| Главная » Статьи и полезные материалы » Микроскопы » Статьи о микроскопах, микропрепаратах и исследованиях микромира » Микроскопия осадка мочи: расшифровка Каждый, кто хоть раз бывал у врача, сталкивался с назначением анализов. Практически каждый пациент сдает общий анализ крови и общий анализ мочи. И это неспроста. Именно по ним врач может быстро определить наличие воспалительного процесса или патологий в организме. В этой статье мы расскажем о микроскопии осадка мочи, его расшифровке и показателях нормы. Но прежде обратимся к основной теории. Моча (урина) – продукт, выделяемый почками. Он является результатом фильтрации крови и состоит из воды и растворенных в ней электролитов, слизи, гормонов, лейкоцитов и других компонентов, по количеству которых и можно узнать о состоянии организма. Анализ мочи: микроскопия, расшифровка Анализ мочи проводится в два этапа. На первом оценивается внешний вид жидкости, ее физические (pH, запах, цвет, мутность) и химические (наличие кетоновых тел, глюкозы, белка) параметры. После этого лаборант приступает к получению осадка. В течение 1–2 часов жидкость отстаивается. Далее пипеткой набирают около 10 мл мочи, добавляют ее в пустую пробирку и помещают в центрифугу. Желательно брать жидкость практически со дна – концентрация веществ там более высокая. Скорость вращения центрифуги выставляют на 1500 об/мин, сама процедура обработки длится около 5–7 минут. В результате моча в пробирке разделяется на жидкость и осадок. Микроскопия осадка мочи: расшифровка (нормальные показатели) Исследуя осадок под микроскопом, можно определить количество лейкоцитов, эритроцитов, солей, бактерий.
Микроскопия мочи: лейкоцитыКак это все выглядит на практике? Что может сказать врачу один измененный показатель? Можно ли сразу поставить диагноз и назначить лечение, которое поможет избежать серьезных осложнений? Предположим, что микроскопия мочи (ее расшифровка) указала на превышение нормы лейкоцитов. По микроскопии мочи (лейкоцитам, эритроцитам и прочим) можно быстро определить наличие воспаления в организме. Отклонение от нормы одного или нескольких показателей способно даже указать на конкретный орган, который требуется обследовать дополнительно. Анализ мочи – надежный и быстрый способ диагностики многих заболеваний. Для исследования осадка используются классические лабораторные (медицинские) микроскопы, которые можно приобрести в нашем интернет-магазине. Если вы разыскиваете конкретную модель микроскопа, свяжитесь с нашими консультантами по телефону или электронной почте – мы с радостью вам поможем! Можно ли при наличии микроскопа самостоятельно изучить образец мочи и поставить себе диагноз? Нет. Мы категорически не рекомендуем заниматься самодиагностикой, если вы не имеете профильного образования. К тому же дома невозможно создать стерильные условия для исследований, и результаты будут искажены из-за привнесенных в образец примесей из окружающей среды. Также в лабораториях всегда соблюдаются особые условия для хранения анализов, которые сложно повторить дома. Не занимайтесь лечением, обязательно обращайтесь за медицинской помочью к врачам. 4glaza.ru Статья обновлена в апреле 2021 года. Использование материала полностью для общедоступной публикации на носителях информации и любых форматов запрещено. Разрешено упоминание статьи с активной ссылкой на сайт www.4glaza.ru. Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления. Рекомендуемые товары
Другие обзоры и статьи о микроскопах, микропрепаратах и микромире:
|
Общий анализ мочи — Микроскопия осадка мочи
Микроскопия нативного препарата. Различают организованный и неорганизованный осадок. Принцип. Микроскопическое исследование нативных препаратов мочевого осадка, полученного при центрифугировании мочи.
ОРГАНИЗОВАННЫЙ ОСАДОК
Эритроциты
Эритроциты в моче имеют дискообразную форму, окрашены в характерный желто-зеленый цвет. Включения в цитоплазме отсутствуют. В концентрированной моче кислой реакции эритроциты могут приобретать звездчатую форму. При длительном пребывании эритроцитов в моче низкой относительной плотности они теряют гемоглобин и имеют вид одноконтурных или двухконтурных колец. Деление эритроцитов иа измененные и неизмененные не имеет первостепенного значения для решения вопроса об источнике гематурии.
Дифференцировать эритроциты надо от дрожжевых грибов и кристаллов оксалатов округлой формы. Грибы в отличие от эритроцитов чаще овальной формы, более резко преломляют свет, имеют голубоватый оттенок и почкуются. Оксалаты обычно имеют различную величину и резко преломляют свет. Прибавление к препарату осадка капли 5 % уксусной кислоты приводит к гемолизу эритроцитов, оставляя грибы и оксалаты без изменения.
Нормальная величина. В норме эритроциты либо не встречаются, либо обнаруживаются единичные в препарате.
Клиническое значение. Гематурия может быть при поражении паренхимы почки (гломерулонефрит, пиелонефрит, опухоли и др.), при тяжелой физической нагрузке и при поражениях мочевыводящих путей (почечных лоханок, мочеточников, мочевого пузыря, уретры).
Лейкоциты
Лейкоциты в моче имеют вид небольших зернистых клеток округлой формы. При низкой относительной плотности мочи размер их увеличивается и в некоторых из них («активных») можно наблюдать броуновское движение гранул. При бактериуриях в щелочной моче лейкоциты довольно быстро разрушаются. Лейкоциты в моче главным образом представлены нейтрофилами, но иногда можно обнаружить лимфоциты и эозинофилы, которые отличаются обильной, равномерной, крупной, преломляющей свет зернистостью.
Активные лейкоциты, так называемые клетки Штернгеймера — Мальбина (Ш.- M.) .), можно выявить следующим образом.
Реактив Штернгеймера — Мальбина.
При микроскопии различают два вида лейкоцитов: одни имеют ядра пурпурно-красного цвета и бесцветную или бледно-розовую цитоплазму, другие бледно-синее, иногда бледно-фиолетовое ядро и почти бесцветную цитоплазму. Бледно- синие клетки называются клетками Ш.- M., в цитоплазме некоторых из них заметно активное движение гранул.
Нормальные величины. В норме в мочевом осадке у мужчин от 0 до 3 лейкоцитов в поле зрения, у женщин — от 0 до 5 лейкоцитов в поле зрения.
Клиническое значение. Увеличение числа лейкоцитов в мочевом осадке свидетельствует о воспалительных процессах в почках или мочевыводящих путях. Наличие в моче «активных» лейкоцитов свидетельствует об интенсивности воспалительного процесса независимо от его локализации.
Эпителиальные клетки.
Эпителиальные клетки в мочевом осадке имеют различное происхождение, т. е. десквамация их происходит с органов, покрытых различными видами эпителия (многослойного плоского, переходного и кубического призматического).
Клетки плоского эпителия
Клетки плоского эпителия полигональной или округлой формы, больших размеров, бесцветные, с небольшим ядром, располагаются в виде отдельных экземпляров или пластами.
Клетки переходного эпителия
Клетки переходного эпителия различной формы (полигональные, «хвостатые», цилиндрические, округлые) и величины, имеют желтоватую окраску, интенсивность которой зависит от концентрации мочи и наличия пигментов, содержат довольно крупное ядро. Среди клеток можно встретить двуядерные. Иногда в клетках наблюдают дегенеративные изменения в виде грубой зернистости и вакуолизации цитоплазмы.
Клетки почечного эпителия
Клетки почечного эпителия неправильной круглой формы, угловатые или четырехугольные, небольших размеров (в 1 1/2-2 раза больше лейкоцита), слегка желтоватого цвета. В цитоплазме клеток обычно выражены дегенеративные изменения: зернистость, вакуолизация, жировая инфильтрация. В результате этих изменений ядра часто не выявляются. Клетки почечного эпителия относятся к кубическому и призматическому эпителию, выстилающему почечные канальцы. Чаще они располагаются в виде групп, цепочек. В некоторых случаях встречаются в виде комплексов округлой или фестончатой формы, состоящих из большого количества клеток разной величины с явлениями жирового перерождения.
Нормальные величины. В мочевом осадке практически всегда встречают клетки плоского и переходного эпителия от единичных в препарате до единичных в поле зрения. Единичные в препарате клетки почечного эпителия на фоне нормальной микроскопической картины мочевого осадка не дают основания говорить о патологии.
Клиническое значение. Особого диагностического значения клетки плоского эпителия, попадающие в мочу из влагалища, наружных половых органов и мочеиспускательного канала, не имеют, но если их обнаруживают расположенными пластами в моче, взятой катетером, то это может указывать на метаплазию слизистой оболочки мочевого пузыря. Такую картину можно наблюдать при лейкоплакии мочевого пузыря и мочеточников, что рассматривают как предопухолевое состояние.
Переходный эпителий выстилает слизистую оболочку мочевого пузыря, мочеточников, почечных лоханок, крупных протоков предстательной железы и простатического отдела мочеиспускательного канала. Усиленная эксфолиация клеток этого эпителия может быть при острых воспалительных процессах мочевого пузыря и лоханок, интоксикациях, а также при мочекаменной болезни и новообразованиях мочевыводящих путей. Клетки почечного эпителия можно выявить в мочевом осадке при поражении паренхимы почек (нефритах), интоксикациях, расстройствах кровообращения.
Обнаружение клеток почечного эпителия в тесной связи с цилиндрами говорит о тяжелом поражении почек.
Цилиндры — элементы осадка. Представляют собой белковые или клеточные образования канальцевого происхождения, имеющие цилиндрическую форму и различную величину. В мочевом осадке различают следующие виды цилиндров: гиалиновые, зернистые, восковидные, эпителиальные, эритроцитарные, пигментные, лейкоцитарные.
Гиалиновые цилиндры
Гиалиновые цилиндры имеют нежные контуры, прозрачны, при ярком освещении плохо заметны. На поверхности может быть легкая зернистость за счет аморфных солей или клеточного детрита. Образуются \из свернувшегося белка. Появление гиалиновых цилиндров свидетельствует о развитии протеинурии, что является следствием повышенной проницаемости клубочковых капилляров. Они представляют собой коллоидную форму белка, возникающую при изменении рН.
Зернистые цилиндры
Зернистые цилиндры имеют более резкие контуры и состоят из плотной зернистой массы желтоватого цвета.
Восковидные цилиндры
Восковидные цилиндры имеют резко очерченные контуры и гомогенную с блеском, слегка желтоватую структуру. Образуются из уплотненных гиалиновых и зернистых цилиндров при задержке их в канальцах.
Эпителиальные цилиндры
Эпителиальные цилиндры имеют четкие контуры и состоят из клеток почечного эпителия.
Эритроцитарные цилиндры
Эритроцитарные цилиндры желтоватого цвета состоят из массы эритроцитов, образуются при почечной гематурии.
Пигментные цилиндры
Пигментные цилиндры могут быть обнаружены при гемоглобинурии и миоглобинурии; коричневого цвета, имеют сходство с зернистыми.
Лейкоцитарные цилиндры
Лейкоцитарные цилиндры, образуются из массы лейкоцитов, обнаруживаются при гнойных процессах в почках, пиелонефритах.
Кроме цилиндров, образованных из белка и клеток, в мочевом осадке иногда встречаются образования цилиндрической формы из аморфных солей, не имеющие практического значения. Эти образования растворяются при подогревании препарата или прибавлении к препарату капли щелочи либо кислоты.
Нормальные величины. В нормальной моче можно встретить единичные гиалиновые цилиндры (1-2 в препарате).
Клиническое значение. Цилиндрурия является симптомом поражения паренхимы почки; хотя и считают, что вид цилиндров особого диагностического значения не имеет, гиалиновые цилиндры подтверждают реальную протеинурию, а лейкоцитарные и эритроцитарные дают возможность предположить источник лейкоцитурии и гематурии.
НЕОРГАНИЗОВАННЫЙ ОСАДОК МОЧИ (КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ ОБРАЗОВАНИЯ)
№ № п/п | Вещество | Внешний вид кристаллов вещества | Способы уточнения при идентификации кристаллических образования | Клиническое значение |
1 | Мочевая кислота C5H4N4O3; макроскопически в виде кирпично-красного осадка или отдельных кристаллов (только в кислой моче) | Полиморфные кристаллы, интенсивно или слабо окрашенные в желтый, а иногда в кирпично-красный цвет, могут быть и бесцветными, имеют форму точильных брусков, многоугольных табличек, игл, булав. Величина кристаллов разная, возможно расположение снопами и розетками | Кристаллы легко растворяются в щелочах, но нерастворимы в кислотах. Дают мурексидную реакцию: осадок нагревают в фарфоровой чашке с несколькими каплями концентрированной азотной кислоты. При добавлении к образовавшемуся интенсивно окрашенному желтому осадку капли аммиака появляется пурпурно-красный цвет | Появляется в осадке при высокой концентрации мочи, при повышенной потливости. Может быть результатом усиленного распада клеток при разрешающихся пневмониях, лейкозах, особенно в период почечной недостаточности |
2 | Ураты — соли мочевой кислоты: C5H3NaN4O3; C5H3KN4O3; макроскопически осадок окрашен в розовый цвет, редко — бесцветный (только в кислой моче) | Мелкие зернышки, окрашенные пигментом, располагаются в виде кучек, полос, откладываясь на свертках слизи, образуют ложные зернистые цилиндры. Могут откладываться на цилиндрах и клетках эпителия | Быстро растворяются при подогревании, прибавлении щелочи. Для растворения используют реактив Селена: 5 г борной кислоты и 5 г буры растворяют в 100 мл горячей дистиллированной воды. Надо- садочную жидкость мочи сливают, добавляют реактив, перемешивают и опять центрифугируют. Реактив Селена на структуру организованного осадка не влияет | Встречаются при лихорадках, гиповолемиях (понос, рвота, усиленное потоотделение), лейкозах |
3 | Кислый мочекислый аммоний C5H3(NH4)N4O3 | Форма гирь, шаров, плодов дурмана | Растворяются при нагревании в щелочах. При прибавлении соляной кислоты или уксусной образуются кристаллы мочевой кислоты | Встречаются при воспалительных процессах мочевыводящих путей инфекционной природы, при щелочном брожении мочи |
4 | Кальция фосфат СаНРO4 ∙ 2H2O | Форма в виде клиньев и копий, могут группироваться в розетки и веера | Растворяются в уксусной кислоте | Можно наблюдать при ревматизме, хлорозе и других анемиях |
5 | Кальция сульфат CaSO4 (только в резко кислой моче) | Форма длинных бесцветных иголок, призм, могут располагаться друзами | Нерастворимы в аммиаке и уксусной кислоте и очень мало меняются от HCl | Диагностическое значение не определено, наблюдают при приеме сернистых вод |
6 | Гиппуровая кислота C6H5COHN ∙ CH3COOH (только в кислой моче) | Форма ромбической призмы, иногда иглы, таблички, соединяясь, образуют звездообразные формы | Не дают положительной мурексидной пробы, не растворяются в уксусной кислоте, но растворимы в этиловом спирте | Причиной появления могут быть диабет, гнилостная диспепсия, употребление брусники, черники, прием салициловой и бензойной кислот |
7 | Аммиак-магнезии фосфат Mg(NH4)PO4∙2H2O (только в щелочной моче) | Форма ромбическая в виде санок, листьев папоротника, ножниц, но чаще это шестигранные призмы со спускающимися плоскостями на концах в форме «гробовых крышек» | Легко растворимы в уксусной кислоте | К появлению приводит прием растительной пищи, воспаление мочевого пузыря, щелочное брожение мочи |
8 | Аморфные фосфаты (кальция фосфат, магния фосфат) Са3(РО4)2; Mg3(РО4)2 | Неокрашенные мелкие кристаллы в виде шариков, лежащих раздельно и скоплениями. Похожи на ураты, но не окрашены | В отличие от уратов не дают положительной мурексидной пробы, не растворяются при нагревании. Растворимы в HCI и уксусной кислоте | Встречаются при рвотах и частых промываниях желудка, сопровождающихся алкалозом; нарушении работы кишечника |
9 | Магния фосфат нейтральный Mg3(РО4)2∙22H2O(только в щелочной моче) | Большие вытянутые ромбические пластинки, встречаются кристаллы в виде шагреневой кожи | Растворимы в уксусной кислоте, нерастворимы в щелочах | Диагностическое значение не вполне определено, встречаются редко (см. п. 7, 8) |
10 | Кальция карбонат CaCO3 (только в щелочной моче) | Имеют вид бесцветных шаров с концентрической исчерченностью, чаще лежат парно, в виде гимнастических гирь, розеток, скрещенных барабанных палочек | Растворяются при прибавлении любой кислоты с выделением пузырьков углекислоты | Встречаются редко. Диагностическое значение аналогично п. 7, 8 |
11 | Кальция оксалат С2СаО4∙3Н2О | Могут иметь форму октаэдров — «конвертов» округлой формы, четырехгранных призм, которые могут быть очень маленького размера | Растворимы в HCl и нерастворимы в щелочах и уксусной кислоте | К появлению в моче приводит употребление в пищу продуктов, богатых щавелевой кислотой (помидоры, шпинат, спаржа, щавель, яблоки, виноград, апельсины и другие фрукты) |
12 | Цистин C6H12N2S2O4. | Шестиугольные кристаллы правильной и неправильной формы, наслаивающиеся друг на друга | Растворимы в аммиаке и HCl. Специальная проба: к 3-5 мл мочи добавляют 2 мл 5 % раствора цианида натрия. Через 10 мин добавляют несколько капель 5 % раствора нитропруссида натрия. В присутствии цистина развивается пурпурно-красное окрашивание | Характерны для цистиноза (наследственная патология обмена) |
13 | Ксантин С5Н4N4O2 | Имеют вид очень мелких бесцветных ромбов | Дают отрицательную мурексндную пробу, хорошо растворимы в аммиаке, щелочах, HCl | Является продуктом расщепления пу- риновых оснований, ведет к образованию камней |
14 | Лейцин С6Н13NO2 и тирозин C9H11NO3 | Лейцин имеет вид шаров, напоминает мочекислый аммоний и капли жира. Тирозин имеет вид блестящих игл, окрашенных в желтый или зеленый цвет, чаше сгруппированных в розетки | Для лейцина характерна отрицательная мурексидная проба и нерастворимость в эфире. Тирозин можно обнаружить с реактивом Миллона; при смешивании его в равных объемах с мочой и подогревании появляется красный осадок, если проба положительна. Реактив Миллона: 1 мл ртути растворяют в 9 мл дымящейся азотной кислоты, разбавляют равным объемом воды и через 2-3 ч фильтруют | Лейцин и тирозин — продукты разложения белка — сопутствуют друг другу и указывают на нарушение обмена при отравлениях фосфором, заболеваниях печени, дефицитной, В12— дефицитной анемии, лейкозах |
15 | Холестерин С27Н46О | Имеет форму табличек с обломанным в виде ступеней одним углом | Кристаллы холестерина растворимы в эфире, спирте, но нерастворимы в щелочах и кислотах | Можно наблюдать при амилоидозе, туберкулезе почек, цистите, холестериновых камнях |
16 | Билирубин С32Н36N4O6 | Игольчатые кристаллы, чаще собраны в пучки, цвет от зеленовато-желтого до рубиново-красного | Могут откладываться на клеточных элементах осадка и даже прокрашивать их | Встречаются при билирубинуриях |
17 | Гематоидин (в своей молекуле не содержит железа) | Игольчатые кристаллы, компактных пучков не образуют | Не растворяются в щелочи. Азотная кислота вызывает быстро исчезающее синее окрашивание | Встречаются при кровотечениях из мочевыводяших путей, особенно связанных с опухолью, абсцессом, травматическим некрозом; образуются в некротизированных тканях |
18 | Гемосидерин C34H33N4FeO5 (железосодержащая часть гематина) | Имеет вид пигментных зерен золотисто-желтого или золотисто- коричневого цвета, располагающихся большей частью внутри клеток эпителия | Реакция на гемосидерин: смешивают каплю осадка с 1-2 каплями приготовленной смеси из равных частей 3 % железосинеродистого калия (желтой кровеносной соли) и 5 % HCl. При наличии гемосидерина выпадает голубой осадок берлинской лазури | Обнаруживают при гемолитических анемиях с внутрисосудистым гемолизом (болезнь Маркьяфавы-Микеле) |
19 | Жирные кислоты | Представлены длинными и игольчатыми кристаллами | Окраска Суданом III при подогревании препарата появляются капли, окрашенные в интенсивно-оранжевый цвет | Обнаруживают при патологических процессах, сопровождающихся жировой дистрофией |
20 | Кристаллы сульфаниламидных препаратов | Обладают большим полиморфизмом (имеют вид снопов, шаров, брусков и т. д.), чаше всего окрашены в желтый цвет | Полоску заранее приготовленной фильтровальной бумаги, пропитанной реактивом (1 г пара-диметиламинобензальдегида, 2 мл концентрированной HCl и 98 мл 2,24 % раствора х. ч. щавелевой кислоты) опускают в осадок мочи. При наличии кристаллов сульфаниламидных препаратов на бумаге появляется ярко-желтое окрашивание | Наблюдают при лечении сульфаниламидными препаратами |
Эпителий в моче — Анализ мочи
Эпителий – это слой клеток, которые выстилают поверхность и полости тела, а также слизистые оболочки, включая мочеполовые пути. В осадке мочи можно встретить 3 вида эпителия: плоский эпителий, переходный эпителий и почечный эпителий.
Моча проходит через почки, мочеточники и другие отделы мочевыделительной системы и постоянно соприкасается с эпителием. Иногда клетки эпителия отслаиваются, и их можно обнаружить при помощи микроскопического анализа осадка мочи. Так как строение клеток эпителия в различных органах отличается, в моче могут обнаруживаться отдельные виды эпителиальных клеток.
Расшифровать «Общий анализ крови»
Расшифровать «Биохимический анализ крови»
Плоский эпителий. У мужчин плоский эпителий попадает в мочу только из нижней трети мочеиспускательного канала, и в моче здоровых мужчин он практически не встречается. У женщин плоский эпителий попадает в мочу из мочеиспускательного канала и влагалища, поэтому в женской моче он практически всегда присутствует.
Особого диагностического значения клетки плоского эпителия не имеют, однако увеличение их количества наблюдается при инфекции мочевыводящих путей.
Переходный эпителий выстилает лоханки почек, мочеточники, мочевой пузырь, крупные протоки предстательной железы и верхний отдел мочеиспускательного канала. Клетки переходного эпителия в моче здоровых людей встречаются в единичном количестве.
Увеличение количества клеток переходного эпителия может наблюдаться при цистите, пиелонефрите, почечнокаменной болезни.
Почечный эпителий. Наличие клеток почечного эпителия в моче является характерным признаком поражения паренхимы почек. В моче здоровых людей почечный эпителий в норме не обнаруживается. У новорожденных иногда присутствуют единичные клетки почечного эпителия. Почечный эпителий может появиться при пиелонефритах, гломерулонефритах, интоксикациях, определенных инфекционных заболеваниях, расстройствах кровообращения.
Автоматическая расшифровка анализа мочи
Микроскопическое исследование осадка мочи
Для микроскопического исследования осадка мочи отсасывают пипеткой с баллоном со дна бутылки, постоявшей 1—2 часа, и центрифугируют 5—7 мин. при 1500 об/мин. Жидкость сливают быстрым опрокидыванием пробирки, каплю осадка переносят на предметное стекло и накрывают покровным. Микроскопируют в затемненном поле сначала при малом увеличении, в основном для поисков и подсчета цилиндров, затем при большом.
Из клеточных элементов осадка в моче находят лейкоциты ( рис. 1, 1) — округлые сероватые зернистые клетки. 1 — 5 лейкоцитов в поле зрения встречаются в любой моче, большое их количество (см. Пиурия) свидетельствует о воспалении в мочеполовом тракте.
Рис. 1. Лейкоциты и эритроциты в осадке мочи: 1— лейкоциты; 2 —свежие эритроциты; 3 — выщелоченные эритроциты.
Рис. 2. Эпителиальные клетки в осадке мочи: 1 — плоский эпителий; 2 — полиморфный эпителий мочевых путей; 3 — почечный эпителий.
Рис. 3. Цилиндры в осадке мочи: 1 — гиалиновый цилиндр; 2 — гиалиновый цилиндр с наложением эритроцитов и лейкоцитов; 3 — восковидные цилиндры.
Рис. 4. Цилиндры в осадке мочи: 1 — зернистые цилиндры; 2 — эпителиальный цилиндр; 3 — кровяной цилиндр.
Рис. 5. Соли в осадке кислой мочи: 7 — кристаллы мочевой кислоты; 2 — кристаллы щавелевокислой извести (оксалаты кальция).
