза | Положительный (+ ve) |
| Галактоза | Положительный (+ ve) |
| Глюкоза | Положительный (+ ve) |
| Лактоза | Положительный (+ ve) |
| Мальтоза | Положительный (+ ve) |
| Маннитол | Положительный (+ ve) |
| манноза | Положительный (+ ve) |
| Рафиноза | Отрицательный (-ve) |
| Рибоза | Положительный (+ ve) |
| Салицин | Отрицательный (-ve) |
| Сахароза | Положительный (+ ve) |
| трегалоза | Положительный (+ ve) |
| Ксилоза | Отрицательный (-ve) |
| Ферментативные реакции | |
| Производство ацетоина | Положительный (+ ve) |
| Щелочная фосфатаза | Положительный (+ ve) |
| Аргининдегидролаза | Положительный (+ ve) |
| Гиалуродиназа | Положительный (+ ve) |
| Липаза | Положительный (+ ve) |
| Орнитин декарбоксилаза | Отрицательный (-ve) |
Классификация стафилококков по химическим и биохимическим свойствам
Albersheim, P., Невинс, Д. Дж., Инглиш, П. Д., Карр, А .: Метод анализа сахаров в полисахаридах клеточной стенки растений с помощью газожидкостной хроматографии. Углеводы. Res. 5 , 340–345 (1967)
Google Scholar
Арчибальд А. Р., Баддили Дж., Баттон Д. Глицерин тейхоевая кислота стенок Staphylococcus lactis I3. Biochem. J. 110 , 543–557 (1968a)
Google Scholar
Арчибальд, А.Р., Баддили, Дж., Баттон, Д., Хептинстолл, С., Стаффорд, Г. Х .: Появление полимеров, содержащих N-ацетилглюкозамин-1-фосфат, в стенках бактериальных клеток. Nature (Лондон) 219 , 855–856 (1968b).
Google Scholar
Арчибальд А. Р., Баддили Дж., Хекелс Дж. Э., Хептинстолл С .: Дальнейшие исследования глицеринтейхоевой кислоты стенок Staphylococcus lactis I3. Расположение фосфодиэфирных групп и их склонность к гидролизу щелочью.Biochem. J. 125 , 353–359 (1971)
Google Scholar
Аулетта, А. Э., Кеннеди, Э. Р .: Состав оснований дезоксирибонуклеиновой кислоты некоторых представителей Micrococcaceae. J. Bact. 92 , 28–34 (1966)
Google Scholar
Баддили, Дж., Брок, Дж. Х., А. Л. Дэвисон, Патридж, М. Д .: Состав стенок микрококков. J. gen. Microbiol. 54 , 393–396 (1968)
Google Scholar
Баддили, Дж., Бьюкенен, Дж. Г., Хандшумахер, Р. Э., Прескотт, Дж. Ф .: Химические исследования биосинтеза пуриновых нуклеотидов. Часть I. Получение N-глицилгликозиламинов. J. chem. Soc. 1956 , 2818–2823
Бэрд-Паркер, А.К .: Классификация стафилококков и микрококков из всемирных источников. J. gen. Microbiol. 38 , 363–387 (1965a)
Google Scholar
Бэрд-Паркер, А. К.: Стафилококки и их классификация. Аня. N.Y. Acad. Scki. 128 , 4–25 (1965b)
Google Scholar
Бэрд-Паркер, А.К .: Методы классификации стафилококков и микрококков, стр. 59–64. В: Б. М. Гиббс и Ф. А. Скиннер, ред., Методы идентификации для микробиологов, Часть A. Нью-Йорк: Academic Press, 1966,
. Google Scholar
Бэрд-Паркер, А.C .: Связь состава клеточной стенки с современной классификацией стафилококков и микрококков. Int. J. Syst. Бакт. 20 , 483–490 (1970)
Google Scholar
Boháček, J., Kocur, M., Martinec, T .: Состав оснований ДНК и таксономия некоторых микрококков. J. gen. Microbiol. 46 , 369–376 (1967)
Google Scholar
