Можно ли принимать при эпилепсии глицин: Страница не найдена — Нерв.Гуру

vetpeterburg

Вы можете подписаться на нашу новостную рассылку.
Для этого нужно заполнить форму, указав ваш почтовый e-mail.
Рассылка осуществляется не более 5-6 раз в год.
Администрация сайта никогда ни при каких обстоятельствах не разглашает и не передает другим лицам данные о пользователях сайта.

Для ветеринарных клиник г. Санкт-Петербурга и Лен. области.
Доставка производится курьером на адрес клиники в количестве одного экземпляра.
Для оформления доставки необходимо заполнить форму. Подписка на доставку оформляется один раз и действует до тех пор, пока представитель вашей организации не подаст заявку на отмену доставки.

Первая помощь при инфаркте миокарда и инсульте

С целью принятия мер по сокращению гибели людей от острого инфаркта миокарда и инсульта предлагаем ознакомится с крайне важной и необходимой информацией о мероприятиях оказания первой помощи.

ИНСУЛЬТ — быстро развивающиеся клинические признаки очагового (или глобального) нарушения функции мозга, симптомы которого сохраняются  24 часа и более или даже приводят к смерти  [ВОЗ].

ПРИЧИНЫ РАЗВИТИЯ ИНСУЛЬТА:

Инсульт происходит вследствие нарушения кровоснабжения головного мозга. Выделяют ишемический и геморрагический тип инсульта. Ишемический инсульт развивается из-за закупорки сосуда в области атеросклеротической бляшки сонной артерии или при эмболии оторвавшимся тромбом, например из сердца; а также вследствие поражения мелких артерий мозга при артериальной гипертензии. Нарушается снабжение мозга кислородом, возникает некроз мозговой ткани. Геморрагический инсульт происходит при разрыве мозгового сосуда из-за тяжелого гипертонического криза или при наличии аневризмы (аномалии) сосудов.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ:

Наиболее частыми симптомами инсульта являются: 1. Внезапное возникновение слабости, неловкости, чувствительных нарушений на одной стороне тела  — в руке, ноге, на лице (асимметрия носогубных складок), 2. Внезапное нарушение речи – неразборчивость «как будто каша во рту», утрата грамматики, повторение одного слова, плохое понимание обращенной к больному речи. 3. При геморрагическом инсульте возникает интенсивная головная боль по типу «удара в голову», рвота, нарушение сознания.  4. А также симптомами инсульта могут быть: нарушение координации, головокружение, выпадение поля зрения с одной стороны, расстройство глотания.

ПРОФИЛАКТИКА:

Факторов риска инсульта рассматривается очень много. Это и немодифицируемые, такие как пожилой возраст, мужской пол. С точки зрения возможной профилактики наиболее важным фактором считается высокое артериальное давление. Так наличие артериальной гипертензии повышает риск инсульта на 50%. Курение — также важнейший корригируемый самостоятельный фактор риска инсульта. При медицинском обследовании для профилактики инсульта важно знать состояние сонных артерий и наличие нарушения  сердечного ритма по типу фибрилляции предсердий; с учетом результатов обследования на данную патологию врач назначает профилактическое лечение.

ЧТО ДЕЛАТЬ ПРИ ОБНАРУЖЕНИИ ПЕРВЫХ ПРИЗНАКОВ ЗАБОЛЕВАНИЯ?

1. НЕМЕДЛЕННО ВЫЗВАВТЬ БРИГАДУ СКОРОЙ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ (МОБ. ТЕЛ.103,112)
2. Физический и эмоциональный покой.
3. Обеспечить доступ свежего воздуха: открыть окно, расстегнуть затрудняющую дыхание одежду).
4. Контроль АД, пульса.
5. В случае высокого АД каптоприл 10мг. под язык

Острый инфаркт миокарда —  омертвение (некроз) участка сердца, вызванное нарушением  кровоснабжения сердечной мышцы (миокарда). Это  остро развившееся  опасное для жизни состояние, которое может привести  к смерти  в первые   минуты, часы из-за тяжелых осложнений (острая сердечная недостаточность, нарушение сердечного ритма).

Факторы риска:

1. Повышенное артериальное давление.
2. Курение вне зависимости от количества.
3. Низкая физическая активность.
4. Высокий уровень холестерина в крови.
5. 5. Избыточная масса тела, абдоминальное ожирение.
6. Генетическая предрасположенность.
7. Сахарный диабет.
8. Возраст.

Симптомы острого инфаркта миокарда

• Загрудинная интенсивная боль давящего, сжимающего характера, реже разрывающая или жгучая («на грудь положили плиту», «взяли в тиски»). Боль  отдает в левое (редко  в правое)  плечо, предплечье, лопатку, шею, нижнюю челюсть, надчревную область.  Длительность – от  15-20 минут и нескольких часов до 1-2 суток.
• Боли могут сопровождаться нарушением сердечного ритма.
• Нестабильное АД.
• Бледность кожных покровов, обильный холодный пот.
• Поведение пациента: возбуждение, двигательное беспокойство.
• Реакция на прием нитроглицерина неполная или отсутствует.
• Реже наблюдаются другие варианты начала ОИМ:
• Астматический (сердечная астма, отек легких)
• Аритмический (обморок, внезапная смерть)
• Цереброваскулярный (острая неврологическая симптоматика)
• Абдоминальный (боль в надчревной области, тошнота, рвота)
• Малосимптомный (слабость, неопределенные ощущения в грудной клетке)

Неотложная помощь

1. НЕМЕДЕЛННО ВЫЗВАТЬ БРИГАДУ СКОРОЙ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ (103, 112)
2. Помощь оказывать на месте, где находится пациент.
3. Физический и эмоциональный покой.
4. Обеспечить доступ свежего воздуха: открыть окно, расстегнуть затрудняющую дыхание одежду).
5. Контроль АД, пульса.
6. Нитроглицерин таблетки ли аэрозоль 0,5мг под язык   с интервалом  5 мин, не более 3 таблеток (доз). При низком АД воздержаться от приема нитроглицерина!
7. Ацетилсалициловая кислота 0,25гр разжевать

Будьте здоровы!

В Израиле идет более эффективное лечение эпилепсии

Профессор Меир Биалер: Для одной трети пациентов с эпилепсией, у которых припадки не прекращаются, нам все еще нужны новые противоэпилептические препараты. Большинство людей думают, что эпилепсия находится под контролем; что это болезнь «старых времен», которая почти не проявляется среди 2,5 миллионов американцев, страдающих этим неврологическим расстройством.

Но, по словам профессора Меира Биалера, профессора фармацевтики Дэвида Х. Айзенберга фармацевтического факультета Еврейского университета, новаторского исследователя эпилепсии, около трети пациентов не реагируют положительно на несколько существующих на рынке препаратов для контроля эпилепсии. , и в результате они продолжают страдать от периодических эпилептических припадков.

«Большинство противоэпилептических препаратов в определенной степени эффективны. Благодаря существующим лекарствам у двух третей пациентов сегодня судороги отсутствуют. Но одна треть из них — это то, что мы называем устойчивостью к терапии », — сказал Биалер ISRAEL21c. «Для этой трети нам все еще нужны новые противоэпилептические препараты».

Enter valrocemide, препарат, разработанный под руководством Биалера, автора более 180 публикаций в области фармакокинетики, противоэпилептических средств и препаратов для центральной нервной системы (ЦНС).

