Как пить бактериофаг стафилококковый: Бактериофаг стафилококковый: применение при золотистом стафилококке, лечение антистафилококовым бактериофагом, инструкция, противопоказания и состав

Бактериофаги: как принимать лекарственные препараты бактериофаги для лечения детей и взрослых

Инфекционные болезниГнойные заболеванияИнфекции желудочно-кишечного трактаМужские болезниДетские инфекцииЖенские болезниЛОР заболевания

Кишечная палочкаКлебсиелла озенаКлебсиелла окситокаКлебсиелла пневмонииКлебсиелла риносклеромыПротей вульгарисПротей мирабилисСальмонелла серогруппы АСальмонелла серогруппы BСальмонелла серогруппы ССальмонелла серогруппы DСальмонелла серогруппы ECальмонелла тифимуриумСинегнойная палочкаСтафилококкиCтрептококкиШигелла ЗоннеШигелла Флекснера 1, 2, 3, 4,6 серотиповЭнтерококки

УфаНижний НовгородПермь

По популярностиА-ЯЯ-А

Секстафаг® Пиобактериофаг поливалентный жидкий

Препарат показан для: лечения и профилактики гнойно-воспалительных и энтеральных  заболеваний, вызванных стафилококками, стрептококками, протеями, клебсиеллами, синегнойной и кишечной палочками Перейти на сайт препарата

формы выпуска препарата

Интестифаг® (Интести-бактериофаг)

Препарат показан для: лечения и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта, вызванных бактериями дизентерии, сальмонеллами, эшерихиями коли, протеем, энтерококками,  стафилококками, псевдомонас аэрогиноза или их сочетанием Перейти на сайт препарата

Пиофаг® (Пиобактериофаг комплексный жидкий)

Препарат показан для: лечения и профилактики гнойно-воспатлительных и кишечных заболеваний, вызванных стафилококками, энтерококками, стрептококками, синегнойной палочкой, клебсиеллами, патогенной кишечной палочкой различных серогрупп, протеем

Стрептофаг® (Бактериофаг стрептококковый)

Препарат показан для: лечения и профилактики заболеваний, вызванных бактериями стрептококка

Пиобактериофаг поливалентный очищенный

Препарат показан для: лечения и профилактики гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями стафилококками, стрептококками, протеем, синегнойной палочкой, клебсиеллой пневмонии, кишечной палочкой

Бактериофаг дизентерийный поливалентный

Препарат показан для: лечения и профилактики бактериальной дизентерии, вызванной шигеллой Флекснера 1, 2, 3, 4,6 серотипов и шигеллой Зонне

формы выпуска препарата

Стафилофаг® (Бактериофаг стафилококковый)

Препарат показан для: лечения и профилактики гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями рода стафилококков

формы выпуска препарата

Бактериофаг псевдомонас аеругиноза (синегнойный)

Препарат показан для: лечения и профилактики заболеваний, вызванных синегнойной палочкой

формы выпуска препарата

Бактериофаг сальмонеллезный групп A,B,C,D,E

Препарат показан для: лечения и профилактики заболеваний и бактерионосительства, вызванных сальмонеллами серотипов груп А, В,С,D,Е

Клебсифаг® (Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный)

Препарат показан для: лечения и профилактики заболеваний, вызванных бактериями клебиселлы пневмонии, клебсиеллы озена, клебсиеллы риносклеромы

формы выпуска препарата

Бактериофаг протейный жидкий

Препарат показан для: Лечение и профилактика гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями Р. vulgaris, Р. mirabilis в составе комплексной терапии

формы выпуска препарата

Бактериофаг коли

Препарат показан для: Лечение и профилактика заболеваний, вызванных бактериями Е. coli в составе комплексной терапии

Бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный

Препарат показан для: Лечение и профилактика заболеваний, вызванных бактериями Klebsiella pneumoniae в составе комплексной терапии

Бактериофаг колипротейный

Препарат показан для: лечения и профилактики гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, дисбактериозов, вызванных бактериями протея и энтеропатогенной кишечной палочки

Бактеріофаг стафілококовий інструкція, ціна в аптеках України

На сайті немає в наявності товарів з торговою назвою «Бактеріофаг стафілококовий»

Редакторська група

Дата створення: 27. 04.2021       Дата оновлення: 29.04.2023

Склад і форма випуску

склад:

Розчин Бактериофаг стафілококовий містить:

• Стерильний очищений фільтрат фаголізатов бактерій Staphylococcus;
• Консервант — хінозол.

Форма випуску:

Розчин Бактериофаг стафілококовий по 20 або 100 мл у флаконах, в пачку з картону вкладають 4 флакона по 20 мл або 1 флакон, що містить 100 мл розчину.

Фармакологічна дія

Бактеріофаг стафілококовий — лікарський препарат, що володіє специфічним бактерицидну дію відносно штамів стафілококів, найбільш значущих в етіології гнійних і запальних захворювань.

Бактеріофаг стафілококовий специфічно лизирует бактерії Staphylococcus. Фагові частки прикріплюються до мембрани чутливих бактерій, проникають всередину клітини та розмножуються за рахунок її ресурсів. Внаслідок цього відбувається загибель клітини та вихід зрілих фагових частинок, здатних до зараження інших чутливих бактеріальних клітин.

Бактеріофаг стафілококовий не впливає на інші бактерії, зокрема не порушує природну мікрофлору.

Показання

Бактеріофаг стафілококовий застосовують для лікування захворювань різної локалізації, які обумовлені стафілококами.

У ЛОР-практиці та пульмонології Бактериофаг стафілококовий застосовують для лікування пацієнтів з отитом, синуситом, ларингіт, трахеїт, фарингіт, гайморит, ангіною, плевритом, бронхітом і пневмонією.

У хірургічній практиці препарат використовують для лікування пацієнтів з інфікованими ранами, опіками, флегмоною, фурункулами та карбункулами, а також гідраденітом, мастит, остеомієліт, бурсит і парапроктитом.