Boháček, J., Kocur, M., Martinec, T .: Состав оснований ДНК некоторых Micrococcaceae. Microbios 6 , 85–91 (1970)
Google Scholar
Браун, А. Т., Виттенбергер, К. Л .: Фруктозо-1,6-дифосфат-зависимая лактатдегидрогеназа из кариесогенного стрептококка : очищающие и регулирующие свойства. J. Bact. 110 , 604–615 (1972)
Google Scholar
Коричневый, Р.В., Сандвик, О., Шерер, Р. К., Роуз, Д. Л .: Дифференциация штаммов Staphylococcus epidermidis , выделенных из вымени крупного рогатого скота. J. gen. Microbiol. 47 , 273–287 (1967)
Google Scholar
Чен, П. С., Торибара, Т. Ю., Уорнер, Х .: Микроопределение фосфора. Аналит. Chem. 28 , 1756–1758 (1956)
Google Scholar
Дэвисон, А.Л., Баддили, Дж .: Распределение тейхоевых кислот в стафилококках. J. gen. Microbiol. 32 , 271–276 (1963)
Google Scholar
Дэвисон, А. Л., Баддили, Дж .: Глицерин тейхоевая кислота в стенках Staphylococcus epidermidis . Природа (Лондон) 202 , 874 (1964)
Google Scholar
Дэвисон, А. Л., Баддили, Т., Хофстанд, Т., Losnegard, N., Oeding, P .: Серологические исследования тейхоевых кислот из стенок стафилококков. Природа (Лондон) 202 , 872–874 (1964)
Google Scholar
Деннис, Д.: рацемаза молочной кислоты из Clostridium butylicum , стр. 430–432. В: С. П. Коловик и Н. О. Каплан, Ред .: Методы энзимологии, Vol. 5. Нью-Йорк: Academic Press, 1962,
,. Google Scholar
Эванс, Дж.Б., Брэдфорд, В. Л., Нивен, К. Ф. Младший: Комментарии относительно таксономии родов Micrococcus и Staphylococcus . Int. Бык. бакт. Номенклатурный. 5 , 61–66 (1955)
Google Scholar
Фромм, Х. Дж .: Рибитолдегидрогеназа. I. Очистка и свойства фермента. J. Biol. Chem. 233 , 1049–1056 (1958)
Google Scholar
Гаррити, Ф.Л., Детрик, Б., Кеннеди, Э. Р .: Состав основания дезоксирибонуклеиновой кислоты в таксономии Staphylococcus . J. Bact. 97 , 557–560 (1969)
Google Scholar
Глейзер, Л .: Синтез тейхоевых кислот. II. Полирибитолфосфат. J. biol. Chem. 239 , 3178–3186 (1964)
Google Scholar
Hohorst, H.J .: l(+)-Lactat. Bestimmung mit Lactat-Dehydrogenase und DPN, стр.266–270. В: Х. У. Бергмайер, Ред .: Метод энзиматического анализа. Вайнхайм: Verlag Chemie 1962
Google Scholar
Камирио, Т., Мацухаши, М .: Биосинтез сшивающих пептидов в пептидогликане клеточной стенки Staphylococcus aureus . J. biol. Chem. 247 , 6306–6311 (1972)
Google Scholar
Кодур, М., Берган, Т., Мортенсон, Н .: Состав ДНК грамположительных кокков. J. gen. Microbiol. 69 , 167–183 (1971)
Google Scholar
Корман Р. З .: Коагулазонегативные мутанты Staphylococcus aureus : генетические исследования. J. Bact. 86 , 363–369 (1963)
Google Scholar
Корман, Р. З .: Повышенный серин клеточной стенки у плейотропных стафилококковых мутантов.J. Bact. 92 , 762–768 (1966)
Google Scholar
Lacchia, R. V. F., Hoeprich, P. D., Genigeorgis, C.: Производство нуклеаз и чувствительность к лизостафину Staphylococcus aureus и других каталаза-положительных кокков. Прил. Microbiol. 21 , 823–826 (1971)
Google Scholar