После недавних испытаний, которые продемонстрировали эффективность валроцемида в качестве противоэпилептического препарата, американская фармацевтическая компания Shire Pharmaceuticals подписала всемирное лицензионное соглашение на разработку, производство и маркетинг этого препарата с Yissum, компанией по передаче технологий Еврейского университета.Шайр намеревается изучить препарат в качестве кандидата для применения при ряде заболеваний центральной нервной системы.

Эпилепсия, слово греческого происхождения, означающее «держать или схватить», вызывается короткими импульсами электрического тока в мозгу. Припадки могут быть вызваны повторяющимися звуками, мигающим светом или прикосновением к определенным частям тела и могут вызывать непроизвольные изменения в движениях или функциях тела, ощущениях, осознанности или поведении. Приступ может длиться от нескольких секунд до эпилептического статуса, продолжительного припадка, который не прекратится без вмешательства.

Припадки обычно происходят без предупреждения и без ведома человека о том, что происходит. У некоторых людей, страдающих эпилепсией, припадки случаются лишь изредка, у других — ежедневно. Ежегодно регистрируется 125 000 впервые диагностированных случаев эпилепсии, и, по словам Биалера, клеймо эпилептического припадка выходит далеко за рамки простого смущения или стыда.

«Если у вас случается хотя бы один судорожный припадок в год, то в США вам не разрешают получать водительские права.Социальные последствия огромны: в Америке без водительских прав вы практически вне общества », — сказал он.

Неэффективность нынешних лекарств от эпилепсии для трети населения проистекает из проблем, связанных с глицином, аминокислотой, дефицит которой у больных эпилепсией. Глицин, как и другие аминокислоты в головном мозге, служит нейротрансмиттером, возбуждающим или тормозящим нервные передачи в центральной нервной системе. Эпилепсия вызывается, среди прочего, нарушением баланса между этими двумя функциями: повышением уровня возбуждающих аминокислот или снижением уровня ингибирующих кислот.

Глицин — одна из ингибирующих аминокислот, повышение его концентрации в головном мозге оказывает противоэпилептический эффект. Однако невозможно вводить его пациентам в его естественном состоянии, потому что он не проникает через гематоэнцефалический барьер, который не позволяет лекарствам достигать целевых участков ЦНС.

Биалер и его команда, в которую входил его бывший докторант, доктор Салим Хадад, работали над разработкой производного глицина, которое могло бы проникать через гематоэнцефалический барьер.
Новое лекарство для ЦНС, валроцемид, представляет собой комбинацию известного противоэпилептического препарата, вальпроевой кислоты, и производного глицина, глицинамида.

«Мы химически объединили одно из основных противоэпилептических препаратов с глицинамидом и смогли обеспечить проницаемость препарата для проникновения в мозг, увеличив ее с 16 до 64%. И мы доказали, что это безопаснее, чем другие противоэпилептические препараты, которые беременным женщинам и детям запрещено принимать », — сказал Биалер.

Готовясь к отъезду, чтобы выступить с докладом на Восьмой конференции в Эйлате, престижном международном мероприятии, проходящем в этом году в Испании и посвященном противоэпилептическим препаратам, Биалер описал свой путь к тому, чтобы стать одним из ведущих исследователей эпилепсии в мире. Мир.

«Я насквозь опунция — настоящая израильская сабра. Я родился здесь, вместе с государством Израиль в 1948 году, и этим горжусь. Я получил образование в Еврейском университете и получил там докторскую степень по медицинской химии, а также степень магистра делового администрирования. Моим наставником был профессор Рафи Мешулам ».

Мехулам, всемирно известный медицинский химик и пионер в области каннабиноидов, который в 1960-х годах провел свои оригинальные лабораторные эксперименты с каннабисом с использованием контрабанды, предоставленной полицией Иерусалима, был первым ученым в мире, выделившим ТГК — активный ингредиент. в каннабисе.Ему также приписывают определение первого эндогенного каннабиноида.

«Мехулам посоветовал мне оставаться в стороне от медицинской химии в качестве карьеры. В 1977 году меня отправили в Университет Флориды в Гейнсвилле изучать фармакокинетику — изучение того, что организм делает с лекарством. И когда я вернулся, он дал мне более мудрый совет — найдите сферу научной и академической независимости. По его предложению я решил специализироваться на противоэпилептических препаратах, а также на других неэпилептических расстройствах центральной нервной системы.Это было предложение, которого я строго придерживался последние 26 лет, — сказал Биалер со смехом.

Последние разработки с велроцемидом являются частью усилий Биалера, направленных на то, чтобы его исследования действительно помогли пациентам, которые в них нуждаются.

«С любым лекарством есть предел тому, чего вы можете достичь в учебе. По сути, вы можете перемещать только хвост мыши с неправильной стороны на правую. В какой-то момент вам нужно получить спонсорство, если вы действительно хотите коммерциализировать препарат », — сказал он.

Биалер с осторожным оптимизмом относился к соглашению с Shire и ожидаемым дальнейшим разработкам в области тестирования велроцимида.

«Мы будем работать вместе над испытаниями, но люди не должны ожидать, что они начнут использовать препарат завтра. Я не хочу создавать никаких иллюзий. Я думаю, что в ближайшее время мы завершим испытания Фазы 3 и получим одобрение FDA. 2011–2012 », — сказал он.

Помимо валроцемида, Биалер вместе с коллегой профессором Борисом Яганом занимался разработкой других препаратов для ЦНС от эпилепсии.

«У нас есть еще три линии препаратов, которые вместе с Yissum мы ведем переговоры с американскими фармацевтическими компаниями о вариантах лицензирования», — сказал он.

В этом году команда была награждена премией Кайе за инновации от Еврейского университета за успех в разработке потенциальной альтернативы вальпроевой кислоте (VPA), одному из ведущих противоэпилептических препаратов, который с тех пор используется для лечения центральной нервной системы (ЦНС). 1967.

Этот препарат также имеет серьезные недостатки с точки зрения безопасности, с побочными эффектами, которые могут причинить вред, особенно детям или женщинам с детородным потенциалом.В своем экспериментальном поиске альтернативы VPA профессора Биалер и Яген разработали пропилизопропилацетамид (PID), новый противоэпилептический препарат для ЦНС, который продемонстрировал отличные противоэпилептические и антиаллодинические (против нейропатической боли) действия без повреждающих побочных эффектов VPA.

Биалер уклоняется от обязательств, когда его спрашивают, чувствует ли он близость к одному из своих открытий по сравнению с другим.

«Это как иметь четверых детей — ты не можешь спросить, какой из них тебе больше всего нравится.”

ученых определили аминокислоту, которая останавливает судороги у мышей

Согласно исследованию исследователей из Johns Hopkins, аминокислота, роль которой в организме оставалась почти загадкой, по-видимому, действует как мощный ингибитор судорог у мышей.

В серии экспериментов аминокислота D-лейцин, обнаруженная во многих продуктах питания и некоторых бактериях, прервала длительные припадки, серьезное состояние, известное как эпилептический статус, и действовала так же эффективно, как и лекарство от эпилепсии диазепам — выбор лечения для пациентов, страдающих судорогами, но без каких-либо побочных седативных эффектов препарата.

Результаты финансируемого из федерального бюджета исследования, опубликованные в Интернете 4 июня в журнале Neurobiology of Disease , также предполагают, что D-лейцин работает иначе, чем все современные противосудорожные препараты — открытие, которое может открыть путь для столь необходимых методов лечения почти одна треть людей с эпилепсией с лекарственно-устойчивыми формами состояния, отмеченными упорными припадками.