Крім того, Бактериофаг стафілококовий використовують в лікуванні генералізованих септичних захворювань, а також урогенітальних і ентеральних інфекцій, включаючи уретрит, пієлонефрит, цистит, кольпіт, сальпінгоофорит, ендометрит, дисбактеріоз, гастроентероколіт і холецистит.

У педіатричній практиці Бактериофаг стафілококовий призначають новонародженим при піодермії, гастроентероколіті, сепсисі, омфаліт та кон’юнктивіті.

Рекомендується профілактична обробка післяопераційних і свежеінфіцірованних ран препаратом Бактериофаг стафілококовий.

Дозування

Бактеріофаг стафілококовий призначений для місцевого, ректального і перорального застосування. Перед застосуванням слід струснути флакон, при наявності видимого осаду або зміні прозорості розчин застосовувати не можна.

Для досягнення максимального терапевтичного ефекту лікування слід починати якомога раніше після появи симптомів захворювання.

Тривалість терапії, схему застосування препарату і дози визначає лікар.

Місцево препарат застосовують залежно від локалізації інфекції:

1) У гінекологічній практиці препарат застосовують у формі зрошень, аплікацій та тампонів, змочених розчином;
2) В хірургічній практиці розчин використовують у вигляді промивань, зрошень, тампонування, а також для введення в дренованих або обмежені порожнини;
3) Введення в суглобову, плевральну та інші обмежені порожнини, в тому числі дренированную порожнину сечового міхура і ниркової балії, через капілярний дренаж, нефростому або цистостому;
4) У отоларингологічній практиці розчин використовують для промивань, зрошень, змочування стерильних турунд, а також в якості назальних і вушних крапель;
5) При кишкових захворюваннях призначають ректальне введення бактеріофага (в комплексі з прийомом всередину).

Рекомендовані разові дози для пацієнтів різних вікових груп:

• Дітям молодше 6 місяців ректально, як правило, призначають 10 мл бактеріофага, перорально — 5 мл препарату. Перші дози препарату слід вводити у вигляді високих клізм, якщо не відзначається розвитку сригіваній, порушень травлення і інших небажаних ефектів бактеріофаг можна призначати перорально або перорально і ректально.
• Дітям 6-12 місяців ректально, як правило, призначають 20 мл бактеріофага, перорально — 10 мл препарату;
• Дітям 1-3 років ректально, як правило, призначають 30 мл бактеріофага, перорально — 15 мл препарату;
• Дітям 3-8 років ректально, як правило, призначають 40 мл бактеріофага, перорально — 20 мл препарату;
• Дорослим і дітям старше 8 років рекомендується призначення 30 мл розчину Бактериофаг стафілококовий перорально і 50 мл препарату при ректальному застосуванні.

Середня тривалість терапії становить від 7 до 20 днів. При рецидивуючих формах захворювань можна призначати кілька курсів препарату Бактериофаг стафілококовий в рік.

Слід враховувати, що якщо перед місцевим застосуванням препарату Бактериофаг стафілококовий проводилася обробка хімічними антисептиками, то до використання бактеріофага слід промити ділянку шкірного покриву фізіологічним розчином натрію хлориду.

Побічні дії

При застосуванні розчину Бактериофаг стафілококовий не було відзначено розвитку небажаних ефектів.

Протипоказання

Немає протипоказань до застосування розчину Бактериофаг стафілококовий.

вагітність:

Бактеріофаг стафілококовий в період вагітності та годування дитини грудьми може застосовуватися під контролем лікаря.

Взаємодія

Бактеріофаг стафілококовий допускається застосовувати сочетано з антибактеріальними препаратами, а також лікарськими засобами інших груп.

Передозування

Чи не надходило повідомлень про передозування препарату Бактериофаг стафілококовий.

Умови зберігання

Бактеріофаг стафілококовий слід зберігати в приміщеннях з температурним режимом від 2 до 8 градусів Цельсія.

Бактеріофаг стафілококовий придатний протягом 2 років після випуску.

Препарат Бактериофаг стафілококовий можна транспортувати при температурному режимі від 8 до 30 градусів Цельсія протягом не більше 30 днів.

Склад і форма випуску

склад:

Розчин Бактериофаг стафілококовий містить:

• Стерильний очищений фільтрат фаголізатов бактерій Staphylococcus;
• Консервант — хінозол.

Форма випуску:

Розчин Бактериофаг стафілококовий по 20 або 100 мл у флаконах, в пачку з картону вкладають 4 флакона по 20 мл або 1 флакон, що містить 100 мл розчину.

Фармакологічна дія

Бактеріофаг стафілококовий — лікарський препарат, що володіє специфічним бактерицидну дію відносно штамів стафілококів, найбільш значущих в етіології гнійних і запальних захворювань.

Бактеріофаг стафілококовий специфічно лизирует бактерії Staphylococcus. Фагові частки прикріплюються до мембрани чутливих бактерій, проникають всередину клітини та розмножуються за рахунок її ресурсів. Внаслідок цього відбувається загибель клітини та вихід зрілих фагових частинок, здатних до зараження інших чутливих бактеріальних клітин.

Бактеріофаг стафілококовий не впливає на інші бактерії, зокрема не порушує природну мікрофлору.

Показання

Бактеріофаг стафілококовий застосовують для лікування захворювань різної локалізації, які обумовлені стафілококами.

У ЛОР-практиці та пульмонології Бактериофаг стафілококовий застосовують для лікування пацієнтів з отитом, синуситом, ларингіт, трахеїт, фарингіт, гайморит, ангіною, плевритом, бронхітом і пневмонією.

У хірургічній практиці препарат використовують для лікування пацієнтів з інфікованими ранами, опіками, флегмоною, фурункулами та карбункулами, а також гідраденітом, мастит, остеомієліт, бурсит і парапроктитом.

Крім того, Бактериофаг стафілококовий використовують в лікуванні генералізованих септичних захворювань, а також урогенітальних і ентеральних інфекцій, включаючи уретрит, пієлонефрит, цистит, кольпіт, сальпінгоофорит, ендометрит, дисбактеріоз, гастроентероколіт і холецистит.