Рис. 6. Соли в осадке щелочной мочи: 1 — кристаллы углекислой извести; 2 — кристаллы мочекислого аммония; 3 — кристаллы трипельфосфатов; 4 — аморфные фосфаты.
Рис. 7. Редкие соли в осадке мочи: 1 — кристаллы тирозина; 2 — кристаллы лейцина; 3 — кристаллы билирубина. Желтушное окрашивание клеток мочи.
Рис. 8. Кристаллы сульфаниламидных препаратов в моче.
Эритроциты встречаются в моче в виде неизмененных (свежих) и выщелоченных (рис. 1, 2 и 3). Первые немного меньше лейкоцитов, круглые, гомогенные, зеленовато-желтые, в скоплениях оранжевые. Выщелоченные эритроциты (потерявшие гемоглобин) имеют вид бесцветных одно- или двухконтурных колечек.
Характер эпителия зависит от места его отделения (рис. 2).
Плоский эпителий — большие полигональные клетки с малым ядром — слущивается со стенок мочеиспускательного канала и наружных половых органов и диагностического значения не имеет.
Полиморфный эпителий мочевыводящих путей — овальные, грушевидные, «хвостатые» клетки несколько меньших размеров, но с большим ядром, чем плоский эпителий. В малом количестве находится в моче всегда, в большом — при воспалении мочевых путей (цистит, пиелит).
Почечный эпителий — округлые или полигональные клетки, несколько больше лейкоцитов, с зернистой цитоплазмой и крупным пузырьковидным ядром. Происходит из почечных канальцев и встречается при их поражениях (например, нефротическом синдроме).
Цилиндры — свернувшийся белок или подвергшиеся дистрофии клетки почечного эпителия, представляющие слепки канальцев (рис. 3 и 4). Различают цилиндры гиалиновые — бесцветные, прозрачные, заметные только в затемненном поле; зернистые — хорошо заметные, состоящие из крупных или мелких зерен, часто желто-бурого цвета; восковидные — гомогенные, непрозрачные с резко очерченными контурами; эпителиальные, состоящие из клеток почечного эпителия; эритроцитные (кровяные), состоящие из эритроцитов, чаще выщелоченных; лейкоцитные, состоящие из лейкоцитов. Появление цилиндров в моче наблюдается при поражениях почек (нефрозы, нефриты и пр.), а также при лихорадке, недостаточности кровообращения и т. д. У здоровых людей гиалиновые цилиндры могут появиться после физического напряжения. В осадке мочи, выделенной после полового сношения, а также при сперматорее встречаются сперматозоиды, а при простаторее (выделение секрета предстательной железы при мочеиспускании или дефекации) — лецитиновые (липоидные) зерна — мелкие, блестящие, сильно преломляющие свет образования и их конгломераты — амилоидные тельца.
Соли кристаллические и аморфные выпадают в моче при большой их концентрации и в зависимости от реакции мочи. В кислой моче (рис. 5) встречаются кристаллы мочевой кислоты, щавелевокислой извести (см. Оксалурия), аморфные ураты (см.), дающие плотный розовый осадок; в щелочной моче ( рис. 6) выпадают углекислая известь, мочекислый аммоний, трипельфосфаты и аморфные фосфаты (см. Фосфатурия). Большинство солей мочи особого диагностического значения не имеет, кроме лейцина и тирозина (рис. 7), появляющихся в моче при острой дистрофии печени и фосфорном отравлении. При приеме больших доз сульфаниламидных препаратов их кристаллы выпадают в моче (рис. 8).
Исследование осадка мочи по Каковскому — Аддису применяют для точного учета выделения форменных элементов мочи. Подсчет элементов осадка по полям зрения неточен, так как зависит от ряда причин: количества мочи, времени ее отстаивания, центрифугирования и т. д.
В 8 час. вечера больной мочится, мочу выливают. В 6 часов утра собирают мочу (за 10 часов). У женщин мочу берут катетером. Мочу точно измеряют, хорошо размешивают и 1/50 часть наливают в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин. при 2000 об/мин. Мочу над осадком осторожно отсасывают пипеткой с баллоном, оставляют 0,5 мл осадка, хорошо ого размешивают и 1 каплю помещают в счетную камеру.
При большом увеличении (об. 40х, около 10х) подсчитывают эритроциты и лейкоциты (отдельно) во всей сетке Горяева. Умножив полученные величины на 66 000, узнают число эритроцитов и лейкоцитов, выделенных за сутки. При большом количестве клеток можно сосчитать 15 больших квадратов (1 ряд) и результат умножить на 1 000 000 либо развести осадок, учтя разведение при расчете. Цилиндры подсчитывают при малом увеличении на двух сетках Горяева, результат множат на 33 000. Здоровый человек выделяет за сутки эритроцитов до 1 000 000, лейкоцитов до 2 000 000, цилиндров до 2000.
Рис. 1. Клеточные элементы в мочевом осадке: 1 — группа клеток плоского эпителия из нижних отделов мочевыводящих путей; 2 — «хвостатые» клетки; 1 — полигональные клетки почечного эпителия; 4 — клетки почечного эпителия, претерпевшие «жировое» перерождение; 5 — лейкоцит.
Рис. 2. Цилиндры в мочевом осадке: 1 — гиалиновые цилиндры, отчасти с наложением солей, единичных лейкоцитов, эритроцитов и зернистого распада; 2 — гиалиновый цилиндр, окрашенный мочевыми пигментами; 3 — зернистый цилиндр; 4 — гиалиновый цилиндр с наложением солей и детрита; 5 — лейкоциты.
Рис. 3. Цилиндры в мочевом осадке: 1 — мелкозернистый цилиндр; 2 — кровяной цилиндр; 3 — восковидный цилиндр; 4 — эпителиальный цилиндр; 5 — лейкоцит.
Рис. 4. Осадки в кислой моче: 1 и 2 — аморфные ураты, состоящие из мочекислого натрия; 3—5 — кристаллы мочевой кислоты; 6 и 7 — кристаллы щавелевокислого кальция.
Рис. 5. Осадки в щелочной моче: 1—5 — кристаллы фосфорнокислой аммиак-магнезии.
Рис. 6. Редкие кристаллические осадки в моче: 1 —«шары» лейцина; 2 — тирозин; 3 — кристаллы холестерина; 4 — сернокислый кальций.
Рис. 7. Осадки в моче: 1 — кристаллы билирубина; 2 — цилиндры, окрашенные желчными пигментами; 3 — клетки почечного эпителия,
окрашенные желчными пигментами.
Рис. 8. Кристаллы сульфаниламидов: 1 — кристаллы белого стрептоцида; 2 — кристаллы сульфадиазина; 3 — кристаллы ацетилсульфадиазина; 4 — кристаллы сульфатиазола (сульфазола).
Рис. 9. Осадки в моче: 1 — кристаллы холестерина; 2 — цилиндр с наложением жира
(окраска Суданом III).
Рис. 10. Свежевыпущенная прозрачная моча здорового человека (цвет соломенно-желтый, уд. в. 1,016).
Рис. 11. Слегка желтоватая, прозрачная моча при несахарном диабете (уд. в. 1,001 —1,002).
Рис. 12. Насыщенная прозрачная моча оранжево-бурого цвета при сердечном застое (уд. в. 1,026—1,030). Рис. 13. Моча типа «мясных помоев», мутная, с грязно-бурым осадком при остром гломерулонефрите.
Рис. 14. Моча темно-коричневого цвета при механической желтухе.
Рис. 15. Насыщенная моча в посткритической стадии крупозной пневмонии. Виден обильный осадок уратов.
Рис. 16. Почти черная, содержащая меланин мутная моча при меланоме печени.
Рис. 17. Молочно-белого цвета, опалесцирующая моча с обильным белым осадком при фосфатурии.
Плоский эпителий в моче при беременности: норма, таблица
Мочевыделительная система на этапе вынашивания плода испытывает значительное давление, поэтому перед или после приема у врача женщина должна сдавать урину на анализ, чтобы своевременно обнаружить начало патологии. Если плоский эпителий в моче при беременности обнаруживается выше нормальных показателей, то ситуация может говорить о начале воспалительного процесса и потребуется более тщательная диагностика.Значение эпителия в моче во время беременности
Эпителий в моче при беременности – это значит, что некоторые клетки, которые выстилают слизистую оболочку мочеполовых путей, отслаиваются. Во время прохождения урины через все отделы выделительной системы происходит соприкосновение со слизистой, которая имеет защитную функцию и под воздействие биологической жидкости незначительно отходит. Поэтому при анализе специалисты могут выявить небольшое количество клеток.Существует несколько разновидностей клеток, таким образом, по типу можно определить локализацию воспаления и инфицирования. Плоский эпителий в моче при беременности становится основанием предполагать, что инфекция находится в уретре или во влагалище, переходный — указывает на развитие вредоносных бактерий между почками и уретрой (в мочеточнике или мочевом пузыре), что приводит к слущиванию канальцевых (почечных) клеток.
Во время диагностирования при расшифровке анализа, специалисты обращают внимание на дополнительную симптоматику. Так, если присутствует болевой синдром при мочеиспускании, а в анализах обнаруживается повышенный эпителий, то лечение будет зависеть от того, какая разновидность клеток была обнаружена.
Эпителий в моче — норма у беременных
Норма эпителиальных клеток у беременных должна составлять не более 4-5 на участке в поле зрения. При расшифровке анализа часто указывается тип осадка, обнаруженный в процессе осмотра под микроскопом. Если клеток много и посчитать при исследовании затруднительно, то таблица бланка исследования будет это учитывать и указывать множественное слущивание.Если плоский эпителий в моче у беременных незначительно повышен, то это чаще всего вариант нормы. Потому что на этапе внутриутробного развития гормональный фон меняется, а в результате роста ребенка и увеличения полости матки возрастает давление на внутренние органы мочевыделительной системы. Кроме того, могут быть нарушены правила сбора мочи, поэтому всегда назначается дополнительное исследование, чтобы исключить ошибочные результаты.
Значительное превышение показателей становится основным параметром, по которому определяют поражение вредоносными бактериями, при этом всегда возникают дискомфортные ощущения при мочеиспускании или боль в поясничной области во время формировании пиелонефрита.
Причины повышенного уровня эпителий в моче
У беременных женщин высокий показатель наличия эпителиальных клеток в осадке урины становится признаком следующих заболеваний:- цистит сопровождается частыми позывами и жжением при мочеиспускании. Инфекция, попавшая в уретру или мочевой пузырь, вызывает множественное отслоение;
- нефропатия характеризуется появлением осадка в урине совместно с кровяными тельцами. Возникают очаги воспаления, при этом почки постепенно теряют способность фильтровать плазму крови;
- пиелонефрит обуславливается инфекционным процессом в почках;
- проявления позднего токсикоза, угрожает формированием гестоза.
Если симптоматические проявления заболеваний отсутствуют, то врачи могут заподозрить неверный сбор исследуемого материала. В таком случае назначаются повторный анализ с учетом правильности забора биологической жидкости.
Ранняя диагностика с помощью клинического анализа мочи и дополнительных обследований позволит своевременно обнаружить инфекцию и предотвратить дальнейшее распространение вредоносных бактерий, которые опасны для нормального внутриутробного развития.
Эпителий плоский в моче при беременности: норма, причины отклонения
Эпителиальные клетки покрывают полости внутренних органов, в том числе и мочевыводящей системы. По содержанию эпителия в моче врачи могут сделать выводы о наличии воспалительных процессов в организме беременной женщины. Иногда лабораторные анализы показывают, что эпителий плоский в моче при беременности повышен. Всегда ли это указывает на патологии почек и мочевого пузыря?
Виды эпителия, которые могут быть обнаружены в моче
При клиническом исследовании мочи в осадке могут быть обнаружены 3 вида эпителиальной ткани. Их наличие, а также концентрация могут указывать на заболевания мочеполовой системы.
Эпителий в моче при беременности может быть следующих типов:
- Плоский эпителий. Покрывает мочевыводящие пути, влагалище, верхний слой мочевого пузыря. Он может содержаться в моче здорового человека, но в небольших количествах.
- Почечный эпителий. Выстилает клетки канальцев, лоханки, мочеточника. Присутствие даже нескольких единиц почечного эпителия свидетельствует о возникновении инфекционно-воспалительных очагов в органах мочевыводящей системы. Обнаружение подобных клеток может быть признаком нефросклероза, пиелонефрита, туберкулезного некроза и патологий почечной паренхимы.
- Переходный эпителий. Покрывает мочевыводящие пути и мочевой пузырь. Содержится в небольшом количестве в моче здорового человека. Его концентрация не зависит от пола, возраста и беременности. Увеличение переходных клеток указывает на цистит, уретрит.
Как расшифровываются и оцениваются результаты анализа?
Общий анализ мочи при беременности — это обязательная диагностическая процедура, на которую направляют всех женщин, вставших на учет в женской консультации. За весь период гестации будущей маме придется не раз сдавать мочу на анализы.
Как расшифровываются результаты диагностики? Лаборант оценивает количество единиц эпителия в одном поле зрения. Полем зрения называется видимая под микроскопом площадь стекла с мазком биоматериала.
Норма содержания эпителия при беременности:
- плоские клетки — до 5 единиц в поле зрения;
- почечные клетки — отсутствуют;
- переходной эпителий — до 3 единиц.
Присутствие плоского эпителия не всегда говорит о патологиях мочевыводящей системы. У беременных его содержание всегда повышено из-за учащенного мочеиспускания. Причины высокого содержания плоского эпителия в моче:
- Цистит — воспаление мочевого пузыря. Сопровождается такими симптомами, как жжение при мочеиспускании, тянущая боль внизу живота. Моча мутная, имеет осадок.
- Болезнь Берже или очаговый пролиферативный гломерулонефрит. Характеризуется отложением в почках иммуноглобулинов IgA, что вызывает воспалительные процессы. Почки хуже фильтруют жидкость, не могут удалять из крови избыток воды.
- Анальгетическая нефропатия — патология почек в результате длительного медикаментозного лечения НПВС или анальгетиками.
Лечение при «плохих» анализах
При повышенном содержании плоского эпителия в моче беременную направляют на дополнительную диагностику и консультацию у уролога или нефролога. При подборе медикаментозной терапии доктора учитывают интересное положение будущей мамы и выбирают те лекарства, которые не могут навредить плоду.
При цистите чаще всего назначают:
- уросептики — Фурагин, Фурамаг;
- фитопрепараты — Фитолизин, Канефрон;
- отвары и настои лекарственных трав — ромашки, листьев брусники, толокнянки.
Болезнь Берже неизлечима, но с помощью глюкокортикостероидов можно поддерживать состояние больного. При очаговом пролиферативном гломерулонефрите показаны рыбий жир, красная рыба — омега-3 жирные кислоты останавливают развитие недуга.
При инфекциях мочеполовой системы особое внимание уделяется личной гигиене. Беременная должна использовать отдельное полотенце для интимных зон. Ей нужно избегать переохлаждения и отказаться от синтетического белья.
Врач акушер-гинеколог, репродуктолог, консультант по грудному вскармливанию, окончила ЧГУ им. Ульянова со специализацией гинекология, маммология Подробнее »Поделитесь с друьями!
что это значит, норма эпителиальных почечных клеток у женщин
Важным диагностическим параметром при многих патологиях являются анализы мочи. Ее лабораторное исследование позволяет получить много информации о состоянии разных органов и систем организма. Рассматриваются ее внешние характеристики, химический состав и осадок. Часто в ее осадке обнаруживаются эпителиальные клетки. Кроме того, лабораторные тесты позволяют определить наличие лейкоцитов, эритроцитов, бактерий и паразитов. Все эти результаты важны для диагностики различных заболеваний или воспалительных процессов.
Общая характеристика
Все полости тела человека и слизистые оболочки выстланы слоем эпителиальных клеток. Именно они, прежде всего, подвергаются негативным воздействиям при наличии инфекции или воспалительных процессов. При этом происходит их обновление: старые слущиваются, и на их месте образуется новый слой.
Покрыты слоем эпителия почки, мочевой пузырь, уретра, мочевыводящие пути. Моча проходит через все эти органы, поэтому в ней могут наблюдаться разные эпителиальные клетки, но обычно их немного. Только при различных патологических состояниях, когда происходит усиленное обновление слизистой оболочки и слущивание слоя эпителия, его количество в моче повышено.
Разновидности
Внутренняя поверхность органов мочеполовой системы выложена различными видами эпителия, с ними моча ежедневно соприкасается. Поэтому при исследовании осадка можно обнаружить различные клетки. Чаще всего различают плоский эпителий, переходный и почечный.
Иногда также различают клетки эпителия по форме. При этом они бывают круглые, овальные, с неровными краями и «хвостом», полигональные и грушевидные. Ядро бывает крупным или маленьким. Разновидностью плоского является полиморфный эпителий. Это клетки более маленького размера, неправильной формы и с большим ядром. Иногда также при анализе мочи могут быть обнаружены цилиндрические клетки, появившиеся в результате изменений почечного эпителия.
Важно: определив, уровень каких клеток в моче повышен, можно поставить предварительный диагноз.
Клетки эпителия могут быть разной формы и размера.
Плоский
Чаще всего при анализе мочи обнаруживается плоский эпителий. Он выстилает внутреннюю поверхность мочеточников и влагалища у женщин. Поэтому он почти всегда обнаруживается в женской моче. А у мужчин эпителиальные клетки могут попасть в мочу только из предстательной железы или нижних отделов мочеиспускательного канала, поэтому там их не должно быть.
Обычно наличие плоских эпителиальных клеток при анализе мочи врачами не учитывается, так как даже у здоровых людей может обнаруживаться небольшое их количество. Только при повышении этого показателя можно заподозрить инфекционные заболевания мочевыводящих путей.
Переходный
Поверхность почек, мочевого пузыря, мочевыводящих путей и верхнего отдела мочеиспускательного канала выстилает переходный эпителий. Такие клетки у здоровых людей должны присутствовать в моче не более 1–3 единиц. Только при различных воспалительных заболеваниях их количество повышается.
Почечный
Почечный эпителий в моче у здорового человека тоже не должен встречаться. Если такие эпителиальные клетки обнаруживаются при проведении анализа, это значит, что поражена ткань почек. Такое бывает при некоторых инфекционных или воспалительных заболеваниях.
Нормы
Клетки эпителия в моче у здорового человека должны присутствовать в единичном количестве или совсем отсутствовать. Существуют определенные таблицы нормы. Они зависят от пола человека, его возраста и состояния здоровья.
Существуют определенные нормы присутствия эпителия в моче.
Чаще всего выявляются при анализах плоские эпителиальные клетки. Незначительное их количество даже не учитывается, особенно у женщин. Ведь они могут попасть из влагалища при неправильном сборе анализа мочи. Чтобы избежать повторного исследования, женщинам нужно соблюдать некоторые правила сбора мочи. Самое главное, тщательно помыть наружные половые органы перед этим, насухо вытереть промежность. Многие врачи рекомендуют также закрыть влагалище тампоном. Собирать нужно только среднюю порцию мочи, так как основное количество эпительных клеток находится в первой порции. Кроме того, не рекомендуется сдавать анализ во время менструации.
У мужчин же любые клетки эпителия в моче должны отсутствовать. Уже 2–3 единицы указывают на наличие патологических процессов. Это связано с тем, что попасть они могут в собранные образцы только из нижних отделов мочеиспускательного канала или из простаты при наличии воспалительных процессов.
У женщин
По причине того, что в мочу женщин плоские эпителиальные клетки могут попасть из влагалища, его присутствие не считается отклонением. Норма эпителия в моче при этом до 10 единиц. Считаются те из них, которые попадают в поле зрения лаборанта через микроскоп. При превышении этого показателя можно заподозрить наличие воспалительных заболеваний. Нормой считается его незначительное повышение у женщин во время менопаузы.
Переходный эпителий проникает в мочу из почек, мочеиспускательного канала или мочевого пузыря при различных патологиях. Поэтому у здорового человека таких клеток не должно быть больше 3. А почечный эпителий появляется только при воспалительных заболеваниях почек.
У беременных
При беременности нормы количества клеток эпителия в моче меняются. Допускается не более 5 единиц плоских или переходных клеток. А почечного эпителия быть не должно совсем. Большое количество таких клеток в моче у беременной женщины всегда указывает на наличие воспалительных заболеваний мочевыводящих путей.
У детей
Эпителий в моче у ребенка может присутствовать. Обычно нормой считается не более 3 единиц, причем независимо от его разновидности. Повышение количества таких клеток наблюдается чаще всего у новорожденных. В первые две недели жизни допустимым количеством считается до 10 единиц. Это связано с адаптацией организма ребенка к самостоятельной жизнедеятельности.
Кроме того, у новорожденных детей считается нормой присутствие незначительного количества почечного эпителия. Ведь в первые дни жизни с мочой выходят все вещества, заглатываемые малышом при внутриутробном развитии.
Повышенный уровень
Если эпителиальные клетки обнаруживаются в больших количествах, это всегда указывает на наличие каких-либо патологических процессов. Обычно это острый или хронический воспалительный процесс.
Внимание: точно диагностировать заболевание можно только при комплексном подходе. Обязательно нужно учитывать также другие показатели.
Особенно важно повышение уровня лейкоцитов одновременно с эпителиальными клетками. Это подтверждает наличие воспаления. Учитывается также присутствие нитратов, солей, бактерий и паразитов.
Когда повышено содержание эпителия в моче, назначаются дополнительные методы обследования. Они помогут определить причины этого состояния. Повторные анализы нужно сдавать также потому, что часто причины повышенного уровня эпителиальных клеток не связаны с патологическими процессами. Это может быть просто неправильный сбор мочи для анализов. Чаще всего такое бывает у женщин и у детей.
Чтобы избежать ошибок при анализе мочи для него нужно использовать чистую емкость.
Причины повышения
Многие патологии, способные повысить уровень эпителия в моче, важно обнаружить как можно раньше. Только своевременное лечение может справиться с ними быстро. Анализы мочи помогут вовремя выявить заболевания и выбрать нужную терапию.
У новорожденных детей повышение эпителия в моче может происходить не только из-за воспалительных заболеваний. Причиной могут стать врожденные патологии, осложненное протекание беременности, тяжелые или преждевременные роды, инфекционные заболевания, перенесенные мамой.
Плоский
Если повторный анализ тоже показал много плоских эпителиальных клеток, проводится дополнительное обследование для определения причины этого. Чаще всего это указывает на воспалительные заболевания мочевыводящих путей. Это может быть уретрит, цистит, пиелонефрит. При этом обязательно проявляются дополнительные симптомы, например, нарушение мочеиспускания, появление болей и жжения, изменение цвета мочи. Часто такое состояние связано с наличием инфекции: бактерий, вирусов или грибка в органах мочеполовой системы.
Кроме того, причиной такого состояния может стать нарушение обменных процессов. Они могут привести к дисфункции почек и отложению солей в мочевыводящих путях. В результате этого эпителий обновляется более быстро и попадает в мочу. Но такое может происходить даже при длительном приеме некоторых лекарственных препаратов, особенно нестероидных противовоспалительных средств. А у беременных женщин повышение количества клеток эпителия возникает из-за гормональных сбоев и более частого мочеиспускания.
Причиной обнаружения таких клеток в моче может стать также нефропатия. Это нарушение работы почек, из-за которых они теряют свои функции. Они не могут нормально фильтровать кровь, поэтому в моче обнаруживается осадок и кровяные тельца. У мужчин эпителиальные клетки часто обнаруживаются при простатите. Этому заболеванию подвержены чаще всего мужчины старше 40 лет.
Обычное повышение плоских эпителиальных клеток не всегда означает, что человек болен. Этот показатель не может являться точным диагностическим критерием. Он только указывает на то, что необходимо провести дополнительную диагностику.
Внимание: подобное состояние может возникнуть при неправильном сборе мочи или если контейнер для анализов был загрязнен.
При анализе мочи повышение количества эпителиальных клеток может указывать на наличие воспалительных заболеваний.
Переходный
Клеток переходного эпителия в моче человека любого пола и возраста должно быть не более 3 единиц. Повышение этого количества может наблюдаться при различных патологиях мочеполовой системы. Это могут быть камни, полипы или опухоли, нарушение работы почек, инфекционно-воспалительные заболевания, состояние после операций или инвазивных диагностических процедур. Но прием некоторых лекарств, например, антибиотиков или препаратов для наркоза, тоже может вызвать такое состояние.
Почечный
Если клетки почечного эпителия присутствуют в моче в количестве больше 1 единицы, это значит, что работа почек нарушена. Чаще всего это указывает на инфекционное заболевание или воспалительный процесс. Это может быть пиелонефрит, гломерулонефрит, диабетическая нефропатия, туберкулез почек.