«Лечение эпилепсии за последние 50 лет не сильно улучшилось, поэтому существует острая потребность в улучшенных терапевтических подходах, особенно для миллионов людей с лекарственно-устойчивой эпилепсией», — говорит ведущий исследователь Адам Хартман, M.D., детский невролог Детского центра Джонса Хопкинса и адъюнкт-профессор неврологии Медицинской школы Университета Джонса Хопкинса. «Если наши результаты будут подтверждены на более крупных животных и людях, наши результаты будут обещать тем, кто страдает от непрекращающихся приступов».

Аминокислоты, строительные блоки белков, являются источниками энергии и имеют решающее значение для многих биохимических реакций в организме, но многие специфические роли различных аминокислот остаются неуловимыми.

В текущем исследовании исследователи исходили из предпосылки, что определенные аминокислоты могут играть роль в предотвращении судорог, потому что они производят некоторые из тех же побочных продуктов метаболизма, что и кетогенные диеты с высоким содержанием жиров, альтернативная терапия для пациентов, у которых судороги не проходят. контролируется лекарствами.Одна из форм диеты использовалась в качестве стандартного лечения эпилепсии в 1920-х и 1930-х годах в эпоху премедикации, но потеряла популярность, когда появились первые лекарства от эпилепсии. Усовершенствованная версия диеты, возвращенная в моду покойным неврологом Джоном Фриманом из Джона Хопкинса, принесла облегчение бесчисленному количеству детей с лекарственно-устойчивыми припадками. Однако режим питания требует сложных расчетов, может быть трудным для соблюдения и не всегда обеспечивает полный контроль над судорогами.

В первоначальной серии экспериментов исследователи предварительно обработали мышей аминокислотой L-лейцин и другой аминокислотой, называемой D-лейцином, которая имеет почти идентичную структуру с L-лейцином и по сути является его биохимическим зеркальным отражением.

Когда исследователи вызывали припадки с помощью шоковой терапии, животные, предварительно получавшие любую из аминокислот, чувствовали себя лучше, развивая припадки при значительно более высоких электрических токах, чем у мышей, получавших плацебо, что является признаком большей устойчивости к припадкам.

Чтобы увидеть, могут ли D-лейцин и L-лейцин также прерывать продолжающиеся припадки, исследователи вызывали припадки у группы животных и, как только начались судороги, они вводили низкие и высокие дозы обеих аминокислот. L-лейцин не смог прекратить продолжающиеся припадки, в то время как D-лейцин эффективно купировал судороги.Поразительно, говорят исследователи, D-лейцин прекращал судороги даже при низких дозах. Затем исследователи сравнили способность D-лейцина прекращать длительные безжалостные приступы с успокаивающим средством диазепамом, обычно используемым для остановки таких приступов у людей. Оба лечения прекратили судороги, но D-лейцин прекратил это примерно на 15 минут раньше. Кроме того, мыши, получавшие D-лейцин, быстрее возобновляли нормальное поведение и не испытывали сонливости и вялости, наблюдаемых у животных, получавших препарат, а также обычных побочных эффектов, наблюдаемых у пациентов-людей.

В последней серии экспериментов измерялось взаимодействие D-лейцина с несколькими нервными рецепторами, которые, как известно, участвуют в передаче сигналов от клетки к клетке и в захватной активности. Удивительно, но D-лейцин не взаимодействовал ни с одним из сигнальных путей, которые, как известно, вызывают или предотвращают судороги.

«Наши результаты показывают, что D-лейцин влияет на нейроны иначе, чем другие известные методы лечения припадков», — говорит старший исследователь Дж. Мари Хардвик, доктор философии, профессор Дэвида Бодиана по микробиологии и иммунологии в Школе общественного здравоохранения Блумберга Джонса Хопкинса. .«Это открытие дает нам надежду на новые подходы к эпилепсии на горизонте».

Соавторами исследования были Полан Сантос и Карл Стафстром из Университета Джона Хопкинса и Кеннет О’Риордан из Университета Висконсина.

Работа была поддержана Национальными институтами здравоохранения под номерами грантов K08NS070931, R01NS083373 и R01NS037402; семьей Сатланд-Пакула; и Мемориальным фондом Матиаса Коха.

Использование кетогенной диеты для лечения трудноизлечимой эпилепсии в случае глициновой энцефалопатии

Мальчику с диагнозом глициновая энцефалопатия в период новорожденности назначили кетогенную диету в 11 лет для лечения лекарственно-рефрактерной эпилепсии.

Введение

Глициновая энцефалопатия, ранее называемая некетотической гиперглицинемией, является аутосомно-рецессивной врожденной ошибкой метаболизма, связанной с системой расщепления глицина. Заболеваемость составляет 1: 60 000. В результате этого дефекта глицин накапливается в нескольких тканях организма, включая мозг. ^1-4 Возраст начала колеблется от неонатального периода до младенчества, а клиническая тяжесть колеблется от ослабленной формы до тяжелой. Люди с тяжелой формой страдают от летаргии, комы, судорог, апноэ и ранней смерти. ^1,3 Однако примерно 15% пациентов с неонатальным началом и 50% пациентов с младенческим началом имеют ослабленную форму. Люди с ослабленной формой испытывают умственную отсталость, судороги, гиперактивность, хорею, летаргию и атаксию. ³

Механизм расщепления глицина состоит из 4 белков, P-, T-, H- и L-. Было установлено, что ~ 80% пациентов с дефектом глицина имеют ошибку в протеине P, ^1,4

Глициновую энцефалопатию также можно диагностировать с помощью биохимического и молекулярного анализа.Его можно диагностировать по повышенному уровню глицина в спинномозговой жидкости по сравнению с плазмой, а также по тестированию на мутации в генах GLDC, AMT, и GCSH . ²

Целью лечения является снижение концентрации глицина в плазме и блокирование глицинергических рецепторов. Варианты лечения включают: бензоаты натрия и антагонисты сайтов рецепторов NMDA, такие как декстрометорфан, кетамин и фелбамат. Помимо медикаментозной терапии, диета с низким содержанием белка может помочь снизить уровень глицина в плазме. ^1,4 Сообщалось, что кетогенная диета снижает частоту приступов и снижает уровень глицина у 4 ранее перенесенных пациентов. ⁸

Мы представляем кетогенную диету как терапию для лечения трудноизлечимых приступов и снижения уровня глицина в плазме у пациента с глициновой энцефалопатией, а также проводим обзор текущей литературы по этому лечению.

История болезни

11-летний мальчик был переведен в наше учреждение для оценки и лечения глициновой энцефалопатии.Пациент родился доношенным в Пуэрто-Рико от неродных родителей с массой тела при рождении 3,9 кг. Семья сообщила, что он был выписан из больницы на третий день жизни и был повторно госпитализирован в тот же день в коматозном состоянии. Пациент оставался в больнице в течение 40 дней, и в течение этого периода у него была диагностирована глициновая энцефалопатия на основании предположительно повышенного соотношения глицин / сывороточный глицин в спинномозговой жидкости (> 0,08). Однако его конкретная концентрация глицина в плазме и соотношение глицина в спинномозговой жидкости и плазме не были доступны нам.Поэтому для подтверждения диагноза было проведено генетическое тестирование, которое показало, что у пациента имеется гомозиготный патогенный вариант c.499G> T, идентифицированный в гене GLDC .