У педіатричній практиці Бактериофаг стафілококовий призначають новонародженим при піодермії, гастроентероколіті, сепсисі, омфаліт та кон’юнктивіті.

Рекомендується профілактична обробка післяопераційних і свежеінфіцірованних ран препаратом Бактериофаг стафілококовий.

Дозування

Бактеріофаг стафілококовий призначений для місцевого, ректального і перорального застосування. Перед застосуванням слід струснути флакон, при наявності видимого осаду або зміні прозорості розчин застосовувати не можна.

Для досягнення максимального терапевтичного ефекту лікування слід починати якомога раніше після появи симптомів захворювання.

Тривалість терапії, схему застосування препарату і дози визначає лікар.

Місцево препарат застосовують залежно від локалізації інфекції:

1) У гінекологічній практиці препарат застосовують у формі зрошень, аплікацій та тампонів, змочених розчином;
2) В хірургічній практиці розчин використовують у вигляді промивань, зрошень, тампонування, а також для введення в дренованих або обмежені порожнини;
3) Введення в суглобову, плевральну та інші обмежені порожнини, в тому числі дренированную порожнину сечового міхура і ниркової балії, через капілярний дренаж, нефростому або цистостому;
4) У отоларингологічній практиці розчин використовують для промивань, зрошень, змочування стерильних турунд, а також в якості назальних і вушних крапель;
5) При кишкових захворюваннях призначають ректальне введення бактеріофага (в комплексі з прийомом всередину).

Рекомендовані разові дози для пацієнтів різних вікових груп:

• Дітям молодше 6 місяців ректально, як правило, призначають 10 мл бактеріофага, перорально — 5 мл препарату. Перші дози препарату слід вводити у вигляді високих клізм, якщо не відзначається розвитку сригіваній, порушень травлення і інших небажаних ефектів бактеріофаг можна призначати перорально або перорально і ректально.
• Дітям 6-12 місяців ректально, як правило, призначають 20 мл бактеріофага, перорально — 10 мл препарату;
• Дітям 1-3 років ректально, як правило, призначають 30 мл бактеріофага, перорально — 15 мл препарату;
• Дітям 3-8 років ректально, як правило, призначають 40 мл бактеріофага, перорально — 20 мл препарату;
• Дорослим і дітям старше 8 років рекомендується призначення 30 мл розчину Бактериофаг стафілококовий перорально і 50 мл препарату при ректальному застосуванні.

Середня тривалість терапії становить від 7 до 20 днів. При рецидивуючих формах захворювань можна призначати кілька курсів препарату Бактериофаг стафілококовий в рік.

Слід враховувати, що якщо перед місцевим застосуванням препарату Бактериофаг стафілококовий проводилася обробка хімічними антисептиками, то до використання бактеріофага слід промити ділянку шкірного покриву фізіологічним розчином натрію хлориду.

Побічні дії

При застосуванні розчину Бактериофаг стафілококовий не було відзначено розвитку небажаних ефектів.

Протипоказання

Немає протипоказань до застосування розчину Бактериофаг стафілококовий.

вагітність:

Бактеріофаг стафілококовий в період вагітності та годування дитини грудьми може застосовуватися під контролем лікаря.

Взаємодія

Бактеріофаг стафілококовий допускається застосовувати сочетано з антибактеріальними препаратами, а також лікарськими засобами інших груп.

Передозування

Чи не надходило повідомлень про передозування препарату Бактериофаг стафілококовий.

Умови зберігання

Бактеріофаг стафілококовий слід зберігати в приміщеннях з температурним режимом від 2 до 8 градусів Цельсія.

Бактеріофаг стафілококовий придатний протягом 2 років після випуску.

Препарат Бактериофаг стафілококовий можна транспортувати при температурному режимі від 8 до 30 градусів Цельсія протягом не більше 30 днів.

Бактеріофаг стафілококовий: інструкція

БАКТЕРІОФАГ СТАФІЛОКОКОВИЙ РІДКИЙ (UA/14622/01/01)

Форма випуску: рідина оральна, оромукозна, нашкірна, ректальна, вагінальна з активністю не менше 10 в 5 ступені по 20 мл у флаконах № 10, по 100 мл у пляшках № 1

Склад: 1 флакон (20 мл) або 1 пляшка (100 мл) містить стерильний розчин бактеріофагу, що лізує мікроорганізми виду Staphylococcus aureus, з активністю не менше 10 в 5 ступені

Производитель: Україна

Протеомная характеристика литических бактериофагов Staphylococcus aureus, выделенных из сточных вод Индии

На этой странице

РезюмеВведениеМатериалы и методыРезультатыОбсуждениеБлагодарностиСсылкиАвторское правоСтатьи по теме

Staphylococcus aureus 9 0008 — грамположительная бактерия, вызывающая различные заболевания, в том числе мастит крупного рогатого скота. имеет тяжелые экономические последствия. Стандартное лечение антибиотиками приводит к отбору устойчивых штаммов, что приводит к необходимости альтернативного лечения, такого как терапия бактериофагами. Настоящее исследование описывает выделение и характеристику стафилококкового фага из образцов сточных вод. Изоляты S. aureus , полученные из коллекции микробных типов культур (MTCC), Чандигарх, Индия, использовали для скрининга стафилококковых фагов. Фаг, обозначенный как ΦMSP, был выделен из проб сточных вод методом наложения мягкого агара. Он образовывал прозрачные бляшки на триптон-соевом агаре, покрытом S. aureus . Трансмиссионная электронная микроскопия показала, что фаг имел икосаэдрическую симметрию. Он имел 5 основных белков и обладал гидролазой пептидогликана, соответствующей 70  кДа. Инфекция ΦMSP индуцировала 26 белков, однозначно экспрессирующихся в золотистый стафилококк . Этот фаг может быть предложен в качестве фага-кандидата для лечения стафилококковых инфекций.