Ман, Дж. К. де, Рогоза, М., Шарп, М. Э .: Среда для культивирования лактобацилл.J.app. Бакт. 23 , 130–135 (1960)
Google Scholar
Мортенсон, Н., Кодур, М .: Корреляция основного состава ДНК и образования кислоты из глюкозы стафилококков и микрококков. Акта путь. микробиол. сканд. 69 , 445–457 (1967)
Google Scholar
Oeding, P., Myklestad, B., Davison, A.L .: Серологические исследования тейхоевых кислот из стенок Staphylococcus epidermidis и Micrococcus .Акта путь. микробиол., сканд. 69 , 458–464 (1967)
Google Scholar
Орла-Йенсен, С .: Молочнокислые бактерии. Memb. Акад. Рой. Sci. Danemark, Sect. Sci. 5 , 81–197 (1919)
Google Scholar
Rosypal, S., Rosypalova, A., Horejs, J .: Классификация микрококков и стафилококков на основе их основного состава ДНК и анализа Адансона.J. gen. Microbiol. 44 , 281–292 (1966)
Google Scholar
Schleifer, K.H .: Субстрат-зависимые модификации аминокислотной последовательности муреина стафилококков. J. gen. Microbiol. 57 , XIV (1969)
Google Scholar
Шлейфер, К. Х .: Химический состав стенок стафилококковых клеток. Я. Еляшевич, Ред .: II. Междунар. Symp.Staph. и Staph. Заразить. Базель: Каргер 1973
Google Scholar
Schleifer, K. H., Huss, L., Kandler, O .: Die Beeinflussung der Aminosäuresequenz des serinhaltigen Mureins von Staphylococcus epidermidis Stamm 24 durch die Nährbodenzusammensetzung. Arch. Микробиол. 68 , 387–404 (1969)
Google Scholar
Шлейфер К. Х., Кандлер О.: Zur chemischen Zusammensetzung der Zellwand der Streptokokken. I. Die Aminosäuresequenz des Mureins von Streptococcus thermophilus и Streptococcus faecalis . Arch. Микробиол. 57 , 335–364 (1967)
Google Scholar
Шлейфер, К. Х., Кандлер, О.: Аминокислотная последовательность муреина Planococcus и других Micrococcaceae. J. Bact. 103 , 387–392 (1970)
Google Scholar
Шлейфер, К.Х., Кандлер, О.: Пептидогликановые типы стенок бактериальных клеток и их таксономическое значение. Бакт. Рей. 36 , 407–477 (1972)
Google Scholar
Schleifer, K. H., Ried, M., Kandler, O .: Die Aminosäuresequenz des Mureins von Staphylococcus epidermidis (Winslow and Winslow) Evans, Stamm 66. Arch. Микробиол. 62 , 198–208 (1968)
Google Scholar
Сильвестри, Л.Г., Хилл, Л. Р.: Соглашение между основным составом дезоксирибонуклеиновой кислоты и таксономической классификацией грамположительных кокков. J. Bact. 90 , 136–140 (1965)
Google Scholar
Смит, Х. Б., Фаркас-Химсли, Х .: Связь патогенных коагулазонегативных стафилококков с Staphylococcus aureus . Канад. J. Microbiol. 15 , 879–890 (1969)
Google Scholar
Сомполинский, Д.: De l ‘ Impetigo contagiosa suisse et du Micrococcus hyicus n. sp. Schweiz. Arch. Tierheilk. 95 , 302–309 (1953)
Google Scholar
Подкомитет по таксономии стафилококков и микрококков. Рекомендации. Int. Бык. бакт. Номенклатурный. 15 , 109–110 (1965)
Google Scholar
Типпер Д. Дж. Структуры пептидогликана клеточной стенки Staphylococcus epidermidis Texas 26 и Staphylococcus aureus Copenhagen.II. Структура нейтральных и основных пептидов в результате гидролиза пептидазой Myxobacter Al-1. Биохимия 8 , 2192–2202 (1969)