Первый припадок, о котором сообщила пациентка, произошел на 3-й день жизни. Приступы описываются как жесткость ног и рук, отклонение глаз вправо и вокализация. В течение 2 месяцев у пациента развились другие симптомы припадков, включая правосторонние гемиклонические припадки. За полгода до перевода родители пациента отвезли его в отделение неотложной помощи, так как увидели резкие движения правой руки и ноги.Его невролог титровал фенобарбитал до 1 мг / кг / день и леветирацетам до 60 мг / кг / день, что, по словам родителей, сделало пациента более летаргическим без значительного улучшения частоты приступов.

Когда пациенту было 11 лет, его невролог предложил кетогенную диету из-за снижения отзывчивости и плохого питания из-за летаргии, заметной после титрования лекарства. Было неясно, было ли снижение реактивности побочным эффектом его недавнего изменения противоэпилептических препаратов, обострения энцефалопатии из-за его основного метаболического состояния или частых припадков (более 20 в день).Он был госпитализирован в наше учреждение для перехода на кетогенную диету.

При поступлении неврологическое обследование показало наличие аксиальной и аппендикулярной гипотонии во всех конечностях. Он был невербальным и не интерактивным, но следил за матерью и отцом глазами. Его лекарства включали декстрометорфан, ламотриджин, клобазам, леветирацетам и фенобарбитал.

Пациент начал кетогенную диету в стационаре в педиатрическом отделении мониторинга эпилепсии (EMU) в соотношении 2: 1 и титровал на 0.5 раз в день до 3: 1.

Пациент был подключен для видеомониторинга электроэнцефалографии (ВЭЭГ) на время госпитализации, чтобы охарактеризовать его электрографический фон. ЭЭГ продемонстрировала мультифокальные и бифронтальные спайк-волновые комплексы, частые эпохи генерализованного затухания, рудиментарные особенности сна, отсутствие устойчивого заднего доминирующего ритма и диффузное замедление. Электроклинические генерализованные тонические судороги наблюдались вплоть до второго дня после начала диеты, когда в анализе мочи пациента начали обнаруживаться кетоновые тела.

Пациент был выписан домой после 5-дневной госпитализации на кетогенной диете 3: 1 через назогастральный зонд. Уровни глицина в плазме снизились после начала диеты, и было зарегистрировано улучшение как профиля аминокислот, так и частоты приступов (, рисунок 1, и , таблица 1, , соответственно). После выписки пациент продемонстрировал резкое повышение активности и бодрствования по сравнению со днем ​​поступления. После первого дня приема измеряемых кетонов и в течение первых 5 месяцев диетической терапии приступов не наблюдалось.С тех пор судороги уменьшились более чем на 50%. Записи vEEG как до, так и после диеты не изменились.

Обсуждение

Кетогенная диета была терапией выбора при определенных состояниях детской эпилепсии, которые не поддаются лечению только фармакологическими средствами, особенно вторичных по отношению к метаболическим заболеваниям. ⁷ Эта диета только недавно была предложена в качестве варианта лечения судорог у пациентов с глициновой энцефалопатией из-за неэффективности одних только противоэпилептических средств.Во всех 4 случаях, о которых сообщалось ранее, было отмечено уменьшение приступов и снижение уровня глицина в плазме, когда кетогенная диета использовалась в сочетании с традиционными методами лечения глициновой энцефалопатии (, таблица 2, ). ⁸

Хотя было показано, что кетогенная диета снижает судорожную активность, механизм действия до сих пор остается неизвестным. Некоторые гипотезы включают:

• Кетоновые тельца могут напрямую ингибировать нагрузку везикулярного глутамата, подавляя VGLUT2. ⁹ .

• Кетоновые тела бета-гидроксибутират, ацетоацетат и ацетон сами могут обладать противосудорожными свойствами. ¹³

• Кетогенная диета увеличивает уровень ГАМК в спинномозговой жидкости, что приводит к общему ингибирующему эффекту. ^{12, 13}

• Кетогенная диета снижает уровень глицина, что может привести к меньшей активации рецепторов NMDA (особенно в коре головного мозга).

Четыре зарегистрированных случая, в которых кетогенная диета использовалась для лечения глициновой энцефалопатии, произошли у 4-месячной женщины, двух 3-месячных мужчин и 6-месячного мужчины.В этих случаях кетогенная диета вместе со стандартной терапией показала резкое снижение частоты и тяжести приступов, улучшение настороженности и снижение уровня глицина в плазме и спинномозговой жидкости. Все 3 статьи Cusmai et al. у пациентов наблюдалось снижение приступов> 50% за 9 месяцев наблюдения. В отличие от нашего пациента, который изначально был начат с диеты в соотношении 2: 1 и затем увеличен до 3: 1, эти пациенты были начаты и сохранены на кетогенной диете 4: 1. Диета нашего пациента никогда не превышала 3: 1 из-за его низкой потребности в энергии и необходимости поддерживать соотношение калорий и белка на должном уровне.

Связанное содержание: Обновленные клинические рекомендации по кетогенной диете у детей с эпилепсией

Еще одно различие между предыдущими случаями и этим случаем заключалось в относительно позднем времени начала диеты после постановки диагноза. В описанных ранее случаях пациенты были переведены на кетогенную диету всего через несколько месяцев после постановки диагноза. Однако наш пациент был начат почти через 11 лет после его первоначального диагноза. Этот случай свидетельствует о том, что позднее начало диеты может быть эффективным в снижении судорог, несмотря на тяжелое бремя приступов, имевших место до сих пор.

Хотя все 5 пациентов испытали повышенный уровень активности после начала диеты, у них сохранялась тяжелая психомоторная задержка даже после улучшения частоты приступов. Это говорит о том, что кетогенная диета не повлияла на их статическую энцефалопатию.

Во всех случаях сообщалось о резком снижении частоты приступов всего через несколько дней после начала диеты. У нашего пациента снижение судорожной активности коррелировало со снижением уровня глицина и увеличением кетонов.Частота приступов снизилась на 100% в течение 5 месяцев после начала кетогенной диеты, пока пациент не сломал бедренную кость. Ни в одном из других случаев 100% снижение судорожных припадков достигнуто не было. Среди всех пациентов не было зарегистрировано значительных побочных эффектов диеты.

Уменьшение частоты приступов, повышение бодрствования и настороженности, а также относительная безопасность этого лечения, наблюдаемые в этом случае, подчеркивают, что кетогенная диета наряду со стандартными методами лечения глициновой энцефалопатии должна рассматриваться для лечения трудноизлечимой эпилепсии.Необходимы более масштабные исследования, чтобы оценить влияние диеты на уровень глицина в плазме.

К авторам описания случая относятся Карренс Л., Сэмюэлс А., Педро Х., Вальдес-Гонсалес К., Сегал Э.

Ссылки:

1. Ван Хов Дж., Кофлин К. II, Шарер Г. Глицинская энцефалопатия . 2002. Обновлено 11 июля 2013 г. В: Pagon RA, Adam MP, Ardinger HH, et al. GeneReviews [Интернет]. Сиэтл (Вашингтон): Вашингтонский университет, Сиэтл; 1993-2016.

2. Свансон М.Э., Кафлин С.Р. мл., Шарер Г.Х. и др.Биохимические и молекулярные предикторы прогноза некетотической гипергликемии. Ann Neurol. 2015; 78: 606-618.