1. Введение

Staphylococcus aureus ( S. aureus ) представляет собой неподвижную и неспорообразующую грамположительную бактерию, вызывающую ряд заболеваний у животных и людей. Это частая причина внутрибольничной пневмонии и различных заболеваний, включая пищевое отравление, синдром токсического шока, кожные заболевания и мастит крупного рогатого скота; последнее имеет серьезные экономические последствия. S. aureus приобрел устойчивость к большинству антибиотиков, от самых старых (пенициллин) до новейших (линезолид) [1]. Резистентность бактериальных возбудителей к большинству имеющихся антибиотиков стала серьезной медико-ветеринарной проблемой во всем мире. За последние 40 лет не было обнаружено ни одного нового класса антибиотиков, и поэтому существует острая необходимость в разработке некоторых альтернатив антибактериальной терапии для борьбы с множественными лекарственно-устойчивыми бактериальными инфекциями.

Бактериофаги были впервые успешно использованы для лечения бактериальных инфекций за десять лет до открытия антибиотиков [2]. Для компенсации недостатков химиотерапии разработана бактериофаговая терапия против многих бактериальных инфекций [2, 3]. В настоящее время фаги используются во многих приложениях биотехнологии и в области медицины в качестве альтернативы антибиотикам, векторам для белков и ДНК-вакцин или в качестве средств доставки генной терапии. Потенциальные области применения фаготерапии включают лечение и профилактику гнойных раневых инфекций, в пред- и послеоперационной хирургии, ожоговых ран, кожных инфекций, глазных и ушных инфекций [4], заболеваний легких и плевры [5]. Все эти наблюдения позволяют предположить, что бактериофаги могут успешно использоваться для борьбы с устойчивостью к антибиотикам. В этой статье мы описываем выделение литического бактериофага против S. aureus и его характеристика.

2. Материалы и методы

2.1. Коллекция бактериальных штаммов и их поддержание

S. aureus была получена из коллекции микробных типов культур и банка генов (MTCC), Чандигарх. Лиофилизированную культуру суспендировали в 3% триптон-соевом бульоне (TSB) и высевали на триптон-соевый бульон (HiMedia, Mumbai) с добавлением 1,5% бактериологического агара (HiMedia, Mumbai). Планшеты инкубировали при 37°С в течение ночи. На следующий день колонии собирали с чашек и культивировали в TSB. Культуры были дополнительно подтверждены окрашиванием по Граму [6].

2.2. Выделение фагов против

S. aureus

Литические фаги против S. aureus подвергали скринингу методом наложения мягкого агара [7] после процедуры обогащения. Около 30 образцов были взяты из сточных вод Университета ветеринарии и зоотехники Гуру Ангад Дев (GADVASU), Лудхияна. Образцы центрифугировали при 6000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант собирали и фильтровали через шприцевой фильтр 0,45  мк . Около 150  мкл л хлороформа добавляли к 15 мл фильтрата и инкубировали в течение 20 минут. Фильтрат смешивали с 10 мл Культура S. aureus (в логарифмической фазе) и 25 мл 2X триптонно-соевого бульона (6%) и инкубировали при 37°C в течение ночи. На следующий день вышеуказанную смесь центрифугировали и фильтровали через шприцевой фильтр 0,22  мкм . 100  мкл л бактериальной культуры (в логарифмической фазе) и 50  мкл л очищенного фагового фильтрата инкубировали в течение 20 минут и добавляли к 3 мл расплавленного мягкого агара, распределяли на чашках с триптон-соевым агаром и инкубировали при 37°С. С в течение 18 часов. После инкубации образование просветленных зон (бляшек) свидетельствовало о присутствии литических фагов. Бляшки собирали, ресуспендировали в солевом магниевом (СМ) буфере (100 мМ NaCl, 8 мМ MgSO 9 ).0057 4 , 50 мМ Tris-HCl (pH 7,5) и 0,01% желатина) и инкубировали с хозяином для получения лизирующих бляшек. После первичной изоляции проводили вторичное посев штрихом с бляшек из положительных первичных чашек на чашках TSA с бактериями-хозяевами. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 15–18 часов для получения линий просветов [7].

2.3. Элюирование фагов

Буфер

SM выливали на вторичные планшеты, выращенные фагами. Всю поверхность полутвердого материала соскребали стерильными наконечниками и планшеты инкубировали при 37°С в течение 8 часов. На следующий день весь материал соскоба с буфером SM собирали микронаконечниками с широким отверстием в центрифужные пробирки объемом 50 мл. Суспензию фага центрифугировали при 6000 об/мин в течение 5 минут при 4°С. Супернатант фильтровали через 0,22  μ шприцевой фильтр и хранят при 4°C для дальнейшего использования.

Количество БОЕ выделенных фагов определяли в соответствии с Chandra et al. (2011) [8] по формуле количество БОЕ = количество подсчитанных бляшек × разведение/объем использованного фагового препарата (т.е. 100  мк л).

2.4. Концентрирование фильтрата фага ультрацентрифугированием

Фильтрат фага дополнительно концентрировали ультрацентрифугированием согласно Eyer et al. (2007) [9] с небольшими изменениями. Вкратце, 10 мл фагового фильтрата подвергали ультрацентрифугированию при 2 50 000 g в течение 2,5 часов при 4°C. Полученный осадок затем восстанавливали в 100  мкл л буфера SM и хранили при 4°C. БОЕ концентрированного фага снова определяли по тому же протоколу, который упоминался ранее.

2.5. Визуализация фагов с помощью трансмиссионного электронного микроскопа (ПЭМ)

Морфологическая характеристика фага была выполнена с помощью электронной микроскопии, которая была проведена во Всеиндийском институте медицинских наук, Нью-Дели. 6  мкл л концентрированной фаговой суспензии (10 ¹⁰  БОЕ/мл) в буфере SM наносили на поверхность гидрофильной медной сетки Formvar, покрытой углеродом (Nissin EM Corporation), и образец оставляли адсорбироваться в течение 2 минут. Избыток образца осторожно удаляли, прикасаясь к краю сетки фильтровальной бумагой; тогда 6  мкл л деионизированной воды наносили на сетку и удаляли через короткое время. Фаг окрашивали добавлением 1% водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты (ФВК), рН 6,5. Через 2 минуты избыток красителя удаляли, и сетке давали высохнуть на воздухе в течение 30 минут. Сетки наблюдали в просвечивающем электронном микроскопе (Morgagni 268 D, Fei Electron Optics) [10].