Google Scholar
Vries, W. de, Kapteijn, W. M. C., van der Beek, E. A., Stouthamer, A.H .: Молярные выходы роста и балансы ферментации Lactobacillus casei L3 в периодических культурах и непрерывных культурах. J. gen. Microbiol. 63 , 333–345 (1970)
Google Scholar
Vries, W.де, Стаутхамер, А. Х .: Ферментация глюкозы, лактозы, галактозы, маннита и ксилозы бифидобактериями. J. Bact. 96 , 472–478 (1968)
Google Scholar
Виттенбергер, К. Л., Анджело, Н .: Очистка и свойства активированной фруктозо-1,6-дифосфатом лактатдегидрогеназы из Streptococcus faecalis . J. Bact. 101 , 717–724 (1970)
Google Scholar
Волин, М.Дж., Арчибальд А. Р., Баддили Дж.: Изменения тейхоевой кислоты в стенке в результате мутации Staphylococcus aureus . Природа (Лондон) 209 , 484–486 (1966)
Google Scholar
Работа, Э .: Стенки клеток, стр. 361–418. В: Дж. Р. Норрис, Д. В. Ленточки. Ред .: Методы микробиологии. 5А. Нью-Йорк: Academic Press 1971
Google Scholar
Физиологические и биохимические характеристики стафилококков, выделенных из рубца молодых телят и ягнят
Резюме
Шесть штаммов уреолитических стафилококков рубца выделены из молодых телят и ягнят.Три изолята были отнесены к видам Staphylococcus xylosus, Staphylococcus saprophyticus и Staphylococcus gallinarum . Таксономия оставшихся трех изолятов была неопределенной. Общее количество стафилококков колебалось от 10 4 до 10 6 на 1 мл жидкости рубца. Стафилококки рубца использовали широкий спектр субстратов и продуцировали вещество, подобное бактериоцину. Желатин не подвергался гидролизу штамма. Все штаммы продуцировали каталазу и восстановленные нитраты.Основным продуктом анаэробного углеводного обмена был лактат, сопровождаемый формиатом, ацетатом и этанолом. Большинство штаммов были чувствительны к ионофорам, авопарцину, бацитрацину и тилозину. Все штаммы были чувствительны к рифампицину, тетрациклину и хлорамфениколу.
Zusammenfassung
Aus den Pansen junger Kälber und Lämmer wurden sechs Stämme ureolytischer Staphylokokken isoliert. Drei Isolate konnten Staphylococcus xylosus, Staphylococcus saprophyticus и Staphylococcus gallinarum zugeordnet werden.Die Taxonomie der drei restlichen Isolate blieb ungewiß. Die Gesamtzahl der Staphylokokken varierte zwischen 10 4 und 10 6 / мл Pansenflüssigkeit. Die Pansenstaphylokokken nutzen ein weites Spektrum von Substraten und produzieren eine Bacteriocin-ähnliche Substanz. Keiner der Stämme Hydrolysiert Gelatine. Alle Stämme bilden Katalase und reduzieren Nitrat. Das Hauptprodukt des anaeroben Kohlenhydratstoffwechsels war Lactat, begleitet von Formiat, Acetat und Ethanol. Die meisten Stämme waren sensitiv gegenüber Ионофор, авопарцин, бацитрацин и тилозин.Все продукты, чувствительные к рифампицину, тетрациклину и хлорамфениколу.
Ключевые слова
рубец
стафилококки
теленок
баранина
Рекомендуемые статьиСсылка статей (0)
Полный текстCopyright © 1992 Gustav Fischer Verlag Jena. Опубликовано Elsevier GmbH. Все права защищены.