Тяжелая интоксикация организма из-за отравления лекарственными препаратами или химическими веществами тоже может приводить к слущиванию почечного эпителия. Повышение почечного эпителия может происходить также после трансплантации почек. Такое состояние указывает на отторжение пересаженного органа.
Выводы
Обычно повышение уровня эпителиальных клеток выявляется при обследовании по поводу нарушенного мочеиспускания или болей в пояснице. Ведь если такое состояние не связано с неправильным сбором анализов или интоксикацией, оно вызывается серьезными патологиями органов мочеполовой системы.
Цитология мочи и дополнительные маркеры для выявления и наблюдения за раком мочевого пузыря
Реферат
Цитология мочи в сочетании с цистоскопическим исследованием была и остается стандартом при первоначальной оценке поражений нижних мочевых путей для исключения рака мочевого пузыря. Однако цистоскопия является инвазивной и может пропустить некоторые плоские поражения, тогда как цитология имеет низкую чувствительность при папиллярной болезни низкой степени. Дополнительные лабораторные или офисные маркеры необходимы для помощи в оценке этих поражений.В последнее время было разработано множество таких маркеров с целью улучшения цитологической диагностики злокачественных новообразований мочевого пузыря. В этом обзоре мы сначала обсудим традиционный цитоморфологический анализ цитологии мочи, а затем обсудим маркеры, которые были разработаны в прошлом для обнаружения и наблюдения за уротелиальной карциномой. Мы сосредоточимся на том, как эти маркеры можно использовать в сочетании с цитологическим исследованием мочи в повседневной практике.
Ключевые слова: Рак мочевого пузыря, цитология мочи, онкомаркеры
Введение
Рак мочевого пузыря, чаще всего уротелиальная карцинома, является 4-м по распространенности раком у мужчин в США [1].Однако его стоимость на пациента является самой высокой из всех типов рака, достигая примерно 200 000 долларов США на пациента от постановки диагноза до смерти [2]. Подсчитано, что в 2009 г. в этой стране будет диагностировано около 70 980 новых случаев рака мочевого пузыря, из которых 14 330 погибнут [1]. Примерно у 75% пациентов наблюдается поверхностное заболевание (Та и Т1), а у 20% — заболевание Т2 или выше. Остальные 5% пациентов имеют метастатическое заболевание. В целом, 70% обработанных опухолей рецидивируют, причем 30% рецидивирующих опухолей прогрессируют до метастатического поражения [3].
Примерно 60% пациентов с впервые диагностированным раком мочевого пузыря не имеют мышечно-инвазивного заболевания и не нуждаются в цистэктомии [4]. У большинства этих пациентов после эндоскопической резекции наблюдается рецидив, поэтому рекомендуется пожизненное наблюдение с помощью цистоскопии. К сожалению, цистоскопия, которая является «золотым стандартом» для выявления de novo и рецидива рака мочевого пузыря, является дорогой и инвазивной процедурой. Кроме того, он может пропустить плоское поражение, особенно карциному in situ, которая считается злокачественным состоянием высокой степени, а не предраковым поражением, как в других системах органов.
Цитология мочи с мочеиспусканием является полезным неинвазивным дополнением к цистоскопии из-за ее общей высокой специфичности. Цитология также имеет относительно высокую чувствительность при обнаружении поражений высокой степени злокачественности. Однако его чувствительность составляет от 20 до 50% для папиллярных опухолей низкой степени злокачественности. Из неинвазивных поражений в мышцах примерно у 10% папиллярных опухолей низкой степени злокачественности впоследствии развивается инвазивный в мышцы или метастатический рак, тогда как примерно треть опухолей высокой степени злокачественности прогрессирует, если еще не является инвазивной в мышцы на момент постановки диагноза [4 ].Следовательно, тщательный мониторинг и раннее обнаружение всех поражений важны для лечения, а неинвазивные онкомаркеры с высокой точностью для обнаружения всех степеней уротелиальной карциномы значительно снизят стоимость, беспокойство и заболеваемость пациентов.
Цитоморфологический анализ мочи
Цитологическое исследование мочи выявляет злокачественные клетки, которые отшелушиваются из уротелия в мочу. Специфичность цитологического исследования превышает 90% [5], в то время как чувствительность к тяжелым заболеваниям и карциноме in-situ (CIS) может достигать 80–90% [6, 7].Однако, как указывалось ранее, основным недостатком цитологического исследования мочеиспускания является низкая чувствительность (приблизительно 20-50%) для выявления новообразований низкой степени злокачественности, включая доброкачественную папиллому, уротелиальную карциному с низким потенциалом злокачественности (пограничная) и папиллярная уротелиальная карцинома низкой степени злокачественности (степень злокачественности). 1-2 из 3 классификации ВОЗ) [3] [4, 8]. Есть две основные причины такой низкой чувствительности. Во-первых, опухолевые клетки низкосортных опухолей обычно не выделяются с мочой из-за их связной природы.Во-вторых, что, вероятно, более важно, это тот факт, что опухолевые клетки низкой степени злокачественности по определению имеют микроскопическую цитоморфологию, аналогичную нормальным уротелиальным клеткам. Хотя повышенная клеточность и присутствие фрагментов сосочков в «истинном» образце мочи с мочеиспусканием может указывать на столь низкую степень поражения, необходимо исключить возможность уротелиальной гиперплазии из-за различных причин, таких как литиаз, инфекция и наличие инструментов.
Вероятно, наиболее частой причиной присутствия повышенной клеточности или папиллярных фрагментов в образце мочи с морфологически нормальным мочеиспусканием являются инструменты в результате цистоскопии, поскольку многие такие образцы собираются после выполнения процедуры, даже если в заявке может быть неверно указано образец представляет собой «мочу без мочеиспускания».Таким образом, следует проявлять осторожность и рекомендовать клиническую корреляцию в таких условиях.
Общие показания для цитологии мочи
Цитология мочи, как «древний» метод, использовалась далее. Во-первых, он использовался в качестве инструмента скрининга для выявления рака уротелия в группах высокого риска, особенно в группах населения, подвергшихся воздействию химических канцерогенов в результате профессиональных занятий, например, в когорте Дрейка [9]. Во-вторых, он использовался в качестве начального теста для пациентов с гематурией, чтобы исключить (или исключить) возможность злокачественного новообразования уротелия.В-третьих, он использовался в качестве инструмента мониторинга и последующего наблюдения для пациентов с предыдущим диагнозом уротелиального рака, чтобы исключить рецидив опухоли. В-четвертых, его использовали после трансуретральной резекции для оценки полноты удаления опухоли [10]. Наконец, недавно он был применен в качестве теста для выявления воспаления или инфекции, особенно у пациентов с трансплантацией почки, у которых наличие или отсутствие инфекции вируса полиомы может иметь значительные клинические последствия для отторжения [11].
Тип образцов мочи
Самым распространенным типом образцов мочи для цитологического анализа является моча с мочеиспусканием. Опять же, имейте в виду, что хотя представленный образец помечен как «моча с мочеиспусканием», важно определить, была ли проведена цистоскопия, и если да, то будет ли образец взят до или после процедуры. При сборе «истинной» мочи с мочеиспусканием следует избегать пробы «первого утра» и собирать пробу опорожнения «вторым утром», поскольку ночная моча часто содержит много дегенерированных уротелиальных клеток, что затрудняет как морфологический, так и маркерный анализ.Хотя есть данные, позволяющие предположить, что три образца мочи с мочеиспусканием «вторым утром», собранные в течение трех последовательных дней, могут оптимизировать выявление злокачественных новообразований уротелия [12], это не обычная практика, вероятно, из-за стоимости и удобства.
Важно помнить, что, в отличие от образцов с мытья или щетки, как описано ниже, истинное мочеиспускание имеет так называемый эффект «воронки», то есть образцы всей системы мочевыводящих путей от почечных лоханок (двусторонних) до мочеточников ( двусторонний), мочевой пузырь и уретра.Учитывая тот факт, что уротелиальный рак часто является «полевым» заболеванием, эффект воронки обеспечивает обнаружение поражений всего мочевыводящих путей, особенно поражений высокой степени. Таким образом, по крайней мере теоретически, выделенная моча должна иметь более высокую чувствительность для выявления уротелиальных злокачественных новообразований всего мочевыводящих путей. Однако компромисс заключается в том, что часто бывает трудно найти точное местоположение поражения, особенно если поражение находится в верхних мочевых путях (мочеточники и почечные лоханки). Это может привести к так называемому «ложному» ложноположительному цитологическому анализу мочи.И последнее, но не менее важное: в образцах женской мочи, большинство эпителиальных клеток, представленных на слайде, представляют собой плоскоклеточные клетки, зараженные из женских половых путей. Таким образом, для любого типа анализа молекулярных маркеров, особенно на основе ПЦР, а не анализа на основе изображений, зараженные плоскоклеточные клетки будут проблематичными. К сожалению, во многих молекулярных исследованиях фактор загрязнения часто игнорируется.
Другой распространенный образец мочи — это катетеризованная моча, которая обычно более клеточная, чем моча истинного мочеиспускания, но в остальном идентична.Загрязнение половых органов может быть менее серьезной проблемой по сравнению с истинным мочеиспусканием. Образцы смыва и щетки из мочевого пузыря, мочеточника или лоханки дополняют образцы мочи при мочеиспускании для оценки поражений мочевыводящих путей, когда одновременно выполняется цистоскопия (или ретроградная уретероцистоскопия). В зависимости от того, обнаружено ли подозрительное поражение, одновременно можно проводить мытье или чистку щеткой. Преимущества промывания и чистки образцов включают большую клеточность и более целевую и однородную популяцию уротелиальных клеток для анализа.Для поражений низкой степени злокачественности один только цитоморфологический анализ образцов для мытья или чистки щеткой может быть чрезвычайно сложной задачей. В таких условиях очень важно соотносить цитологию с результатами цистоскопии. Напротив, для поражений высокой степени, особенно карциномы in situ, при цитологическом исследовании может быть много одиночных или слабо связанных, сильно атипичных клеток, в то время как цистоскопия может показать или не показать видимое поражение. Биопсия может показать только несколько опухолевых клеток на поверхности («цепляющая» карцинома in situ).Положительная цитология в сочетании с тем, что кажется отрицательной цистоскопией или биопсией, является еще одним источником так называемого «ложного» ложноположительного диагноза. Более подробное обсуждение этого вопроса будет предоставлено в связи с обсуждением онкомаркеров ниже.
К другим типам образцов относится моча из подвздошной кишки или нео- пузыря, которые часто характеризуются наличием множества дегенерированных столбчатых эпителиальных клеток и воспалительных клеток. Иногда может наблюдаться рецидивирующая уротелиальная карцинома, и диагностика таких поражений может быть чрезвычайно сложной, поскольку многие биомаркеры (как описано ниже) могут быть бесполезными в таком случае.
Клетки и другие материалы
Клетки и другие материалы приведены во вставке 1.
Вставка 1
Другие клетки в моче:
Железистые клетки — предстательная железа, эндометрий, железистый цистит, парауретра
Клетки почечных канальцев
Лимфоциты, лейкоциты, эритроциты
Клетки семенных пузырьков ()
Клетки семенных пузырьков иногда можно увидеть в моче. Цитоплазма может иметь пигмент золотисто-коричневого цвета.Ядра обычно гиперхромные с дегенеративным хроматином. Обратите внимание на связанные сперматозоиды. (Окраска Папаниколау, 600 ×)
Спорадически наблюдается в образцах мочи пожилых пациентов
Причудливый вид с сильно увеличенными ядрами и пенистой фрагментированной цитоплазмой
Золотисто-коричневый пигмент липофусцина
- 9000a S-клетки
Аномальная плоидность ДНК
-Эозинофильные тельца включения — гигантские лизосомы
Гиалиновые тела включения
Неклеточные компоненты:
Кристаллы, аммония, s слизь, фибрин, лубрикант, пыльца и редко Alternaria spp.и микроконидии
Обработка образца мочи
Фиксация образца: Образец мочи следует обрабатывать немедленно или хранить в холодильнике при температуре 4 градуса по Фаренгейту не более 24 часов. Если ожидается задержка более 24 часов, образец следует зафиксировать равным объемом 50% этанола или образец следует центрифугировать, а осадок смешать с фиксатором на основе этанола для жидкостной цитологии или с 50% этанолом. изопропиловый спирт или денатурированный спирт.Низкий pH, по-видимому, способствует сохранению уротелиальных клеток.
Обработка образцов: Образцы следует обрабатывать цитоцентрифугированием или препаратом на жидкой основе. Пятьдесят миллилитров образца переносят в отдельные центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 10 мин / 1500 об / мин. Супернатант отсасывают, а осадок ресуспендируют в сбалансированном солевом растворе. Наиболее часто используемые методы подготовки слайдов включают цитоцентрифугирование и методы на жидкой основе SurePath или Thin-Prep.Традиционный метод мембранной фильтрации в настоящее время используется редко.
Соответствие образца
В отличие от образцов из шейки матки, точные рекомендации по адекватности образцов мочи не установлены. Как правило, слайды должны содержать не менее пятнадцати хорошо визуализированных базальных и промежуточных клеток, чтобы их можно было классифицировать как адекватные. Образцы с аномальными клетками по определению являются удовлетворительными.
Диагностический формат и категории для образцов цитологии мочи
Формат, показанный во вставке 2, рекомендуется для диагностики цитологии мочи.
Вставка 2. Диагностический формат и рекомендации по категории для образцов цитологического исследования мочи:
Заявление об адекватности (необязательно)
Удовлетворительно для оценки
Укажите любые факторы качества, влияющие на образец
Неудовлетворительно для оценки (укажите причину)
Общие Категории
Отрицательный результат на аномалию эпителиальных клеток (см. Описательный диагноз)
Наличие аномалий эпителиальных клеток (см. Описательный диагноз)
Отрицательный результат на аномалию эпителиальных клеток:
Инфекционные агенты
000
Вирусные организмы
изменения (ЦМВ, герпес, полиомавирус, аденовирус)
Неспецифические воспалительные изменения
Острое воспаление
Хроническое воспаление
Изменения, соответствующие ксантогранулематозному пиелонефриту
Клеточные изменения, связанные с:
Химиотерапия радиация
Наличие аномалий эпителиальных клеток:
Атипичные уротелиальные клетки (дальнейшие комментарии — необязательно)
-Favor reactive
-Favor urothelial carcinoma
-Favor urothelial carcinoma
уротелиальная карцинома степени
(включая инвазивную карциному vs.карцинома in situ)
Атипичные плоскоклеточные клетки
-NOS
-Вирусные изменения / кондилома
-Плоскоклеточная карцинома
Атипичные железистые клетки
-NOS
-Аденокарцинома
0004-аденокарцинома0004-аденокарцинома0004-аденокарцинома Другие злокачественные новообразования (укажите тип)Другое (укажите)
Для образцов, которые отрицательны на аномалии эпителиальных клеток, следует охарактеризовать тип воспаления (острое или смешанное хроническое), если оно присутствует, поскольку информация может помочь урологу для определения потенциально излечимых состояний по урологическим симптомам пациента.Присутствие определенных организмов, если они наблюдаются, также должно быть указано. показаны клетки, инфицированные вирусом полиомы. Иногда для подтверждения диагноза может быть добавлен иммуноцитохимический анализ SV40 ().
Клетки, инфицированные вирусом полиомы. (A) Инфицированные клетки имеют повышенное ядерное и цитоплазматическое соотношение, имитирующее карциному in situ («клетки-ловушки»), ядро матового стекла с граничным хроматином и иногда короткие цитоплазматические хвосты («клетки-кометы»). (B) Иммуноцитохимия для SV40 поддерживает клетки, инфицированные вирусом полиомы.(A, окраска по Папаниколау, 1000x; B, окраска иммунопероксидазой, 1000x).
Терапевтические изменения являются основным источником «истинных» ложноположительных диагнозов. Однако, как правило, терапевтические изменения характеризуются большими клетками с обильной цитоплазмой, низким соотношением ядер к цитоплазме и нечетким ядерным хроматином (). Клеточные маркеры, особенно uCyt + (ImmunoCyt) ™, могут быть полезны при оценке.
Уротелиальные клетки с терапевтическими изменениями. Бацилла Кальметта-Герена (БЦЖ), аттенуированная микобактерия крупного рогатого скота, используется для лечения карциномы in situ.Он также вызывает воспалительную реакцию, особенно гранулемы подслизистой оболочки и уротелиальную атипию. В образцах мочи пациентов, получавших БЦЖ, могут быть уротелиальные клетки с выраженной ядерной атипией и гиперхромазией, однако соотношение ядер к цитоплазме не увеличивается, и цитоплазма имеет реактивный вид. Часто встречаются гистиоциты, включая многоядерные формы. (A-C, окраска по Папаниколау, 600 ×)
Излишне говорить, что категория так называемых «атипичных уротелиальных клеток», вероятно, является наиболее спорным диагнозом с точки зрения ведения пациентов.По нашему опыту, от 20 до 25% всех образцов будут зарегистрированы как «атипия уротелиальных клеток» (это не включает категорию «подозрительные на злокачественные новообразования» — неопубликованные данные). Эта категория, вероятно, получит наибольшую пользу от анализа маркеров. Как обсуждается ниже, мы применили анализ маркеров (в основном иммуноцитохимический анализ uCyt + и иногда цитокератин 20) в качестве рефлекторного теста для случаев, отмеченных как атипия уротелиальных клеток.
Как обсуждалось ранее, образцы мочи при поражениях низкой степени злокачественности (папиллома, пограничная и низкосортная уротелиальная карцинома) являются более клеточными, чем обычно, со связными или папиллярными фрагментами и тонкими морфологическими изменениями, которые в значительной степени перекрываются с гиперпластическими уротелиальными поражениями ().Таким образом, эти поражения сгруппированы вместе.
Уротелиальная неоплазия низкой степени в сравнении с гиперплазией. Различение может быть затруднено, поскольку оба объекта образуют сосочковые скопления со скоплением клеток. Ядерные изменения в новообразованиях низкой степени злокачественности (повышенное соотношение ядер к цитоплазматическим, нерегулярные ядерные мембраны, заметные ядрышки, случайный характер роста) могут быть незначительными. На обоих объектах можно увидеть удерживаемые зонтичные ячейки. (A-B, окраска по Папаниколау, 400 ×; C, окраска гематоксилином и эозином, 400 ×)
Опухоль высокой степени злокачественности (включая карциному in situ) обычно показывает много атипичных одиночных клеток и слабо связанных групп, многие из которых дегенерировали.Фон может быть некротическим, кровянистым, воспалительным или чистым. Важно найти жизнеспособные клетки и тщательно оценить ядерно-цитоплазматическое соотношение, ядерную мембрану и хроматин. Примеры уротелиальных новообразований высокой степени злокачественности показаны на рис.
Уротелиальная карцинома высокой степени злокачественности. Цитологические изменения более очевидны при поражениях высокой степени и включают очень высокое соотношение ядер к цитоплазме, темный грубый хроматин, нерегулярные границы ядер и иногда выступающие ядрышки, наблюдаемые в крупных, часто единичных клетках.На заднем фоне могут быть видны вырожденные клетки, некротический мусор, воспалительные клетки и кровь. Могут быть видны железистые или плоские цитоплазматические особенности. Зонтичные клетки в большинстве своем отсутствуют. (A-C, окраска Папаниколау, 1000 ×)
Плоскоклеточные поражения могут наблюдаться как с действием вируса папилломы человека (HPV), так и без него. Изменения, связанные с ВПЧ, относительно редки в образцах от пациентов-мужчин и чаще встречаются у пациентов-женщин, в основном из-за заражения из гинекологического тракта (). Плоскоклеточная карцинома () в Соединенных Штатах в основном связана с дивертикулитом, в то время как в других странах, особенно в Египте, она связана с шистосомозом.
HPV изменения плоских клеток в моче. Изменения можно рассматривать как первичную инфекцию плоскоклеточных клеток мочевыводящих путей (например, уротелиальные клетки с плоскоклеточной метаплазией или плоскоклеточные клетки, выстилающие дистальную часть уретры) или в женской моче как загрязнения из области гениталий. Признаки ВПЧ папилломы человека в сквамозных клетках мочи идентичны тем, которые наблюдаются в мазках из шейки матки, и включают увеличенный размер ядер, нерегулярные границы ядер, гиперхромазию и перинуклеарные ореолы.(Пятно Папаниколау, 400 ×).
Плоскоклеточный рак. Злокачественные клетки имеют обильную плотную цитоплазму, которая может быть сильно оранжеофильной. Ядра большие, гиперхроматические, с неровными границами ядер. Обратите внимание на зернистый некротический фон. (Окраска Папаниколау, 400 ×)
Аденокарцинома может быть первичной (в основном происходящей из железистой метаплазии или остатков ураха) или метастатической. Принимая во внимание высокую заболеваемость карциномой простаты, редко можно увидеть выделение клеток рака простаты, характеризующееся неплотно связными или одиночными столбчатыми клетками овальной или низкой формы с амфофильной цитоплазмой и выступающими ядрышками в мочу ().Это потому, что большинство случаев рака простаты возникает из периферической зоны. Только большая опухоль, которая распространяется до уретры, или первичная опухоль центральной зоны (так называемый протоковый / эндометриоидный тип рака простаты) может выделяться с мочой. Почечно-клеточная карцинома также может быть замечена в мочеиспускании, хотя это случается редко (). Что касается муцинозных опухолей, то может быть невозможно различить опухоль первичного уротелиального происхождения, урахального происхождения или метастатическую из желудочно-кишечного тракта, основываясь только на одной цитологии или даже на небольшой биопсии.В настоящее время не существует никаких специфических маркеров, позволяющих провести различие между ними, и клиническая или радиологическая корреляция — единственный способ определить происхождение опухоли.
Аденокарцинома простаты. Листы или небольшие агрегаты однородных железистых клеток имеют большие круглые ядра, открытый хроматин и выступающие одиночные или двойные ядрышки. (Окраска Папаниколау, 600 ×)
Почечно-клеточная карцинома. Клетки почечно-клеточной карциномы редко выделяются с мочой. Этот высушенный на воздухе мазок демонстрирует обильную вакуолизированную цитоплазму, характерную для почечно-клеточного рака.Также отмечаются атипичные центрально расположенные ядра. (Окраска Diff-Quik, 600 ×)
Потенциальные источники ошибочного диагноза
Хотя ложноположительный результат цитологического исследования мочи — это редкость, особенно в случае низкосортных поражений, иногда она может встречаться. Возможные причины включают так называемый «ложный» ложноположительный диагноз, инструментальный эффект (), камни, терапевтические изменения, включая химиотерапию и лучевую терапию, и вирусную инфекцию (например, полиому или ЦМВ). Так называемый «ложный» ложноположительный результат — это положительный цитологический анализ мочи с поражениями, которые не обнаруживаются клинически во время исследования мочи.Чаще всего это плоское диспластическое или злокачественное поражение, а иногда и поражение верхних отделов тракта, которое можно не заметить при цистоскопии и биопсии. Специального исследования для определения точной доли такого поражения в цитологическом исследовании мочи не проводилось.
Инструментальный эффект. Промывание мочевого пузыря или моча после цистоскопии будут содержать фрагменты ткани с более мелкими базальными клетками, окруженными большими двуядерными зонтичными клетками. Обратите внимание, что каждая ячейка имеет четкий контур и что границы фрагментов ткани не гладкие.(Окраска Папаниколау, 400 ×)
Дополнительные маркеры к цитологии мочи
Благодаря простоте доступа мочевой пузырь представляет собой идеальную модель для исследований по оценке риска, раннему выявлению и исследованию биомаркеров. Идеальный биомаркер должен быть неинвазивным, обеспечивать быстрые результаты, легко интерпретироваться с небольшой вариабельностью или без вариабельности среди пользователей, быть рентабельным и, что наиболее важно, иметь высокую чувствительность и специфичность [3, 4]. Потенциальные препятствия на пути определения идеального маркера включают необходимость получения согласованных образцов, стандартизации методов фиксации, обеспечения контроля качества методов анализа и оптимизации интерпретации данных в контексте решаемого клинического вопроса [8].Выбор биомаркера зависит от того, является ли цель профилактикой, скринингом, наблюдением или прогнозированием биологического поведения (т.е. риска прогрессирования) новообразования [8].
Мы кратко выделим маркеры, которые в настоящее время доступны или исследуются для обнаружения и мониторинга / наблюдения за раком мочевого пузыря (и). Таким образом, маркеры, которые используются для прогнозирования рецидива, выходят за рамки этого обзора, хотя многие из обсуждаемых здесь маркеров перейдут в другие категории.Сначала мы кратко обсудим маркеры, используемые в настоящее время в клинической практике, некоторые из которых были одобрены Федеральным управлением по лекарственным средствам (FDA). Мы продолжим предварительный просмотр маркеров, которые являются более исследовательскими, но потенциально могут быть интегрированы в клиническую практику в ближайшем будущем.