2.6. Анализ протеома бактериофагов

2.6.1. Обнаружение белков методом SDS-PAGE

Белки выделенных фагов Staphylococcus выявляли электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия [11]. Концентрированный препарат фага (примерно 10 ¹⁰  БОЕ/мл) смешивали с равным объемом 2Х буфера Лэммли (Sigma, США) и кипятили в течение 10 минут. В каждую лунку загружали смесь образцов 25  мкл л вместе с 6  мкл л предварительно окрашенной белковой лестницы широкого диапазона ( Puregen , USA ) в одну лунку. Гель работал при постоянном токе 20 мА в течение 1 часа (приблизительно), пока следящий краситель не достиг дна геля. Затем гель окрашивали красителем 0,25% кумасси бриллиантовым синим R-250 (Amresco, США) в течение 4 часов, а затем соответствующим образом обесцвечивали для лучшей видимости белковых полос с несколькими сменами обесцвечивающего раствора и хранили в 7% растворе ледяной уксусной кислоты в течение 4 часов. фотография. Гель сканировали на сканере и документировали.

2.6.2. Заражение

Staphylococcus aureus его бактериофагом

S. aureus , выращенных в течение ночи, инокулировали в две 20-мл свежие пробирки TSB и инкубировали при 37°C в течение 6 часов. Одну из пробирок заражали 1 мл выделенного фага (10 ¹⁰   БОЕ/мл), а другую оставляли в качестве контроля. Обе пробирки инкубировали при 37°С в течение следующих 8 часов. Инфицированные и неинфицированные бактериофагом клеток S. aureus собирали центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. После трех промывок стерильным фосфатно-солевым буфером (PBS) (pH 7,4) клетки лизировали, инкубируя при комнатной температуре в течение 1 часа с буфером для лизиса (8 М мочевина, 4% масс./об. 3-холамидопропил-диметиламминио-1- пропансульфонат (CHAPS), 2% буфер иммобилинового градиента pH (IPG) (диапазон pH 3–10), 10  мМ дитиотреитола (DTT) и коктейльный ингибитор протеазы (Fisher Scientific, США)). Затем смесь обрабатывали ультразвуком с помощью микронасадки (Misonix, США) в течение 5 коротких (20–30 с) циклов амплитудой 15 Гц с 30-секундным охлаждением на льду между каждым ультразвуком. Суспензию центрифугировали при 12000 об/мин в течение 8 минут и собирали надосадочную жидкость. Концентрацию белка определяли на спектрофотометре NanoDrop (Thermo Scientific, США). Цельноклеточный белок очищали с помощью набора 2DE-cleanup (GE Healthcare, Швеция). Белковый осадок восстанавливали в регидратационном буфере (8 M мочевины, 2% CHAPS, 0,2% DTT (дитиотреитол), 0,5% буфера IPG, pH 3–10, и 0,002% бромфенолового синего) и определяли концентрацию.

2.7. 2-мерный электрофорез (2DE) и анализ изображений

Электрофорез в первом измерении образца белка (около 200  мк г) проводили на иммобилизованных полосках геля с градиентом рН (IPG) (pH от 3 до 10; 7 см; GE Здравоохранение, США). Полоску IPG регидратировали при комнатной температуре в течение 12 часов и подвергали изоэлектрическому фокусированию с использованием 5-ступенчатой ​​программы (шаг/удержание 100 В в течение 4 часов, п/ч 500 В в течение 1 часа, градиент 1000 В в течение 1 часа, градиент 5000). В в течение 2 часов, с/ч 5000 В в течение 30 минут и максимальный ток 50  9полоска 0007 мк A/IPG). Затем полоски IPG инкубировали в уравновешивающем буфере I (6 М мочевины, 50 мМ Трис-HCl, 2 % SDS, 30 % глицерина, 0,002 % бромфенолового синего, pH 8,8), содержащем 1 % (масса/объем) DTT, с последующим уравновешиванием. буфер II (уравновешивающий буфер I + 2,5% йодацетамид) по 15 минут в каждом. Разделение во втором измерении проводили на 12% SDS-PAGE при 100 В в течение 30 минут, а затем при 200 В до тех пор, пока фронт красителя не достигал дна гелей. После электрофореза гели окрашивали кумасси синим R-250 и сканировали с использованием сканера изображений IІЅ (GE Healthcare). Обнаружение пятна, сопоставление пятна и количественный анализ выполняли с использованием программного обеспечения для двумерного анализа ImageMaster 7.0 (GE Healthcare). 2D-анализ был биологически повторен трижды. Изображения геля нормализовали в соответствии с общим количеством в наборе для анализа. Критерий Стьюдента был принят для оценки пятен, которые значительно различались между зараженными фагом и неинфицированными S. aureus групп.

2.8. Анализ зимограммы

Очищенную суспензию фага подвергали диализу против буфера SM, смешивали с загрузочным буфером (1% SDS, 6% сахарозы, 100 мМ дитиотреитола, 10 мМ Трис, pH 6,8 и 0,0625 % бромфенолового синего) и кипятили в течение 5 минут перед загрузка на 12% гели SDS-PAGE, содержащие 0,2% автоклавированных клеток S. aureus [12]. Гели отливали в соответствии с Laemmli (1970) [11], за исключением того, что для ренатурации белка использовали только 0,01% SDS. В одну лунку также загружали предварительно окрашенную белковую лестницу (Puregene, США). После электрофореза дорожку с предварительно окрашенной белковой лестницей вырезали и отделяли от остальной части геля для сравнения после окрашивания. Гель промывали в течение 30 мин водой, а затем выдерживали в течение 1 сут при комнатной температуре в 150 мМ натрий-фосфатном буфере, рН 7,0, содержащем 0,1 % тритона Х-100 и 10 мМ MgCl 9 .0057 2 . Зимограмму окрашивали в течение 3 часов 0,1% раствором метиленового синего в 0,001% КОН и промывали водой.