3. Хеннерманн Дж. Б., Бергер Дж. М., Грибен У. и др. Прогнозирование отдаленных результатов при глициновой энцефалопатии: клиническая хирургия. J Inherit Metab Dis. 2011; 35 (2): 253-261.

4. Вериссимо С., Гарсия П., Симоэс М. и др. Некетотическая гиперглицинемия: причина энцефалопатии у детей. J Детского нейрол. 2012; 28 (2): 251-254.

5.Kossoff EH, Habbout R. Использование диетической терапии при эпилептическом статусе. J Детского нейрол. 2013; 28 (8): 1049-1051.

6. Фриман Дж. М., Коссофф Э. Х., Хартман А. Л.. Кетогенная диета: десять лет спустя. Педиатрия. 2007; 119 (3): 535-543.

7. Scholl-Bürgi S, Höller A, Pichler K, et al. Кетогенные диеты у пациентов с наследственными нарушениями обмена веществ. J Inherit Metab Dis. 2015; 38 (4): 765-773.

8. Кусмай Р., Мартинелли Д., Диониси Вичи С. и др.Кетогенная диета при ранней миоклонической энцефалопатии из-за некетотической гиперглицинемии. Eur J Paediatr Neurol. 2012; 16 (5): 509-513.

9. Juge N, Gray JA, Omote H, et al. Метаболический контроль транспорта и высвобождения везикулярного глутамата. Neuron. 2010; 68 (1): 99-112.

10. Таннер Г.Р., Лутас А., Мартенес-Франсуа Дж. Р., Йеллен Г. Одиночное открытие канала K _ATP в ответ на активацию потенциала действия в нейронах зубчатых гранул мыши. J Neurosci. 2011; 31 (23): 8689-8696.

11. Ма В., Берг Дж., Йеллен Г. Метаболиты кетогенной диеты уменьшают возбуждение в центральных нейронах, открывая каналы K _ATP . J Neurosci. 2007; 27 (14): 3618-3625.

12. Далин М., Эльфвинг А., Унгерштедт У., Амарк П. Кетогенная диета влияет на уровни возбуждающих и ингибиторных аминокислот в спинномозговой жидкости у детей с рефрактерной эпилепсией. Epilepsy Res. 2005; 64 (3): 115-125.

13. Боу К.Дж., Ро Дж. М.. Противосудорожный механизм кетогенной диеты. Эпилепсия. 2007; 48 (1): 43-58.

% PDF-1.3 % 233 0 объект > эндобдж xref 233 89 0000000016 00000 н. 0000002131 00000 н. 0000002234 00000 н. 0000002610 00000 н. 0000002824 00000 н. 0000003320 00000 н. 0000003416 00000 н. 0000004520 00000 н. 0000004789 00000 н. 0000004811 00000 н. 0000005151 00000 п. 0000005174 00000 н. 0000006875 00000 н. 0000006898 00000 н. 0000008700 00000 н. 0000008723 00000 н. 0000010486 00000 п. 0000010509 00000 п. 0000012391 00000 п. 0000012414 00000 п. 0000014257 00000 п. 0000014526 00000 п. 0000014810 00000 п. 0000014833 00000 п. 0000016501 00000 п. 0000016522 00000 п. 0000016543 00000 п. 0000016566 00000 п. 0000018210 00000 п. 0000018233 00000 п. 0000020116 00000 п. 0000020138 00000 н. 0000020976 00000 п. 0000020998 00000 н. 0000021699 00000 н. 0000021722 00000 п. 0000022977 00000 п. 0000023000 00000 п. 0000024836 00000 п. 0000024858 00000 п. 0000025436 00000 п. 0000025459 00000 п. 0000027729 00000 н. 0000027752 00000 п. 0000030345 00000 п. 0000030368 00000 п. 0000034882 00000 п. 0000034905 00000 п. 0000040602 00000 п. 0000040625 00000 п. 0000046572 00000 п. 0000046595 00000 п. 0000051287 00000 п. 0000051310 00000 п. 0000055863 00000 п. 0000055886 00000 п. 0000061740 00000 п. 0000061763 00000 п. 0000067118 00000 п. 0000067141 00000 п. 0000071937 00000 п. 0000071960 00000 п. 0000077675 00000 п. 0000077698 00000 п. 0000082443 00000 п. 0000082466 00000 п. 0000087691 00000 п. 0000087714 00000 п. 0000093619 00000 п. 0000093642 00000 п. 0000099766 00000 н. 0000099789 00000 н. 0000105601 00000 п. 0000105624 00000 н. 0000111001 00000 н. 0000111024 00000 н. 0000117225 00000 н. 0000117248 00000 н. 0000121275 00000 н. 0000121298 00000 н. 0000124692 00000 н. 0000124715 00000 н. 0000131783 00000 н. 0000131806 00000 н. 0000138711 00000 н. 0000138734 00000 н. 0000143989 00000 н. 0000002298 00000 н. 0000002588 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 234 0 объект > эндобдж 235 0 объект > эндобдж 320 0 объект > транслировать Hb’c` (A @ lV ~ 0kJdC̥d и

Обзор, использование, побочные эффекты, меры предосторожности, взаимодействия, дозировка и обзоры

Bannai M, Kawai N, Ono K, Nakahara K, Murakami N.Влияние глицина на субъективную дневную работоспособность у здоровых добровольцев с частичным ограничением сна. Фронт Neurol. 2012 18 апреля; 3:61. Просмотреть аннотацию.

Bannai M, Kawai N. Новая терапевтическая стратегия для аминокислотной медицины: глицин улучшает качество сна. J Pharmacol Sci. 2012; 118 (2): 145-8. Просмотреть аннотацию.

де Конинг Т.Дж., Дюран М., Дорланд Л. и др. Благоприятные эффекты L-серина и глицина при лечении судорог при дефиците 3-фосфоглицератдегидрогеназы.Ann Neurol 1998; 44: 261-5 .. Просмотреть аннотацию.

Диас-Флорес М., Крус М., Дюран-Рейес Г., Мунгиа-Миранда С., Лоза-Родригес Н., Пулидо-Касас Е., Торрес-Рамирес Н., Гаха-Родригес О., Кумате Дж., Байса-Гутман Л.А., Эрнандес- Сааведра Д. Пероральный прием глицина снижает окислительный стресс у пациентов с метаболическим синдромом, улучшая систолическое артериальное давление. Может J Physiol Pharmacol. 2013 Октябрь; 91 (10): 855-60. Просмотреть аннотацию.

Evins AE, Фитцджеральд С.М., Wine L и др. Плацебо-контролируемое испытание глицина, добавленного к клозапину при шизофрении.Am J Psychiatry 2000; 157: 826-8 .. Просмотреть аннотацию.

File SE, Fluck E, Fernandes C. Благотворное влияние глицина (биоглицина) на память и внимание у взрослых молодого и среднего возраста. J Clin Psychopharmacol 1999; 19: 506-12. . Просмотреть аннотацию.

Fries MH, Rinaldo P, Schmidt-Sommerfeld E, et al. Изовалериановая ацидемия: ответ на лейциновую нагрузку после трех недель приема добавок глицина, L-карнитина и комбинированной терапии глицин-карнитином. J Pediatr 1996; 129: 449-52 .. Просмотреть аннотацию.

Гринвуд Л.М., Леунг С., Мичи П.Т. и др. Влияние глицина на негативность слухового несоответствия при шизофрении. Schizophr Res. 2018; 191: 61-69. Просмотреть аннотацию.