Таблица 1
Вспомогательные маркеры для цитологии мочи
| Методы | Чувствительность | Специфичность | Комментарий |
|---|---|---|---|
| Цитология | для определения 9027 поражения низкой степени злокачественности | ||
| uCyt ™ (иммуноцит) | 67% -> 90% | 62-84% | Технически просто, трудно интерпретировать; Одобрено FDA |
| FISH (UroVysion) | 30-86% | 75-> 90% | Технически сложно; интерпретация затруднена; Одобрено FDA |
| BLCA-4 | 89% | > 90% | Требуется дальнейшее тестирование |
| Теломераза (TRAP) | 70-90% | 66-88% | Отсутствует техническая стандартизация сложно |
| Цитокератин 20 (иммуноцитохимическим методом) | 65-> 90% | 67-> 90% | Простой маркер; исключить доброкачественные состояния для повышения специфичности |
| Гиалуроновая кислота / гиалуронидаза | 83-> 90% | 63-> 90% | Более высокая чувствительность для низкосортных поражений |
| Survivin | 53-> 90% 88-> 90% | Требуется дальнейшее тестирование | |
| Нестабильность микроспутника | 58-> 90% | 73-> 90% | Технически сложно |
| DD23 (QFIA) | 70-85% | 55-> 90%Требуется дополнительное тестирование | |
| Quanticyt | 59-69% | 68-70% | Низкая чувствительность, технически сложно |
| PSCA | 80% | 85.7% | Требуется дополнительное тестирование |
| Метилирование ДНК | 69-> 90% | 60-> 90% | Требуется дальнейшее тестирование |
Таблица 2
Маркер-добавка на основе полос для цитологии мочи ( все одобрено FDA)
| Методы | Чувствительность | Специфичность | Комментарий | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| NMP22 | 73% | 56-> 90% | Хорошая чувствительность 9027 при поражениях низкой степени 9027 BTA Stat | 9.3-89% | 50-90% | Доброкачественная гематурия снижает специфичность | |
| BTA TRAK | 56-68% | 54-75% | Лучшая чувствительность, специфичность все еще низкая | ||||
| FDP 9027 % | 78% | В настоящее время не производится |
Ядерный матричный белок 22 (NMP-22) — одобрен FDA
Ядерные матричные белки (NMP) состоят из трехмерной сети РНК и белков, которые поддерживают форма ядра, организует ДНК и координирует репликацию ДНК, транскрипцию и экспрессию генов [3, 13].NMP-22 высвобождается из ядер опухолевых клеток во время апоптоза. Высвобождение NMP в мочу может быть обнаружено с помощью одобренного FDA набора для энзим-связанного анализа NMP-22 [14] (Matritech, Newton, Mass).
NMP-22 представляет собой белок массой 238 кДа, который может быть обнаружен в опухоли в 25 раз большей концентрации, чем нормальный уротелий [15, 16]. В иммуноферментном иммуноферментном анализе используются два моноклональных антитела для измерения уровней комплексных и фрагментированных форм митотического аппарата в моче [15]. Пороговое значение 10 ед / мл одобрено производителем и первоначальным исследованием на предмет рецидива [17]; однако общепринятой точки отсечения не существует.Другие исследования предлагали пороговые значения от 5 до 20 ед / мл [17-21].
Некоторые полагают, что NMP22 может быть полезен в качестве инструмента скрининга [22]. Наблюдательные исследования, проводимые отдельно или в дополнение к цитологии, оценили чувствительность в диапазоне от 32 до 100% и специфичность от 56 до 95% [23]. В метаанализе 50 исследований Lotan et al. Сообщили о средней чувствительности и специфичности 73% и 80% соответственно, что превосходит чувствительность цитологического исследования мочи, равную 34% [24]. Основными источниками ложных положительных результатов являются гематурия и пиурия [25].Это серьезная проблема, поскольку многие доброкачественные урологические состояния, такие как каменная болезнь и инфекции, сопровождаются гематурией [26]. В целом, NMP-22 имеет более высокую чувствительность, чем цитология, особенно при обнаружении опухолей низкой степени злокачественности и низкой стадии.
Многочисленные исследования оценили полезность NMP-22 в качестве маркера рецидива опухоли. Soloway et al. Использовали NMP-22 для прогнозирования вероятности рецидива после трансуретральной резекции при последующей цистоскопии у девяноста последующих пациентов [17].Уровни менее 10 Ед / мл предсказывали низкую вероятность рецидива, тогда как уровни более 10 Ед / мл предсказывали рецидив (общая чувствительность 69,7% и специфичность 78,5%). Однако последующие исследования были менее впечатляющими. Боман и др. Сообщили о чувствительности и специфичности 45% и 65% соответственно [27]. Miyanaga et al сообщили о чувствительности и специфичности 18,6% и 85,1% соответственно. Оба исследования пришли к выводу, что низкая чувствительность связана с небольшим размером рецидивирующих опухолей [18].
Новый тест на NMP22 (тест Bladder-Chek) в месте оказания помощи показал чувствительность от 50 до 85% и специфичность от 40 до 90% [28-32]. Преимущества включают тестирование на месте с немедленным получением качественных результатов, что делает тест привлекательным дополнением к цистоскопии.
Общий анализ данных показывает, что тест NMP-22 имеет более высокую чувствительность по сравнению с цитологией для выявления рака мочевого пузыря низкой степени злокачественности и может использоваться для прогнозирования повышенного риска рецидива у пациентов с повышенным уровнем после трансуретральной резекции.Из-за низкой специфичности не рекомендуется рутинное использование NMP-22 в качестве первичного детектора рака мочевого пузыря. Специфичность, однако, может быть улучшена, если исключены пациенты с доброкачественными воспалительными состояниями (инфекциями и т. Д.), Камнями в почках или мочевом пузыре, инородными телами (стентами или нефростомическими трубками), вставкой кишечника, другим раком мочеполовой системы и / или инструментарием [25, 33].
Антиген опухоли мочевого пузыря (BTA) одобрен FDA
Термин BTA фактически описывает три отдельных теста: 1) BTA, 2) BTA stat и 3) BTA TRAK.Поскольку тесты BTA зависят от разрушения базальной мембраны, их чувствительность улучшается при более инвазивном раке [34]. Преимущества включают повышенную чувствительность к инвазивным опухолям. Недостатки включают высокую частоту ложноположительных результатов у пациентов с воспалительными состояниями, вторичными по отношению к доброкачественной гипертрофии предстательной железы (ДГПЖ), и низкую общую чувствительность для обнаружения всех опухолей мочевого пузыря.
Первоначальный тест BTA представлял собой тест на латекс-агглютинацию, в котором измеряли уровни базального белкового антигена, высвобождаемого в мочу в результате проникновения опухоли в строму [35].В обзоре более 1000 пациентов (семь серий) чувствительность исходного теста БТА составила только 52,3%, а специфичность — 84,6% [20] [36–41].
BTA stat и BTA TRAK обнаруживают белок, связанный с фактором комплемента H человека (hCFH), который продуцируется и секретируется несколькими линиями клеток рака мочевого пузыря и почек. Качественный тест BTA stat стоит всего пять долларов и легко выполняется в офисе с помощью щупа [42]. Общая чувствительность колеблется от 9,3% до 89% с более высокой чувствительностью при опухолях более высокого уровня [43-50].Специфичность BTA stat среди здоровых людей превышает 90%. Однако он имеет низкую специфичность (около 50%) среди пациентов с инфекциями мочевыводящих путей, мочевыми камнями (90% положительных результатов с использованием BTA stat [51]), нефритом, почечными камнями, циститом, ДГПЖ, гематурией и от 2+ до 3 + белок на щупе для определения мочи [49, 52-54]. Низкая специфичность в этих условиях является вторичной по отношению к способности теста обнаруживать как белок, связанный с фактором комплемента H, так и фактор комплемента H. Фактор комплемента H присутствует в сыворотке человека в высоких концентрациях, и, следовательно, тест BTA-Stat может быть ложноположительным при доброкачественных заболеваниях. состояния, вызывающие гематурию [13].
BTA TRAK — это количественный тест, который имеет немного улучшенную чувствительность по сравнению с двумя предшественниками BTA [55-57], но имеет высокую частоту ложноположительных результатов по схожим причинам (например, воспаление и травма), что, следовательно, приводит к низкой специфичности [57-59] ]. Более того, многоцентровые исследования и когортные исследования показали, что чувствительность BTA TRAK также варьируется в зависимости от порогового значения, используемого для теста [57, 59-62].
В целом, три теста на БТА приводят к повышенной чувствительности по сравнению с цитологией, но более низкой специфичности из-за высокого уровня ложноположительных результатов, связанных с недавним инструментарием, камнями, воспалительными состояниями, ДГПЖ и гематурией.
Продукты распада фибрин-фибриногена (FDP) — одобрены FDA
Поскольку опухолевые клетки мочевого пузыря вызывают проницаемость сосудов, клеточные белки, такие как плазминоген и фибриноген, проникают в мочу. Урокиназа впоследствии превращает плазминоген в плазмин, который затем превращает фибриноген в продукты фибрин-фибриноген (FDP) [63]. Таким образом, у пациентов с раком мочевого пузыря может быть повышенный уровень FDP в моче. В обзоре четырех серий чувствительность и специфичность анализа AccuDx-FDP варьировались от 68-83% и 68-100% соответственно [38, 64-66].Преимущества включают высокий выход при инвазивных опухолях, предположительно из-за повышенной утечки FDP. К недостаткам можно отнести низкую чувствительность к заболеваниям низкой степени и низкую специфичность по причинам, ранее упомянутым в связи с тестами BTA. Тест стоит около пятнадцати долларов и занимает менее 10 минут [42]. Однако в настоящее время анализ не проводится из-за проблем, связанных с составом теста [4].
uCyt + (ImmunoCyt) ™ и антигены, ассоциированные с опухолью — одобрено FDA
uCyt + (ImmunoCyt) ™ основано на обнаружении ассоциированных с опухолью антигенов, в основном слизистых копротеинов, в переходной или уротелиальной карциноме с использованием моноклональных антител.Анализ uCyt + ™ на сегодняшний день является наиболее часто используемым иммуноцитологическим тестом. Используются три антитела, меченные флуоресцеином M344 и LDQ10 (направленные против сульфатированных муцигликопротеинов) и антитело 19A211, связанное с техасским красным (направленное против гликозилированных форм высокомолекулярных карциномоэмбриональных антигенов, то есть CEA).
Многие исследования оценивали эффективность теста с 1997 года. Используя пороговое значение любой отдельной клетки, положительной как положительной, uCyt + ™ имеет чувствительность и специфичность в диапазоне от 67-100% до 62-84% [67-76] для всех опухолей и является многообещающим диагностическим маркером рака мочевого пузыря.Поскольку одно из антител, M344, оказывается весьма чувствительным к опухолевым клеткам низкой степени злокачественности, этот тест дает важное преимущество для обнаружения опухолей низкой степени злокачественности. Действительно, недавнее исследование с разделением выборки, сравнивающее цитологию, uCyt + ™ и UroVysion ™ в 100 образцах мочи, собранных у 100 пациентов с раком мочевого пузыря (мониторинг популяции), показало, что чувствительность uCyt + ™ превосходит цитологию и UroVysion ™ для выявления рака мочевого пузыря, особенно в опухоли степени [77]. Чувствительность всех опухолей к UCyt + ™, цитологии и UroVysion ™ составляла 76%, 21% и 13% соответственно.Однако недостатком теста является низкая специфичность по сравнению с цитологией или UroVysion ™ (63% для UCyt + ™ против 97% для цитологии и 90% для UroVysion ™). Piaton et al [78] продемонстрировали, что пациенты, у которых был положительный результат UCyt + ™, но отрицательный результат цистоскопии (так называемый «ложноположительный»), имели гораздо более высокий риск обнаружения опухоли в течение 12 месяцев наблюдения (). Полученные данные предполагают, что многие из этих так называемых «ложноположительных» образцов могут на самом деле быть «ложными» ложноположительными, т. Е. Тест обнаруживает ранние очаги поражения или поражения, которые не могут быть обнаружены при цистоскопии во время обследования.показывает окрашивание UCyt + ™ в образце мочи, который имел атипичный цитологический анализ мочи и последующую опухоль низкой степени злокачественности при цитологическом исследовании шесть месяцев спустя. Неясно, сколько именно ложных срабатываний относится к категории «ложных» ложных срабатываний по сравнению с категорией истинных ложноположительных результатов из-за доброкачественных заболеваний, таких как обструкция мочевыводящих путей.
UCyt + ™ (ImmunoCyt) в образце с атипичным цитологическим исследованием мочи. Антитела, меченные флуоресцеином и техасским красным, выявляют ассоциированные с опухолью антигены в уротелиальной карциноме.Положительные опухолевые клетки под флуоресцентной микроскопией имеют как зеленый, так и красный цвет. (400 ×)
Таблица 3
Рецидив опухоли у пациентов с отрицательной цистоскопией [78]
| uCyt ™ | Шестимесячное наблюдение,% (n) | Годовое наблюдение,% (n ) |
|---|---|---|
| Отрицательный тест | 13,9 (8/59) | 11,9 (7/59) |
| Положительный тест | 35,7 (21/59) | 47,0 (8/17) |
Помимо относительно высокой чувствительности при обнаружении злокачественных новообразований, uCyt + ™ технически прост (около 30 минут инкубации на тонких препаратах или фильтрованных предметных стеклах) и относительно недорог.Однако недостатком является иногда наблюдаемый ложноположительный результат, связанный с обструкцией мочевыводящих путей из-за камней или ДГПЖ. Кроме того, интерпретация теста с использованием флуоресцентной микроскопии может быть трудной для многих цитологов, поскольку в некоторых случаях определение положительной клетки может оказаться не таким простым, как можно было бы ожидать. Кроме того, поскольку обнаруженные антигены представляют собой гликопротеины слизистой оболочки или гликозилированный СЕА, клетки слизистой оболочки толстой кишки являются положительными для теста. Таким образом, тест не подходит для образцов мочи из петли или не пузыря.Еще один важный момент, который стоит отметить, заключается в том, что FDA одобрило этот тест с порогом положительного результата на одну клетку. Однако, по нашему опыту (данные не показаны) и, возможно, как и ожидалось, образцы, которые имеют менее или равные 5 положительным клеткам. Таким образом, в нашем отчете мы не только предоставляем общие положительные или отрицательные результаты теста, но также приводим образцы с положительными клетками 0-5 в качестве пограничных и указываем количество положительных клеток, меченных флуоресцеином или техасским красным.
Многоцелевой многоцветный анализ FISH (тест UroVysion ™) — одобрен FDA
Уротелиальные карциномы имеют ряд ассоциированных цитогенетических аномалий, связанных с хромосомами 1, 3, 4, 7, 8, 9, 11, 17 и т. Д.[79-81]. Эти хромосомные аномалии могут быть обнаружены с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с использованием ДНК-зондов для центромер хромосомы или уникальных локусов, которые изменены в опухолевых клетках. Гибридизация обнаруживается с помощью флуоресцентной микроскопии. За счет использования разноцветных зондов (т.е. разных ДНК-зондов, меченных разными флуоресцентными красителями) чувствительность повышается по сравнению с использованием одного зонда.
Тест UroVysion ™ — это многоцелевой многоцветный FISH-анализ, в котором используются перицентромерные флуоресцентные зонды для хромосом 3, 7, 17 и локус-специфический зонд для области 9p21 (локус p16).Отслоившиеся клетки из образцов мочи фиксируют на предметных стеклах с 12 лунками и инкубируют с денатурированным датчиком подсчета хромосом (CEP) 3 (спектр красный), CEP7 (спектр зеленый), CEP 17 (спектр голубой) и Locus Specific Identifier (LSI) 9p21 ( спектр золота). Слайды контрастируют и исследуют под флуоресцентным микроскопом (UroVysion ™ / Abbott Laboratories). Предлагаемые критерии для положительного анализа включают обнаружение 5 или более клеток мочи с приростом 2 или более хромосом или 10 или более клеток с приростом одной хромосомы (например.г. трисомия 7). Также положительным тестом считается гомозиготное обнаружение локуса 9p21 более чем в 20% эпителиальных клеток [48, 82]. Однако консенсусные критерии положительного результата теста FISH не определены, и исследования, оценивающие чувствительность и специфичность UroVysion ™, используют различные критерии положительности.
Первоначальные когортные исследования случай-контроль показали, что чувствительность UroVysion ™ для выявления рака мочевого пузыря составляла 81-84% [83, 84]. В более поздних исследованиях чувствительность варьировалась от 30 до 86% [85–88].Анализ имеет повышенную чувствительность для обнаружения опухолей более высокой степени злокачественности и более высокой стадии, однако чувствительность для обнаружения опухолей низкой степени злокачественности неясна. Опухоли низкой степени злокачественности труднее всего диагностировать с помощью цитологии. Фактически, наше исследование 100 образцов мочи с целью мониторинга рака мочевого пузыря на разделенных выборках показало, что чувствительность теста UroVysion ™ существенно ниже по сравнению с тестом uCyt + ™ (13% против 76%, соответственно) [77]. Однако специфичность UroVysion ™ в нашем исследовании высока (90%, аналогично цитологии) и колеблется от 75% до 100% в других [48, 85, 89-94].Примечательно, что этот тест обладает высокой специфичностью среди пациентов с различными доброкачественными заболеваниями мочеполовой системы, включая микрогематурию, аденомы простаты, инфекции и воспаления [48, 84, 91].
Некоторые исследования также показывают, что UroVysion ™ может предсказывать рецидивы. Skacel et al. В ретроспективном когортном исследовании сообщили, что 8 из 9 FISH-положительных пациентов с атипичной цитологией, но отрицательной биопсией, имели подтвержденный биопсией рак мочевого пузыря в течение 12 месяцев [95]. В другом исследовании Buben-drof et al. Сообщили, что 4 из 5 так называемых «ложноположительных» тестов UroVysion ™ имели рецидив в течение 8 месяцев; ни один из действительно отрицательных случаев не повторился в течение 18 месяцев.Однако критерии, использованные для положительного теста в этом исследовании, отличались от критериев, предложенных производителем. Более того, авторы пришли к выводу, что не все аберрации FISH одинаково важны [96].
Таким образом, UroVysion ™, по-видимому, обладает высокой специфичностью для обнаружения рака мочевого пузыря и способности обнаруживать рецидив опухоли мочевого пузыря до клинического обнаружения. Таким образом, его можно использовать в качестве подтверждающего теста либо для цитологического исследования, либо для теста uCyt + ™. Одним из основных ограничений анализа является отсутствие консенсуса по критериям, используемым для оценки аномальных клеток.Кроме того, тест имеет относительно низкую чувствительность при обнаружении опухолей мочевого пузыря низкой степени злокачественности, как обсуждалось ранее, и поэтому не может улучшить чувствительность в качестве дополнения к цитоморфологическому анализу.
BLCA-4
Конети и Гетценберг описали несколько специфических белков ядерного матрикса, которые присутствуют только у пациентов с раком мочевого пузыря (BLCA 1-6), и три белка, которые присутствуют в нормальной ткани мочевого пузыря (BLNL 1-3) [97 ]. Один из этих маркеров, BLCA-4, обнаруживается по всему мочевому пузырю у пациентов с раком мочевого пузыря, включая как опухолевые, так и нормальные области.Предполагается, что маркер отражает тип «эффекта поля», который был описан несколькими исследователями на генетическом уровне. Исследования Getzenberg et al. Показали, что этот маркер, по-видимому, является регулятором транскрипции, который может играть роль в регуляции экспрессии генов при раке мочевого пузыря [98]. В первоначальных исследованиях с использованием непрямого иммуноферментного анализа (ELISA) они сообщают, что уровни BLCA-4 были значительно выше, чем в нормальном контроле, и что 53 из 55 (96% чувствительность) образцов имели экспрессию BLCA-4 [99].Последующие испытания с использованием иммуноанализа на основе сэндвичей изучали экспрессию BLCA-4 у различных пациентов, включая пациентов с подтвержденным биопсией раком мочевого пузыря, доброкачественными урологическими состояниями, раком простаты и здоровыми людьми. Результаты этого исследования продемонстрировали чувствительность 89% и специфичность 100% [100].
Было обнаружено, что аналогичные белки, а именно BLCA-1, также могут быть потенциально полезными. В отличие от BLCA-4, BLCA-1 экспрессируется только в областях опухоли и не обнаруживается в соседних нормальных тканях или тканях здоровых людей.Иммуноанализ для определения BLCA-1 в образцах мочи был разработан и демонстрирует относительно высокую чувствительность и специфичность [101]. Однако для подтверждения результатов потребуются дополнительные независимые исследования.
Теломераза
Теломеры — это нуклеотидные последовательности на концах хромосом, которые важны для поддержания целостности ДНК. С каждым циклом репликации часть теломер теряется, и полная потеря теломер связана с гибелью клеток. Теломераза — это фермент, удлиняющий теломеры; таким образом, повышенные уровни теломеразы позволяют опухолевым клеткам сохранять бессмертие [102].
Тест протокола амплификации теломерных повторов (TRAP) — это тест на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), который обнаруживает повышенные уровни теломеразы, секретируемой в мочу клетками рака мочевого пузыря. Доступны и другие анализы теломеразы, которые обнаруживают обратную транскриптазу теломеразы человека и ее РНК-компонент. Однако для краткости обсуждение будет ограничено анализом TRAP. Он обнаруживает продукты теломеразной реакции in vitro, имеет 10-часовой рабочий цикл и стоит около семнадцати долларов [4, 102].Как правило, анализ TRAP имеет лучшую чувствительность, чем цитология, с несколько меньшей специфичностью [20, 103]. Недавние исследования показывают, что чувствительность находится в диапазоне от 70 до 90% при пороговом значении 50 произвольных ферментативных единиц. Специфичность несколько ниже — 66–88% [13, 20, 104–107]. Более низкая специфичность может быть объяснена загрязнением доброкачественных клеток теломеразной активностью (например, лимфоцитов). Чувствительность немного повышалась при промывании мочевого пузыря по сравнению с мочеиспусканием [103]. Однако при обнаружении рецидивных опухолей TRAP имеет низкую чувствительность (35%) [108].
Трудности, связанные с тестом на теломеразу, ограничивают его широкое распространение. Мочу необходимо обработать в течение 24 часов [13]. По крайней мере, 50 клеток должны экспрессировать теломеразу для надежного определения теломеразы [13, 109]. Наконец, ложноотрицательные результаты могут быть получены в зависимости от сбора, обработки образцов и наличия ингибиторов ПЦР или рибонуклеаз [110]. В настоящее время анализ TRAP не рекомендуется в клинических условиях из-за сложных лабораторных процедур и отсутствия стандартизированной обработки образцов для уменьшения количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Цитокератины
Цитокератины (СК) составляют большой компонент промежуточных филаментов, которые обнаруживаются в эпителиальных клетках [111]. Двадцать цитокератинов были идентифицированы в клетках человека, и их экспрессия варьирует в зависимости от типа эпителиальных клеток и состояния дифференцировки [112]. Экспрессия цитокератинов 8, 18, 19 и 20 была оценена как потенциальные маркеры рака мочевого пузыря.
Тесты UBC-Rapid и UBC-ELISA (производимые IDL Biotech, Börlabger, Швеция) обнаруживают присутствие цитокератина 8 и 18 в моче больных раком мочевого пузыря.UBC-Rapid — это тест по месту оказания медицинской помощи, а UBC-ELISA — это двухчасовой сэндвич-тест ELISA. Несколько исследований показывают, что чувствительность тестов UBC для выявления как первичного, так и рецидивирующего рака мочевого пузыря варьируется от 12 до 79% со специфичностью от 63 до 97% [46, 57, 113-121]. В нескольких исследованиях также сообщалось о более низкой чувствительности при обнаружении опухолей низкой степени злокачественности и низкой стадии. Чувствительность UBC для выявления опухолей мочевого пузыря 1, 2 и 3 степени составляет 13-60%, 42-79% и 35-75% соответственно [114, 116, 117, 122].Ретроспективные исследования показывают, что чувствительность UBC-Rapid составляет 21-25% для выявления опухолей стадии Та и карциномы in situ (CIS), и поэтому он имеет недостаточную диагностическую ценность для выявления поверхностного рака мочевого пузыря [46, 122]. По сравнению с другими онкомаркерами мочевого пузыря и цитологией, тесты UBC обычно имеют более низкую чувствительность.