3. Результаты

3.1. Выделение литических фагов против

Staphylococcus aureus

Скрининг различных образцов сточных вод ГАДВАСУ, Лудхиана, методом наложения мягкого агара выявил литический фаг против S. aureus , обозначенный как MSP. На газоне S. aureus образовались очень небольшие зоны просветов (бляшек). Эти пластинки в дальнейшем использовали для вторичного штрихования на чашках с 1,5% TSA, покрытых золотистый стафилококк . Поперек линий штриховки наблюдались зоны просветов (рис. 1). Это указывало на то, что выделенные фаги обладали мощной литической активностью в отношении S. aureus . Было обнаружено, что фаготитр (бляшкообразующие единицы)/мл MSP составляет 150 × 10 ⁴  БОЕ/мл.

3.2. Морфологическая характеристика MSP

Просвечивающая электронная микроскопия MSP показала, что фаг имел икосаэдрическую головку диаметром около 60 нм и длинный несокращающийся хвост около 125,83 нм (рис. 2).

3.3. Протеомная характеристика

Из-за относительной простоты фаговых протеомов для первоначального протеомного анализа выделенного фага Staphylococcus был выбран 1DE. Было обнаружено примерно 17 полос белков в диапазоне 15–120 кДа (рис. 3). Было обнаружено, что 5 из них являются основными белками, соответствующими молекулярной массе 100 кДа, 52 кДа, 37 кДа, 35 кДа и 15 кДа (прибл.).

2DE был выполнен для идентификации белков, однозначно экспрессируемых в S. aureus в ответ на инфекцию MSP. Это было сделано путем сравнения протеомов S. aureus и инфицированных фагом S. aureus (рис. 4). В общей сложности было обнаружено 123 и 149 белковых пятен для S. aureus и инфицированных фагом S. aureus, соответственно, что позволяет предположить, что около 26 белков экспрессировались в бактериях в ответ на фаговую инфекцию. Несколько дифференциально экспрессируемых белков S. aureus в ответ на фаговую инфекцию перечислены в таблицах 1(a) и 1(b) вместе с их соответствующими молекулярными массами (MW) и изоэлектрическими точками (pI). Было обнаружено, что около 16 белков (молекулярная масса 30–70 кДа, pI 4–8) сверхэкспрессированы, в то время как 5 белков (молекулярная масса 33–98  кДа, pI 4,8–6,2) были обнаружены с пониженной экспрессией в S. aureus из-за фаговой инфекции.

Для подтверждения наличия структурных компонентов с гидролитической активностью пептидогликана в MSP был проведен анализ зимограммы с автоклавированными клетками S. aureus . После электрофоретического разделения белков фага на зимограмме была обнаружена одиночная полоса массой 70 кДа в виде прозрачной зоны на темно-синем фоне окрашенного пептидогликана (рис. 5).

4. Обсуждение

В этой статье описывается выделение бактериофага из сточных вод, который проявлял литические свойства с S. aureus . В предыдущих исследованиях рабочие выделяли фаги из сточных вод с конечной целью борьбы с инфекциями S. aureus [13, 14]. В наших усилиях по выделению новых стафилококковых фагов было проверено 30 образцов сточных вод и, наконец, был выделен литический фаг против S. aureus .

Выделенный бактериофаг был выбран для дальнейшей характеристики на основании его способности производить очень четкий лизис в анализе бляшек с помощью золотистый стафилококк . Литический (вирулентный) бактериофаг проникает в бактериальную клетку и использует собственный механизм клетки для размножения. Когда эти механизмы исчерпаны, клетка лизируется и высвобождаются сотни копий исходного бактериофага [15, 16]. Умеренные бактериофаги не всегда лизируют клетку-хозяина и способны интегрировать свой геном в геном хозяина, что может привести к горизонтальному переносу генов, связанных, например, с продукцией токсинов, вирулентностью и устойчивостью к антибиотикам [17, 18]. ]; их нельзя использовать в фаготерапии. Литические бактериофаги предпочтительны в качестве мишеней для бактериофаговой терапии [19].].

Наблюдение фага MSP с помощью ПЭМ показало, что он имел икосаэдрическую головку/капсид и несокращающийся хвост и был подобен членам, принадлежащим к семейству Siphoviridae, в соответствии с рекомендациями Международного комитета по таксономии вирусов.

Существенным для анализа взаимодействия вирус-хозяин является идентификация белков/генов, вовлеченных в вирусную инфекцию. В настоящем исследовании, основанном на сравнении профилей экспрессии белков S. aureus и фаг MSP заразил S. aureus , было обнаружено, что 26 стафилококковых белков индуцируются за счет фаговой инфекции в лабораторных условиях. 26 стафилококковых белков могут иметь различные метаболические функции. MSP может либо использовать клетку-хозяина для собственного воспроизводства путем эффективного захвата и перепрограммирования физиологии хозяина, либо реплицироваться внутри клетки, не затрагивая основные пути биосинтеза в период производства потомства. Последняя стратегия может обеспечить размножение фага без индукции механизмов защиты хозяина, в то время как первая стратегия, вероятно, активирует ответы хозяина. Индукция систем защиты хозяина, вероятно, окажет неблагоприятное влияние на продукцию потомства фага и снизит приспособленность фага [20]. Можно предположить, что прямой стрессовый ответ на вирусную инфекцию может быть обеспечен за счет регуляции экспрессии ключевых белков, имеющих отношение к энергетическому метаболизму, транспортных белков и регуляторных белков цикла трикарбоновых кислот (ЦТК). Аналогичные результаты были получены Wei and Zhang (2010) [21], которые сравнили протеомы глубоководных термофилов Геобациллы зр. и бактериофаг GVE2 заразил Geobacillus sp. и обнаружили, что 20 белков участвуют в заражении вирусом бактерий.