Гусев Е.И., Скворцова В.И., Дамбинова С.А. и др. Нейропротекторные эффекты глицина в терапии острого ишемического инсульта. Цереброваск Дис 2000; 10: 49-60. Просмотреть аннотацию.

Харви С.Г., Гибсон-младший, Берк, Калифорния. L-цистеин, глицин и dl-треонин в лечении гипостатических язв на ногах: плацебо-контролируемое исследование.Pharmatherapeutica 1985; 4: 227-30 .. Просмотреть аннотацию.

Heresco-Levy U, Javitt DC, Ermilov M, et al. Двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное испытание адъювантной терапии глицином для лечения резистентной шизофрении. Br J Psychiatry 1996; 169: 610-7 .. Просмотреть аннотацию.

Heresco-Levy U, Javitt DC, Ermilov M, et al. Эффективность высоких доз глицина при лечении стойких негативных симптомов шизофрении. Arch Gen Psychiatry 1999; 56: 29-36 .. Просмотреть аннотацию.

Инагава К., Хираока Т., Кохда Т., Ямадера В., Такахаши М.Субъективное влияние приема глицина перед сном на качество сна. Сон и биологические ритмы. 2006; 4: 75-77.

Инагава К., Кавай Н., Оно К., Сукегава Е., Цубуку С., Такахаши М. Оценка острых побочных эффектов приема глицина в высоких дозах у людей-добровольцев. Seikatsu Eisei. 2006; 50: 27-32.

Джавитт, округ Колумбия, Балла А., Сершен Х, Лайта А.Э. Премия за исследования Беннета. Аннулирование фенциклидин-индуцированных эффектов глицином и ингибиторами транспорта глицина. Биол Психиатрия 1999; 45: 668-79.. Просмотреть аннотацию.

Джавитт Д.К., Зильберман И., Зукин С.Р. и др. Облегчение негативных симптомов при шизофрении глицином. Am J Psychiatry 1994; 151: 1234-6 .. Просмотреть аннотацию.

Oshima S, Shiiya S, Nakamura Y. Эффекты комбинированного лечения глицином и триптофаном в сыворотке крови у субъектов с легкой гиперурикемией: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное исследование. Питательные вещества 2019; 11 (3). pii: E564. Просмотреть аннотацию.

Поткин С.Г., Джин И, Банни Б.Г., Коста Дж., Гуласекарам Б.Эффект клозапина и дополнительных высоких доз глицина при резистентной к лечению шизофрении. Am J Psychiatry 1999; 156: 145-7 .. Просмотреть аннотацию.

Rose ML, Cattley RC, Dunn C, et al. Пищевой глицин предотвращает развитие опухолей печени, вызванных пролифератором пероксисом WY-14,643. Канцерогенез 1999; 20: 2075-81 .. Просмотреть аннотацию.

Rose ML, Madren J, Bunzendahl H, Thurman RG. Пищевой глицин подавляет рост опухолей меланомы B16 у мышей. Канцерогенез 1999; 20: 793-8.. Просмотреть аннотацию.

Турман Р.Г., Чжун З., фон Франкенберг М. и др. Профилактика вызванной циклоспорином нефротоксичности с помощью диетического глицина. Трансплантация 1997; 63: 1661-7 .. Просмотреть аннотацию.

Варгас М.Х., Дель-Разо-Родригес Р., Лопес-Гарсия А. и др. Влияние перорального глицина на клинический, спирометрический и воспалительный статус у субъектов с муковисцидозом: пилотное рандомизированное исследование. BMC Pulm Med. 2017; 17 (1): 206. Просмотреть аннотацию.

Woods SW, Уолш BC, Хокинс KA, Миллер TJ, Saksa JR, D’Souza DC, Pearlson GD, Javitt DC, McGlashan TH, Krystal JH.Лечение глицином синдрома риска психоза: отчет о двух пилотных исследованиях. Eur Neuropsychopharmacol. 2013 августа; 23 (8): 931-40. Просмотреть аннотацию.

Ямадера В., Инагава К., Чиба С., Баннаи М., Такахаши М., Накаяма К. Прием глицина улучшает субъективное качество сна у добровольцев, что коррелирует с полисомнографическими изменениями. Сон и биологические ритмы. 2007; 5: 126-131.

Инь М., Икедзима К., Arteel GE, Seabra V и др. Глицин ускоряет восстановление после повреждения печени, вызванного алкоголем.J Pharmacol Exp Ther 1998; 286: 1014-9 .. Просмотреть аннотацию.

Чжун З., Arteel GE, Коннор HD и др. Циклоспорин А увеличивает гипоксию и выработку свободных радикалов в почках крыс: профилактика с помощью диетического глицина. Am J Physiol 1998; 275: F595-604 .. Просмотреть аннотацию.

Некетотическая гиперглицинемия: MedlinePlus Genetics

Некетотическая гиперглицинемия — это заболевание, характеризующееся аномально высокими уровнями молекулы, называемой глицином, в организме (гиперглицинемия). Избыток глицина накапливается в тканях и органах, особенно в головном мозге.У больных есть серьезные неврологические проблемы.

Некетотическая гиперглицинемия имеет две формы: тяжелую и ослабленную. Обе формы обычно начинаются вскоре после рождения, хотя в некоторых случаях признаки и симптомы могут проявиться в первые несколько месяцев жизни. Только ослабленная форма начинается позже в младенчестве. Формы различаются серьезностью признаков и симптомов. Чаще встречается тяжелая некетотическая гиперглицинемия. Больные младенцы испытывают сильную сонливость (вялость), которая со временем ухудшается и может привести к коме.У них также может быть слабый мышечный тонус (гипотония) и опасные для жизни проблемы с дыханием в первые дни или недели жизни. У большинства детей, переживших эти ранние признаки и симптомы, развиваются трудности с кормлением, аномальная жесткость мышц (спастичность), глубокая умственная отсталость и приступы, которые трудно контролировать. Большинство пораженных детей не достигают нормальных этапов развития, таких как питье из бутылки, сидение или хватание предметов, и со временем они могут потерять приобретенные навыки.

Признаки и симптомы ослабленной формы некетотической гиперглицинемии сходны с симптомами тяжелой формы заболевания, но менее выражены. Дети с ослабленной некетотической гиперглицинемией обычно достигают определенных этапов развития, хотя навыки, которые они достигают, сильно различаются. Несмотря на задержку развития, многие затронутые дети со временем учатся ходить и могут общаться с другими, часто используя язык жестов. У некоторых пострадавших детей развиваются судороги; если они присутствуют, судороги обычно легкие и поддаются лечению.Другие особенности могут включать спастичность, непроизвольные подергивания (хорея) или гиперактивность.

Люди с некетотической гиперглицинемией также могут иметь определенные изменения в головном мозге, которые можно увидеть с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ). Например, у детей с тяжелой формой заболевания ткань, соединяющая левую и правую половины мозга (мозолистое тело), ​​меньше среднего размера.

Метаболомика на основе ЯМР при педиатрической лекарственно-устойчивой эпилепсии — предварительные результаты

Выбор субъектов

Исследование было одобрено этическим комитетом Силезского медицинского университета, и было получено письменное информированное согласие родителей или опекунов каждого ребенка. участие их ребенка в исследовании.Все методы были выполнены в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами.