Экспрессия цитокератина 20 ограничена поверхностными и иногда промежуточными клетками нормального уротелия, но не базальными клетками. Аберрантная экспрессия цитокератина 20 (СК 20) наблюдается в раковых клетках мочевого пузыря [112].Анализы с обратной транскрипцией (RT) -PCR были использованы для оценки экспрессии CK 20 в образцах мочи. Несколько исследований показали, что ОТ-ПЦР CK 20 имеет чувствительность 78-87% для выявления рака мочевого пузыря в моче. Специфичность ОТ-ПЦР СК 20 колеблется от 55,7% до 98% [111, 123-129]. CK 20 RT-PCR на образцах крови также изучалась для раннего выявления прогрессирования системного рака мочевого пузыря [126]. В целом, 17–29% пациентов с раком мочевого пузыря были положительными на CK 20 RT-PCR [130, 131]. Высокая чувствительность, присущая методологии ОТ-ПЦР, также может быть связана с низкой специфичностью [125].
Иммуноцитохимия Cytokeratin 20 также была оценена как дополнительный маркер для атипичной цитологии. Klein et al. Сообщили о чувствительности 91% и специфичности 67% в исследовании 87 пациентов [132]. Образцы с ложноположительными результатами имели цитологию, соответствующую предраковым состояниям, таким как атипия, гиперплазия или метаплазия [111, 132]. У всех полностью здоровых пациентов уровень КК20 был отрицательным. Lin et al. Показали, что общая чувствительность и специфичность иммуноцитохимии CK20 для обнаружения уротелиальной карциномы составила 94.4% и 80,5% соответственно [133]. Это исследование продемонстрировало, что CK20 является полезным дополнительным маркером для цитологии мочи, то есть анализ CK20 можно удобно проводить на том же слайде после рутинной морфологической оценки и использовать для сортировки атипичных цитологических исследований мочи на категории низкого и высокого риска для последующего клинического наблюдения. вверх. Golijanin et al. Также сообщили о высокой чувствительности (82%) иммуноцитохимии CK 20 у пациентов с микрогематурией и раком мочевого пузыря. Специфичность данного исследования составила 76% [134].Хотя общая чувствительность была высокой, исследование Golijanin также показало, что чувствительность варьировалась в зависимости от степени опухоли, с чувствительностью только 56,5% для опухолей степени 1. Окрашивание СК 20 имело гораздо более высокую чувствительность при опухолях мочевого пузыря 2 и 3 степени (93% и 92% соответственно) [134]. Более поздние исследования подтвердили эти результаты, продемонстрировав чувствительность в диапазоне от 65 до 86%, специфичность от 86 до 100% и преимущества перед цитологическим исследованием мочи при обнаружении первичных, рецидивирующих опухолей стадии pT1 и степени 2/3 [135-137] .Одна из ловушек иммуноцитохимического окрашивания СК20 заключается в том, что часто доброкачественные зонтичные клетки оказываются положительными. Таким образом, в нашей практике мы используем СК20 только в образцах, содержащих несколько небольших базалоидных клеток, и чтобы различить, представляют ли эти клетки нормальные базальные клетки (отрицательный СК20) по сравнению с диспластическими или злокачественными клетками (положительный СК20).
Цитокератин 19 (СК 19) экспрессируется в нормальном уротелии. CYFRA 21-1 представляет собой растворимый фрагмент CK 19, который можно измерить в моче при отшелушивании и лизировании уротелиальных клеток.Есть два коммерчески доступных теста, которые могут измерять CYFRA 21-1; один представляет собой твердофазный иммунорадиометрический сэндвич-анализ (Cis Bio International, Gif-sur-Yvette, Франция), а другой — электрохемилюминесцентный иммуноферментный анализ с системой Elecsys 2010 (Roche Diagnostics). Уровни CK 19 измеряются после нормализации креатинина в моче [138]. Ретроспективное когортное исследование показало, что уровни CYFRA 21-1 повышены у пациентов с раком мочевого пузыря по сравнению с пациентами с другими урологическими состояниями и нормальным контролем.Уровень CYFRA 21-1 у пациентов с раком мочевого пузыря, пациентов с другими урологическими состояниями и здорового контроля составлял 154,4 нг / мл, 22,3 нг / мл и 2,4 нг / мл соответственно [139]. Когда применялся пороговый уровень 4 нг / мл, чувствительность и специфичность CYFRA 21-1 для обнаружения рака мочевого пузыря составляли 96,9% и 67,2% соответственно. Низкая специфичность объяснялась высоким уровнем CK 19 у пациентов с мочекаменной болезнью и инфекцией мочевыводящих путей. Другое исследование показало, что чувствительность и специфичность CYFRA 21-1 составляет 75.5% и 71% соответственно при использовании электрохемилюминесцентного анализа [140]. Это исследование показало, что чувствительность выявления рака мочевого пузыря увеличивается с опухолями более высокого уровня (чувствительность к обнаружению опухолей 1, 2 и 3 степени составила 54,5%, 66,7% и 88,2% соответственно). Однако в исследовании также сообщается о приблизительно 33% ложноположительных результатах у пациентов с различными урологическими заболеваниями, включая мочекаменную болезнь, стеноз, аденомы простаты и инфекции мочевыводящих путей. Последующие более поздние исследования показали чувствительность в диапазоне 43–79% и специфичность в диапазоне 68–88% с пороговым значением 4 нг / мл [118, 141–143].Некоторые сообщили об улучшении чувствительности по сравнению с цитологией при обнаружении опухолей 1 степени [141].
Таким образом, цитокератин 20, обнаруженный с помощью ОТ-ПЦР или иммуноцитохимии, является полезным и простым маркером. Однако часто положительные данные о СК20 в нормальных зонтичных клетках препятствуют широкому применению этого теста в качестве инструмента первичного скрининга. Скорее, его лучше использовать в качестве теста в определенных условиях; например, в образцах, содержащих скудные мелкие базалоидные клетки. Тесты UBC, по-видимому, имеют более низкую чувствительность по сравнению с другими онкомаркерами и в настоящее время не имеют достаточной диагностической ценности для выявления рака мочевого пузыря.В целом, использование CYFRA 21-1 многообещающе с некоторыми противоречивыми исследованиями его преимущества над цитологией мочи.
Гиалуроновая кислота / гиалуронидаза
Гиалуроновая кислота (НА) — гликозаминогликан, который способствует адгезии опухолевых клеток и ангиогенезу [13, 144]. Гиалуронидаза (HAase) представляет собой фермент, который расщепляет HA на фрагменты; эти расщепленные фрагменты затем способствуют росту и распространению опухоли, способствуя ангиогенезу [145, 146]. Первоначальные исследования случай-контроль измеряли как уровни НА, так и активность НАазы в моче.Результаты показали, что у пациентов с раком мочевого пузыря, независимо от степени опухоли, наблюдалось повышение уровня ГК в 2,5–6,5 раза (чувствительность 83% и специфичность 90,1%) [146]. Уровни активности НАазы также были увеличены в 3–7 раз у пациентов с раком мочевого пузыря высокой степени (чувствительность 81,5% и специфичность 83,8%) [147]. Комбинация тестов увеличивает общую чувствительность до 92%.
Проспективное исследование по мониторингу рецидива рака мочевого пузыря показало, что HA-HAase более чувствительна и точнее, чем BTA stat (чувствительность 94% и 61% соответственно).Однако тест BTA stat имел лучшую специфичность, чем тест HA-HAase (74% и 63% соответственно) [49]. Последующие сравнительные исследования показали, что тестирование HA-HAase имеет самую высокую чувствительность при обнаружении опухолей как низкой степени / низкой стадии, так и высокой степени / высокой стадии [46, 67]. Пассеротти и др. Сравнили точность теста HA с UroVysion ™, BTA stat и цитологией в проспективном исследовании с участием пациентов с раком мочевого пузыря с первичными или рецидивирующими опухолями. Специфичность теста определялась у пациентов с историей рака мочевого пузыря, не выявленного во время тестирования, и у пациентов с ДГПЖ.Тест HA имел самую высокую чувствительность среди всех тестов (83%) и немного более высокую специфичность [148]. Eissa et al исследовали РНК HAase в моче, обнаруженную с помощью ОТ-ПЦР, и обнаружили более высокую чувствительность (90,8%) по сравнению с цитологией (68,9%) и СК 20 (78,1%) со специфичностью 93,4%, 98,1% и 80,2% соответственно [149] .
Таким образом, тестирование HA-HAase является многообещающим маркером для обнаружения первичных и рецидивирующих опухолей мочевого пузыря. Тест имеет высокую чувствительность и позволяет обнаруживать опухоли низкой / низкой стадии и высокой / высокой стадии.Этот тест может быть наиболее полезным при скрининге пациентов с раком мочевого пузыря на предмет рецидива.
Сурвивин
Сурвивин — ингибитор апоптоза, который увеличивает жизнеспособность клеток опухолей мочевого пузыря [150, 151]. Сурвивин не обнаруживается в большинстве нормальных тканей взрослого человека и коррелирует с неблагоприятным заболеванием и сокращает общую выживаемость при нейробластоме, колоректальном раке и немелкоклеточном раке легких [152–155]. Gazzaniga et al. Продемонстрировали с помощью ОТ-ПЦР, что мРНК сурвивина экспрессируется в 30% опухолей мочевого пузыря [156].Schultz et al. Обнаружили экспрессию мРНК сурвивина в 100% опухолей мочевого пузыря [157].
Smith et al. Проанализировали образцы мочи с помощью поликлональных антител к сурвивину, а затем подтвердили результаты с помощью вестерн-блоттинга и ОТ-ПЦР. Сурвивин был обнаружен у 31 из 31 пациента с впервые возникшим или рецидивирующим раком мочевого пузыря с использованием системы поликлональных антител и у 15 из 15 пациентов с помощью RT-PCR, что дает чувствительность 100%. Только 3 из 35 пациентов с пролеченным раком мочевого пузыря и отрицательными результатами цистоскопии дали положительный результат, что позволяет предположить, что сурвивин можно использовать для наблюдения.Дополнительные данные показали, что сурвивин был отрицательным у 17 здоровых добровольцев и 30 пациентов с неуротелиальным раком мочеполовой системы. Среди 30 пациентов с неопухолевым заболеванием мочевыводящих путей было только 4 ложноположительных результата, в том числе 3 с аномалиями мочевого пузыря при цистоскопии и один пациент с повышенным уровнем ПСА. Общая специфичность сурвивина составила 95% [151]. Другие исследования показали, что уровни сурвивина в моче выше у пациентов с рецидивом карциномы по сравнению с теми, кто достиг ремиссии после лечения БЦЖ или митомицином С.Чувствительность и специфичность выявления рецидива составляли 100% и 78% соответственно [158]. Наконец, анализы мочи, выявляющие мРНК сурвивина с помощью ОТ-ПЦР, показали чувствительность в диапазоне от 53 до 94% и специфичность от 88 до 100% [159–162].
Короче говоря, сурвивин потенциально может быть ценным маркером как для обнаружения, так и для мониторинга рака мочевого пузыря, но его проверка требует дальнейшего тестирования.
Плоидность ДНК и фракция S-фазы
Плоидность ДНК и фракции S-фазы можно оценить по образцам мочи с помощью проточной цитометрии, визуальной цитометрии (ICM), лазерной сканирующей цитометрии (LSC) или флуоресценции in situ гибридизации ( РЫБА) [3].Хотя одобренная FDA методология FISH уже обсуждалась в этой статье (UroVysion ™), другие методологии, такие как проточная цитометрия, могут идентифицировать неопластические клетки с увеличенным размером ядра и повышенным соотношением ядерного хроматина и дополнительно определять плоидность их ДНК (например, диплоидная, тетраплоидная , или ане-уплоид). Опухоли высокой степени злокачественности можно обнаружить по анеуплоидии и более высокому проценту клеток в S-фазе [3]. Чувствительность к уротелиальным опухолям высокой степени злокачественности или карциноме in situ может достигать 90% [3, 163–165].Поскольку этот метод дорог и требует большого количества клеток, а также высококвалифицированного персонала, проточная цитометрия не получила широкого распространения.
Цитометрия изображений (ICM), особенно система на основе флуоресценции, позволяет измерять содержание ДНК в каждой отдельной клетке, что делает ее привлекательной альтернативой проточной цитометрии, которая требует большой популяции клеток. Группа Хемстрита, используя специальную платформу, называемую количественным анализом флуоресцентных изображений (QFIA), продемонстрировала, что анализ содержания ДНК на основе отдельных клеток (путем обнаружения клеток с ДНК более 5c) более чувствителен, чем цитология или проточная цитометрия при обнаружении опухолей низкой степени злокачественности [166].Более того, такая система позволяет одновременно анализировать множество маркеров на основе других белков (или, возможно, ДНК). Последующие исследования показали аналогичные результаты [92, 167]. Лазерная сканирующая цитометрия сочетает в себе преимущества проточной цитометрии и ICM за счет лазерного сканирования отдельных клеток для количественной оценки флуоресценции [168]. Хотя многочисленные исследования в целом показали, что анализ содержания ДНК на основе изображений является полезным маркером для обнаружения рака мочевого пузыря, необходимость в дорогостоящих инструментах и тщательных мерах контроля качества для количественной оценки флуоресценции препятствует широкому применению этой полезной технологии.
Анализы микросателлитной нестабильности
Подобно другим злокачественным новообразованиям, механизмы репарации ДНК рака мочевого пузыря могут быть дефектными, что приводит к постоянным ошибкам в репликации, то есть геномной нестабильности. Микросателлиты — это унаследованные последовательности ДНК тандемных повторов, которые можно анализировать для обнаружения ошибок репликации [169, 170], также известных как микросателлитная нестабильность. ПЦР-амплификация этих последовательностей тандемных повторов может обнаруживать микросателлитную нестабильность и потерю гетерозиготности (LOH) генов-супрессоров опухолей.Хотя микросателлитная нестабильность чаще встречается при поздних стадиях рака мочевого пузыря, она может быть продемонстрирована в опухолях низкой степени злокачественности при использовании большего количества микросателлитных маркеров. Методология требует значительного количества микросателлитных маркеров для достижения высокой чувствительности [171–174].
Микросателлитный анализ был использован для подтверждения того, что папиллярная уротелиальная карцинома низкой степени злокачественности имеет нестабильность и / или потерю хромосомы 9 и гена-супрессора опухоли p16 (MTS1) [169, 175]. Независимо от класса и стадии опухоли мочевого пузыря обычно имеют LOH в области 9p при микросателлитном анализе [169, 176].Используя микросателлитный анализ и ПЦР, Мао и др. Смогли идентифицировать 19 из 20 пациентов (чувствительность 95%) с генетическими изменениями; однако 2 из 4 образцов с воспалительной атипией также были положительными [13, 177]. Недавние исследования van Rhijn et al показали, что активирующие мутации FGFR3 обнаруживаются при поверхностном раке мочевого пузыря низкой степени, и при использовании в сочетании с микросателлитным анализом чувствительность обнаружения рака мочевого пузыря увеличивается до 89% (по сравнению с 71% для отрицательных мутаций FGFR3. ) [178].Другие исследования показали, что микросателлитная нестабильность может использоваться для прогнозирования рецидива уротелиальной карциномы. Чувствительность выбранных исследований варьировалась от 58% до 95% со специфичностью от 73 до 100% [169, 177, 179–185], при этом некоторые исследования показали прогноз рецидива за несколько месяцев до положительной цистоскопии. Однако потребуется крупномасштабный анализ для определения специфичности, особенно в симптоматических популяциях, чтобы понять истинную клиническую полезность теста.
ДНК-чипы (HuSNP-чип) могут обнаруживать аллели, различающиеся одним нуклеотидным полиморфизмом.С помощью этой технологии LOH можно обнаружить одновременно в 1500 разных локусах. Предварительные результаты у 31 пациента показывают LOH в 24 или более локусах, демонстрируя способность чиповой технологии обнаруживать опухоли мочевого пузыря со 100% чувствительностью. У девяти контрольных субъектов и у 4 из 5 пациентов с гематурией были отрицательные результаты чипа [186].
Несмотря на то, что проведенные на сегодняшний день исследования показывают, что микросателлитный анализ обладает превосходной чувствительностью и специфичностью независимо от степени и стадии опухоли, множественности опухоли или предшествующей истории рака мочевого пузыря, исследования основаны на относительно небольших размерах выборки.К недостаткам можно отнести потенциальное заражение неуротелиальными клетками, которое может вызвать ложноотрицательные или положительные результаты, длительное время обработки, высокую стоимость оборудования и потребность в обученном персонале, что делает этот тест непрактичным для рутинного клинического использования. В настоящее время тестирование мочи на микросателлитную нестабильность не рекомендуется для мониторинга или обнаружения первичных опухолей.
DD23
Моноклональное антитело, названное DD23, получено в результате иммунизации мышей BALB / c свежим раком мочевого пузыря.Антиген, распознаваемый DD23, идентифицируется в 81% опухолей мочевого пузыря. Тестирование на этот антиген с использованием количественного анализа флуоресцентных изображений (QFIA) имеет чувствительность 85% и специфичность 95% [13, 187]. При использовании в сочетании с цитологией чувствительность составляет 94%, а специфичность — 85% [3]. UroCor, Inc. (теперь часть LabCorp Inc.) лицензировала моноклональное антитело DD23, и аналитический метод был преобразован в иммуногистохимический анализ щелочной фосфатазы. Проспективное исследование, оценивающее полезность иммуногистохимии DD23, показало, что общая чувствительность и специфичность DD23 составляли 81% и 60%, соответственно, по сравнению с чувствительностью и специфичностью 66% и 85%, соответственно, только с цитологией.Комбинация цитологии и DD23 имела чувствительность 85% и специфичность 55% [188]. Другое исследование показало чувствительность 70% и специфичность 60% с улучшенной чувствительностью у пациентов, ранее получавших внутрипузырное лечение [189]. В целом, DD23 — многообещающее моноклональное антитело, которое можно использовать для обнаружения рака мочевого пузыря. Флуоресцентные анализы, по-видимому, имеют лучшую общую чувствительность и специфичность по сравнению с иммуноцитохимией. Когда и флуоресцентный, и иммуноцитохимический анализы используются в сочетании с цитологией, чувствительность увеличивается с небольшим снижением специфичности.Однако необходимы дальнейшие исследования, чтобы подтвердить полезность обоих методов в более крупных проспективных исследованиях.
Quanticyt ядерная кариометрия
Quanticyt — это автоматизированная система количественной кариометрической цитологии, которая объективно интерпретирует ядерные характеристики (форму ядра и содержание ДНК) на основе микроскопических изображений. Изготовлены цитоспиновые препараты образцов промывки мочевого пузыря, зафиксированных этанолом и полиэтиленгликолем. Ядерные изображения, полученные с помощью световой микроскопии, передаются в компьютеризированную систему анализа изображений.Используя внутренний стандарт лимфоцитов, измеряют среднюю форму ядра (MPASS) и содержание ДНК (индекс отклонения 2c или 2cDI). Затем образцы разделяются на группы низкого, среднего или высокого риска [39, 190–194].
Van der Poel и др. Сообщили, что тест Quanticyt имел чувствительность 59% и специфичность для выявления рака мочевого пузыря. Винер и др. Сообщили о чувствительности 69%. Чувствительность повышается для опухолей более высокого уровня, а для опухолей 3 степени чувствительность составляет 85% [39, 195].Кроме того, 2cDI ≥ 2,00 был значимым предиктором карциномы in situ, инвазивного рака мочевого пузыря и прогрессирования [190].
Полезность Quanticyt несколько ограничена из-за низкой чувствительности. В одном исследовании van der Poel и др. Частота выявления инвазивных заболеваний составила 10% среди лиц, отнесенных Quanticyt к группе высокого риска, но только после того, как у пациента были взяты пять последовательных образцов [190]. Другие исследования показывают, что Quanticyt также переоценивает риск аномалий мочевого пузыря и, следовательно, имеет более низкую специфичность, чем цитология промывки мочевого пузыря и цитология мочи мочевого пузыря [87, 195].
Таким образом, Quanticyt является потенциальным дополнительным тестом для стратификации риска пациентов с раком мочевого пузыря. Однако тест ограничен его низкой чувствительностью, необходимостью сложных инструментов и технических знаний, а также его потенциалом переоценить риск рака мочевого пузыря. В настоящее время общая применимость этой методологии ограничена.
Антиген стволовых клеток простаты
Недавние исследования показали, что экспрессия антигена стволовых клеток простаты (PSCA), гликозилфосфатидилинозитального (GPI) антигена клеточной поверхности, повышается в уротелиальной карциноме человека.Экспрессия PSCA обнаруживается более чем в 80% локальных опухолей и в 60–100% метастатических опухолей [196–198]. В 2003 году исследование с использованием иммуноцитохимии PSCA в качестве дополнительного маркера уротелиальной карциномы в образцах мочи показало, что положительное окрашивание PSCA имело повышенную чувствительность и специфичность для обнаружения уротелиальной карциномы по сравнению с одной цитологией. Cheng et al. Показали, что чувствительность и специфичность одного окрашивания PSCA составляли 80% и 85,7% соответственно по сравнению с цитологическим исследованием (46.Чувствительность 7%). Из ложноположительных случаев у одного в анамнезе был интерстициальный цистит, а у другого — гематурия. Чувствительность и специфичность увеличивались, когда цитология и иммуноцитохимическое окрашивание PSCA были объединены в ситуации «или / или» до 83,3% и 85,7% соответственно [199]. Wu et al. Недавно провели полногеномное ассоциативное исследование 969 случаев рака мочевого пузыря и 957 контрольных больных и определили миссенс-вариант гена PSCA, устойчиво связанный с раком мочевого пузыря в популяциях США и Европы [200].
Таким образом, представляется, что PSCA может быть полезным дополнительным маркером к цитологическому анализу мочи при обнаружении уротелиальной карциномы в образцах мочи с мочеиспусканием. Однако первоначальные исследования необходимо подтвердить на большем количестве образцов и в более широком диапазоне клинических условий, прежде чем можно будет сделать какие-либо определенные выводы.
Метилирование ДНК
Динуклеотиды CpG присутствуют в промоторах многих генов и могут метилироваться, что, в свою очередь, ингибирует экспрессию генов.Изменение статуса метилирования — частое явление при раке, когда, например, метилирование инактивирует ген-супрессор опухоли и приводит к развитию рака. Метилирование гена p16 / CDKN2A при раке мочевого пузыря было впервые описано Gonzalez-Zulueta et al [201], и с тех пор во многих исследованиях изучались различные локусы и комбинированные панели маркеров метилирования в образцах мочи для выявления рака мочевого пузыря.
Dulaimi et al [202] исследовали статус метилирования генов-супрессоров опухолей APC, RASSF1A и p14 (ARF) и продемонстрировали 87% чувствительность в моче 45 пациентов с опухолями, полученными до операции по поводу рака мочевого пузыря.Другие исследовали комбинацию панелей от 2 до 15 отдельных панелей генов и сообщили о чувствительности и специфичности в пределах 69–92% и 60–100% соответственно [203–207]. Renard et al [207] недавно идентифицировали два гена, TWIST1 и NID2, часто метилированные при раке мочевого пузыря, включая опухоли ранней стадии и низкой степени злокачественности. Панель с двумя генами выявила рак мочевого пузыря в трех отдельных наборах образцов мочи (выборка, тренировка и проверка) у 496 пациентов с чувствительностью 90% и специфичностью 93%.
Исследования, демонстрирующие использование метилирования ДНК для скрининга и надзора, являются многообещающими. Необходимы дальнейшие межведомственные исследования для изучения различных предложенных панелей метилирования и проверки этой методологии, чтобы лучше понять ее применимость для лечения рака мочевого пузыря.
Инфекции мочевыводящих путей: новый взгляд на общую проблему
Инфекция мочевыводящих путей (ИМП) — одна из наиболее распространенных бактериальных инфекций, встречающихся в клинической практике в Европе и Северной Америке.Подсчитано, что ежегодно в мире происходит 150 миллионов случаев ИМП, в результате чего прямые расходы на здравоохранение составляют более 4 миллиардов фунтов (6 миллиардов долларов). 1 Молодые, в остальном здоровые, женщины обычно заболевают с оценочной заболеваемостью 0,5–0,7 инфекций в год. 2 Среди пораженных женщин у 25% –30% будут развиваться рецидивирующие инфекции, не связанные с какими-либо функциональными или анатомическими аномалиями мочевыводящих путей. Хотя неосложненные инфекции не приводят к долгосрочным последствиям, например рубцеванию почек, они вызывают значительную заболеваемость, особенно если они повторяются.
Были достигнуты важные успехи в определении факторов вирулентности бактерий, которые увеличивают бактериальную инфекционность. Другие исследователи изучали факторы, которые приводят к восприимчивости хозяина. Однако именно сложное взаимодействие между этими факторами вирулентности бактерий и реакцией хозяина определяет результат воздействия бактерий. Достижения в клеточной и молекулярной биологии улучшили наше понимание ассоциации бактерия-хозяин, тем не менее, это остается не полностью изученным.
Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) является возбудителем 70–95% внебольничных ИМП и 50% всех случаев нозокомиальной инфекции. В этом обзоре мы обсудим последние достижения в нашем понимании того, как этот распространенный патоген взаимодействует с хозяином, приводя к инфекции и последующему разрешению или, в меньшей степени, к повторной инфекции
ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ
Уропатогенные бактерии развили ряд факторов вирулентности, которые способствуют колонизации и инфицированию мочевыводящих путей.Факторы вирулентности, наиболее часто связанные с этими организмами, включают наличие фимбрий с адгезиновыми кончиками, протектинов, бактериальной капсулы, включая липополисахарид (ЛПС), и выработку токсинов, таких как гемолизин и фактор некротизации колоний.
Фимбрии (пили)
Фимбрии представляют собой тонкие, похожие на волоски поверхностные адгезивные органеллы, состоящие из белковых субъединиц. Описан ряд различных типов, которые различаются по размеру (длине и диаметру) и по своей молекуле-мишени-хозяину.Впервые они были описаны в 1960-х годах профессором микробиологии Университета Данди Дж. П. Дугидом и обычно связаны с грамотрицательными бактериями, такими как E coli и Salmonella spp . Фимбрии берут начало в цитоплазме клетки и проецируются через клеточную мембрану и клеточную стенку. Они связывают гликопротеиновые или гликолипидные фрагменты на уротелиальных клетках, позволяя бактериям прикрепляться к эпителию и сохраняться в мочевыводящих путях. Наиболее распространенными фимбриальными белками, связанными с инфекцией UPEC, являются фимбрии типа 1, P и Dr.
Фимбрии типа 1
Фимбрии типа 1, единственный наиболее часто выраженный фактор вирулентности, продуцируются более чем 80% всех UPEC. Электронная микроскопия и биохимические исследования показали, что эти выступы стенок бактериальных клеток связываются с уротелиальными маннозилированными гликопротеинами уроплакином Ia и Ib через субъединицу адгезина FimH, расположенную на кончике фимбрия. Также считается, что они ответственны за усиление воспалительной реакции, связанной с бактериальной адгезией и инвазией.Исследования показали, что специфические рецепторы на тучных клетках, которые связываются с кончиком FimH, инициируют воспалительную реакцию путем высвобождения медиаторов воспаления. 3 Белок Тамма-Хорсфалла (THP), синтезируемый в дистальном отделе нефрона, также связывает фимбрии 1 типа, предотвращая адгезию и, следовательно, является уропротекторным.
Фимбрии типа P
Фимбрии типа P являются вторым по распространенности фактором вирулентности UPEC. Они состоят из гетерополимерных волокон, состоящих из различных белковых субъединиц, кодируемых опероном гена pap A-K. 4 Эти фимбрии распознают почечные гликосфинголипиды, несущие детерминанту Gal α (1–4) Gal через его адгезин papG. Они важны в патогенезе восходящих инфекций мочевых путей и пиелонефрита у людей и были идентифицированы в 80% изолятов пиелонефрита E coli . 5 При экспериментальном пиелонефрите P-фимбрии так же важны, как и пузырно-мочеточниковый рефлюкс, в развитии восходящей инфекции. 6 P-фимбрий опосредованное прикрепление к рецепторам олигосахаридов также индуцирует активацию эпителиальных клеток и продукцию цитокинов, таких как IL6 и IL8, in vitro. 7
Тип Dr fimbriae
Это семейство адгезинов — часто встречающийся фактор вирулентности. Штаммы E coli , экспрессирующие Dr fimbriae, способны связываться с эпителиальными клетками и, возможно, вторгаться в них, взаимодействуя с регуляторным белком комплемента, фактором ускорения распада (DAF). Штаммы E. coli , которые экспрессируют адгезины семейства Dr, ассоциированы с циститом (30–50%) у детей и пиелонефритом, связанным с беременностью (30%). 8
Сидерофоры
Железо является важным питательным веществом для жизнеспособности бактерий в организме хозяина, и UPEC демонстрируют несколько механизмов экстракции железа, наиболее распространенными из которых являются системы рецепторов сидерофор-сидерофор и поглощение гема. 9 Сидерофорные системы включают энтробактин и аэробактин с рецепторами, такими как рецепторы IreA и IroN и Iha. Было также показано, что рецепторы Iha обладают свойствами прилипания, что способствует дальнейшему развитию вирулентности.
Токсины
Гемолизины
Существует два распространенных типа этого токсина: α-гемолизин и β-гемолизин. α-Гемолизин обычно продуцируется штаммами, изолированными от случаев ИМП у человека и других внекишечных инфекций. Это термолабильный внеклеточный белок, и его продукция может определяться плазмидой или хромосомой. 10
Это цитолизин, образующий поры, который лизирует эритроциты, вызывая рассеяние трансмембранных ионных градиентов.Железо высвобождается из клеток, которые могут использоваться бактериями для размножения через системы сидерофоров. Вода перемещается в клетку в результате повышенного внутриклеточного осмотического давления, в результате чего клетка набухает и разрывается. β-гемолизин представляет собой связанный с клеткой гемолизин с таким же диапазоном гемолитической активности, как и α-гемолизин.
Цитотоксический некротизирующий фактор (CNF)
CNF типов 1 и 2 принадлежат к группе бактериальных токсинов, которые модифицируют Rho, подсемейство малых GTP-связывающих белков, которые являются регуляторами актинового цитоскелета.Эукариотические клетки, подвергшиеся воздействию CNF1, демонстрируют взъерошенность мембран, образование очаговых адгезий и актиновых стрессовых волокон, а также репликацию ДНК в отсутствие клеточного деления, что приводит к образованию увеличенных многоядерных клеток. Несмотря на то, что in vitro было показано, что CNF вызывает лизис клеток и, следовательно, способствует вирулентности, прямые доказательства роли токсина в заболевании еще предстоит определить.
Протектинов
UPEC экспрессируют покрытие полисахаридной капсулы 2 или 3 группы и ЛПС по сравнению с капсулами группы 1 комменсалов.Полисахарид, особенно ЛПС, играет важную роль в вирулентности, активируя различные сигнальные пути, вызывая иммунный ответ от хозяина. Детали этого каскада обсуждаются позже в этом обзоре.
ХОЗЯЙСТВЕННЫЕ ФАКТОРЫ
Факторы хозяина играют жизненно важную роль в балансе между бесплодием и инфекцией мочевыводящих путей. Большинство патогенных бактерий, вызывающих ИМП, происходят из кишечной флоры хозяина и проникают в мочевой пузырь через уретру.
Факторы хозяина можно разделить на: (а) естественные факторы защиты хозяина и (б) приобретенные факторы хозяина (ответ хозяина), которые активируются в ответ на бактериальную инвазию.
Естественная защита хозяина
Общие защитные факторы
Мочевыводящие пути обладают рядом специализированных защитных средств против бактериальной колонизации, благодаря чему моча остается стерильной. К ним относятся однонаправленный перистальтический поток мочи от почки к мочевому пузырю.В мочевом пузыре секреция гликозаминов переходными клетками мочевого пузыря предотвращает прикрепление бактерий за счет образования муцинового слоя. Низкий pH и присутствие солей и мочевины снижают выживаемость бактерий в мочевыводящих путях.
Белок Тамма-Хорсфалла
THP, также известный как уромукоид, представляет собой гликопротеин, который синтезируется исключительно эпителиальными клетками толстой восходящей петли Генле и раннего сегмента дистальных извитых канальцев. Это действует как фактор антиадгезии, связываясь с UPEC, экспрессирующими фимбрии 1 типа, и образует уромукоидно-колиформный комплекс, который затем выводится путем мочеиспускания.Однако недавнее исследование показало, что при концентрациях ниже 30 мкг / мл THP стимулирует прикрепление бактерий.
Дефенсинс
Дефенсины представляют собой группу небольших высококатионных антимикробных пептидов, продуцируемых различными клетками млекопитающих. Их можно разделить на три группы в зависимости от их молекулярной структуры, а именно α, β и θ. Первые два обнаружены в клетках человека, включая макрофаги, нейтрофилы и эпителиальные клетки, выстилающие бронхиальное дерево, желудочно-кишечный тракт и почечный тракт.В мочевыводящих путях они образуются после контакта с патогенами и обладают способностью убивать бактерии, грибки и некоторые инкапсулированные вирусы. Дефенсины прикрепляются к анионным фосфолипидам на клеточной стенке организмов и нарушают их функцию клеточных мембран, увеличивая проницаемость клеток и вызывая гибель клеток. Также было показано, что они усиливают врожденные реакции, вызывая дегрануляцию тучных клеток и способствуя хемотаксису нейтрофилов за счет увеличения продукции IL8. 11
P Статус секретора группы крови
P Фимбриальное прикрепление бактерий к уротелию происходит через рецепторы гликолипидных эпителиальных клеток.Эти рецепторы являются членами группы крови P, включая несколько антигенов, P 1 , P и Pk. Было показано, что P-фимбрии гемагглютинируют эритроциты людей, которые имеют антиген группы крови P 1 . Если этот антиген секретируется (секреторный положительный), снижается частота прикрепления бактерий и, следовательно, ИМП. 12
Кроме того, моча содержит микробицидные белки, включая фермент лизоцим, который специфически расщепляет клеточную стенку грамположительных бактерий.Другой специализированной защитой от бактериальной инвазии и колонизации является бактериальная интернализация эпителиальными клетками, быстрый апоптозный процесс, включающий фрагментацию ДНК и активацию протеолитических ферментов и отторжение клеток, тем самым удаляя бактерии из почечного тракта.
ИММУННЫЙ ОТВЕТ ХОЗЯИНА
Как только бактерии вступают в контакт с уротелиальными клетками, запускается врожденный иммунный ответ. Это происходит за счет взаимодействия между бактериальными факторами, например фимбриями и ЛПС, и эпителиальными рецепторами, что приводит к активации множества сигнальных путей.
LPS является неотъемлемым компонентом клеточной стенки грамотрицательных бактерий и мощным активатором различных типов клеток. ЛПС стимулирует клетки врожденного иммунитета через взаимодействие с толл-подобным рецептором 4 (TLR4). TLR представляют собой недавно описанное семейство рецепторов распознавания образов, экспрессируемых на лейкоцитах и эпителиальных клетках, которые распознают сохранившиеся молекулярные мотивы, обнаруженные на патогенах. В настоящее время идентифицировано 10 TLR млекопитающих (TLR1-TLR10), которые взаимодействуют с различными компонентами инвазивных организмов.Например, было показано, что TLR2 отвечает компонентами грамположительных бактерий, тогда как TLR4 реагирует на грамотрицательные бактерии.
Чтобы LPS активировал клетки через TLR4, требуется ряд дополнительных молекул. К ним относятся LPS-связывающий белок (LBP), CD14 и MD2, и считается, что эти молекулы образуют рецепторный комплекс на поверхности клетки. Это сигнализирует об активации внутриклеточного сигнального пути, ведущего к высвобождению цитокинов, таких как факторы некроза опухоли (TNF), интерферон γ, IL8 и IL1.Важность TLR4 показана на линии мышей, которая имеет дефектную передачу сигналов LPS, вызванную мутациями в гене TLR4. Этот штамм не может эффективно удалять бактерии из мочевого пузыря после заражения UPEC. 13 Он также активирует каскад свертывания и каскад комплемента, инициируя иммунный ответ.
Активация дополнения
Активация каскада комплемента происходит тремя разными путями, а именно классическим, альтернативным и связывающим маннан лектином (пути MBL), каждый из которых может быть активирован вторгающимися организмами.Активация любым из этих путей приводит к образованию конвертаз C3 и C5 и продукции биологически активных компонентов, включая анафилатоксины, опсонины и комплекс мембранной атаки (MAC). Анафилатоксины C3a и C5a действуют путем привлечения и активации нейтрофилов и макрофагов, в то время как опсонины C3b, C4b усиливают фагоцитоз бактерий. МАК связывается с липидным бислоем бактериальных клеток, создавая поры на поверхности клетки, через которые растворенные вещества могут диффундировать, что приводит к осмотическому лизису бактерии.Система комплемента также может усиливать адаптивный иммунный ответ. Например, было показано, что C3d увеличивает чувствительность иммунного ответа за счет опсонизации антигена и последующего взаимодействия с рецептором комплемента 2 (CR2) на иммунных клетках.
Адаптивная невосприимчивость
Несмотря на врожденный иммунный ответ, бактерии все еще могут сохраняться в мочевыводящих путях. Следовательно, возникает более специфический адаптивный иммунный ответ, который включает как гуморальные, так и клеточные ответы.Несмотря на то, что выработку антител в сыворотке обычно трудно обнаружить при ИМП, сообщалось о местном производстве антител из мочевого пузыря и уретры. 14 Было высказано предположение, что сенсибилизированные В-лимфоциты мигрируют в собственную пластинку из лимфатических сосудов и дифференцируются в секретирующие IgA клетки. 15 Роль этих секреторных IgA (sIgA) антител в ИМП изучена недостаточно. Однако было высказано предположение, что эти антитела ингибируют бактериальную колонизацию, снижая прилипание бактерий к слизистой оболочке. 16
БАКТЕРИАЛЬНАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ
Несмотря на многочисленные защитные механизмы организма хозяина и даже лечение антибиотиками, которые могут эффективно стерилизовать мочу, значительная часть пациентов в конечном итоге страдает рецидивом ИМП. Современные знания о патогенезе ИМП не могут объяснить рецидив инфекции, несмотря на многократное и долгое применение противомикробных препаратов. Считается, что UPEC колонизируют желудочно-кишечный тракт, откуда они мигрируют в периуретральную область и поднимаются вверх по мочевыводящим путям, вызывая инфекцию.Более того, женщины, страдающие рецидивирующими ИМП, имеют более высокий уровень колонизации влагалища UPEC. Однако нанесение мази с антибиотиком на периуретральную область не снижает риск ИМП. 17
Недавние исследования показывают, что уропатогены могут проникать в поверхностные эпителиальные клетки и реплицироваться, образуя большие очаги внутриклеточной E coli . Инвазия эпителиальных клеток мочевого пузыря запускает иммунный ответ хозяина и вызывает отшелушивание поверхностных клеток.Хозяин считает отшелушивание эффективным механизмом защиты. Однако до завершения этого процесса внутриклеточные бактерии повторно появляются из клеток-хозяев и вторгаются в нижележащие эпителиальные клетки (новый поверхностный слой) и, следовательно, сохраняются в мочевыводящих путях. Таким образом, UPEC может продолжать вторгаться в эпителий, создавая устойчивый, покоящийся бактериальный резервуар в слизистой оболочке мочевого пузыря, или вызывать рецидивирующие инфекции мочевого пузыря. Наличие таких резервуаров в мочевыводящих путях может помочь объяснить рецидивирующий характер ИМП. 18
На экспериментальной модели на мышах было показано, что бактерии используют иммунные ответы хозяина, такие как активация комплемента, в своих интересах при вторжении в клетки хозяина. Springall и др. обнаружили, что мыши с дефицитом гена C3 по сравнению с дикими мышами имели значительно более низкий уровень инфицирования при инокуляции UPEC в мочевой пузырь. Было показано, что опсонизация бактерий с помощью C3 способствует их вторжению в уротелиальные клетки, возможно, через взаимодействие с рецепторами поверхности эпителиальных клеток, однако их еще предстоит идентифицировать.Такие адаптации проливают свет на тот факт, что бактерии постоянно развиваются, чтобы поддерживать свою вирулентность. 19
КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
Считается, что у 10–20% женщин с ИМП наблюдаются рецидивы. Факторы риска включают как генетические, так и поведенческие факторы. Женщины с рецидивирующей инфекцией чаще имеют рецидивирующие ИМП у их родственниц первой степени родства. 20 Самым распространенным поведенческим фактором, связанным с рецидивирующими ИМП, является использование спермицидов в качестве средства контрацепции.
Европейские рекомендации по урологии рекомендуют лечить рецидив ИМП с помощью антибиотиков по двум различным схемам. Первый — это долгосрочная профилактика низкими дозами, а второй — самостоятельное лечение. Второй режим эффективно использовался в качестве посткоитальной профилактики для женщин, страдающих рецидивирующими ИМП, связанными с половым актом. Хотя во всем мире используется множество антибиотиков, наиболее распространенными из них являются котримоксазол, нитрофурантоин, ципрофлоксацин и цефалоспорины.
Клюквенный сок
Дополнительная терапия для этого состояния также популярна, хотя доказательства неоднородны.Чаще всего используются клюквенный сок и продукты. Кокрановский обзор использования клюквенного сока для профилактики ИМП предполагает, что в двух рандомизированных контрольных испытаниях хорошего качества есть некоторые доказательства того, что клюквенный сок может снизить количество симптоматических ИМП у женщин в течение 12-месячного периода. 21 Было показано, что клюква предотвращает прилипание бактерий (особенно E coli ) к уротелиальным клеткам мочевого пузыря. Клюква содержит два соединения, которые препятствуют прилипанию — фруктозу и полимерное соединение неизвестной природы.Хотя многие соки содержат фруктозу, только клюква и черника содержат полимерное соединение.
Пробиотики
Другой продукт, который все чаще используется, — это пробиотики или «полезные бактерии». Обычно используются или продаются лактобациллы. Первоначальные испытания оральных пробиотиков не дали убедительных результатов. Тем не менее, Reid et al. 22 показали снижение на 43% частоты ИМП у женщин с рецидивирующими ИМП в анамнезе при использовании перекиси водорода, продуцирующей 10 8-9 L acidophilus в продукте под названием Vivag , дважды в день. на шесть дней.Лактобациллы вводили в тампоне вагинально. Хотя эти результаты обнадеживают, все еще существует необходимость в продолжении исследований по повышению его эффективности и специфичности, прежде чем его можно будет принять в качестве жизнеспособного выбора для профилактики.
Добавка эстрогена
У женщин в постменопаузе было показано, что недостаток эстрогена делает влагалище более подверженным колонизации патогенными бактериями. Поэтому испытания местных добавок эстрогенов проводились по обе стороны Атлантики, но с неоднозначными результатами.Raz и др. изучали 93 женщины в постменопаузе с рецидивирующими ИМП в анамнезе в рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании местного интравагинального крема с эстриолом и оценивали пациентов ежемесячно в течение восьми месяцев. 23 Частота ИМП в группе, получавшей эстриол, была значительно снижена по сравнению с таковой в группе плацебо (0,5 по сравнению с 5,9 эпизодами на пациента в год, p <0,001). Лактобациллы отсутствовали во всех вагинальных культурах до лечения и вновь появились через месяц у 61% из 36 женщин, получавших эстриол, по сравнению ни с одной из 24 реципиентов плацебо (p <0.001). В более недавнем рандомизированном контрольном исследовании, проведенном Sobel 24 , результаты оказались не такими, как ожидалось. Данные, собранные в ходе исследования, показали, что эстриол, высвобождаемый из влагалищного пессария, действительно достиг повышенного созревания вагинальных эпителиальных клеток. Однако, в отличие от предыдущих исследований, эта форма введения эстрогена не смогла достичь своей функциональной цели, потому что pH оставался аномально высоким (pH составлял 5,3), а доминирующая микрофлора влагалища лактобактериями не была достигнута.
Несмотря на то, что эти новые методы лечения повышают наши ожидания, ни один из них не кажется достаточно убедительным для использования в клинических условиях для предотвращения рецидивов ИМП.
ПЕРСПЕКТИВЫ НА БУДУЩЕЕ
Несмотря на многие успехи в нашем понимании взаимодействия между патогенными бактериями и почечным трактом хозяина, многие аспекты патогенеза ИМП все еще плохо определены. Постоянно совершенствующиеся научные методы позволяют нам изучать это взаимодействие на молекулярном и клеточном уровне и, несомненно, дадут представление о механизмах, лежащих в основе этого распространенного заболевания. Кроме того, по мере того, как наше понимание улучшается, мы, возможно, сможем нацелить лечение для предотвращения инфекции, которое не зависит от обычных антибиотиков, с растущими проблемами устойчивости бактерий.Существует несколько областей, представляющих особый интерес.
Геномные и протеомные исследования хозяина и патогенов показывают многообещающие возможности для поиска новых стратегий изучения взаимодействий между хозяином и патогеном и разработки новых противомикробных агентов. Теперь у нас есть последовательности генома человека и бактерий, которые могут идентифицировать новые гены, участвующие в инфекции. Мы можем изучить уровень экспрессии большого количества генов во время заражения с помощью таких методов, как серийный анализ экспрессии генов (SAGE), «чипы» олигонуклеотидных микрочипов и микроматрицы ДНК.Микроматрицы используют данные первичных последовательностей для измерения уровней транскриптов и обнаружения полиморфизмов последовательностей для тысяч генов одновременно. Следовательно, молекулярные детали сложного взаимодействия между патогеном и хозяином могут быть изучены для идентификации связанных с вирулентностью микробных генов и стратегий защиты хозяина и, в частности, полиморфизма в этих ответах.
Вакцины
Из-за неопределенности в отношении важности адаптивного иммунного ответа в предотвращении ИМП роль вакцинации не ясна.Однако по мере того, как наше понимание молекулярных аспектов связывания бактерий расширилось, появилась возможность разработать вакцины, нацеленные на адаптивные ответы против определенных бактериальных белков и функций. Вырабатываемые антитела могут мешать функционированию основных факторов бактериальной вирулентности и могут препятствовать прикреплению бактерий к эпителию хозяина и вторжению в него. Одной из таких мишеней является адгезин наконечника Fim H фимбрий 1 типа. Внутрипузырная инокуляция обезьян Fim H защищала их от дальнейших экспериментальных ИМП. 25 Аналогичным образом, инокуляция адгезии P-фимбрий PapG (вакцина Pap DG), как было показано, защищает от рецидивирующих ИМП на модели обезьяны. 26 Возрастающее значение внутриклеточных бактерий в патогенезе ИМП предполагает, что блокирование интернализации может быть эффективным способом остановить рецидив ИМП.
Поскольку очевидно, что воспалительная реакция вызывает повреждение и рубцевание мочевыводящих путей (а также других пораженных тканей), ее изменение может уменьшить или предотвратить необратимое повреждение ткани, следовательно, снизить сопутствующую заболеваемость ИМП.Активация нейтрофилов и каскад комплемента и его рецепторы могут быть потенциальными терапевтическими мишенями.
ССЫЛКИ
- ↵
Harding GKM , Ronald AR. Лечение инфекций мочевыводящих путей: чему мы научились за последнее десятилетие. Международный журнал противомикробных агентов, 1994; 4: 83–8.
- ↵
Hooton TM , Scholes D, Hughes JP, et al. Проспективное исследование факторов риска симптоматической инфекции мочевыводящих путей у молодых женщин.N Engl J Med1996; 335: 468–74.
- ↵
Абрахам С.Н. , Шин Дж. С., Малавия Р. Фимбриированные Escherichia coli типа 1 — взаимодействия тучных клеток при цистите. J Infect Dis2001; 183: S51–5.
- ↵
Hull RA , Gill RE, Hsu P, et al. Конструирование и экспрессия рекомбинантных плазмид, кодирующих устойчивые к маннозе типа 1 или D пили из изолята Escherichia coli, инфицированного мочевыводящими путями.Infect Immun 1981; 33: 933–8.
- ↵
Plos K , Connell H, Jodal U. Кишечное носительство P-фимбриированной Escherichia coli и восприимчивость к инфекции мочевыводящих путей у маленьких детей. J Infect Dis1995; 171: 625–31.
- ↵
Roberts JA , Suarez GM, Kaack B, et al. Экспериментальный пиелонефрит у обезьяны. VII. Восходящий пиелонефрит при отсутствии пузырно-мочеточникового рефлюкса.J Urol1985; 133: 1068–75.
- ↵
Hedges SR , Agace WW, Svanborg C. Ответы эпителиальных цитокинов и сети цитокинов слизистой оболочки. Trends Microbiol, 1995; 3: 266–70.
- ↵
Голушко П. , Мозли С.Л., Труонг Л.Д., и др. Разработка экспериментальной модели хронического пиелонефрита с Escherichia coli O75: K5: H-несущие Dr fimbriae: мутация в области dra предотвратила тубулоинтерстициальный нефрит.Дж. Клин Инвест, 1997; 99: 1662–72.
- ↵
Russo TA , Carlino UB, Johnson JR. Идентификация ire A, нового гена вирулентности, регулируемого железом, во внекишечном патогенном изоляте Escherichia coli. Infect Immun2001; 69: 6209–16.