Зрелые вирионы часто содержат пептидогликангидролазы, участвующие в деградации клеточной стенки хозяина перед введением их генетического материала во время инфекции. Недавно было продемонстрировано, что некоторые белки хвостовой рулетки имеют структурные домены, сходные с пептидогликангидролазами, что позволяет фаговой ДНК проникать через толстый пептидогликановый слой бактерий-хозяев, таких как 9.0007 Mycobacterium [12]. В настоящем исследовании одна полоса 70 кДа на зимограмме подтвердила наличие активной пептидогликангидролазы в каждом фаге. Размер соответствует белку вириона gp58 (72,5 кДа) phiIPLA88, который был выделен против S. aureus из молока мастита и содержал предсказанные гидролитические домены пептидогликана [12].

Конфликт интересов

Ни один из авторов этого документа не имеет финансовых или личных отношений с другими людьми или организациями, которые могли бы ненадлежащим образом повлиять на содержание документа или исказить его.

Благодарности

Авторы выражают благодарность директору Школы биотехнологии животных, GADVASU и UGC, Нью-Дели, за предоставление необходимых условий для проведения работы, а также центральному инструментальному центру, AIIMS, Нью-Дели, за помощь в электронной микроскопии.

Ссылки

1. S.K. Pillai, G. Sakoulas, C. Wennersten et al., «Устойчивость к линезолиду у Staphylococcus aureus: характеристика и стабильность резистентного фенотипа», Journal of Infectious Diseases , том. 186, нет. 11, стр. 1603–1607, 2002.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

2. А. Сулаквелидзе и Э. Каттер, «Бактериофаговая терапия у людей», в Bacteriophage: Biology and Applications , стр. 381–36, CRC Press, Бока-Ратон, Флорида, США, 2005.

   Посмотреть по адресу:

   Google Scholar

3. B. Biswas, S. Adhya, P. Washart et al., «Терапия бактериофагами спасает мышей с бактериемией от клинического изолята устойчивого к ванкомицину Enterococcus faecium», Инфекции и иммунитет , том. 70, нет. 1, стр. 204–210, 2002.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

4. Проскуров В. А. Применение стафилококкового бактериофага в лечебно-профилактических целях // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 47, нет. 2, pp. пациентов с новообразованиями» Советская Медицина , тел. 6, стр. 23–26, 1989.

   Посмотреть по адресу:

   Google Scholar

5. Беверидж Т. Дж., «Использование окраски по Граму в микробиологии», Biotechnic and Histochemistry , vol. 76, нет. 3, стр. 111–118, 2001.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

6. А. Дж. Синнотт, Ю. Куанг, М. Куримото, К. Ямамичи, Х. Ивано и Ю. Танджи, «Выделение из сточных вод и характеристика новых бактериофагов Staphylococcus aureus с широким кругом хозяев и мощными литическими способностями». », Прикладная и экологическая микробиология , том. 75, нет. 13, стр. 4483–4490, 2009.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

7. М. Чандра, С. Такур, Д. Наранг и Х. М. Саксена, «Выделение бактериофага против сальмонеллы Дублин и определение его физической устойчивости в различных условиях in vitro», African Journal of Microbiology Research , том. 5, нет. 15, стр. 2044–2047, 2011.

   Посмотреть по адресу:

   Google Scholar

8. Л. Эйер, Р. Пантучек, З. Здрахал и др., «Анализ структурного белка поливалентного стафилококкового бактериофага 812», Proteomics , vol. 7, нет. 1, стр. 64–72, 2007.

   Просмотр по адресу:

   Google Scholar

9. Дж. Оуэнс, М. Д. Бартон и М. В. Хойзенродер, «Выделение и характеристика бактериофагов Campylobacter jejuni из домашняя птица, Ветеринарная микробиология , вып. 162, нет. 1. С. 144–150, 2013.

   Посмотреть по адресу:

   Сайт издателя | Google Scholar

10. UK Laemmli, «Расщепление структурных белков во время сборки головки бактериофага T4», Nature , vol. 227, нет. 5259, стр. 680–685, 1970.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

11. P. García, C. Madera, B. Martínez, A. Rodríguez и J. Evaristo Suárez, «Распространенность бактериофагов, заражающих Staphylococcus aureus, в образцах молочных продуктов и их потенциал в качестве агентов биологической борьбы», Journal of Dairy Science , vol. 92, нет. 7, стр. 3019–3026, 2009.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

12. Q. F. Wills, C. Kerrigan, and J. S. Soothill, «Экспериментальная защита бактериофагами от абсцессов Staphylococcus aureus на модели кролика», Antimicrobial Agents and Chemotherapy , vol. 49, нет. 3, стр. 1220–1221, 2005.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

13. Дж. Дж. Гилл, Дж. К. Пакан, М. Э. Карсон, К. Э. Лесли, М. В. Гриффитс и П. М. Сабур, «Эффективность и фармакокинетика терапии бактериофагами при лечении субклинического мастита, вызванного золотистым стафилококком, у лактирующего молочного скота», Противомикробные агенты и химиотерапия , vol. 50, нет. 9, стр. 2912–2918, 2006.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

14. М. П. Дойл и М. С. Эриксон, «Уменьшение переноса патогенов пищевого происхождения в домашнем скоте и птице», Poultry Science , vol. 85, нет. 6, стр. 960–973, 2006.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

15. G. W. Hanlon, «Бактериофаги: оценка их роли в лечении бактериальных инфекций», Международный журнал противомикробных агентов , том. 30, нет. 2, стр. 118–128, 2007 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

16. Е. Ф. Бойд и М. К. Уолдор, «Альтернативный механизм приобретения холерного токсина холерным вибрионом: генерализованная трансдукция CTXPhi бактериофагом CP-T1», Infection and Immunity , vol. 67, нет. 11, pp. 5898–5905, 1999.