В исследование были включены 48 пациентов. Пациенты были разделены на две группы: группа эпилепсии (EG) и контрольная группа (RG). В ЭГ вошли 28 человек, страдающих эпилепсией (средний возраст 12 месяцев, соотношение женщин и мужчин 13:15). Типы приступов, типы эпилепсии и синдромы эпилепсии были определены в соответствии с классификацией и терминологией Международной лиги против эпилепсии (ILAE 2017).Всем детям с эпилепсией (ЭГ) был проведен протокол диагностики, включающий ЭЭГ, видеоЭЭГ, 24-часовую ЭЭГ (в отдельных случаях), лабораторные тесты на врожденные нарушения метаболизма, хромосомный анализ и молекулярное исследование. Все пациенты с эпилепсией получали от 1 до 5 противоэпилептических препаратов (AED): VPA = 23 (47,9%), LVT = 11 (22,9%), VGB = 9 (18,8%), ACTH = 7 ( 14,6%), PB = 4 (8,3%), CBL = 3 (6,3%), TPM = 2 (4,55%), LTG = 1 (2,1%), CLZ = 1 ( 2,1%), OXC = 1 (2,1%). Ни один из пациентов не соблюдал кетогенную диету (КД).В результате лечения у 16 ​​пролеченных пациентов приступы исчезли.

ЭГ разделили на 2 подгруппы. В группу эпилепсии с припадками (EG ₁ ) вошли 12 пациентов с припадками в ходе исследования (средний возраст составлял 10 месяцев, соотношение женщин и мужчин 4: 8) [Таблица 1]. Возраст начала эпилепсии 1–30 месяцев. Фокальные приступы были классифицированы у 2 пациентов, приступы с генерализованным началом у 7 пациентов, фокальные и генерализованные приступы у 2 пациентов. Тип фокальной эпилепсии был классифицирован у 2 пациентов, генерализованный тип у 7 пациентов, комбинированный фокальный и генерализованный тип у 2 пациентов, эпилептический спазм у 1 пациента и синдромы эпилепсии у 8 пациентов (синдром Веста у 5, синдром Леннокса-Гасто у 2, синдром Драве в 1).Этиология эпилепсии была установлена ​​у 6 пациентов (структурная этиология у 5 пациентов: гипоксически-ишемическая энцефалопатия у 4 и генетическая этиология у 1 пациента: синдром Драве) и осталась неизвестной у 50% (n = 6). Задержка развития выявлена ​​у 10 пациентов.

EG ₂ была подгруппой пациентов, у которых не было приступов во время исследования (средний возраст составлял 13 месяцев, соотношение женщин и мужчин 9: 7, n = 16) [Таблица 2].Возраст начала эпилепсии от 1 до 36 месяцев. Фокальные приступы были классифицированы у 8 пациентов, приступы с генерализованным началом у 5 пациентов, фокальные и генерализованные приступы у 2 пациентов. Типы эпилепсии были классифицированы как: фокальная эпилепсия у 8 пациентов, генерализованная эпилепсия у 5 пациентов, комбинированная фокальная и генерализованная эпилепсия у 2 пациентов. Синдромы эпилепсии установлены у 6 пациентов (синдром Веста — у 4, синдром Леннокса-Гасто — у 1, синдром Драве — у 1). Этиология эпилепсии установлена ​​у 12 (75%) пациентов (структурная этиология у 10 пациентов: порок развития мозга у 6, гамартома у 1, гипоксически-ишемическая энцефалопатия у 3, генетическая этиология у 6 пациентов: синдром Нунана, хромосомная аберрация — трисомия 21. Мутации TSC, NF1, SCN1A и метаболическая этиология у 1 пациента: метиломалоновая ацидурия) и оставались неизвестными у 25% (n = 4).Задержка развития выявлена ​​у 13 пациентов, РАС — у 1 пациента.

У всех пациентов с ЭГ концентрации вальпроевой кислоты в сыворотке крови были в терапевтическом диапазоне, у пациентов была нормальная функция печени и почек, а уровни сывороточных трансаминаз были нормальными.

В группу RG вошли 20 пациентов (средний возраст 20 месяцев, соотношение женщин и мужчин 7:13). У всех детей не было выявлено неврологических симптомов, задержки развития и хронических заболеваний.Семейный и гестационный анамнез отрицательный. При рутинных лабораторных исследованиях, ЭЭГ и МРТ головного мозга отклонений не выявлено. Все дети не употребляли наркотики.

Относительно широкий возрастной диапазон (от 3 до 48 месяцев) группы ЭГ обусловлен различиями в возрасте начала эпилепсии у детей и последующим последующим диагнозом рефрактерной эпилепсии. Однако, чтобы не уменьшать и без того небольшой размер группы, из исследования не исключались и самые молодые пациенты. С другой стороны, поскольку здоровые дети не должны подвергаться исследованию (из-за этических проблем), контрольная группа (РГ) была выбрана из пациентов с незначительными проблемами со здоровьем (согласно критериям включения, описанными выше), диагностированными в нашем отделении.Такие диагностические процедуры особенно сложны в возрасте до 12 месяцев. Таким образом, сопоставить обе группы по возрасту было непросто. Чтобы уменьшить ограничение исследования из-за несоответствия возраста изучаемых групп, к данным была применена возрастная поправка, как подробно описано в разделе 2.8.

Клинические проявления

Клинические характеристики пациентов с ЭГ показаны в таблицах 1 и 2.

Подготовка образцов сыворотки для ЯМР-спектроскопии

Ночные пробы периферической крови были собраны между 6 и 9 часами дня.м. У 5 пациентов образцы собирали дважды: до и после модификации АВД. Общее количество собранных образцов сыворотки составило 53 (33 в группе EG и 20 в группе RG). Образцы сыворотки для эксперимента по метаболомике были приготовлены в соответствии с модифицированным протоколом Bruker ¹⁸ , включающим двухступенчатое размораживание (при 4 ° C и комнатной температуре) и с использованием фосфатного буфера (pH 7,4) с D ₂ O и TSP. Аликвоты по 600 мкл раствора выливали в 5-миллиметровые пробирки для ЯМР (Wilmad WG-1235-7) и хранили при 4 ° C до спектроскопического анализа.

Протоколы измерений

Спектры ЯМР 1H регистрировали на спектрометре Bruker 400 МГц Avance III (Bruker Biospin, Райнштеттен, Германия), оборудованном 5-миллиметровым зондом PABBI. Процедуры обеспечения качества, измерения и постобработки следовали протоколу, ранее описанному Богушевичем и др. . в предыдущей работе ¹⁸ . Тесты обеспечения качества проводились ежедневно перед началом измерений, настройка параметров сбора всегда производилась для каждого измеренного образца.Спектры получали при постоянном усилении приемника (90,5) и температуре 310 К. NOESY (ядерная спектроскопия на эффекте Оверхаузера), CPMG (Карра-Перселла-Мейбума-Гилла), DIFF (с диффузионным редактированием) и двумерным JRES (с J-разрешением) спектры были получены для каждого образца сыворотки крови.

Всего было получено 212 спектров ЯМР (по 4 спектра на каждый из 53 образцов). Описание и обоснование применяемых последовательностей и параметров сбора данных ЯМР доступно в дополнительном материале.