- ↵
Menestrina G , Pederzolli C, Dalla Serra M, et al. Повышение проницаемости, индуцированное гемолизином А Escherichia coli в макрофагах человека, связано с образованием ионных пор: характеристика патч-зажим.J Membr Biol 1996; 149: 113–21.
- ↵
Ганц Т . Дефенсины: антимикробные пептиды врожденного иммунитета. Nature Rev Immunol2003; 3: 710–20.
- ↵
Lomberg H , Hanson LA, Jacobsson B, et al. Корреляция группы крови P, пузырно-мочеточникового рефлюкса и прикрепления бактерий у пациентов с рецидивирующим пиелонефритом. N Engl J Med1983; 308: 1189–92.
- ↵
Hagberg L , Hull R, Hull S, и др. Разница в восприимчивости к грамотрицательной инфекции мочевыводящих путей у мышей C3H / HeJ и C3H / HeN. Infect Immun 1984; 46: 839–44.
- ↵
Курияма М . Исследование секреторного IgA в моче. (Я). Его локализация в мочевыводящих путях. (Авторский перевод). Nippon Hinyokika Gakkai Zasshi 1979; 70: 602–7.
- ↵
Underdown BJ , Schiff JM. Иммуноглобулин А: стратегическая защитная инициатива на поверхности слизистой оболочки.Анну Рев Иммунол 1986; 4: 389–417.
- ↵
Сванборг C , Свеннерхольм AM. Секреторные иммуноглобулины A и G антитела предотвращают адгезию кишечной палочки к эпителиальным клеткам мочевыводящих путей человека. Infect Immun, 1978; 22: 790–7.
- ↵
Cass AS , Ирландия GW, Aal C. Антибактериальное промывание промежности для профилактики рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей. Урология 1985; 25: 492–4.
- ↵
Mulvey MA , Joel SD, Hultgren SJ. Создание постоянного резервуара Escherichia coli во время острой фазы инфекции мочевого пузыря. Infect Immun2001; 69: 4572–9.
- ↵
Springall T , Sheerin NS, Abe K, et al. Эпителиальная секреция C3 способствует колонизации верхних мочевых путей кишечной палочкой. Нат Мед, 2001; 7: 803–8.
- ↵
Fenell RS , Wilson SG, Garin EH, et al. Бактериурия в семьях девочек с рецидивирующей бактериурией. Clin Paediatr 1977; 16: 1132.
- ↵
Jepson RG , Mihaljevic L, Craig J. Cranberries для профилактики инфекций мочевыводящих путей. Кокрановская библиотека. Выпуск 2. Чичестер: Wiley, 2004.
- ↵
Рид Г. , Брюс А.В. Урогенитальные инфекции у женщин: могут ли помочь пробиотики? Postgrad Med J2003; 79: 428–32.
- ↵
Raz R , Stamm WE. Контролируемое испытание интравагинального эстриола у женщин в постменопаузе с рецидивирующими инфекциями мочевыводящих путей. N Engl J Med1993; 329: 753–6.
- ↵
Sobel JD . Заместительная терапия эстрогенами для предотвращения рецидивов инфекции мочевыводящих путей у женщин в постменопаузе. Текущие отчеты об инфекционных заболеваниях, 2003; 5: 479–80.
- ↵
Langermann S , Mollby R, Burlein JE.Вакцинация адгезином FimH защищает яванских макак от колонизации и заражения уропатогенными бактериями Escherichia coli. J Infect Dis2000; 181: 774–8.
- ↵
Roberts JA , Kaack MB, Baskin G, et al. Ответы антител и защита от пиелонефрита после вакцинации очищенным белком PapDG Escherichia coli. J Urol2004; 171: 1682–5.
Посев мочи | Лабораторные тесты онлайн
Источники, использованные в текущем обзоре
Обзор2019 выполнен Николь Амистани, BS CLS, MT (ASCP) и редакционным советом Lab Tests Online.
(30 июля 2018 г.) Обзор посева мочи. Kaiser Permanente. Доступно на сайте wa.kaiserpermanente.org. По состоянию на май 2019 г.
Brusch, J. (Обновлено 19 июля 2018 г.). Инфекция мочевыводящих путей (ИМП) и цистит (инфекция мочевого пузыря) у женщин. Справочник по Medscape [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/233101-overview. По состоянию на май 2019 г.
(30 января 2019 г.) Клиника Мэйо. Инфекции мочевыводящих путей, причины. Доступно в Интернете по адресу http: // www.mayoclinic.org/diseases-conditions/urinary-tract-infection/basics/causes/con-20037892. По состоянию на январь 2015 г.
Генри «Клиническая диагностика и лечение с помощью лабораторных методов». Глава. 28, Основное исследование мочи. 22-е изд. Макферсон Р., Пинкус М., ред. Филадельфия, Пенсильвания: Saunders Elsevier: 2011.
Учебник Тиц по клинической химии и молекулярной диагностике. Клинические синдромы, инфекции мочевыводящих путей. Надер Рифаи. 6-е издание, Elsevier Health Sciences; 2017.
Источники, использованные в предыдущих обзорах
Томас, Клейтон Л., Редактор (1997). Циклопедический медицинский словарь Табера. Компания F.A. Davis, Филадельфия, Пенсильвания [18-е издание].
Пагана, Кэтлин Д. и Пагана, Тимоти Дж. (2001). Справочник Мосби по диагностике и лабораторным испытаниям, 5-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури.
Пагана, Кэтлин Д. и Пагана, Тимоти Дж. (© 2007). Справочник Мосби по диагностике и лабораторным испытаниям, 8-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. С. 981-983.
Ву, А. (2006). Клиническое руководство по лабораторным исследованиям Титца, четвертое издание.Сондерс Эльзевир, Сент-Луис, Миссури. С. 1621-1622.
Томас, Клейтон Л., редактор (1997). Циклопедический медицинский словарь Табера. Компания F.A. Davis, Филадельфия, Пенсильвания [18-е издание]. PP 2037-2038.
Forbes, B. et. al. (© 2007). Диагностическая микробиология Бейли и Скотта, двенадцатое издание: Mosby Elsevier Press, Сент-Луис, Миссури. С. 842-855.
(август 2007 г.). Ваша мочевыделительная система и как она работает. Национальный информационный центр по почечным и урологическим заболеваниям [он-лайн информация].Доступно в Интернете по адресу http://kidney.niddk.nih.gov/kudiseases/pubs/yoururinary/. По состоянию на март 2009 г.
(2008). Существующие рекомендации по скринингу на бактериурию поддерживаются. Medscape от Reuters Информация о здоровье [онлайн-информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.medscape.com/viewarticle/576888. По состоянию на март 2009 г.
Стэнли Хеллерштейн, С. (17 сентября 2008 г.). Инфекция мочевыводящих путей. EMedicine [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/969643-overview.По состоянию на март 2009 г.
(ноябрь 2005 г., с изменениями). Подход к почечному пациенту. Пособие Merck для специалистов здравоохранения [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.merck.com/mmpe/sec17/ch326/ch326b.html#sec17-ch326-ch326b-21. По состоянию на март 2009 г.
Барклай, Л. и Мурата, П. (17 мая 2007 г.). Чистка промежности / гениталий во время сбора мочи может минимизировать заражение. Медицинские новости Medscape [On-line CME]. Доступно в Интернете по адресу http://www.medscape.com/viewarticle/556640.По состоянию на март 2009 г.
Маккартер, Ю.С., Э.М. Бурд, Г.С. Холл, М. Зервос. 2009. Cumitech 2C, Лабораторная диагностика инфекций мочевыводящих путей . Координирующее изд. S.E. Острый. ASM Press, Вашингтон, округ Колумбия.
Kasper DL, Braunwald E, Fauci AS, Hauser SL, Longo DL, Jameson JL eds (2005). Принципы внутренней медицины Харрисона . 16-е издание, McGraw Hill, стр. 1715 и 1718.
Медицинская энциклопедия MedlinePlus. Посев мочи катетеризованный. Доступно в Интернете по адресу http: // www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003752.htm. По состоянию на апрель 2010 г.
Пагана, К. Д. и Пагана, Т. Дж. (© 2011). Справочник Мосби по диагностическим и лабораторным испытаниям, 10-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. С. 1017-1019.
(24 мая 2012 г.). Инфекции мочевыводящих путей у взрослых. Национальный информационный центр по почечным и урологическим заболеваниям, NIDDK. [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://kidney.niddk.nih.gov/KUDiseases/pubs/utiadult/index.aspx. По состоянию на октябрь 2012 г.
(© 1995-2012). Бактериальная культура, аэробика, моча. Клиника Мэйо Медицинские лаборатории Мэйо [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Overview/8105. По состоянию на октябрь 2012 г.
Johnson, J. et. al. (4 декабря 2011 г.). Уменьшает ли посев мочи при инфекциях мочевыводящих путей повторные посещения? Новости Medscape Today от J Am Board Fam Med . В 24 (6): 647-655. [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http: //www.medscape.com / viewarticle / 753802. По состоянию на октябрь 2012 г.
Brusch, J. (Обновлено 1 февраля 2012 г.). Цистит у женщин. Справочник по Medscape [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/233101-overview. По состоянию на октябрь 2012 г.
Грането, Дж. И Бектел, К. (8 ноября 2011 г.). Неотложное лечение педиатрических пациентов с лихорадкой. Справочник по Medscape [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/801598-overview#a1. По состоянию на октябрь 2012 г.
(24 мая 2012 г.). Инфекции мочевыводящих путей у взрослых. Национальный информационный центр по почечным и урологическим заболеваниям, NIDDK. [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://kidney.niddk.nih.gov/KUDiseases/pubs/utiadult/index.aspx. По состоянию на декабрь 2015 г.
(© 1995-2015). Бактериальная культура, аэробика, моча. Клиника Мэйо Медицинские лаборатории Мэйо [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Overview/8105. По состоянию на декабрь 2015 г.
Brusch, J. (Обновлено 19 августа 2015 г.). Цистит у женщин. Справочник по Medscape [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/233101-overview. По состоянию на декабрь 2015 г.
(23 июля 2015 г.) Клиника Мэйо. Инфекции мочевыводящих путей, причины. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/urinary-tract-infection/basics/causes/con-20037892. По состоянию на январь 2015 г.
Внутриэпителиальные нейтрофилы при инфекциях молочной железы, мочевого пузыря и желчного пузыря | Ветеринарные исследования
Kolaczkowska E, Kubes P (2013) Рекрутинг и функция нейтрофилов при здоровье и воспалении. Nat Rev Immunol 13: 159–175
CAS Статья Google Scholar
Greenlee-Wacker MC (2016) Удаление апоптозных нейтрофилов и разрешение воспаления. Immunol Rev 273: 357–370
CAS Статья Google Scholar
de Oliveira S, Rosowski EE, Huttenlocher A (2016) Миграция нейтрофилов при инфекции и заживлении ран: движение вперед в обратном направлении.Nat Rev Immunol 16: 378–391
Статья Google Scholar
Нуршар С., Реншоу С.А., Имхоф Б.А. (2016) Обратная миграция нейтрофилов: где, когда, как и почему? Тенденции Immunol 37: 273–286
CAS Статья Google Scholar
Fox S, Leitch AE, Duffin R, Haslett C, Rossi AG (2010) Апоптоз нейтрофилов: значение для врожденного иммунного ответа и воспалительного заболевания.J Innate Immun 2: 216–227
CAS Статья Google Scholar
Soehnlein O, Lindbom L (2010) Партнерство фагоцитов во время возникновения и разрешения воспаления. Nat Rev Immunol 10: 427–439
CAS Статья Google Scholar
Elazar S, Gonen E, Livneh-Kol A, Rosenshine I, Shpigel NY (2010) Существенная роль нейтрофилов, но не альвеолярных макрофагов молочной железы в мышиной модели острого мастита Escherichia coli .Vet Res 41:53
Статья Google Scholar
Gonen E, Vallon-Eberhard A, Elazar S, Harmelin A, Brenner O, Rosenshine I, Jung S, Shpigel NY (2007) Толл-подобный рецептор 4 необходим для ограничения вторжения Escherichia coli P4 в эпителиальные клетки молочных желез на мышиной модели острого мастита. Cell Microbiol 9: 2826–2838
CAS Статья Google Scholar
Jones HR, Robb CT, Perretti M, Rossi AG (2016) Роль нейтрофилов в разрешении воспаления. Семин Иммунол 28: 137–145
CAS Статья Google Scholar
Бразилия JC, Parkos CA (2016) Патобиология нейтрофил-эпителиальных взаимодействий. Immunol Rev 273: 94–111
CAS Статья Google Scholar
Hall CHT, Campbell EL, Colgan SP (2017) Нейтрофилы как компоненты гомеостаза слизистой оболочки.Cell Mol Gastroenterol Hepatol 4: 329–337
Статья Google Scholar
Neudecker V, Brodsky KS, Clambey ET, Schmidt EP, Packard TA, Davenport B, Standiford TJ, Weng T, Fletcher AA, Barthel L, Masterson JC, Furuta GT, Cai C, Blackburn MR, Ginde AA , Graner MW, Janssen WJ, Zemans RL, Evans CM, Burnham EL, Homann D, Moss M, Kreth S, Zacharowski K, Henson PM, Eltzschig HK (2017) Перенос нейтрофилов miR — 223 в эпителиальные клетки легких смягчает острое повреждение легких у мышей.Sci Transl Med 9: eaah5360
Статья Google Scholar
Кэмпбелл Эрик Л., Брюнинкс Уолтер Дж., Келли Калеб Дж., Гловер Луиза Е., МакНэми Эоин Н., Бауэрс Бриттел Е., Бейлесс Аманда Дж., Скалли М., Саиди Бежан Дж., Голден-Мейсон Л., Эрентраут Стефан Ф., Curtis Valerie F, Burgess A, Garvey John F, Sorensen A, Nemenoff R, Jedlicka P, Taylor Cormac T, Kominsky Douglas J, Colgan Sean P (2017) Трансмиграция нейтрофилов формирует микросреду слизистой оболочки за счет локального истощения кислорода, чтобы влиять на разрешение воспаления.Иммунитет 40: 66–77
Статья Google Scholar
Mintz M, Mintz D, Ezra-Elia R, Shpigel NY (2013) Передача сигналов Pam3CSK4 / TLR2 вызывает рекрутирование нейтрофилов и ограничивает инвазию Escherichia coli P4 в эпителиальные клетки молочной железы на мышиной модели мастита. Vet Immunol Immunopathol 152: 168–175
CAS Статья Google Scholar
Андерсон GG, Палермо JJ, Шиллинг JD, Roth R, Heuser J, Hultgren SJ (2003) Внутриклеточные бактериальные биопленочные стручки при инфекциях мочевыводящих путей. Наука 301: 105–107
CAS Статья Google Scholar
Rosen DA, Hooton TM, Stamm WE, Humphrey PA, Hultgren SJ (2007) Обнаружение внутриклеточных бактериальных сообществ при инфекции мочевыводящих путей человека. PLoS Med 4: e329
Артикул Google Scholar
Gonzalez-Escobedo G, Gunn JS (2013) Эпителий желчного пузыря как ниша для хронического носительства сальмонелл. Infect Immun 81: 2920–2930
CAS Статья Google Scholar
Menendez A, Arena ET, Guttman JA, Thorson L, Vallance BA, Vogl W., Finlay BB (2009) Сальмонеллезная инфекция эпителиальных клеток желчного пузыря вызывает локальное воспаление и повреждение в модели острого брюшного тифа. J Infect Dis 200: 1703–1713
Статья Google Scholar
Schlosser-Silverman E, Elgrably-Weiss M, Rosenshine I, Kohen R, Altuvia S (2000) Характеристика Escherichia coli повреждений ДНК, генерируемых в макрофагах J774. J Bacteriol 182: 5225–5230
CAS Статья Google Scholar
Mulvey MA, Schilling JD, Hultgren SJ (2001) Создание постоянного резервуара Escherichia coli во время острой фазы инфекции мочевого пузыря. Infect Immun 69: 4572–4579
CAS Статья Google Scholar
Hung CS, Dodson KW, Hultgren SJ (2009) Мышиная модель инфекции мочевыводящих путей. Национальный протокол 4: 1230–1243
CAS Статья Google Scholar
Grinberg N, Elazar S, Rosenshine I, Shpigel NY (2008) Бета-гидроксибутират отменяет образование внеклеточных ловушек бычьих нейтрофилов и бактерицидную активность против патогенных Escherichia coli молочной железы. Infect Immun 76: 2802–2807
CAS Статья Google Scholar
Overholtzer M, Mailleux AA, Mouneimne G, Normand G, Schnitt SJ, King RW, Cibas ES, Brugge JS (2007) Неапоптотический процесс гибели клеток, энтоз, который происходит в результате инвазии клетки в клетку. Ячейка 131: 966–979
CAS Статья Google Scholar
Караджи Н., Саттентау QJ (2017) Эффероцитоз инфицированных патогенами клеток. Фронт Иммунол 8: 1863
Артикул Google Scholar
Monks J, Smith-Steinhart C, Kruk ER, Fadok VA, Henson PM (2008) Эпителиальные клетки удаляют апоптотические эпителиальные клетки во время пост-лактационной инволюции молочной железы мыши. Биол Репрод 78: 586–594
CAS Статья Google Scholar
Monks J, Rosner D, Geske FJ, Lehman L, Hanson L, Neville MC, Fadok VA (2005) Эпителиальные клетки как фагоциты: апоптотические эпителиальные клетки поглощаются альвеолярными эпителиальными клетками молочной железы и подавляют высвобождение медиатора воспаления.Разница в клеточной смерти 12: 107–114
CAS Статья Google Scholar
Lee Chang S, Penberthy Kristen K, Wheeler Karen M, Juncadella Ignacio J, Vandenabeele P, Lysiak Jeffrey J, Ravichandran Kodi S (2016) Повышение клиренса апоптотических клеток эпителиальными клетками толстой кишки снижает воспаление в естественных условиях. Иммунитет 44: 807–820
Статья Google Scholar
Salvermoser M, Pick R, Weckbach LT, Zehrer A, Löhr P, Drechsler M, Sperandio M, Soehnlein O, Walzog B (2018) Миозин 1f особенно необходим для миграции нейтрофилов в трехмерной среде во время острого воспаления. Кровь 131: 1887–1898
CAS Статья Google Scholar
Salvermoser M, Begandt D, Alon R, Walzog B (2018) Ядерная деформация во время миграции нейтрофилов в местах воспаления. Фронт Иммунол 9: 2680
Артикул Google Scholar
Gonen E, Nedvetzki S, Naor D, Shpigel NY (2008) CD44 высоко экспрессируется на нейтрофилах молока при мастите крупного рогатого скота и играет роль в их адгезии к матриксу и эпителию молочных желез. Vet Res 39:29
Статья Google Scholar
Brazil JC, Lee WY, Kolegraff KN, Nusrat A, Parkos CA, Louis NA (2010) Миграция нейтрофилов через эпителий кишечника: доказательства роли CD44 в регулировании отделения мигрирующих клеток от поверхности просвета.J Immunol 185: 7026–7036
CAS Статья Google Scholar
Johnson JD, Hess KL, Cook-Mills JM (2003) CD44, альфа (4) интегрин и фагоцитоз апоптотических лейкоцитов, опосредованный рецептором фукоидина. J Leukoc Biol 74: 810–820
CAS Статья Google Scholar
Manohar R, Li Y, Fohrer H, Guzik L, Stolz DB, Chandran UR, LaFramboise WA, Lagasse E (2015) Идентификация стволовых клеток-кандидатов в желчном пузыре человека.Stem Cell Res 14: 258–269
CAS Статья Google Scholar
Rouschop KMA, Sylva M, Teske GJD, Hoedemaeker I, Pals ST, Weening JJ, van der Poll T, Florquin S (2006) Уротелиальный CD44 способствует инфицированию мочевыводящих путей Escherichia coli мыши. J Immunol 177: 7225–7232
CAS Статья Google Scholar
Jaeger A, Bardehle D, Oster M, Gunther J, Murani E, Ponsuksili S, Wimmers K, Kemper N (2015) Профилирование экспрессии генов эпителиальных клеток молочной железы свиней после заражения Escherichia coli и Staphylococcus aureus in vitro.Vet Res 46:50
Статья Google Scholar
Auth MK, Keitzer RA, Scholz M, Blaheta RA, Hottenrott EC, Herrmann G, Encke A, Markus BH (1993) Создание и иммунологическая характеристика культивированных эпителиальных клеток желчного пузыря человека. Гепатология 18: 546–555
CAS Статья Google Scholar
Agace WW, Patarroyo M, Svensson M, Carlemalm E, Svanborg C (1995) Escherichia coli индуцирует трансуроэпителиальную миграцию нейтрофилов посредством механизма межклеточной адгезии, зависимого от молекулы-1.Infect Immun 63: 4054–4062
CAS PubMed PubMed Central Google Scholar
Robino L, Scavone P, Araujo L, Algorta G, Zunino P, Pirez MC, Vignoli R (2014) Внутриклеточные бактерии в патогенезе инфекции мочевыводящих путей Escherichia coli у детей. Clin Infect Dis 59: e158 – e164
CAS Статья Google Scholar
Кин О.М. (2019) Обзор симпозиума: интрамаммарные инфекции — основные патогены и сложность, связанная с штаммами.J Dairy Sci 102: 4713–4726
CAS Статья Google Scholar
Lippolis JD, Holman DB, Brunelle BW, Thacker TC, Bearson BL, Reinhardt TA, Sacco RE, Casey TA (2018) Геномный и транскриптомный анализ штаммов Escherichia coli , связанных со стойким и временным маститом крупного рогатого скота и роль колановой кислоты. Infect Immun 86: e00566 – e00617
CAS PubMed Google Scholar
Espinoza JA, Bizama C, García P, Ferreccio C, Javle M, Miquel JF, Koshiol J, Roa JC (2016) Воспалительное начало рака желчного пузыря. Biochim Biophys Acta 1865: 245–254
CAS PubMed PubMed Central Google Scholar
Зависящий от мочи уротелиальный органоид человека представляет собой потенциальную альтернативу моделям инфекции на грызунах.
Фоксман Б. Эпидемиология инфекций мочевыводящих путей: заболеваемость, заболеваемость и экономические затраты. Болезнь в месяц: DM 49 , 53–70, https://doi.org/10.1067/mda.2003.7 (2003).
Артикул PubMed Google Scholar
Фоксман Б. Эпидемиология инфекций мочевыводящих путей. Природные обзоры. Урология 7 , 653–660, https://doi.org/10.1038/nrurol.2010.190 (2010).
Артикул PubMed Google Scholar
ВОЗ. Устойчивость к противомикробным препаратам: глобальный отчет по эпиднадзору 2014 г. (2014 г.).
Руссо, Т.А., Стэплтон, А., Вендерот, С., Хутон, Т.М. и Стамм, У.Э. Анализ полиморфизма длины фрагментов хромосомной рестрикции штаммов Escherichia coli, вызывающих рецидивирующие инфекции мочевыводящих путей у молодых женщин. Журнал инфекционных болезней 172 , 440–445 (1995).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Laupland, K. B., Ross, T., Pitout, J. D., Church, D. L., Gregson, D. B. Инфекции мочевыводящих путей, возникающие в сообществе: оценка населения. Инфекция 35 , 150–153, https://doi.org/10.1007/s15010-007-6180-2 (2007).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Махадева, А., Танасеску, Р. и Гран, Б. Инфекции мочевыводящих путей при рассеянном склерозе: недооценка и недостаточное лечение? Клинический аудит в большой университетской больнице. Американский журнал клинической и экспериментальной иммунологии 3 , 57–67 (2014).
PubMed PubMed Central Google Scholar
Buljevac, D. Проспективное исследование связи между инфекциями и обострениями рассеянного склероза. Мозг: журнал неврологии 125 , 952 (2002).
CAS Статья Google Scholar
Паннек, Дж. Лечение инфекции мочевыводящих путей у лиц с травмой спинного мозга: руководящие принципы, доказательства и клиническая практика: анкетный опрос и обзор литературы. Журнал медицины спинного мозга 34 , 11–15, https://doi.org/10.1179/107
0X128862610(2011).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Гиссинг М. Инфекция мочевыводящих путей при трансплантации почек. Арабский журнал урологии 10 , 162–168, https://doi.org/10.1016/j.aju.2012.01.005 (2012).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Хутон, Т. М. и др. . Диагностика, профилактика и лечение катетер-ассоциированной инфекции мочевыводящих путей у взрослых: Международные клинические практические рекомендации 2009 г. Американского общества инфекционистов. Клинические инфекционные болезни 50 , 625–663, https: // doi.org / 10.1086 / 650482 (2010).