    Просмотр по адресу:

    Google Scholar

17. Браббан А. Д., Хайт Э. и Каллауэй Т. Р., «Эволюция патогенов пищевого происхождения посредством переноса генов, опосредованного умеренными бактериофагами. », Патогены и болезни пищевого происхождения , vol. 2, нет. 4, стр. 287–303, 2005.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

18. Р. В. Хендрикс, «Геномика бактериофагов», Current Opinion in Microbiology , vol. 6, нет. 5, стр. 506–511, 2003 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

19. М. М. Поранен, Дж. Дж. Равантти, А. М. Гран, Р. Гупта, П. Аувинен и Д. Х. Бамфорд, «Глобальные изменения в экспрессии клеточных генов во время инфекции бактериофага PRD1», Журнал вирусологии , том. 80, нет. 16, стр. 8081–8088, 2006.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

20. D. Wei и X. Zhang, «Протеомный анализ взаимодействий между глубоководным термофильным бактериофагом и его хозяином при высокой температуре», Journal of Virology , vol. 84, нет. 5, стр. 2365–2373, 2010.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

Copyright

Copyright © 2014 Kamalpreet Kaur Sangha et al. Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы.

Staphylococcus aureus subsp. бактериофаг aureus 6 — 27704-B1

Делиться

27704-B1 ^™

Работает на Биоз Подробнее о Биозе

Документация

Лист продукта

Сертификат анализа Скачать

Скачать сертификат анализа на Staphylococcus aureus subsp. aureus бактериофаг 6 ( 27704-B1 ), введите номер партии точно так, как он указан на этикетке продукта или в упаковочном листе.

Номер лота

Запрос сертификата анализа

Сертификат анализа на эту партию Staphylococcus aureus subsp. aureus бактериофаг 6 ( 27704-B1 ) в настоящее время недоступен в Интернете. Заполните эту форму, чтобы запросить этот сертификат анализа.

Номер счета

Артикул ATCC

Лот №

Адрес электронной почты

Ничего, мне не нужен этот сертификат анализа

Мы получили ваш запрос на этот сертификат анализа. Мы свяжемся с вами как можно скорее.

Вы можете найти номер своего счета в подтверждении заказа на продажу или в счете-фактуре заказа.

Сертификат происхождения Скачать

Скачать сертификат происхождения на Staphylococcus aureus subsp. aureus бактериофаг 6 ( 27704-B1 ), введите номер партии точно так, как он указан на этикетке продукта или в упаковочном листе.

Номер лота

Запрос сертификата происхождения

Сертификат происхождения на эту партию Staphylococcus aureus subsp. aureus бактериофаг 6 ( 27704-B1 ) в настоящее время недоступен в Интернете.

Заполните эту форму, чтобы запросить этот сертификат происхождения.

Номер счета

Артикул ATCC

Лот №

Адрес электронной почты

Ничего, мне не нужен этот сертификат происхождения

Мы получили ваш запрос на этот сертификат происхождения. Мы свяжемся с вами как можно скорее.

Вы можете найти номер своего счета в подтверждении заказа на продажу или в счете-фактуре заказа.

Этот лист продукта недоступен в Интернете. Мы предоставляем этот лист продукта только клиентам, которые приобрели этот продукт уровня биобезопасности 3. Если вы приобрели этот продукт, обратитесь в службу технической поддержки LGC для получения данного описания продукта.

Скачать паспорт безопасности

Откройте паспорт безопасности для этого продукта, чтобы загрузить его.

Выберите язык ЯзыкАнглийский

ошибка

Отмена

Если запрашиваемый продукт не является опасным химическим веществом или не содержит каких-либо опасных химических веществ, паспорт безопасности не требуется и, следовательно, не предоставляется.

Для получения дополнительной информации ознакомьтесь с Паспортом продукта и Целевой страницей Паспорта безопасности.

Проверьте информацию паспорта безопасности

БСЛ 1

Узнайте больше о безопасности информации об этом продукте

ATCC определяет уровень биологической безопасности материала на основе нашей оценки риска в соответствии с текущим изданием Биобезопасность в микробиологических и биомедицинских лабораториях (BMBL) , Министерство здравоохранения и социальных служб США. Вы несете ответственность за понимание опасностей, связанных с материалом, в соответствии с политиками и процедурами вашей организации, а также любыми другими применимыми нормами, которые применяются вашими местными или национальными органами.

ATCC настоятельно рекомендует всегда использовать соответствующие средства индивидуальной защиты при работе с флаконами. Для культур, требующих хранения в жидком азоте, важно отметить, что некоторые флаконы могут протекать при погружении в жидкий азот и будут медленно заполняться жидким азотом. При оттаивании превращение жидкого азота обратно в его газообразную фазу может привести к взрыву флакона или срыву его крышки с опасной силой, создающей разлетающиеся осколки. Без необходимости ATCC рекомендует хранить эти культуры в паровой фазе жидкого азота, а не погружать в жидкий азот.

Необходимые продукты

Эти продукты жизненно важны для правильного использования этого предмета и были подтверждены как эффективные для поддержки функциональности. Если вы используете альтернативные продукты, это может повлиять на качество и эффективность продукта.

Общий

Обработка информации

История

Правовые оговорки

Разрешения и ограничения

Экспортный сертификат происхождения

Покупатели из Аргентины, Колумбии, Египта, Эфиопии, Германии, Греции, Индии, Иордании, Ливана, Перу, Катара, Саудовской Аравии, Испании и Объединенных Арабских Эмиратов
Этот материал может потребоваться экспортный сертификат происхождения, полученный либо ATCC, либо экспедитором; вам не нужно предпринимать никаких действий для этого экспортного сертификата происхождения. Дополнительные сборы могут взиматься в результате получения этого экспортного сертификата происхождения; эти сборы будут применяться после того, как ваш заказ будет подтвержден, и наша служба поддержки клиентов свяжется с вами по этому товару.