Постобработка спектров

Экспоненциальное расширение линии (0,3 Гц) и автоматическая фазовая коррекция применялись с помощью Topspin (Bruker Biospin). Программное обеспечение Amix (Bruker Biospin) использовалось для выравнивания спектров ЯМР с сигналом аланина при 1,5 ppm с последующим сужением спектральной области до диапазона 9,0–0,5 ppm, удалением остаточного сигнала воды и спектральным бакетированием (с размером ведра). 0,002 частей на миллион). Нормализация не применялась. Наши предыдущие результаты показывают, что строгое соблюдение протокола подготовки образцов и протокола измерений обеспечивает очень стабильные и воспроизводимые результаты, позволяющие интерпретировать биологические данные ^18,19,20 .

Количественная оценка метаболитов

Одномерные положительные проекции спектров JRES использовали для количественной оценки низкомолекулярных метаболитов, в то время как липидные сигналы количественно оценивали на основе спектров, редактируемых диффузией. Пики были интегрированы по площади с использованием AMIX (Bruker Biospin), и интегралы были измерены в спектральных областях, определенных индивидуально для каждого низкомолекулярного метаболита, тогда как в случае липидных сигналов применялся диапазон 0,12 ppm вокруг конкретного пика.

Идентификация метаболитов

Идентификация метаболитов проводилась на основе сравнения с библиотекой эталонных соединений (в Chenomx NMR Suite Professional (Chenomx Inc., Эдмонтон, Канада)), информации о множественности и скалярных связях, извлеченной из 2D спектров JRES, а также информации от человека. База данных Metabolome (http://www.hmdb.ca/) и доступная литература ²¹ .

Возрастная зависимость

Поскольку концентрация многих метаболитов изменяется в процессе развития, особенно в младенчестве и раннем детстве ^22,23,24 , интегральные интенсивности сигналов ЯМР были исследованы в зависимости от возраста и скорректированы с использованием остаточного метода ^25,26 .Остаточный метод основан на определении хода изменения признака в контрольной группе и вычислении прогнозируемого значения этого признака для всего набора данных. Остатки получаются путем вычитания этого прогнозируемого курса из наблюдаемых значений для каждого субъекта и представляют отклонения от курса, прогнозируемого для контрольной группы (с использованием конкретных значений субъекта для каждой ковариаты) ^25,26 . Возрастная зависимость определялась по метаболическим профилям, измеренным для контрольной группы — пациенты, у которых не было метаболических нарушений вследствие эпилепсии.

Существует множество публикаций, описывающих нормальный спектральный вид и концентрации метаболитов в развивающемся организме. Такие отчеты служат основой для расчета разницы между спектральными данными, полученными для детей и взрослых, а также нормы, откуда следует исследовать патологию ^22,23,24 . В этих работах используются различные математические функции для описания изменений метаболических концентраций с возрастом (моноэкспоненциальные или мультиэкспоненциальные функции, логарифм и линейная регрессия).

В нашем подходе были проанализированы процент объясненной дисперсии и значимость параметров различных моделей в описании взаимосвязи между интегралами метаболитов и возрастом (моноэкспоненциальная, мультиэкспоненциальная, логарифмическая и гомографическая функция). Гомографическая функция была выбрана, поскольку она лучше всего описывает изменчивость данных и желаемые характеристики монотонности.

Коэффициент ранговой корреляции Спирмена со стандартным порогом значимости p <0.{RG} (age) = {a} _ {1} + \ frac {{a} _ {2}} {age} $$

(1)

Это рациональная функция с горизонтальной асимптотой для возраста, стремящейся к + ∞, равной a ₁ , тогда как параметр a ₂ определяет динамику развития, наблюдаемую в метаболоме сыворотки.

Параметры a ₁ и ₂ , описывающие процессы созревания, оценивались с использованием алгоритма Гаусса – Ньютона и нелинейного метода наименьших квадратов.

Статистическая достоверность полученной модели была проверена с помощью теста нормальности остатков и статистической значимости оцениваемого параметра, R-значение> 0,45.

Возрастные функции, отражающие метаболические изменения в RG, были приняты в качестве эталонного курса для расчета остаточных значений, чтобы сделать уровень метаболомного маркера независимым от возраста для R (R ^RG ) и эпилепсии (R ^EG). ) группы ^25,26 :

$$ {R} ^ {RG} = {C} _ {измерено} ^ {RG} — {C} ^ {RG} (возраст), \, {R} ^ {EG} = {C} _ {измерено} ^ {EG} — {C} ^ {RG} (возраст) $$

(2)

где \ ({C} _ {измерено} ^ {RG} \) и \ ({C} _ {измерено} ^ {EG} \) — интегралы метаболитов, количественно определенные по спектрам ЯМР.

Анализ данных

Многовариантный анализ спектров ЯМР проводили с использованием программного обеспечения SIMCA-P + (Umetrics, против 14) и Stata (StataCorp LP, против 13,1). Переменные ЯМР были масштабированы по Парето. Первоначальный анализ проводился с использованием неконтролируемого анализа главных компонентов (PCA). Затем был применен ортогональный частичный дискриминантный анализ методом наименьших квадратов (OPLS-DA). Результаты методов многомерной проекции (MPT) представлены графически на двух типах графиков, подробное описание и интерпретация которых доступны в ¹⁸ .

Из-за относительно небольшого размера исследуемой группы проверка контролируемой модели OPLS-DA проводилась с использованием внутренней перекрестной проверки. Статистическая значимость расчетной прогностической силы модели OPLS-DA была проверена с использованием дисперсионного анализа перекрестно проверенных остатков (cv-ANOVA).

Интегралы метаболитов оценивали по их статистической значимости с помощью t-критерия Стьюдента и критерия Манна-Уитни U (MWU) (для переменных с ненормальным распределением, Шапиро-Уилка).Корреляцию между возрастом и интегралами метаболитов проверяли с использованием коэффициентов ранговой корреляции Спирмена. Программное обеспечение Statistica (Statsoft, v. 12) применялось для одномерной статистики.

Окончательная модель классификации, основанная на интегралах метаболитов и скорректированных по возрасту интегралах метаболитов (R), была построена с использованием линейного дискриминантного анализа (LDA) для Z-нормированных данных метаболитов. Метод LDA ориентирован на поиск линейной комбинации отдельных переменных, которая обеспечит наибольшее разделение между группами.Модель LDA основана на предположении, что наблюдения в каждой группе (EG и RG) имеют многомерное нормальное распределение, а ковариационные матрицы равны для всех групп, но с разными средними значениями. Предположения о многомерной нормальности вектора наблюдения и равенстве ковариационной матрицы проверялись с помощью тестов Дорника-Хансена и F (Box) соответственно.

Результаты LDA представлены графически и в виде таблиц. Оценка важности метаболитов для различения между группами EG и RG основана на коэффициентах структуры LDA, измеряющих корреляцию между дискриминантной функцией и каждым метаболитом.Оценка эффективности классификации LDA проводилась с использованием пошагового подхода. Во-первых, прогностическая сила модели LDA была подтверждена с использованием проверки с исключением по одному (LOO) с использованием априорных вероятностей 0,53 и 0,47 для групп EG и RG соответственно. Связь между изучаемыми группами представлена ​​графиком оценок, где дискриминантные оценки LOO (шкала y) графически представлены для каждого рассматриваемого пациента (шкала x).

Затем была построена кривая ROC как мера для оценки эффективности классификатора LDA, которая соответствует общей доле правильно классифицированных наблюдений и площади под кривой (AUC).

Анализ метаболических путей проводился с использованием MetaboAnalyst 4.0 (MetPA) с использованием точного критерия Фишера, выбранного для анализа избыточного представления и относительной центральности промежуточности для анализа топологии пути.