Артикул PubMed Google Scholar
Коттер, М., Донлон, С., Рош, Ф., Бирн, Х. и Фитцпатрик, Ф. Инфекция, связанная со здравоохранением, в ирландских учреждениях длительного ухода: результаты Первого национального исследования распространенности. Журнал больничной инфекции 80 , 212–216, https://doi.org/10.1016/j.jhin.2011.12.010 (2012).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Корреале, Дж., Фиол, М. и Гилмор, У. Риск рецидивов рассеянного склероза во время системных инфекций. Неврология 67 , 652–659, https://doi.org/10.1212/01.wnl.0000233834.09743.3b (2006).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Солиман, Ю., Мейер, Р. и Баум, Н. Падают у пожилых людей вторично из-за мочевых симптомов. Обзоров в урологии 18 , 28–32 (2016).
PubMed PubMed Central Google Scholar
Лоренц, Э. К. и Косио, Ф. Г. Влияние инфекций мочевыводящих путей на реципиентов почечного трансплантата. Международная почка 78 , 719–721, https://doi.org/10.1038/ki.2010.219 (2010).
Артикул PubMed Google Scholar
Персик, Б. К., Гарван, Г. Дж., Гарван, К.С. и Чимиотти, Дж. П. Факторы риска развития уросепсиса у пожилых людей: систематический обзор. Геронтология и гериатрическая медицина 2 , 2333721416638980, https://doi.org/10.1177/2333721416638980 (2016).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Шив, Л. А., Хендлер, А., Хершоу, Р., Перски, В. и Дэвис, Ф. Инфекция мочевыводящих путей во время беременности: ее связь с материнской заболеваемостью и перинатальным исходом. Американский журнал общественного здравоохранения 84 , 405–410 (1994).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Розетт, Дж. Д. Л. и др. . Профилирование экспрессии кератина переходного эпителия при синдроме болезненного мочевого пузыря / интерстициальном цистите. Американский журнал клинической патологии 125 , 105–110, https://doi.org/10.1309/w342bwmdmddbctvh (2006).
Артикул PubMed Google Scholar
Ханделвал П., Абрахам С. Н. и Аподака Г. Клеточная биология и физиология уроэпителия. Am J Physiol-Renal 297 , F1477 – F1501, https://doi.org/10.1152/ajprenal.00327.2009 (2009).
CAS Статья Google Scholar
Чен, Ю. Р. и др. . Rab27b связан с веретенообразными пузырьками и может участвовать в нацеливании уроплакинов на апикальные мембраны уротелия. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 100 , 14012–14017, https://doi.org/10.1073/pnas.2436350100 (2003).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Wu, X. R., Kong, X. P., Pellicer, A., Kreibich, G. & Sun, T. T. Уроплакины в уротелиальной биологии, функциях и заболеваниях. Международная почка 75 , 1153–1165, https: // doi.org / 10.1038 / ki.2009.73 (2009).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Бейкер, С.С., Шабир, С. и Саутгейт, Дж. Биомиметические модели уротелиальной ткани для in vitro оценки физиологии барьера и эффективности лекарств для мочевого пузыря. Молекулярная фармацевтика 11 , 1964–1970, https://doi.org/10.1021/mp500065m (2014).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Cervigni, M. Интерстициальный цистит / синдром боли в мочевом пузыре и заместительная терапия гликозаминогликанами. Трансляционная андрология и урология 4 , 638–642, https://doi.org/10.3978/j.issn.2223-4683.2015.11.04 (2015).
PubMed PubMed Central Google Scholar
Янссен, Д. А. У. и др. . Распределение и функция хондроитинсульфата и других сульфатированных гликозаминогликанов в мочевом пузыре человека и их вклад в защитный барьер мочевого пузыря. Журнал урологии 189 , 336–342, https://doi.org/10.1016/j.juro.2012.09.022 (2013).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Rübben, H., Friedrichs, R., Stuhlsatz, H. W., Cosma, S. & Lutzeyer, W. Количественный анализ гликозаминогликанов в уротелии и стенке мочевого пузыря теленка. Урология 22 , 655–657, https://doi.org/10.1016/0090-4295(83)
Артикул PubMed Google Scholar
Ханстад, Д. А. и Джастис, С. С. Внутриклеточный образ жизни и стратегии уклонения от иммунитета уропатогенной кишечной палочки. Ежегодный обзор микробиологии 64 , 203–221, https://doi.org/10.1146/annurev.micro.112408.134258 (2010).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Тиан, W. и др. . Полезность экспрессии уроплакина II как маркера уротелиальной карциномы. Патология человека 46 , 58–64, https://doi.org/10.1016/j.humpath.2014.09.007 (2015).
Артикул PubMed Google Scholar
Craig, W. Актуальность моделей на животных для клинического лечения. евро. J. Clin. Microbiol. Заразить. Дис. 12 , S55 – S57, https://doi.org/10.1007/BF02389879 (1993).
Артикул PubMed Google Scholar
van der Worp, H. B. et al. . Могут ли модели болезней на животных достоверно использоваться в исследованиях на людях? PLoS Med 7 , e1000245, https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1000245 (2010).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Perel, P. et al. . Сравнение эффектов лечения в экспериментах на животных и клинических испытаниях: систематический обзор. Bmj 334 , 197, https://doi.org/10.1136/bmj.39048.407928.BE (2007).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Bhogal, N. & Combes, R. Актуальность генетически измененных мышиных моделей болезней человека. Альтернативы лабораторным животным: ATLA 34 , 429–454 (2006).
CAS PubMed Google Scholar
Лин, Дж. Х. Применение и ограничения генетически модифицированных моделей мышей в открытии и разработке лекарств. Curr Drug Metab 9 , 419–438 (2008).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Морденти, Дж. Прогнозирование периода полураспада цефалоспоринов и монобактамных антибиотиков у людей на основе данных, собранных на лабораторных животных. Противомикробные препараты и химиотерапия 27 , 887–891 (1985).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Wu, X. R., Manabe, M., Yu, J. & Sun, T. T. Крупномасштабная очистка и иммунолокализация бычьих уроплакинов I, II и III. Молекулярные маркеры дифференцировки уротелия. Журнал биологической химии 265 , 19170–19179 (1990).
CAS PubMed Google Scholar
Vaidyanathan, S. et al. . Исследование иммуноокрашивания цитокератина 20 в уротелии невропатического мочевого пузыря пациентов с травмой спинного мозга. BMC urology 2 , 7 (2002).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Smith, N. J. et al. . Ответы толл-подобных рецепторов нормальных уротелиальных клеток человека на бактериальный флагеллин и липополисахарид. Журнал урологии 186 , 1084–1092, https://doi.org/10.1016/j.juro.2011.04.112 (2011).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Ян, П. Дж., Фам, Дж., Чу, Дж. И Ху, Д. Л. Продолжительность мочеиспускания не зависит от размера тела. Proceedings of the National Academy of Sciences 111 , 11932–11937, https://doi.org/10.1073/pnas.1402289111 (2014).
ADS CAS Статья Google Scholar
Бубеник, Дж. и др. . Установленная клеточная линия карциномы мочевого пузыря (Т24), содержащая опухолеспецифический антиген. Int J Cancer 11 , 765–773 (1973).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Георгопулос, Н. Т. и др. . Иммортализация нормальных уротелиальных клеток человека ставит под угрозу способность к дифференцировке. Eur Urol 60 , 141–149, https: // doi.org / 10.1016 / j.eururo.2011.02.022 (2011).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Бауаут, С., Гуле, Ф. и Болдак, С. Новый и более быстрый метод получения дифференцированного трехмерного тканевого инженерного мочевого пузыря. Урологический журнал 194 , 834–841, https://doi.org/10.1016/j.juro.2015.03.001 (2015).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Ноулз, М. А., Файнсилвер, А., Харви, А. Е., Берри, Р. Дж. И Хикс, Р. М. Долгосрочная органная культура нормального мочевого пузыря человека. Онкологические исследования 43 , 374–385 (1983).
CAS PubMed Google Scholar
Feil, G. et al. . Иммунореактивность p63 в однослойных и In vitro стратифицированных культурах клеток уротелия человека по сравнению с нативной уротелиальной тканью. Европейская урология 53 , 1066–1073, https: // doi.org / 10.1016 / j.eururo.2007.10.026 (2008).
Артикул PubMed Google Scholar
Nagele, U. et al . In vitro исследования тканеинженерного многослойного уротелия, полученного из промываний мочевого пузыря. Eur Urol 54 , 1414–1422, https://doi.org/10.1016/j.eururo.2008.01.072 (2008).
Артикул PubMed Google Scholar
Sugasi, S. и др. . In vitro инженерия стратифицированного уротелия человека: анализ его морфологии и функции. Журнал урологии 164 , 951–957 (2000).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Кросс, У. Р., Эардли, И., Лиз, Х. Дж. И Саутгейт, Дж. Биомиметическая ткань из культивированных нормальных уротелиальных клеток человека: анализ физиологической функции. Американский журнал физиологии — физиология почек 289 , F459 – F468, https://doi.org/10.1152/ajprenal.00040.2005 (2005).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Андерсен Т.Э. и др. . Escherichia coli uropathogenesis in vitro : инвазия, ускользание клеток и вторичная инфекция проанализированы на модели инфицирования клеток мочевого пузыря человека. Infect Immun 80 , 1858–1867, https: // doi.org / 10.1128 / IAI.06075-11 (2012).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Андерссон, К. Э. Текущие и будущие препараты для лечения дисфункции мочевого пузыря, связанной с РС. Анналы физической и реабилитационной медицины 57 , 321–328, https://doi.org/10.1016/j.rehab.2014.05.009 (2014).
Артикул PubMed Google Scholar
Сайто М., Накамура И. и Миягава И. Авторадиографическая локализация мускариновых рецепторов в диабетическом мочевом пузыре крысы. Nihon Hinyokika Gakkai zasshi . Японский урологический журнал 88 , 858–867 (1997).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Wu, X. R. et al . Уроплакины млекопитающих. Группа высококонсервативных мембранных белков, связанных с дифференцировкой уротелия. Журнал биологической химии 269 , 13716–13724 (1994).
CAS PubMed Google Scholar
Лавель, Дж. П., Аподака, Г., Мейерс, С. А., Руис, В. Г. и Зейдель, М. Л. Нарушение барьера проницаемости мочевого пузыря морской свинки при неинфекционном цистите. Американский журнал физиологии — физиология почек 274 , F205 – F214 (1998).
CAS Статья Google Scholar
Либхольд М., Вендт М., Кауп Ф. Дж. И Дроммер У. [Световые и электронно-микроскопические исследования структуры нормального эпителия мочевого пузыря самок свиней]. Анатомия, гистология, эмбриология 24 , 47–52 (1995).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Andrews, P. M. Microplicae: характерные гребневидные складки плазмалеммы. Журнал клеточной биологии 68 , 420 (1976).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Wayt, J. & Bretscher, A. Cordon Bleu служит платформой в базальной области микроворсинок, где он регулирует длину микровилл посредством своих Wh3-доменов. Mol Biol Cell 25 , 2817–2827, https://doi.org/10.1091/mbc.E14-06-1131 (2014).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Derganc, J., Božič, B. & Romih, R. Формы дискообразных внутриклеточных полостей с небольшими относительными объемами. PloS one 6 , e26824, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0026824 (2011).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Хасрия, Р. и др. . Спектр бактериальной колонизации, связанной с уротелиальными клетками, от пациентов с хроническими симптомами нижних мочевыводящих путей. J Clin Microbiol , https://doi.org/10.1128/JCM.03314-12 (2013).
Horsley, H. et al. . Enterococcus faecalis разрушает и проникает в уротелий хозяина у пациентов с хронической инфекцией мочевыводящих путей. PloS one 8 , e83637, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0083637 (2013).
ADS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Гитон, П.С., Ханнан, Т. Дж., Форд, Б., Капарон, М. Г. и Халтгрен, С. J. Enterococcus faecalis преодолевает воспаление, опосредованное инородным телом, для установления инфекций мочевыводящих путей. Инфекция и иммунитет 81 , 329–339, https://doi.org/10.1128/IAI.00856-12 (2013).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Poulsen, L. L. et al. . Enterococcus и Streptococcus spp.связаны с хроническими инфекциями мочевыводящих путей и самолечением во Вьетнаме. BMC Infect Dis 12 , 320, https://doi.org/10.1186/1471-2334-12-320 (2012).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Мохамед, Дж. А. и Хуанг, Д. Б. Образование биопленок энтерококками. Журнал медицинской микробиологии 56 , 1581–1588, https://doi.org/10.1099/jmm.0.47331-0 (2007).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Фелмингем Д., Уилсон А. П., Кинтана А. И. и Грюнеберг Р. Н. Виды энтерококков при инфекции мочевыводящих путей. Клинические инфекционные болезни: официальное издание Американского общества инфекционистов. 15 , 295–301 (1992).
CAS Статья Google Scholar
Ханин, А. и др. . Скрининг in vivo активированных генов в Enterococcus faecalis во время инфекций насекомых и мышей и роста в моче. PloS one 5 , e11879, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011879 (2010).
ADS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Никол, К. А. и др. . Молекулярная эпидемиология изолятов мочевыводящих путей Enterococcus faecium, устойчивых к ванкомицину, из Северной Америки. Int J Antimicrob Agents 27 , 392–396, https://doi.org/10.1016/j.ijantimicag.2005.12.006 (2006).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Swaminathan, S. & Alangaden, G.J. Лечение устойчивых энтерококковых инфекций мочевыводящих путей. Текущие отчеты об инфекционных заболеваниях 12 , 455–464, https://doi.org/10.1007/s11908-010-0138-8 (2010).
Артикул PubMed Google Scholar
Бхадрираджу, К. и Чен, С. Разработка клеточной микросреды для улучшения клеточного тестирования лекарств. Открытие лекарств сегодня 7 , 612–620 (2002).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Найт, Э. и Пржиборски, С. Достижения в технологиях трехмерных клеточных культур, позволяющих создавать тканеподобные структуры in vitro . Анатомический журнал , https: // doi.org / 10.1111 / joa.12257 (2014).
Джерман, У. Д., Крефт, М. Э. и Вераник, П. Эпителиально-мезенхимальные взаимодействия в мочевом пузыре и тонком кишечнике и их применение в тканевой инженерии. Tissue Eng Часть B Ред. 21 , 521–530, https://doi.org/10.1089/ten.TEB.2014.0678 (2015).
Артикул PubMed Google Scholar
Максуд, М. И., Матин, М. М., Бахрами, А.Р. и Гасролдашт, М. М. Бессмертие клеточных линий: проблемы и преимущества создания. Международная клеточная биология 37 , 1038–1045, https://doi.org/10.1002/cbin.10137 (2013).
Артикул PubMed Google Scholar
Dalal, E. Умеренный стресс защищает самок мышей от бактериальной инфекции мочевого пузыря, вызывая уроэпителиальный отшелушивание. Инфекция и иммунитет 62 , 5505–5510 (1994).
CAS PubMed PubMed Central Google Scholar
Смит, Ю.К., Расмуссен, С.Б., Гранде, К.К., Конран, Р.М. и О’Брайен, А.Д. Гемолизин уропатогенной кишечной палочки вызывает обширное отделение уроэпителия и кровоизлияние в ткань мочевого пузыря в течение первых 24 часов после интрауретрального кровотечения. прививка мышей. Инфекция и иммунитет 76 , 2978–2990, https://doi.org/10.1128/Iai.00075-08 (2008).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Thumbikat, P. et al. . Индуцированная бактериями передача сигналов уроплакина опосредует ответ мочевого пузыря на инфекцию. Патогены PLoS 5 , e1000415, https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000415 (2009).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Hannan, T. J., Mysorekar, I.U., Hung, C. S., Isaacson-Schmid, M. L. & Hultgren, S.J. Ранние тяжелые воспалительные реакции на уропатогенные E. coli предрасполагают к хронической и рецидивирующей инфекции мочевыводящих путей. Патогены PLoS 6 , e1001042, https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1001042 (2010).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Розен Д. А., Хутон Т.М., Стамм У. Э., Хамфри П. А. и Халтгрен С. Дж. Обнаружение внутриклеточных бактериальных сообществ при инфекции мочевыводящих путей человека. PLoS Med 4 , e329, https://doi.org/10.1371/journal.pmed.0040329 (2007).
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Hertting, O. et al. . Витамин D индукция человеческого антимикробного пептида кателицидина в мочевом пузыре. PloS one 5 , e15580, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015580 (2010).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Кульман, И. Профилактическое применение антибиотиков в культуре клеток. Cytotechnology 19 , 95–105, https://doi.org/10.1007/BF00749764 (1995).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Баджпай, Р., Лесперанс, Дж., Ким, М. и Терских, А. В. Эффективное размножение отдельных клеток эмбриональных стволовых клеток человека, диссоциированных с помощью аккутазы. Молекулярное воспроизводство и развитие 75 , 818–827, https://doi.org/10.1002/mrd.20809 (2008).
CAS Статья PubMed Google Scholar
Шнайдер, К. А., Расбанд, В. С. и Элисейри, К. В. NIH Image to ImageJ: 25 лет анализа изображений. Нат. Мет 9 , 671–675 (2012).
CAS Статья Google Scholar
Bolte, S. & CordeliÈRes, F.P. Экскурсия по анализу субклеточной колокализации в световой микроскопии. Journal of Microscopy 224 , 213–232, https://doi.org/10.1111/j.1365-2818.2006.01706.x (2006).
MathSciNet CAS Статья PubMed Google Scholar
Почечные эпителиальные клетки, полученные из мочи человека, дают представление об альтернативных вариантах сплайсинга, специфичных для почек
Клинические особенности и геномные исследования двух семей с необъяснимой ТПН
В первой семье у 14-летнего подростка была обнаружена стадия хронической болезни почек. 4, которая прогрессировала до необъяснимой ТПН к 15 годам (Таблица 1).Родители были белыми европейцами и не кровными родственниками. В семейном анамнезе почечной недостаточности не было. Ультразвуковое исследование почек показало повышенную эхогенность и потерю кортико-медуллярной дифференцировки, а биопсия почек показала хронический интерстициальный фиброз и тубулярную атрофию, указывающие на нефронофтиз (Таблица 1).
Таблица 1 Клинические и молекулярные данные пациентовВо второй семье двое братьев и сестер имели врожденный фиброз печени и необъяснимую ТПН. Первому брату или сестре сделали комбинированную трансплантацию почки и печени в возрасте 15 лет (таблица 1).Биопсия почек выявила гломерулярный склероз и интерстициальный фиброз с признаками, указывающими на нефронофтиз (дополнительный рисунок S1). Второй брат достиг ТПН в возрасте 13 лет и получил трансплантацию почки с последующей трансплантацией печени 1 год спустя. Семья была белыми британцами, не кровными, у них был здоровый брат и сестра мужского пола (Таблица 1).
В семье 1 целевой захват экзона и секвенирование панели цилиопатии из 121 гена, как сообщалось ранее [8, 11], выявили вариант, который, по прогнозам, влияет на функцию в NPHP3 (NM_153240.3, c.3003del; p. (Phe1001Leufs * 61)) в сочетании с синонимом SNV (c.2154C> T; p.Phe718 =). Варианты присутствовали в сложном гетерозиготном состоянии, при этом вариант со сдвигом рамки считывания наследуется по материнской линии, а синонимичное изменение наследуется по отцовской линии (Таблица 2, Рис. 1).
Таблица 2 Анализ in silico вариантов NPHP3 Рис. 1Молекулярно-генетическое исследование и тканеспецифическая ОТ-ПЦР выявляет функциональный эффект синонимичного аллеля NPHP3 . a , b Диаграммы родословных (квадраты самцов, круги самок, пробанды отмечены стрелками) и хроматограммы последовательностей, показывающие двуаллельные варианты NPHP3 у пораженного пациента в a Семья 1 и b Семья 2. c Геномная карта и стратегия ОТ-ПЦР для обнаружения аномального сплайсинга экзона 15 NPHP3 с праймерами, указанными стрелкой. Экзоны пронумерованы как у Olbrich et al. [12]. d ОТ-ПЦР с использованием РНК, выделенной из hUREC дикого типа (WT), цельной крови WT и отцовского hUREC семейства 2. Обратите внимание, что отцовская РНК является сложной гетерозиготной для альтернативного сплайсинга экзона 15 NPHP3 (NM_153240.3: c.2154C> T; r.2154c> u). и Секвенирование по Сэнгеру подтверждает альтернативное сплайсинг экзона 15 NPHP3 в РНК цельной крови дикого типа. f Секвенирование по Сэнгеру подтверждает включение экзона 15 в РНК, полученную из hUREC
дикого типа. В семействе 2 после исключения вариантов PKHD1 прямым секвенированием WES выявил единственный гетерозиготный вариант, который, как предполагается, влияет на функцию (c.2694- 2_2694-1delAG) в NPHP3 , сегрегация от матери, в сочетании с вышеупомянутым синонимом SNV в NPHP3 (c.2154C> T; p.Phe718 =), сегрегация от отца (Таблица 2). Функциональный эффект c.Вариант 2694-2_2694-1delAG, приводящий к аномальному сплайсингу, был подтвержден с помощью ОТ-ПЦР из РНК цельной крови у затронутых братьев и сестер из семьи 2 (дополнительный рисунок S2). В обеих семьях редкий синонимичный SNV в NPHP3 (таблица 2) изначально считался доброкачественным и был отмечен в ClinVar как «вероятно доброкачественный» (SCV000316262.1). Однако, учитывая, что это было идентифицировано у трех человек из двух разных семей с перекрывающимися клиническими фенотипами, и тот факт, что никакие другие известные варианты гена цилиопатии, влияющие на функцию, не были идентифицированы с использованием подходов NGS в этих семьях, были предприняты дополнительные исследования.
Вариант NPHP3 c.2154C> T находится вблизи границы экзон-интрон (экзон 15-интрон 15) и, следовательно, может быть вовлечен в аномальный сплайсинг экзона 15 из NPHP3 . Инструменты in silico, в том числе Human Splicing Finder, предложили функциональный эффект с вероятным нарушением мотивов экзонного сплайсинга (Таблица 2).
мРНК, выделенная из цельной крови пораженных пациентов из семьи 2 и здоровых контролей, не подвергшихся воздействию, показала полное сплайсинг экзона 15 из NPHP3 , что было подтверждено секвенированием по Сэнгеру, предполагая, что сплайсинг РНК этого экзона был тканеспецифичным (рис.1). Оба пострадавших пациента в семье 2 перенесли трансплантат почки, поэтому РНК, выделенная из их мочи, будет представлять донора. Вместо этого образцы мочи, полученные от отца в семье 2 и здоровых контрольных субъектов, были использованы для культивирования hUREC, что позволило нам получить специфичную для почек мРНК. Используя эти образцы мРНК тканевого происхождения, ОТ-ПЦР через экзон 15 NPHP3 в мРНК контрольной почки показала сохранение экзона 15, подтвержденное секвенированием по Сэнгеру, в то время как РНК от отца из семьи 2 показала гетерозиготный альтернативный сплайсинг в NPHP3 , подтверждая специфическую для почек утрату функции c.2154C> Аллель T.
| ACTN4 (604638) | Фокальный сегментарный гломерулосклероз 1 (603278) | AD |
9 9227N | Фокальный сегментарный гломерулосклероз 8 (616032) | AD | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| APOL1 (603743) | Фокально-сегментарный гломерулосклероз255134255134 9027 | 9278 9234 9278 9234 9278 9234 9278 — | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ARHGAP24 (610586) | Фокальный сегментарный гломерулосклероз | AD |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 9274 9278 9278 9274 9274 9274 9274 9274 9274 9273 резистентный стероидный синдром ARHGD АР |
| AVIL (613397) | Стероидорезистентный нефротический синдром, тип 21 (618594) | AR |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CD2AP (604241) | CD2AP (604241) | фокально-сегментарный |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CDC42 (116952) | Синдром Такенучи – Косаки (616737) | AD |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| LMX1B (602575) | Фокальный сегментарный гломерулосклероз 10 (2560122000a) ) | AD AD |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| MAGI2 (60638 2) | Стероидрезистентный нефротический синдром, тип 15 (617609) | AR |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| MYH9 (160775) | Макротромбоцитопения с 15523 9034 9023 | с включениями нефрита 9278 AD27 ( | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| MYO1E (601479) | Фокальный сегментарный гломерулосклероз, 6 (614131) | AR | 902-22343 | MYO — | Фокальный сегментарный гломерулосклероз | AD |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| NPHS1 (602716) | Стероидорезистентный нефротический синдром, тип 1 (256300) | 2 | 2 AR | НПХС2 (604766) | Стероидрезистентный нефротический синдром, тип 2 (600995) | АР 90 278 |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| NUP85 (170285) | Нефротический синдром, устойчивый к стероидам, тип 17 (618176) | AR |
|