Рекомендуемые статьи
Цитирование статей
Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Болезнь, свойства, лабораторная диагностика • Микроб онлайн
Последнее обновление 25 июня 2021 г.
Золотистый стафилококк , частый колонизатор кожи и слизистых оболочек людей и животных, является очень успешным условно-патогенным микроорганизмом.
Основные заболевания, вызываемые Staphylococcus aureusMneomonic: Заболевания, вызываемые Staphylococcus, можно запомнить, используя этот акроним «SOFTPAINS»
- Инфекция Инфекция опухоли стеомиелит
- F отравление / гастроэнтерит
- T синдром оксического шока
- P невмония (в основном приобретенная в больнице)
- A милый эндокардит
- i экстракт
- i
- S epsis и S синдром ошпаренной тафилококковой кожи (SSSS)
- грамположительных пар короткие цепочки и неправильные виноград- как кластеры
- Каталазный тест : положительный
- Коагулазный тест: положительный
- Другие свойства: неподвижный, неспоровый, часто некапсулированный или имеющий ограниченную капсулу, факультативные анаэробы.
- Поверхностные белки : белок А (предотвращает активацию комплемента), фактор слипания, тейхоевая кислота (адгезия и индукция септического шока)
- Суперантигены : энтеротоксин AD, эксфолиатин A&B, токсин синдрома токсического шока (TSST). -суперантиген.
- Цитотоксины: α-гемолизин, β-гемолизин, γ-гемолизин, δ-гемолизин, лейкоцидин Пантона-Валентайна (PVL), эксфлиатин (эпидермолитически расщепляет десмоглеин в десмосомах) (вызывает свертывание плазмы), стафилокиназа, гидролаза сложного эфира глицерина, каталаза (деградация H 2 O 2 ограничивает способность нейтрофилов убивать S.aurues), и т.п. кокки могут появляться поодиночке парами или короткими цепочками.
- Культура
- Кровяной агар: рост происходит обильно в течение 18-24 часов, видны желтые или золотисто-желтые колонии с бета-гемолизом или без него.
- Маннитоловый солевой агар (MSA) — селективная среда, обычно используемая для выделения S.aureus.
- После инокуляции чашки с MSA инкубировали при 35 ° C в течение 24-48 часов. S. aureus — бактерии, ферментирующие маннит, образующие колонии желтого или золотого цвета.
- Биохимические тесты:
- Каталазный тест: положительный
- Коагулазный тест: положительный — отличить S. aureus от коагулазо-отрицательного Staphylococcus aureus (CONS). МИНУСы дополнительно дифференцируются на основе теста на чувствительность к новобиоцину ( S.epidermidis чувствителен, тогда как S. saprophyticus устойчив к ).
Биохимические тесты для идентификации S. aureus
Устойчивость к противомикробным препаратамStaphylococcus aureus , в том числе Methylococcus aureus , в том числе Methylococcus aureus , устойчивые к метициллину RS частые причины инфекций, связанных со здоровьем. Первое сообщение об устойчивом к ванкомицину Staphylococcus aureus (VRSA) появилось в 2002 году.VRSA также устойчив к метициллину и другим классам антибиотиков, что ограничивает доступные варианты лечения.
СвязанныеПривет, спасибо, что посетили мой блог. Я Танкешвар Ачарья. Ведение блога — моя страсть. Я работаю ассистентом. Профессор и микробиолог отделения микробиологии и иммунологии Академии наук о здоровье Патана, Непал. Если вы хотите, чтобы я писал о каких-либо сообщениях, которые вы сочли запутанными / сложными, пожалуйста, укажите в комментариях ниже.
ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ СТАФИЛОКОКЧ, ВЫДЕЛЕННЫХ У БОЛЬНЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ
Кантор, Р., Тиссен, Дж. П., Паллер, А. С., Сильверберг, Дж. И. (2016). Атопический дерматит, атопическая экзема или экзема? Систематический обзор, метаанализ и рекомендации по единообразному использованию «атопического дерматита». Аллергия, 71 (10), 1480–1485. DOI: http://doi.org/10.1111/all.12982
Кутасевич Я. Ф., Ищейкин К.Э., Зубан И. В., Мангушева В. Ю. (2018). Диферентчийваны пидхид до диагностики та зовнишной терапии экземы. Дерматология и венерология, 1, 50–55.
Потекаев, Н. С. (2006). Экзема: аспекты истории и современное представление. Клиническая дерматология и венерология, 4, 102–107.
Дзораева С.К., Кутасевич Я. Ф., Олийнык И.О., Гончаренко В.В. и др. al. (2013). Вувчення факторов патогенности стафилокковой микрофлоры шкиры у хворых на поширени дерматозы.Дерматология и венерология, 1 (59), 20–25.
Белкайд Ю., Сегре Дж. А. (2014). Диалог между микробиотой кожи и иммунитетом. Наука, 346 (6212), 954–959. DOI: http://doi.org/10.1126/science.1260144
Рохо, А., Агинага, А., Монеке, С., Юсте, Дж. Р., Гастаминза, Г., Испания, А. (2013). Геномный паттерн Staphylococcus aureus и атопический дерматит: могут ли быть задействованы другие факторы, помимо суперантигенов? Европейский журнал клинической микробиологии и инфекционных заболеваний, 33 (4), 651–658.DOI: http://doi.org/10.1007/s10096-013-2000-z
Нада, Х. А., Гомаа, Н. И. М., Элахрас, А., Васфи, Р., Бейкер, Р. А. (2012). Колонизация кожи производящим суперантиген Staphylococcus aureus у египетских пациентов с атопическим дерматитом и ее связь с тяжестью заболевания и уровнем интерлейкина-4 в сыворотке. Международный журнал инфекционных болезней, 16 (1), e29 – e33. doi: http://doi.org/10.1016/j.ijid.2011.09.014
О, Дж., Берд, А. Л., Деминг, К., Конлан, С., Конг, Х. Х., Сегре, Дж. А. (2014). Биогеография и функция формы индивидуальности в метагеноме кожи человека. Природа, 514 (7520), 59–64. DOI: http://doi.org/10.1038/nature13786
Сергеев А. У., Бурчева Г. Н., Сергеев В. У. (2014). Стафилоковая колонизация кожи, антибиотикорезистентность и противомикробная терапия при распространенных дерматозах. Иммунопатология, аллергология, инфектология, 4, 32–45.
Кутасевич, Я., Джораева, С., Щербакова, Ю., Бондаренко, Г., Соболь, Н. (2019). Изучение патогенных свойств аутофлоры кожи у пациентов с диагнозом атопический дерматит. Грузинские медицинские новости, 7-8 (292-293), 113–117.
Грайс, Э. А., Конг, Х. Х., Рено, Г., Янг, А. К., Буффар, Г. Г. и др. al. (2008). Профиль разнообразия микробиоты кожи человека. Исследование генома, 18 (7), 1043–1050. DOI: http://doi.org/10.1101/gr.075549.107
Мурзина, Е.А. (2009). Оптимизация патогенетической терапии при атопическом дерматите, Украинский журнал дерматологии, венерологии, косметологии, 2 (33), 16–19.
Граничная Н. В., Зайчева Е. А., Бондарь В. У. (2017). Фенотипическая характеристика биологических свойств коагулазонегативных стафилококов, вуделенных в кардиохирургическом стационаре. Альманах клинической медицины, 45 (2), 127–132.
Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений (1985).МЗ СССР, № 535. Режим доступа: http://www.alppp.ru/law/zdravoohranenie—fizicheskaja-kultura-i-sport—turizm/zdravoohranenie/64/prikaz-minzdrava-sssr-ot-22- 04-1985—535.
